本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體為銀杏葉定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、操作規(guī)程與制造工藝。
背景技術(shù)：
中藥飲片是中國中藥產(chǎn)業(yè)不可缺失的部分，是中醫(yī)臨床辯證施治必需的傳統(tǒng)武器，其品質(zhì)直接影響中醫(yī)臨床防病、治病的療效，另外針對現(xiàn)代人快速的生活節(jié)奏，本發(fā)明提供的高品質(zhì)、可沖泡服用改變傳統(tǒng)煎煮服用方法的中藥飲片有較大的市場需求。
本品為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉。銀杏葉作為常用中藥，具有強(qiáng)大的開發(fā)潛力。銀杏葉富含黃酮類、萜類、銀杏醇、莽草酸、谷甾醇、生物堿、聚異戊二稀、多種氨基酸、礦物質(zhì)、多糖、原花青素、鞣質(zhì)、銀杏酚酸、蠟、葉綠素等有效成分，其功能與主治為活血化瘀，通絡(luò)止痛，斂肺平喘，化濁降脂。用于瘀血阻絡(luò)，胸痹心痛，中風(fēng)偏癱，肺虛咳喘，高脂血癥。傳統(tǒng)煎煮服用較為耗時(shí)費(fèi)力，因此迫切需要一種可沖泡服用的銀杏葉中藥飲片。
本發(fā)明所要解決的問題是解決目前市場上的普遍存在中藥飲片療效不明顯，中藥炮制和劑型，中藥的配伍、劑量、給藥途徑，中藥的調(diào)配、煎服方法、飲食等因素對中藥療效均有明顯影響(劉紅星，丁樹棟.淺析影響中藥療效的因素【J】.中醫(yī)中藥，2014)。銀杏葉因環(huán)境污染而重金屬超標(biāo)等質(zhì)量問題(張雪梅.成都市大氣重金屬污染銀杏葉監(jiān)測研究【D】.成都：成都理工大學(xué)，2014)。
本發(fā)明所要解決的問題是解決中藥材農(nóng)藥殘留超標(biāo)質(zhì)量問題，中藥材的農(nóng)藥殘留來源主要有3個(gè)方面：一是在中藥的生長過程中為了控制病、蟲、草害或調(diào)節(jié)植物生長而噴施的農(nóng)藥。二是中藥材種植環(huán)境中農(nóng)藥對藥材的污染。如藥材生長周圍的土壤、水源、大氣中農(nóng)藥等，通過根、葉等器官吸收進(jìn)入藥用植物體內(nèi)。三是藥材在加工、儲(chǔ)藏過程中為了保證質(zhì)量而噴施的農(nóng)藥或藥材所接觸的其他物品而沾染的農(nóng)藥。如一些藥材產(chǎn)區(qū)，在施用農(nóng)藥后不久就開始采收；藥材炮制過程中加入的輔料中含有較高農(nóng)藥殘留；使用包裝、運(yùn)輸過農(nóng)藥的媒介物來包裝、運(yùn)輸中藥材等(高倩等.中藥材農(nóng)藥殘留研究現(xiàn)狀【J】.藥用植物·煙草，2008)。
附圖說明
附圖1是銀杏葉定性定量中藥飲片生產(chǎn)工藝流程圖。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述問題，本發(fā)明提供的銀杏葉定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與制造工藝，在現(xiàn)行版《中國藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉中藥材標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上制訂相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)，并增加藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫殘留量，并將含量測定中的總黃酮醇苷的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.40％提高至0.44％、萜類內(nèi)酯(銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B，銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的總量)標(biāo)準(zhǔn)限度從0.25％提高至0.28％，并通過特定的工序生產(chǎn)出碎片0.4mm的銀杏葉中藥飲片，確保中藥飲片符合高標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)要求。
本發(fā)明提供的銀杏葉定性定量中藥飲片的制造工藝，包括以下步驟：
A10、凈制：清除混在銀杏葉中的雜質(zhì)及霉變品等，以便達(dá)到潔凈或進(jìn)一步加工處理。注意：銀杏葉經(jīng)凈選后不得直接接觸地面。
A20、清洗：凈制后銀杏葉放置在洗藥池中，清洗干凈至無泥沙，清洗時(shí)要快速搶洗，減少銀杏葉在水中浸泡時(shí)間。清洗完成后堆潤2-3h，至銀杏葉徹底潤透。
A30、切制：按全自動(dòng)高速切片機(jī)操作規(guī)程操作，調(diào)好刀距0.4mm，進(jìn)行切藥。
A40、干燥：采用熱風(fēng)循環(huán)烘箱進(jìn)行干燥，將銀杏葉鋪于烘箱架子上，攤鋪厚度均勻，厚度在3cm以下。打開開關(guān)，開啟加熱開關(guān)、風(fēng)機(jī)，在溫度60±2℃進(jìn)行干燥，在溫度達(dá)到設(shè)定溫度后干燥5-7h，干燥完畢，關(guān)閉加熱開關(guān)，繼續(xù)吹風(fēng)，待箱內(nèi)溫度降下至35～40℃，關(guān)閉風(fēng)機(jī)。干燥后崗位人員需填寫中間產(chǎn)品請檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行水分檢查。
A50、包裝：根據(jù)本品包裝規(guī)格要求進(jìn)行包裝。包裝前需對包裝間進(jìn)行檢查，確認(rèn)包裝生產(chǎn)線的清場已經(jīng)完成，并核對包裝材料是否符合要求。內(nèi)包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需要印制的生產(chǎn)日期、批號，QA監(jiān)控，稱取規(guī)定重量的銀杏葉放入料斗中，用封口機(jī)封口，要求做到封口嚴(yán)密、平整、美觀。外包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需印制的生產(chǎn)日期及批號，QA監(jiān)控，在外包裝盒子上打印批號、生產(chǎn)日期，打印過程中需注意批號及生產(chǎn)日期是否清晰。將內(nèi)包裝完成后的飲片及檢驗(yàn)報(bào)告書放入外包盒中，4袋/盒。將每10盒飲片，套入1個(gè)熱縮膜中，進(jìn)行熱收縮；熱收縮后裝入大紙箱中，240盒/箱。操作過程中，QA隨時(shí)抽檢。包裝后崗位人員需填寫成品請檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
A60、成品：包裝后崗位人員需填寫成品請檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
在現(xiàn)行版《中國藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉中藥材標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上制訂相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)，并增加藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫殘留量，并將含量測定中的總黃酮醇苷的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.40％提高至0.44％、萜類內(nèi)酯(銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B，銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的總量)標(biāo)準(zhǔn)限度從0.25％提高至0.28％。修訂的銀杏葉定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下所示：
銀杏葉飲片
拼音名稱：Yinxingye Yinpian
包裝：純鋁復(fù)合膜包裝。
【性狀】取本品適量，在日光下觀察，本品為不規(guī)則碎，體輕，嗅之，氣微，嘗之，味微苦。
鑒別
薄層鑒別
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機(jī)、恒溫水浴鍋、點(diǎn)樣器、展開缸、薄層板、三用紫外儀
試劑及試液：乙醇、4％醋酸鈉溶液、3％三氯化鋁乙醇溶液、乙酸乙酯、丁酮、甲酸、丙酮、甲苯、甲醇、醋酐
測定及結(jié)果判定
取本品粉末1g，加40％乙醇10ml，加熱回流10分鐘，放冷，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取銀杏葉對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一用4％醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。
結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
取本品粉末1g，加50％丙酮溶液40ml，加熱回流3小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?5％乙醇5ml使溶解，加入已處理好的聚酰胺柱(30～60目，1g，內(nèi)徑為1cm，用水濕法裝柱)上，用5％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸去乙醇，水液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品、銀杏內(nèi)酯C對照品及白果內(nèi)酯對照品，加丙酮制成每1ml各含銀杏內(nèi)酯A 0.5mg、銀杏內(nèi)酯B 0.5mg、銀杏內(nèi)酯C 0.5mg、白果內(nèi)酯1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一用4％醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10∶5∶5∶0.6)為展開劑，在15℃以下展開，取出，晾干，在醋酐蒸氣中熏15分鐘，在140～160℃中加熱30分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。
結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查
藥屑、雜質(zhì)
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩
取供試品約100g(精確到0.1g)，攤開，揀出雜質(zhì)，用藥篩篩出藥屑，合并，稱重，計(jì)算其在供試品中的量(％)。
結(jié)果判定：本品雜質(zhì)不得過2％。
水分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、稱量瓶
測定及結(jié)果判定：照水分測定法(通則0832第二法)測定。
取供試品2～5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，疏松供試品不超過10mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量(％)。
結(jié)果判定：本品水分不得過12.0％。
總灰分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝
測定及結(jié)果判定：照灰分測定法(通則2302)測定。
取供試品2～3g(如須測定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中總灰分的含量(％)。
結(jié)果判定：本品總灰分不得過10.0％。
酸不溶性灰分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝
試劑及試液：稀鹽酸、純化水
測定及結(jié)果判定：照灰分測定法(通則2302)測定。
取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10分鐘，表面皿用熱水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量(％)。
結(jié)果判定：本品酸不溶性灰分不得過2.0％。
重金屬及有害元素
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、微波消解儀、原子吸收分光光度計(jì)
試劑及試液：硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂、碘化鉀、抗壞血酸、鹽酸、硼氫化鈉、氫氧化鈉、硫酸、高錳酸鉀、鹽酸羥胺(其中硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂為優(yōu)級純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
標(biāo)準(zhǔn)樣品：鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、砷單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品
方法：照鉛、鎘、砷、汞、銅測定法(通則2321)測定
鉛的測定(石墨爐法)
測定條件參考條件：波長283.3nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度400～750℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1700～～2100℃，持續(xù)4～5秒。
鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鉛(Pb)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含鉛0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分別精密量取1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取20μl注入石墨爐原子化器，測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氯乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)，進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)緩緩濃縮至2～3ml，放冷，用水轉(zhuǎn)入25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測定法精密量取空白溶液與供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鉛(Pb)的含量，計(jì)算，即得。
鎘的測定(石墨爐法)
測定條件參考條件：波長228.8nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度300～500℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1500～1900℃，持續(xù)4～5秒。
鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鎘(Cd)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含鎘0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分別精密吸取10μl，注入石墨爐原子化器，測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測定吸光度(若供試品有干擾，可分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液和供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，依法測定)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鎘(Cd)的含量，計(jì)算，即得。
砷的測定(氫化物法)
測定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含硼氫化鈉和0.3％氫氧化鈉溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測波長為193.7nm。
砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含砷(As)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分別精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，加10％抗壞血酸溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，用鹽酸溶液(20→100)稀釋至刻度，搖勻，密塞，置80℃水浴中加熱3分鐘，取出，放冷。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測定項(xiàng)下供試品溶液的制備中的A法制備。
測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下，自“加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml”起，依法測定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中砷(As)的含量，計(jì)算，即得。
汞的測定(冷蒸氣吸收法)
測定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含0.5％硼氫化鈉和0.1％氫氧化鈉的溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測波長為253.6nm。
汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含汞(Hg)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用水稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上，于120℃緩緩 加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)濃縮至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，必要時(shí)離心，取上清液，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測定從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中汞(Hg)的含量，計(jì)算，即得。
銅的測定(火焰法)
測定條件檢測波長為324.7nm，采用空氣-乙炔火焰，必要時(shí)進(jìn)行背景校正。
銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含銅(Cu)10μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含銅0μg、0.05μg、0.2μg、4μg、0.6μg、0.8μg的溶液。依次噴入火焰，測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法測定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中銅(Cu)的含量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品含鉛不得過8mg/kg、鎘不得過0.8mg/kg、砷不得過4mg/kg、汞不得過0.8mg/kg、銅不得過20mg/kg。
有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機(jī)、氣相色譜儀
試劑及試液：石油醚(60～90℃)、丙酮、氯化鈉、二氯甲烷、無水硫酸鈉(其中石油醚(60～90℃)為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對照品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC、pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT、PCNB農(nóng)藥對照品
方法：照農(nóng)藥殘留量測定法(通則0512第一法)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以(14％-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，63Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度230℃，檢測器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。理論板數(shù)按α-BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1×106，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對照品貯備溶液的制備精密稱取六六六(BHC)(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)、滴滴涕(DDT)(pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)農(nóng)藥對照品適量，用石油醚(60～90℃)分別制成每1ml約含4～5μg的溶液，即得。
混合對照品貯備溶液的制備精密量取上述各對照品貯備液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀釋至刻度，搖勻，即得。
混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品貯備液，用石油醚(60～90℃)制成每1L分別含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取供試品，粉碎成粉末(過三號篩)，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置(使分層)，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5ml，小心加入硫酸1ml，振搖1分鐘，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下(或用氮?dú)?將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1ml，即得。
測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對應(yīng)濃度的混合對照品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。
結(jié)果判定：本品含總六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和)不得過0.2mg/kg、總滴滴涕(pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT之和)不得過0.2mg/kg、五氯硝基苯不得過0.1mg/kg。
黃曲霉毒素B1
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、均質(zhì)瓶、離心機(jī)、高效液相色譜儀(配置熒光檢測器及衍生化泵、衍生化保溫箱)
試劑及試液：甲醇、乙腈、碘、氯化鈉、免疫親合柱(其中乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對照品：黃曲霉毒素B1對照品
方法：照黃曲霉毒素測定法(通則2351)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)為流動(dòng)相；采用柱后衍生法檢測，碘衍生法：衍生溶液為0.05％的碘溶液 (取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml制成)，衍生化泵流速每分鐘0.3ml，衍生化溫度70℃以熒光檢測器檢測，激發(fā)波長λex＝360nm(或365nm)，發(fā)射波長λex＝450nm。兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
混合對照品溶液的制備精密量取黃曲霉毒素B1對照品溶液(標(biāo)示濃度為1.0μg/ml)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。
供試品溶液的制備取供試品粉末約15g(過二號篩)，精密稱定，置于均質(zhì)瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘)，離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親合柱，流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進(jìn)入柱子，將水?dāng)D出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取上述混合對照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20～25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1的量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品每1000g含黃曲霉毒素B1不得過5μg。
二氧化硫殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱套
試劑及試液：過氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照二氧化硫殘留量測定法(通則2331)測定。取藥材或飲片細(xì)粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開回流冷凝管開關(guān)給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置于100ml錐形瓶底部。錐形瓶內(nèi)加入3％過氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導(dǎo)氣管的末端應(yīng)在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，并用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點(diǎn)；如果超過終點(diǎn)，則應(yīng)舍棄該吸收溶液)。開通氮?dú)?，使用流量?jì)調(diào)節(jié)氣體流量至約0.2L/min；打開分液漏斗C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶內(nèi)的溶液至沸，并保持微沸；燒瓶內(nèi)的水沸騰1.5小時(shí)后，停止加熱。吸收液放冷后，置于磁力攪拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續(xù)時(shí)間20秒不褪，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。
結(jié)果判定：本品二氧化硫殘留量不得過150mg/kg。
浸出物
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱
試劑及試液：乙醇(試劑使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
測定及結(jié)果判定：照醇溶性浸出物測定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑
取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml的錐形瓶中，精密加乙醇50～100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(％)。
結(jié)果判定：本品醇溶性浸出物不得少于25.0％。
含量測定
總黃酮醇苷
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、液相色譜儀
試劑及試液：甲醇、三氯甲烷、鹽酸、石油醚(30-60℃)、磷酸、四氫呋喃、純化水(其中甲醇為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對照品：槲皮素對照品、山柰素對照品、異鼠李素對照品、銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品、銀杏內(nèi)酯C對照品、白果內(nèi)酯對照品
方法：照高效液相色譜法(通則0512)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動(dòng)相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備取槲皮素對照品、山柰素對照品、異鼠李素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含槲皮素30μg、山柰素30μg、異鼠李素20μg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品中粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小時(shí)，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干，加甲醇回流提取4小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状?25％鹽酸溶液(4∶1)混合溶液25ml，加熱回流30分鐘，放冷，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測 定，分別計(jì)算槲皮素、山柰素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮醇苷的含量。
總黃酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山柰素含量+異鼠李素含量)×2.51
結(jié)果判定：本品按干燥品計(jì)算，含總黃酮醇苷不得少于0.44％。
萜類內(nèi)酯
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備取銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品、銀杏內(nèi)酯C對照品、白果內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，加50％甲醇制成每1ml含銀杏內(nèi)酯A 0.18mg、銀杏內(nèi)酯B 0.08mg、銀杏內(nèi)酯C 0.10mg、白果內(nèi)酯0.20mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品中粉約1.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(30～60℃)在70℃水浴上回流提取1小時(shí)，棄去石油醚(30～60℃)液，藥渣和濾紙筒揮盡石油醚，置于60℃烘箱中烘干，再加甲醇回流提取6小時(shí)，提取液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，超聲處理(功率300W，頻率50kHZ)30分鐘，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，靜置，精密量取上清液5ml，加入酸性氧化鋁柱(200～300目，3g，內(nèi)徑為1cm，用甲醇濕法裝柱)上，用甲醇25ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)眉状?m1分次轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加水約4.5ml，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)30分鐘，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl，供試品溶液10～20μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程分別計(jì)算銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯的含量，即得。
結(jié)果判定：本品按干燥品計(jì)算，含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)，銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)，銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)和白果內(nèi)酯(C15H18O8)的總量計(jì)，不得少于0.28％。
微生物限度
沙門菌取本品10g，以無菌接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性實(shí)驗(yàn)確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，按非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：沙門菌不得檢出(10g)。
耐膽鹽革蘭陰性菌取本品，以無菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為稀釋劑，制成1∶10的供試液，混勻，按非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：耐膽鹽革蘭陰性菌應(yīng)小于104cfu(1g)。