本發(fā)明屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域，具體涉及一種人參配方顆粒特征圖譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根莖。多于秋季采挖，洗凈經(jīng)曬干或烘干。栽培的俗稱(chēng)“園參”；播種在山林野生狀態(tài)下自然生長(zhǎng)的稱(chēng)“林下山參”，習(xí)稱(chēng)“籽?！薄Ｖ饕腥藚⒃碥?，各種人參中總皂苷的含量通常為2％～12％，支根和須根中總皂苷的含量高于主根；其中主要為達(dá)馬烷型四環(huán)三萜皂苷，如人參皂苷Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf等。水解可得到人參二醇或人參三醇；少數(shù)為齊墩果酸型皂苷，如人參皂苷R0。此外，尚有多種氨基酸、人參酸、膽堿，維生素、無(wú)機(jī)元素等。具有大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智。用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少，肺虛喘咳，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，氣血虧虛，久病虛贏，驚悸失眠，陽(yáng)痿官冷。人參配方顆粒是由人參中藥材經(jīng)過(guò)水提取、濃縮、干燥、制粒等工藝制成顆粒性飲片，可以替代人參中藥材供臨床中藥方劑調(diào)配使用。取人參3334g，加水煎煮2次，第一次煎煮2小時(shí)，第二次煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.15(80℃)的清膏，干燥；加輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成1000g，即得。本品為棕色至棕褐色的顆粒；味微苦、甘。性味與歸經(jīng)：甘、微苦，微溫。歸脾、肺、心、腎經(jīng)。功能與主治：大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智。用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少，肺虛喘咳，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，氣血虧虛，久病虛贏，驚悸失眠，陽(yáng)痿官冷。貯藏：置陰涼干燥處，密閉保存，防蛀。由于人參配方顆粒不具有人參藥材可視的外觀性狀，所以需要建立專(zhuān)屬性較強(qiáng)的人參配方顆粒定性檢測(cè)方法。目前人參制劑的檢測(cè)方法是檢測(cè)一種或少數(shù)幾種成分，但是眾所周知人參在中醫(yī)臨床的治療效果并非來(lái)源于某個(gè)單一的活性成分，而是多種有效成分共同作用的結(jié)果，所以只檢測(cè)一種或少數(shù)幾種成分，不能對(duì)人參具有的多種有效成分進(jìn)行全面的檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種人參配方顆粒檢測(cè)方法，可以較為全面的對(duì)人參配方顆粒進(jìn)行定性檢測(cè)。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：包括下列步驟：(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；CAPCELLPAKMG，4.6×250mm，5μm；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于6000，按人參皂苷Rd峰計(jì)算應(yīng)不低于200000；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品和人參皂苷Rd對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，即得；(3)供試品溶液的制備精密稱(chēng)定人參配方顆粒1g，精密加入甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次100ml，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，采集120分鐘，記錄色譜圖，其中：峰1：人參皂苷Rg1，峰2：人參皂苷Re，峰3：人參皂苷Rf，峰4：人參皂苷Rb1，峰5：人參皂苷Rc，峰6：人參皂苷Rb2，峰7：人參皂苷Rd(S)；供試品特征圖譜應(yīng)呈現(xiàn)7個(gè)特征峰，其中3個(gè)峰應(yīng)分別與相應(yīng)的參照物峰保留時(shí)間相同，與人參皂苷Rd參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算特征峰3～7的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5％之內(nèi)，規(guī)定值為：0.67(峰3)、0.78(峰4)、0.83(峰5)、0.88(峰6)、1.00(峰7)。本發(fā)明較為全面的對(duì)人參配方顆粒進(jìn)行定性檢測(cè)，是專(zhuān)屬性較強(qiáng)的人參配方顆粒定性檢測(cè)方法。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明對(duì)照特征圖譜。具體實(shí)施方式包括下列步驟：(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；CAPCELLPAKMG，4.6×250mm，5μm；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于6000，按人參皂苷Rd峰計(jì)算應(yīng)不低于200000；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品和人參皂苷Rd對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，即得；(3)供試品溶液的制備精密稱(chēng)定人參配方顆粒1g，精密加入甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次100ml，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；(4)測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，采集120分鐘，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1，其中：峰1：人參皂苷Rg1，峰2：人參皂苷Re，峰3：人參皂苷Rf，峰4：人參皂苷Rb1，峰5：人參皂苷Rc，峰6：人參皂苷Rb2，峰7：人參皂苷Rd(S)；供試品特征圖譜應(yīng)呈現(xiàn)7個(gè)特征峰，其中3個(gè)峰應(yīng)分別與相應(yīng)的參照物峰保留時(shí)間相同，與人參皂苷Rd參照物峰相應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算特征峰3～7的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5％之內(nèi)，規(guī)定值為：0.67(峰3)、0.78(峰4)、0.83(峰5)、0.88(峰6)、1.00(峰7)。專(zhuān)屬性試驗(yàn)取缺人參的陰性對(duì)照樣品1g，按正文擬定的供試品溶液制備方法依法制成缺人參的陰性對(duì)照溶液。進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果在與七個(gè)對(duì)照品峰相應(yīng)位置處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，說(shuō)明陰性對(duì)照無(wú)干擾。精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液(批號(hào)：140401)5μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)精密度試驗(yàn)結(jié)果下表。精密度試驗(yàn)結(jié)果表從上表所列數(shù)據(jù)顯示，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD(％)小于1％，具有良好精密度。穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液(批號(hào)：140401)5μl，分別在0、2、4、6、8小時(shí)照正文方法測(cè)定，記錄各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果未發(fā)生明顯變化，穩(wěn)定性良好，結(jié)果見(jiàn)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)：140401)6份，依法獨(dú)立測(cè)定，記錄各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表上表結(jié)果表明，各特征峰保留時(shí)間的RSD(％)均小于1％，本方法具有良好重復(fù)性。標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜保留時(shí)間及相對(duì)保留時(shí)間峰號(hào)保留時(shí)間(min)相對(duì)保留時(shí)間1與對(duì)照品相同與對(duì)照品相同2與對(duì)照品相同與對(duì)照品相同364.7990.672475.0530.778579.7600.827684.7140.8787(S)96.4641供試品特征圖譜應(yīng)呈現(xiàn)7個(gè)特征峰，分別與人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、人參皂苷Rf對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品、人參皂苷Rc對(duì)照品、人參皂苷Rb2對(duì)照品、人參皂苷Rd對(duì)照品相對(duì)應(yīng)，由于有些對(duì)照品價(jià)格昂貴且較難購(gòu)得，所以?xún)H選擇人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、人參皂苷Rd對(duì)照品作為特征圖譜的參照物。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3