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      阿比特龍衍生物的藥代動力學(xué)評估方法與流程

      文檔序號:12268385閱讀:855來源:國知局
      阿比特龍衍生物的藥代動力學(xué)評估方法與流程

      本發(fā)明涉及一種阿比特龍衍生物的藥代動力學(xué)評估方法,屬于藥理學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域。



      背景技術(shù):

      前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤之一,全球范圍內(nèi),前列腺癌發(fā)病率居于男性所有惡性腫瘤中的第二,在癌癥相關(guān)的死亡率中排第五。亞洲國家前列腺癌的發(fā)病率逐漸上升,相比于西方國家,亞洲國家前列腺癌患者中,晚期和轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者所占比例較大。截止2012年我國腫瘤登記地區(qū)前列腺癌發(fā)病率為9.92/10萬,列男性惡性腫瘤發(fā)病率的第6位,已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅我國人民健康和生命的一大殺手。內(nèi)分泌治療是目前晚期前列腺癌的主要治療方法,大多數(shù)患者起初都對去勢(手術(shù)或藥物)或聯(lián)合雄激素阻斷治療有效,但經(jīng)過14~30個月的中位時間后,大部分患者病變將逐漸發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌(Castration Resistant Prostate Cancer,CRPC),其中位生存期小于20個月。因此,開發(fā)能有效對抗CRPC的藥物是關(guān)系國計民生的重大問題。

      醋酸阿比特龍(商品名:ZYTIGA)是CYP17的一種抑制劑(17α-羥化酶/C17,20-裂解酶),于2011年4月28號被美國FDA批準(zhǔn)上市。ZYTIGA與潑尼松聯(lián)用適用于曾接受既往含多烯紫杉醇化療轉(zhuǎn)移的去勢難治性前列腺癌(CRPC)患者的治療[1-2]。



      技術(shù)實現(xiàn)要素:

      針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷,本發(fā)明的目的是提供一種阿比特龍衍生物的藥代動力學(xué)評估方法。

      本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:

      本發(fā)明提供一種阿比特龍衍生物的藥代動力學(xué)評估方法,其包括如下步驟:

      將雄性小鼠進(jìn)行去勢手術(shù)后,接種LNCaP/AR細(xì)胞;

      將所述雄性小鼠等效分為醋酸阿比特龍-170mg/kg組、醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組、受試藥阿比特龍衍生物-300mg/kg組、阿比特龍衍生物-200mg/kg組、阿比特龍衍生物聯(lián) 合潑尼松組、溶劑對照組和潑尼松-2mg/kg共七組;

      采用經(jīng)口灌胃給藥,對所有組別的雄性小鼠按照組別每天給藥一次,連續(xù)給藥28天,定期測定體重及腫瘤體積,末次給藥后24小時,收集血清測定前列腺特異性抗原(PSA)濃度,并取腫瘤、精囊腺和前列腺進(jìn)行稱重,并計算得到相對腫瘤體積、相對腫瘤增殖率、腫瘤體積改變百分比、瘤重抑制率及體重變化百分比。

      作為優(yōu)選方案,所述雄性小鼠為6~7周齡的雄性CB17SCID小鼠。

      作為優(yōu)選方案,接種LNCaP/AR細(xì)胞的雄性小鼠的腫瘤體積為100~250mm3。

      與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下的有益效果:

      受試藥阿比特龍衍生物-200mg/kg聯(lián)合潑尼松后,對去勢抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠腫瘤增長有較為明顯的抑制作用,未呈現(xiàn)明顯毒副作用,與同等劑量下的陽性藥醋酸阿比特龍-170mg/kg聯(lián)合潑尼松對腫瘤的抑制作用相當(dāng),但還未達(dá)到《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的有效標(biāo)準(zhǔn)。

      附圖說明

      通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細(xì)描述,本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會變得更明顯:

      圖1為溶劑對照組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖2為醋酸阿比特龍-170mg/kg組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖3為醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖4為阿比特龍衍生物-300mg/kg組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖5為阿比特龍衍生物-200mg/kg組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖6為阿比特龍衍生物聯(lián)合潑尼松組平均相對腫瘤體積生長趨勢;

      圖7為潑尼松-2mg/kg組平均相對腫瘤體積生長趨勢。

      具體實施方式

      下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。以下實施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明,但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是,對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下,還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

      實施例1

      1.1試驗名稱及編號

      試驗名稱:AHS-114的藥效評估試驗

      試驗編號:KP19-2015

      1.2試驗?zāi)康?/p>

      使用AR過表達(dá)的人前列腺癌細(xì)胞系LNCaP/AR皮下移植的CB17SCID荷瘤小鼠模型,觀察阿比特龍衍生物AHS-114對去勢抗性前列腺癌的治療作用。

      1.3本試驗遵循的法規(guī)

      《藥品注冊管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理局局令第28號,2007年10月01日)[3];

      《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》(國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心,2006年11月)[4];

      《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》(國家食品藥品監(jiān)督管理局局令第2號,2003年09月01日)[5];

      本試驗的實施除方案特殊說明外,均遵循本機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Standard Operating Procedure:SOP)。

      2試驗材料

      2.1供試品

      名稱或代號:阿比特龍衍生物AHS-114;

      來源:上海麥步醫(yī)藥科技有限公司;

      性狀:白色至類白色粉末;

      規(guī)格及濃度:99.71%;

      批號:Mb039-26-3;

      保存條件:常溫,密閉干燥避光保存;

      注意事項:本品極易吸潮,注意防潮;

      有效期:2017.07;

      保存地點:四川康城生物科技有限公司供試品存放室;

      配制方法:含0.5%甲基纖維素以及0.1%吐溫-80的0.9%生理鹽水配制[1];

      配制后標(biāo)識:注明試驗編號、試驗物質(zhì)名稱及濃度、配制體積、保存條件、有效期、責(zé)任人及配制日期等;

      配制后暫存條件:2~8℃密閉保存;

      配制后有效期:1周;

      返還及剩余供試品的處理:給藥后剩余供試品統(tǒng)一收集到廢液桶中。留樣供試品參照《供試品的保存》SOP儲存于供試品存放室。

      2.2對照品

      名稱或代號:醋酸阿比特龍;

      來源:上海麥步醫(yī)藥科技有限公司;

      性狀:白色至類白色粉末;

      規(guī)格及濃度:99.87%;

      批號:20141101;

      保存條件:常溫,密閉干燥避光保存;

      有效期:2017.07;

      保存地點:四川康城生物科技有限公司供試品存放室;

      配制方法:含0.5%甲基纖維素以及0.1%吐溫-80的0.9%生理鹽水配制;

      配制后標(biāo)識:注明試驗編號、試驗物質(zhì)名稱及濃度、配制體積、保存條件、有效期、責(zé)任人及配制日期等;

      配制后暫存條件:2~8℃密閉保存;

      配制后有效期:1周;

      返還及剩余對照品的處理:給藥后剩余對照品統(tǒng)一收集到廢液桶中。

      名稱或代號:醋酸潑尼松;

      來源:上海麥步醫(yī)藥科技有限公司;

      性狀:白色至類白色粉末;

      規(guī)格及濃度:99.5%;

      批號:100012-201407;

      保存條件:常溫,密閉干燥避光保存;

      有效期:2017.07;

      保存地點:四川康城生物科技有限公司供試品存放室;

      配制方法:含0.5%甲基纖維素以及0.1%吐溫-80的0.9%生理鹽水配制;

      配制后標(biāo)識:注明試驗編號、試驗物質(zhì)名稱及濃度、配制體積、保存條件、有效期、責(zé)任人及配制日期等;

      配制后暫存條件:2~8℃密閉保存;

      配制后有效期:1周;

      返還及剩余對照品的處理:給藥后剩余對照品統(tǒng)一收集到廢液桶中。

      2.3溶劑對照品

      名稱或代號:含0.5%甲基纖維素及0.1%吐溫-80的0.9%生理鹽水;

      來源:甲基纖維素和吐溫-80來自于Sigma,0.9%生理鹽水來自于四川科倫藥業(yè)股份有限公司;

      性狀:無色澄明液體;

      規(guī)格及濃度:0.5%甲基纖維素、0.1%吐溫-80、0.9%生理鹽水;

      保存條件:室溫密閉保存;

      保存地點:四川康城生物科技有限公司供試品存放室;

      配制方法:稱取所需質(zhì)量的甲基纖維素,充分溶解于適量體積0.9%生理鹽水中,超聲處理15min,冰浴10min,然后加入所需質(zhì)量的吐溫-80,使用生理鹽水定容,充分混勻;

      配制后標(biāo)識:以白色標(biāo)簽標(biāo)識,并注明試驗編號、試驗物質(zhì)名稱及濃度、配制體積、保存條件、有效期、責(zé)任人及配制日期等;

      返還及剩余溶劑對照品的處理:給藥后返還的溶劑對照品倒入下水道。

      2.4其他主要試劑

      改良型RPMI-1640培養(yǎng)基(HyClone公司產(chǎn)品,規(guī)格:500mL,批號:NZG1385)。

      胎牛血清(Feotal Bovine Serum,Biological Industries公司產(chǎn)品,規(guī)格:500mL,批號:1452736)。

      胰蛋白酶(0.25%Tripsin-EDTA(1×),GIBCO公司產(chǎn)品,規(guī)格:100mL,批號:1620318)。

      基質(zhì)膠(Matrigel Matrix,CORNING公司產(chǎn)品,規(guī)格:10mL,批號:4090004)

      Human Kallikrein 3/PSA Quantikine ELISA(R&D Systems公司產(chǎn)品,規(guī)格:96孔,批號:330695)

      2.5主要儀器、器械

      單人生物安全柜(蘇州安泰公司產(chǎn)品,型號:BSC-1300IIA2)

      二氧化碳培養(yǎng)箱(THERMO公司產(chǎn)品,型號:THERMO 311)

      倒置顯微鏡(Olympus公司產(chǎn)品,型號:CKX41)

      電子數(shù)顯卡尺(成都成量工具集團(tuán)有限公司,型號:0-220)

      1000μL、200μL、20μL微量加樣器(EPPENDRF公司產(chǎn)品)

      分析天平(METTLER公司產(chǎn)品,型號:ME104)

      2.6細(xì)胞株

      細(xì)胞株名稱:LNCaP/AR人前列腺癌細(xì)胞系;

      來源:四川大學(xué)生物治療國家重點試驗室。

      3試驗系統(tǒng)

      3.1試驗動物

      種屬:CB17SCID小鼠;

      等級:SPF級;

      購入動物數(shù)量和性別:80只(雄性);

      使用動物數(shù)量和性別:53只(雄性);

      年齡:5~6周齡;

      體重:去勢手術(shù)時體重均值20~24g,體重個體值在均數(shù)±20%范圍內(nèi);

      來源:北京華阜康生物科技股份有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2014-0004。

      3.2飼養(yǎng)管理

      3.2.1環(huán)境適應(yīng)

      試驗前環(huán)境適應(yīng)6-7天,選擇健康CB17SCID小鼠作為受試動物。適應(yīng)期主要檢查結(jié)果:

      與訂購時要求的質(zhì)量指標(biāo)一致;

      動物一般狀態(tài)正常;

      動物體重達(dá)到試驗要求的體重范圍;

      不合格的異常動物未納入本試驗。

      3.2.2飼養(yǎng)地點

      華西海圻醫(yī)藥科技有限公司SPF區(qū)(第3棟)(實驗動物使用許可證號:SYXK(川)2009-123)。

      3.2.3飼養(yǎng)條件

      飼養(yǎng)密度:≤5只/籠;

      籠具空間位移頻度:1次/周。

      3.2.4飼養(yǎng)環(huán)境條件

      飼養(yǎng)環(huán)境條件標(biāo)準(zhǔn):中華人民共和國國標(biāo)GB14925-2010;

      飼養(yǎng)環(huán)境控制系統(tǒng):Honeywell公司EBI400自動控制全新風(fēng)中央空調(diào)系統(tǒng);

      溫度:20~26℃(日溫差<4℃);

      濕度:相對濕度40~70%;

      光照:人工照明,12小時明暗交替(07點30分開燈,19點30分關(guān)燈,如因試驗需要,黑暗期間可以照明);

      換氣次數(shù):≥15次/小時,100%全新風(fēng)。非工作時間可降低換氣次數(shù),未低于10次/小時。

      3.2.5飼料

      種類:大小鼠維持飼料;

      制造單位:上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供。飼料生產(chǎn)企業(yè)審查合格證:滬飼審(2008)04002;

      給料方法:自由攝取(試驗有特殊要求時除外);

      營養(yǎng)成分檢測:(由飼料供應(yīng)商每批提供檢測報告)常規(guī)營養(yǎng)成分指標(biāo):粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、水分、鈣和磷;氨基酸指標(biāo):蘇氨酸、胱氨酸+蛋氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸+苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸、色氨酸,參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB14924.3-2010;

      飼料污染物含量的確認(rèn):由飼料供應(yīng)商每批提供檢測報告,化學(xué)污染物指標(biāo):砷、鉛、鎘、汞、六六六、滴滴涕、黃曲霉毒素B1、菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌和酵母菌數(shù)、致病菌(沙門氏菌),參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB14924.2-2001。

      3.2.6飲水

      種類:實驗動物飲用水(反滲透水);

      供水方法:飲水瓶盛裝,自由攝??;

      菌落總數(shù)檢測:參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB5749-2006,取樣自檢(1次/周);

      水質(zhì)常規(guī)指標(biāo)的檢測:參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB5749-2006,取樣送具有相關(guān)資質(zhì)的單位檢測,每年至少2次。

      4試驗方法

      4.1CRPC模型建立

      將6~7周齡CB17SCID小鼠進(jìn)行去勢手術(shù),同時進(jìn)行LNCaP/AR細(xì)胞培養(yǎng)。去勢手術(shù)3天后(小鼠狀態(tài)基本恢復(fù)),將小鼠剃毛,在右前肢背側(cè)皮下接種約1.0*107個/只的LNCaP/AR細(xì)胞(細(xì)胞懸液與Matrigel按1:1的比例混勻,總體積約100μL/只),接種后每周觀察小鼠狀態(tài)及成瘤情況兩至三次。腫瘤體積達(dá)到100-250mm3,將小鼠按照腫瘤體積范圍等效分組。

      4.2動物分組與標(biāo)識

      4.2.1動物標(biāo)識

      環(huán)境適應(yīng)期及分組后:采用尾號和籠卡作為動物的識別標(biāo)記;

      籠卡的標(biāo)記方法:

      環(huán)境適應(yīng)期間:統(tǒng)一使用白色籠卡,并注明試驗編號、動物種系、動物流水號、入室時間、備注信息等;

      分組后:用不同顏色籠卡進(jìn)行組別區(qū)分,在籠卡上注明試驗編號、動物種系、動物編號、處理因素、預(yù)期試驗起止時間、備注信息等。

      4.2.2動物分組

      試驗組別設(shè)計:溶劑對照組,阿醋酸比特龍-170mg/kg,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松,AHS-114-300mg/kg,AHS-114-200mg/kg,AHS-114聯(lián)合潑尼松,潑尼松-2mg/kg;

      動物數(shù)量:潑尼松組為5只,其他各組每組8只;

      性別:雄性;

      分組方法:根據(jù)CB17SCID小鼠腫瘤大小等效分組,其中潑尼松組為待其他各組分組完畢后用剩余動物進(jìn)行的補充分組。

      4.3劑量設(shè)計及依據(jù)

      根據(jù)人用量折算并參考阿比特龍衍生物AHS-114CB17SCID小鼠亞急性毒性試驗(KP18-2015)結(jié)果,及與委托方協(xié)商,具體劑量設(shè)計見表1。

      表1給藥設(shè)計表

      備注:聯(lián)合用藥組需先將兩種藥物在同一份溶劑中進(jìn)行均勻混合后再給予該組小鼠。

      4.4給藥

      給藥途徑:經(jīng)口灌胃;

      給藥途徑選擇理由:與臨床擬用藥途徑一致;

      給藥體積:10mL/kg;

      給藥頻率:每日一次,連續(xù)給藥28天;

      給藥:首次給藥當(dāng)天定義為試驗第1天。

      4.5檢測指標(biāo)

      4.5.1一般狀態(tài)觀察

      觀察時間和頻率:每天至少觀察1次;

      動物出現(xiàn)明顯毒性癥狀時,增加觀察頻率;

      觀察指標(biāo)或內(nèi)容:包括但不限于小鼠外觀體征、一般行為活動、精神狀態(tài)、腺體分泌、呼吸狀態(tài)、糞便性狀、生殖器、死亡等情況及其它毒性表現(xiàn)。

      4.5.2腫瘤測量與評價

      4.5.2.1相對腫瘤體積和相對腫瘤增值率

      腫瘤測量頻率:開始給藥前至少測定一次,給藥期每隔2天測量一次測定腫瘤的長(a)和寬(b),根據(jù)“腫瘤體積(TumorVolume,TV),TV=l/2×a×b2”計算出腫瘤體積。分別計算出相對腫瘤體積(Relative TumorVolume,RTV,RTV=Vt/V0)和相對腫瘤增殖率T/C(%)=TRTV/CRTV×100,其中V0為首次給藥當(dāng)天(即第一天)測量所得腫瘤體積,V t為每一次測量時的腫瘤體積,TRTV為治療組RTV,CRTV為陰性對照組RTV。

      療效評價標(biāo)準(zhǔn):T/C(%)≥40為無效;T/C(%)<40,并經(jīng)方差分析與陰性對照組相比P<0.05為有效。

      4.5.2.2腫瘤體積改變百分比

      根據(jù)腫瘤體積,計算末次給藥當(dāng)天(第28天)腫瘤體積改變百分比(Vchange%,Vchange%=(Vt-V0)/V0×100),其中V0為首次給藥當(dāng)天(即第一天)測量所得腫瘤體積,Vt為每一次測量時的腫瘤體積。

      4.5.2.3瘤重及瘤重抑制率

      末次給藥后24小時,將待解剖CB17SCID小鼠實施安樂死,取瘤,盡快除去臟器周圍結(jié)締組織,并用吸水紙吸去臟器表面的血液及體液,以千分之一或以上精度電子天平進(jìn)行稱量。

      瘤重抑制率(%)=(溶劑對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/陰性對照組平均瘤重×100%。

      療效評價標(biāo)準(zhǔn):瘤重抑制率<40%為無效,≥40%,并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理P<0.05為有效。

      4.5.3血清PSA檢測

      解剖前采集小鼠全血,室溫放置0.5h至1h,于4℃,3000rpm離心15分鐘后分離血清,于-80℃保存?zhèn)溆?,待全部動物采樣結(jié)束后按照Human Kallikrein 3/PSA(R&D Systems)Quantikine ELISA試劑盒說明,進(jìn)行各小鼠血清PSA測定。

      4.5.4前列腺及精囊腺重量

      摘取腫瘤的同時摘取各小鼠的前列腺及精囊腺,用分析天平測定其重量。

      4.5.5體重

      測定時間:于去勢手術(shù)前測定1次體重,并于手術(shù)后根據(jù)小鼠狀態(tài)進(jìn)行體重監(jiān)測;首次給藥前測定1次,開始給藥后每1-2天測定一次。根據(jù)體重計算各小鼠的體重改變百分比(Wchange%=(Wt-W0)/W0*100,其中W0為首次給藥當(dāng)天(即第一天)測量所得體重,Wt為每一次測量時的體重)。

      5統(tǒng)計分析與結(jié)果判定

      所獲數(shù)據(jù)采用EXCEL和SPSS進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

      先采用LEVENE檢驗進(jìn)行方差齊性檢驗,當(dāng)方差齊時(P≥0.05),采用重復(fù)測量方差分析(Repeated measures ANOVA)對相對腫瘤體積及體重改變百分比的組別差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗,組別差異有統(tǒng)計學(xué)意義時(P<0.05),采用單因素方差分析(ANOVA)中的Dunnett’s t檢驗(Dunnett法)對各時間點的組間差異進(jìn)行比較;重復(fù)測量方差分析顯示組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義時(P≥0.05),則統(tǒng)計分析結(jié)束。當(dāng)方差不齊時(P<0.05),采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗(K-W法)進(jìn)行統(tǒng)計分析。當(dāng)Kruskal-Wallis H秩和檢驗顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義時(P<0.05),則采用Mann-Whitney U檢驗(M-W法)對各時間點組間差異進(jìn)行比較;當(dāng)Kruskal-Wallis H秩和檢驗顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義時(P≥0.05),統(tǒng)計分析結(jié)束。

      其他指標(biāo)均數(shù)的組別差異,當(dāng)方差齊時(P≥0.05),采用單因素方差分析(ONE-WAYANOVA)對組別差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗,組別差異有統(tǒng)計學(xué)意義時(P<0.05),采用Dunnett’s t檢驗(Dunnett法)對組間差異進(jìn)行比較;單因素方差分析顯示組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義時(P≥0.05),則統(tǒng)計分析結(jié)束。當(dāng)方差不齊時(P<0.05),采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗(K-W法)進(jìn)行統(tǒng)計分析。當(dāng)Kruskal-Wallis H秩和檢驗顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義時(P<0.05),則采用Mann-Whitney U檢驗(M-W法)對組間差異進(jìn)行比較;當(dāng)Kruskal-Wallis H秩和檢驗顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義時(P≥0.05),統(tǒng)計分析結(jié)束。

      6試驗結(jié)果

      6.1一般狀態(tài)觀察

      各組腫瘤直觀情況如圖1所示。進(jìn)入給藥期后,各組小鼠體重普遍呈下降趨勢,各組小鼠均有個別小鼠體呈現(xiàn)瘦弱狀態(tài)。從腫瘤直觀狀態(tài)來看,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組、AHS-114聯(lián)合潑尼松組小鼠腫瘤相對其他組較小,到給藥后期,各組均有1-2只小鼠腫瘤處皮膚出現(xiàn)壞死龜裂甚至潰爛,如圖1中黑色箭頭所示。各組小鼠精神狀態(tài)尚佳。

      6.2腫瘤測量與評價

      6.2.1.1相對腫瘤體積

      如表2及圖2所示,溶劑對照組平均相對腫瘤體積呈現(xiàn)出穩(wěn)步增長趨勢,在給藥期最后一天(第28天)為3.92±0.5,潑尼松-2mg/kg組腫瘤生長情況與溶劑對照組相仿,在給藥最后一天為4.14±0.71。醋酸阿比特龍-170mg/kg組、AHS-114-300mg/kg及AHS-114-200mg/kg組在給藥最后一天平均相對腫瘤體積分別為3.87±0.5、3.93±0.37及3.20±0.55,也與溶劑對照組相當(dāng)。兩個聯(lián)合用藥組醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松、AHS-114聯(lián)合潑尼松組效果相對較好,給藥最后一天平均相對腫瘤體積分別為1.62±0.29、2.16±0.30。

      與溶劑對照組相比,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組給藥第4天相對腫瘤體積顯著性降低(P<0.05),給藥第7天至試驗結(jié)束相對腫瘤體積均極顯著性降低(P<0.01);AHS-114聯(lián)合潑尼松組給藥第10天,第19天至試驗結(jié)束相對腫瘤體積均顯著性降低(P<0.05);其他各組與溶劑對照組相比均無顯著性差異(P≥0.05)。

      與醋酸潑尼松單用組相比,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組自給藥第4天至試驗結(jié)束,相對腫瘤體積均極顯著性降低(P<0.01);AHS-114-300mg/kg組給藥第10天和第16天相對腫瘤體積顯著性降低(P<0.05);AHS-114-200mg/kg組給藥第10天、第13天及第16天相對腫瘤體積顯著性降低(P<0.05);AHS-114聯(lián)合潑尼松組于給藥第7天、第19 天和第28天相對腫瘤體積顯著性降低(P<0.05),給藥第10天至16天、第22天和第25天相對腫瘤體積極顯著性降低(P<0.01)。

      兩個聯(lián)合用藥組相比,相對腫瘤體積均無顯著性差異(P≥0.05)。

      各組相對腫瘤體積原始數(shù)據(jù)及圖表如附錄所示。

      表2各組平均相對腫瘤體積(Mean±SEM)

      備注:*P<0.05,**P<0.01vs.溶劑對照組;P<0.05,▲▲P<0.01vs.潑尼松組;#P<0.05,##P<0.01醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組vs.AHS-114聯(lián)合潑尼松組。

      6.2.1.2相對腫瘤增值率

      各組相對腫瘤增值率(T/C(%))如表3和圖3所示,統(tǒng)計學(xué)檢驗結(jié)果與相對腫瘤體積相同,在此不作贅述。由圖3可見,兩個聯(lián)合用藥組T/C(%)隨著給藥時間的增長呈持續(xù)下降趨勢,在給藥最后一天,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組T/C(%)為41.39±7.46,AHS-114聯(lián)合潑尼松組T/C(%)為55.03±7.60,均能顯著性抑制腫瘤生長,但是未能達(dá)到《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的藥物有效標(biāo)準(zhǔn)中的有效標(biāo)準(zhǔn)(T/C(%)≤40)。

      表3各組相對腫瘤增值率(%)(Mean±SEM)

      備注:*P<0.05,**P<0.01vs.溶劑對照組;P<0.05,▲▲P<0.01vs.潑尼松組;#P<0.05,##P<0.01醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組vs.AHS-114聯(lián)合潑尼松組。

      6.2.2腫瘤體積改變百分比

      圖4為給藥最后一天(第28天)各組腫瘤體積改變百分比(Vchange%=(V t-V0)/V0×100),由圖可見溶劑對照組各小鼠腫瘤體積均較初始體積大,該組共8只小鼠,腫瘤體積均較初始腫瘤體積增大1倍以上(>100%)。醋酸阿比特龍-170mg/kg組、AHS-114-300mg/kg、AHS-114-200mg/kg及潑尼松-2mg/kg組腫瘤體積改變百分比分布情況與溶劑對照組相仿;兩個聯(lián)合用藥組腫瘤體積改變百分比整體偏小,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組8只中有5只腫瘤體積較初始腫瘤體積增大在1倍以內(nèi)(<100%),其中有3只腫瘤體積較初始腫瘤體積縮小(<0%);AHS-114聯(lián)合潑尼松組8只中有5只腫瘤體積較初始腫瘤體積增大在1倍以內(nèi)(<100%)。說明兩個聯(lián)合用藥組對腫瘤生長的抑制作用較為明顯。

      6.2.3瘤重及瘤重抑制率

      如表4及圖5所示,溶劑對照組平均評價瘤重為0.431±0.066g,潑尼松-2mg/kg組瘤重為0.656±0.230g。醋酸阿比特龍-170mg/kg組、AHS-114-300mg/kg及AHS-114-200mg/kg組瘤重與溶劑對照組相當(dāng)。兩個聯(lián)合用藥組醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松、AHS-114聯(lián)合潑尼松組效果相對較好,平均瘤重分別為0.234±0.077g、0.204±0.038g,瘤重抑制率分別為45.67%、52.56%。

      與溶劑對照組相比,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組瘤重顯著性降低(P<0.05),AHS-114聯(lián)合潑尼松組瘤重極顯著性降低(P<0.01)。其他各組與溶劑對照組相比均無顯著性差異(P≥0.05)。

      與潑尼松-2mg/kg組相比,兩個聯(lián)合用藥組瘤重均顯著性降低(P<0.05)。

      兩個聯(lián)合用藥組間相比,瘤重?zé)o顯著性差異(P≥0.05)。

      圖6為各組離體腫瘤組織數(shù)碼照片。

      表4瘤重和瘤重抑制率(Mean±SEM)

      備注:*P<0.05,**P<0.01vs.溶劑對照組;P<0.05,▲▲P<0.01vs.潑尼松組;#P<0.05,##P<0.01醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組vs.AHS-114聯(lián)合潑尼松組。

      6.3血清PSA檢測

      各組血清PSA濃度如表5及圖7所示,溶劑對照組血清PSA濃度為64.67±10.27ng/mL,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組血清PSA濃度為40.16±16.25ng/mL,AHS-114聯(lián)合潑尼松組血清PSA濃度為22.23±6.80ng/mL。

      與溶劑對照組相比,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松能一定程度降低血清PSA含量,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P≥0.05);AHS-114聯(lián)合潑尼松能極顯著性降低血清PSA含量(P<0.01);其他各組與溶劑對照組相比均無顯著性差異(P≥0.05)。

      與潑尼松-2mg/kg組相比,AHS-114聯(lián)合潑尼松能顯著性降低血清PSA含量(P<0.05)。

      兩個聯(lián)合用藥組間相比,血清PSA含量無顯著性差異(P≥0.05)。

      6.4前列腺及精囊腺重量

      各組前列腺及精囊腺重量如表6所示,各組間均無顯著性差異(P≥0.05)。

      表6前列腺及精囊腺重量(Mean±SEM)

      備注:*P<0.05,**P<0.01vs.溶劑對照組;P<0.05,▲▲P<0.01vs.潑尼松組;#P<0.05,##P<0.01醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組vs.AHS-114聯(lián)合潑尼松組。

      6.5體重

      各組體重變化百分比如所示,各組體重隨時間的延長均呈現(xiàn)持續(xù)下降趨勢,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P≥0.05)。

      結(jié)論

      溶劑對照組(n=8)與潑尼松單用組(n=5)平均相對腫瘤體積呈現(xiàn)出穩(wěn)步增長趨勢,與溶劑對照組相比,醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組(n=8)給藥第4天相對腫瘤體積顯著性降低,給藥第7天至試驗結(jié)束相對腫瘤體積均極顯著性降低;AHS-114聯(lián)合潑尼松組(n=8)給藥第10天,第19天至試驗結(jié)束相對腫瘤體積均顯著性降低;其他各給藥組腫瘤生長情況與溶劑對照組相仿。在給藥最后一天,潑尼松單用組T/C(%)為105.64±18.14,瘤重抑制率為-18.78%,與溶劑對照組相比無腫瘤抑制作用;醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松組T/C(%)為41.39±7.46,AHS-114聯(lián)合潑尼松組T/C(%)為55.03±7.60,均能顯著性抑制腫瘤生長,但是還未能達(dá)到《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的藥物有效標(biāo)準(zhǔn)中的有效標(biāo)準(zhǔn)(T/C(%)≤40),兩組瘤重抑制率分別為45.67%、52.56%,對瘤重抑制作用明顯;另外,AHS-114聯(lián)合潑尼松還能極顯著性地降低荷瘤小鼠血清PSA濃度,也進(jìn)一步說明受試藥AHS-114聯(lián)合潑尼松后能對去勢抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠腫瘤增長有較為明顯的抑制作用。兩個聯(lián)合用藥組間相比,各指標(biāo)均無顯著性差異。

      各組均有個別小鼠腫瘤處皮膚出現(xiàn)龜裂和壞死,同時各組體重普遍呈下降趨勢,各 組對體重的改善情況均不明顯。

      綜上所述,受試藥AHS-114-200mg/kg聯(lián)合潑尼松后,對去勢抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠腫瘤增長有較為明顯的抑制作用,未呈現(xiàn)明顯毒副作用,與同等劑量下的陽性藥醋酸阿比特龍聯(lián)合潑尼松對腫瘤的抑制作用相當(dāng),但還未達(dá)到《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的有效標(biāo)準(zhǔn)。

      以上對本發(fā)明的具體實施例進(jìn)行了描述。需要理解的是,本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式,本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改,這并不影響本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。

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