本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑的方法，尤其是一種用高效液相色譜法檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑丁基羥基茴香醚(BHA)和二丁基羥基甲苯(BHT)的方法。
背景技術(shù)：
：恩雜魯胺的化學(xué)名稱為4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-5，5-二甲基-4-氧代-2-硫代咪唑烷-1-基]-2-氟-N-甲基苯甲酰胺；英文為4-{3-[4-cyano-3-(triflu-oromethyl)phenyl]-5，5-dimethyl-4-oxo-2-sulfanyli-deneimidazolidin-1-yl}-2-fluoro-N-methylbenz-amide；分子式為C21H16F4N4O2S；分子量為464.44；CAS登記號為915087-33-1。恩雜魯胺是一種新型的非類固醇類雄激素受體抑制劑，作用于雄激素受體信號通路。競爭性抑制雄激素與雄激素受體的結(jié)合，同時抑制雄激素受體核移位和與DNA的相互作用。恩雜魯胺軟膠囊商品名為由安斯泰來和Medivation兩家公司共同研發(fā)。該藥于2012年8月31日被FDA批準(zhǔn)上市，用于既往接受過多西紫杉醇(多西他賽，docetaxel)化療的轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌(mCRPC)的治療。2014年9月10日，F(xiàn)DA批準(zhǔn)用用于既往未接受化療的轉(zhuǎn)移性去勢性前列腺癌(mCRPC)男性患者的治療，這一決定顯著增加了這款口服藥物潛在的適用人群。FDA公開說明書中提到恩雜魯胺軟膠囊內(nèi)容物組成為恩雜魯胺、辛酰癸酸聚乙二醇甘油酯、抗氧劑丁基羥基茴香醚(BHA)和二丁基羥基甲苯(BHT)。但恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑的檢測，目前還沒有相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。為保證恩雜魯胺軟膠囊在放置過程的質(zhì)量控制，有必要針對恩雜魯胺軟膠囊建立抗氧劑的檢測方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的問題提供一種檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑的方法，對恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑BHA、BHT進(jìn)行有效分離，從而對恩雜魯胺軟膠囊產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效控制，保證恩雜魯胺軟膠囊的質(zhì)量。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑的方法，包括：步驟1：取恩雜魯胺軟膠囊內(nèi)容物，加稀釋液溶解，定量配制成一定濃度的供試品溶液；步驟2：對供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測，以水相為流動相A、有機(jī)相為流動相B進(jìn)行梯度洗脫。本發(fā)明中，首先采用稀釋劑將恩雜魯胺軟膠囊中溶解后配制成供試品溶液。優(yōu)選的，所述稀釋液為乙腈和/或甲醇。更優(yōu)選為乙腈。優(yōu)選的，所述供試品溶液中每1mL含恩雜魯胺約1mg-10mg。即恩雜魯胺軟膠囊內(nèi)容物，加稀釋液溶解后，加稀釋液調(diào)整供試品溶液的濃度至每1mL含恩雜魯胺約1mg-10mg。更優(yōu)選為每1mL含恩雜魯胺約5mg。本發(fā)明定量吸取供試品溶液進(jìn)高效液相色譜儀，采用一定比例的水相-有機(jī)相為流動相，結(jié)合梯度洗脫方法，用于檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑。本發(fā)明中，所述“抗氧劑”在沒有明確區(qū)分的情況下，可以是BHA或者BHT。本發(fā)明的測定方法均適用于恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑BHA和BHT的檢測。本發(fā)明所述方法對高效液相色譜儀無特殊要求?？梢詾閸u津LC-20AT高效液相色譜儀，也可以為島津SPD-M20A效液相色譜儀。優(yōu)選的，所述供試品溶液吸取量為10μl-20μl。優(yōu)選的，所述色譜柱為FluoroSep-RPPhenyl色譜柱。優(yōu)選的，所述檢測波長為260～300nm，柱溫為25～45℃。優(yōu)選的，檢測波長為277nm，柱溫為38℃～42℃。優(yōu)選的，所述水相選自甲酸水溶液、乙酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液。更優(yōu)選為甲酸水溶液。優(yōu)選的，所述水相中所含酸濃度為0.005％～0.5％。更優(yōu)選為0.05％。優(yōu)選的，所述有機(jī)相選自甲醇、乙腈。更優(yōu)選為乙腈。優(yōu)選的，所述流動相A和流動相B的流速為1.4～1.7mL/min。更優(yōu)選為1.5mL/min。優(yōu)選的，所述梯度洗脫程序?yàn)樵谝恍?shí)施方案中，所述梯度洗脫程序中流動相A與流動相B的初始比例為70:30。在一些實(shí)施方案中，所述梯度洗脫程序中流動相A與流動相B的初始比例為65:35。在另一些實(shí)施方案中，所述梯度洗脫程序中流動相A與流動相B的初始比例為75:25。分離度(R)用于評價待測物質(zhì)與被分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)分離效能的關(guān)鍵指標(biāo)。可以通過測定待測物質(zhì)與雜質(zhì)的分離度，對色譜系統(tǒng)分離效能進(jìn)行評價與調(diào)整。無論是定性鑒別還是定量測定，均要求待測物質(zhì)色譜峰與其他色譜峰之間有較好的分離度。本發(fā)明按中國藥典2015年版第四部通則0512(高效液相色譜法)對本發(fā)明所述方法進(jìn)行分離度驗(yàn)證。結(jié)果表明利用本發(fā)明所述方法檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑BHA、BHT，BHA和BHT色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度均大于1.5，表明本發(fā)明所述方法可以對恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑BHA、BHT有效分離，為控制恩雜魯胺軟膠囊的質(zhì)量提供有效控制，具有較大的實(shí)際應(yīng)用價值。由上述的技術(shù)方案可知，本發(fā)明所述檢測恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑的方法以一定比例的水相-有機(jī)相為流動相，結(jié)合梯度洗脫方法可以對恩雜魯胺軟膠囊中抗氧劑與其他成分進(jìn)行有效分離，從而有效控制恩雜魯胺軟膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。圖1示實(shí)施例1空白溶劑色譜圖；圖2示實(shí)施例1對照溶液色譜圖；圖3示實(shí)施例1恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液色譜圖；圖4示實(shí)施例2在流速為1.4ml/min條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖；圖5示實(shí)施例3在流速為1.7ml/min條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液色譜圖；圖6示實(shí)施例4在柱溫為38℃條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖；圖7示實(shí)施例5在柱溫為42℃條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖；圖8示實(shí)施例6在流動相A:B初始比例為(65:35)的條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖；圖9示實(shí)施例7在流動相A:B初始比例為(75:25)的條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖；圖10示實(shí)施例8在色譜儀為島津SPD-M20A條件下恩雜魯胺軟膠囊供試品溶液的色譜圖。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本鄰域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例1儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀及其工作站，PDA檢測器色譜柱：FluoroSep-RPPhenyl(4.6×250mm5μm)流動相A：0.05％甲酸水溶液(0.5ml甲酸，加水1000ml)流動相B：乙腈檢測波長：277nm流速：1.5mL/min進(jìn)樣量：20μL柱溫：40℃梯度洗脫程序如表1。表1梯度洗脫程序時間(min)A％B％0.01703010406015010020010020.1703030Stop--稀釋液：乙腈取恩雜魯胺軟膠囊內(nèi)容物，加稀釋液配制成每1mL含恩雜魯胺約5mg的溶液，作為供試品溶液。取BHA和BHT適量，加稀釋液溶解混勻，作為對照溶液。取空白溶劑和供試品溶液，分別按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。典型色譜圖見圖1，圖2，圖3。圖2中BHA保留時間為12.797min，BHT保留時間為16.951min。圖3中BHA保留時間為12.768min，與相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.682、1.992；BHT保留時間為16.943min，與相鄰雜質(zhì)分離度為1.520。結(jié)果表明，空白溶劑不干擾測定，抗氧劑BHA、BHT與其相鄰的各雜質(zhì)均能達(dá)到良好的分離，符合中國藥典的要求。實(shí)施例2改變柱流速1.4ml/min，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定。典型圖譜見圖4。BHA保留時間為13.243min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.430、1.624；BHT保留時間為17.302min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為1.509。實(shí)施例3改變柱流速1.7ml/min，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖5。BHA保留時間為11.900min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.854、2.491；BHT保留時間為16.281min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為2.260。實(shí)施例4改變柱溫38℃，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖6。BHA保留時間為12.790min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.620、1.769；BHT保留時間為16.932min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為1.552。實(shí)施例5改變柱溫42℃，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖7。BHA保留時間為12.714min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.510、1.914；BHT保留時間為17.072min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為1.535。實(shí)施例6改變流動相梯度如表2，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖8。BHA保留時間為12.033min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：4.065、2.084；BHT保留時間為16.871min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為2.035。表2梯度洗脫程序?qū)嵤├?改變流動相梯度如表3，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖9。BHA保留時間為13.375min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.738、1.645；BHT保留時間為17.010min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為1.514。表3梯度洗脫程序時間(min)A％B％0.01752510406015010020010020.1703030Stop--實(shí)施例8改變色譜儀為島津SPD-M20A，其余色譜條件同實(shí)施例1進(jìn)行測定，典型圖譜見圖10。BHA保留時間為10.662min，與BHA相鄰兩雜質(zhì)的分離度依次為：3.393、1.963；BHT保留時間為14.888min，與BHT相鄰雜質(zhì)分離度為1.592。當(dāng)前第1頁1 2 3