本發(fā)明涉及中成藥檢測(cè)方法領(lǐng)域，尤其是涉及一種沙棘果油的質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

沙棘(Hippophae rhamnoides L.)為胡頹子科酸刺屬的落葉灌木或小喬木，耐旱、耐旱、耐鹽堿，適應(yīng)性強(qiáng)，是優(yōu)良的水土保持樹種，能顯著改善生態(tài)環(huán)境，集中分布在內(nèi)蒙古、甘肅、山西等地。沙棘果油是從沙棘鮮果中分離提取的有效部位，主要含脂肪酸類和脂溶性維生素，具有促進(jìn)體內(nèi)脂肪代謝，減低血液中膽固醇含量等藥理作用。市場(chǎng)上有多種以沙棘果油主要原料的保健品和藥品。由于沙棘果油市場(chǎng)應(yīng)用廣泛，生產(chǎn)加工成本高，市場(chǎng)中沙棘果油產(chǎn)品中摻入其它低成本的植物油，而現(xiàn)有質(zhì)量控制方法無(wú)法鑒別，造成市場(chǎng)產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，棕櫚酸、棕櫚油酸是沙棘果油中有效組分，但目前還尚未對(duì)沙棘果油中2種成分進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，采用氣相色譜法測(cè)定2種成分的含量，根據(jù)2種成分的含量限度及比例關(guān)系鑒別沙棘果油質(zhì)量偽劣，對(duì)于沙棘果油的質(zhì)量監(jiān)控有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問題，對(duì)沙棘果油的質(zhì)量偽劣，進(jìn)行有效控制和評(píng)價(jià)。本發(fā)明提供一種沙棘果油的質(zhì)量檢測(cè)方法，其方法包括脂肪酸類棕櫚酸、棕櫚油酸含量測(cè)定，該檢測(cè)方法具有步驟簡(jiǎn)便、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性高的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種沙棘果油的質(zhì)量檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括如下步驟：

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品，加甲醇，搖勻，加氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置水浴加熱3～7min，加三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱7～13min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移至量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.1～0.2g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為190～210℃，檢測(cè)器溫度200～230℃；程序升溫，初始溫度50～80℃，維持1～5min，以20～50℃·min^-1升溫速率至160～190℃，再1～2.5℃·min^-1升溫速率至190～210℃，維持10～15min；分流比30～60：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。

優(yōu)選的，所述檢測(cè)方法步驟⑴對(duì)照品溶液的制備為，分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品，加甲醇，搖勻，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置水浴加熱3～7min，加1～3mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱7～13min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管2～4次，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取2～4次，每次15～25mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩海诱和閷埩粑镆浦亮科恐?，稀釋至刻度，搖勻，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，加正己烷定容，搖勻，即得。

優(yōu)選的，所述檢測(cè)方法步驟⑶中毛細(xì)管色譜柱型號(hào)為HP-FFAP或DM-WAX。

優(yōu)選的，所述檢測(cè)方法步驟⑶色譜條件為：毛細(xì)管色譜柱DM-WAX；FID檢測(cè)器；進(jìn)樣口溫度為210℃，檢測(cè)器溫度230℃；程序升溫，初始溫度50℃，維持1min，以25℃·min^-1升溫速率至180℃，再1℃·min^-1升溫速率至200℃，維持10min；分流比50：1。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的優(yōu)選，所述檢測(cè)方法包括如下步驟：

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品，加甲醇，搖勻，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置水浴加熱5min，加2mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱10min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管3次，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取，合并乙醚液3次，每次20mL，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移至量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.15g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱DM-WAX；FID檢測(cè)器；進(jìn)樣口溫度為210℃，檢測(cè)器溫度230℃；程序升溫，初始溫度50℃，維持1min，以25℃·min^-1升溫速率至180℃，再1℃·min^-1升溫速率至200℃，維持10min；分流比50：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。

1.本發(fā)明氣相色譜條件的優(yōu)化：

本發(fā)明經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)摸索和嘗試，終于找到檢測(cè)分離度高，準(zhǔn)確性好，溫度性高的色譜條件。其以下是部分摸索條件。

表1氣相色譜分離條件的選擇試驗(yàn)

2.本發(fā)明氣相檢測(cè)方法的有益效果如下：

⑴、本發(fā)明建立的沙棘果油脂肪酸類主要成分棕櫚酸、棕櫚油酸含量檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法具有精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的良好的優(yōu)點(diǎn)。該檢測(cè)方法步驟簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，能有效鑒別沙棘果油中是否加入其它油脂，防止沙棘果油的摻假，可廣泛應(yīng)用于沙棘果油生產(chǎn)、檢驗(yàn)和質(zhì)量控制方法中。該方法應(yīng)用前景廣闊。

⑵、本發(fā)明對(duì)不同產(chǎn)地的沙棘果油采用氣相色譜法測(cè)定2種成分的含量，根據(jù)沙棘果油脂肪酸類主要成分棕櫚酸、棕櫚油酸的含量及比例關(guān)系特點(diǎn)。經(jīng)過多批次試驗(yàn)驗(yàn)證測(cè)得，沙棘果油中棕櫚酸和棕櫚油酸的總量不低于36.0％，且棕櫚酸：棕櫚油酸＝1：(0.90～1.20)。根據(jù)2種成分的含量限度及比例關(guān)系鑒別沙棘果油質(zhì)量偽劣，對(duì)于沙棘果油的質(zhì)量監(jiān)控和鑒別有十分重要意義。

附圖說(shuō)明

圖1是混合棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯對(duì)照品的GC色譜圖；

圖2是沙棘果油樣品的GC色譜圖；其中圖1和圖2中的2個(gè)色譜峰所代表的化合物名稱分別為①-棕櫚酸甲酯、②-棕櫚油酸甲酯。

1、沙棘果油棕櫚酸、棕櫚油酸含量檢測(cè)方法

1 儀器與試藥

1.1儀器LC-GC2010 PLUS氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)；DV215CD電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2試藥棕櫚酸(批號(hào)190029-201202)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，棕櫚油酸(批號(hào) 101491588)購(gòu)自SIGMA-ALORICH公司。甲醇、氫氧化鈉為分析純，國(guó)藥集團(tuán)；三氟化硼乙醚溶液，成都市科龍化工試劑廠；乙醚為分析純，洛陽(yáng)昊華化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水硫酸鈉為分析純，天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司；正己烷為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。沙棘果油為用不同產(chǎn)地沙棘鮮果通過壓榨離心法制備。

2 方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品儲(chǔ)備液制備

分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品各50mg，置20mL試管中，加甲醇2mL，搖勻，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液2mL，充氮后，置50℃水浴加熱5min，加2.0mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在50℃水浴加熱10min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管3次，每次10mL，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，做為儲(chǔ)備溶液。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL量瓶中，加正己烷定容，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備

取沙棘果油約0.15g，電子天平精密稱重，置同一20mL試管中，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液2mL，充氮，50℃水浴加熱5min，加2.0mL三氟化硼乙醚溶液，充氮，繼續(xù)在50℃水浴加熱10min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管3次，每次10mL，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4色譜條件

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱DM-WAX(聚乙二醇固定液30m×0.32mm×0.50μm)；載氣為高純氮?dú)?質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.999％)，流速1.5mL·min^-1，F(xiàn)ID檢測(cè)器；進(jìn)樣口溫度為210℃，檢測(cè)器溫度230℃；程序升溫，初始溫度50℃，維持1min，以25℃·min^-1升溫速率至180℃，再1℃·min^-1升溫速率至200℃，維持10min；氫氣流速40mL·min^-1，空氣流速400mL·min^-1，尾吹10mL·min^-1，分流比50：1，進(jìn)樣量1μL，理論板數(shù)按棕櫚酸計(jì)算不應(yīng)低于50000。

按上述色譜條件進(jìn)樣，混合對(duì)照品及樣品色譜圖見圖1。結(jié)果表明，各色譜峰分離度良好，樣品測(cè)定無(wú)干擾。

按下列公式計(jì)算。

m_對(duì)1、A_對(duì)1、、A_樣1分別為棕櫚酸對(duì)照品稱樣量、棕櫚酸對(duì)照品峰面積、沙棘果油中棕櫚酸峰面積；m_對(duì)1、A_對(duì)1、、A_樣1分別為棕櫚酸對(duì)照品稱樣量、棕櫚酸對(duì)照品峰面積、沙棘果油中棕櫚酸峰面積；m_樣為沙棘果油的稱樣量。

2.5線性關(guān)系考察

精密吸取2.1項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、4、6、8mL，置10mL量瓶中，用正己烷定容至，搖勻。配制的5種濃度對(duì)照品溶液及對(duì)照品儲(chǔ)備液分別注入色譜儀，按照“2.4項(xiàng)”下色譜條件進(jìn)樣，記錄各峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、各對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，分別得棕櫚酸、棕櫚油酸的回歸方程及線性范圍，結(jié)果見表1。

表1 2種成份的回歸方程和線性范圍

2.6精密度實(shí)驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液，按照“2.4項(xiàng)”下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定棕櫚酸、棕櫚油酸的峰面積，計(jì)算RSD分別為1.21％、1.02％，表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批沙棘果油(陜西延安市)，按照“2.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液，在“2.4項(xiàng)”色譜條件下，分別于0、2、4、12、24h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果棕櫚酸、棕櫚油酸和油酸峰面積RSD分別為1.36％、1.23％，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批沙棘果油(陜西延安市)，按照“2.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液，平行6份，分別按“2.4項(xiàng)”色譜條件測(cè)定。結(jié)果棕櫚酸、棕櫚油酸峰面積的RSD分別為2.16％、1.68％，表明該方法重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知棕櫚酸、棕櫚油酸的同一批沙棘果油(陜西延安市)0.075g，分別精密加入棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品，按照“2.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液，按“2.4項(xiàng)”色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果棕櫚酸、棕櫚油酸和油酸平均回收率分別為97.2％、98.9％，RSD分別為1.87％、1.58％。

2.10不同樣品測(cè)定

取不同產(chǎn)地沙棘果按照壓榨離心法制備沙棘果油，另取市售沙棘果油和其它植物油按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2不同樣品測(cè)定結(jié)果

沙棘果油中棕櫚酸和棕櫚油酸的總量不低于36.0％，且棕櫚酸：棕櫚油酸＝1：(0.90～1.20)。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但本發(fā)明不僅限于這些實(shí)施例，在未脫離本發(fā)明宗旨的前提下，所作的任何改進(jìn)均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品各50mg，置20mL試管中，加甲醇2mL，搖勻，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液2mL，充氮后，置50℃水浴加熱5min，加2.0mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在50℃水浴加熱10min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管3次，每次10mL，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩海诱和閷埩粑镆浦?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL量瓶中，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.15g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱DM-WAX；FID檢測(cè)器；進(jìn)樣口溫度為210℃，檢測(cè)器溫度230℃；程序升溫，初始溫度50℃，維持1min，以25℃·min^-1升溫速率至180℃，再1℃·min^-1升溫速率至200℃，維持10min；分流比50：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。

實(shí)施例2

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品各50mg，置20mL試管中，加甲醇2mL，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置50℃水浴加熱3min，加1mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱13min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管4次，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取4次，每次15mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL量瓶中，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.1g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為210℃，檢測(cè)器溫度230℃；程序升溫，初始溫度50℃，維持5min，以20℃·min^-1升溫速率至190℃，再2.5℃·min^-1升溫速率至210℃，維持15min；分流比60：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。

實(shí)施例3

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品各50mg，置20mL試管中，加甲醇2mL，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置50℃水浴加熱7min，加3mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱7min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管2次，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次25mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩?，加正己烷將殘留物移?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL量瓶中，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.2g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為190℃，檢測(cè)器溫度200℃；程序升溫，初始溫度80℃，維持1min，以50℃·min^-1升溫速率至160℃，再1·min^-1升溫速率至190，維持10min；分流比30：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。

實(shí)施例4

⑴、對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸、棕櫚油酸對(duì)照品各50mg，置20mL試管中，加甲醇2mL，加0.5moL·L^-1氫氧化鈉甲醇溶液，充氮后，置50℃水浴加熱5min，加2mL三氟化硼乙醚溶液，充氮后，繼續(xù)在水浴加熱10min，移至分液漏斗中，用水沖洗試管3次，洗液并入分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，乙醚液用無(wú)水硫酸鈉過濾，合并乙醚液，用氮?dú)饬鞔蹈擅岩海诱和閷埩粑镆浦?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL量瓶中，加正己烷定容，搖勻，即得；

⑵、供試品溶液的制備：取沙棘果油0.15g，精密稱定，按照步驟⑴“對(duì)照品溶液”的制備方法，制成供試品溶液；

⑶、色譜條件：毛細(xì)管色譜柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測(cè)器溫度215℃；程序升溫，初始溫度65℃，維持3min，以25℃·min^-1升溫速率至175℃，再1.5℃·min^-1升溫速率至200℃，維持13min；分流比40：1；

⑷、含量測(cè)定：

分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，按照上述步驟⑶的色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，即得。