本發(fā)明涉及一種細(xì)胞分析裝置及細(xì)胞分析方法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及一種分析腦脊髓液、體腔液等體液中的細(xì)胞的細(xì)胞分析裝置及細(xì)胞分析方法。

背景技術(shù)：

為診斷疾病而分析患者的體液是人們一直以來的做法。比如，特開（日本專利公開）2008-209386號(hào)公報(bào)中公開了一種獲取血液中白細(xì)胞信息的血細(xì)胞分析裝置和體液分析方法。在專利文獻(xiàn)1所記述的方法中，將體液中的白細(xì)胞與白細(xì)胞以外的粒子——即巨噬細(xì)胞、間皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等異性粒子分離并進(jìn)行解析。在以側(cè)向熒光強(qiáng)度為縱軸以側(cè)向散射光強(qiáng)度為橫軸的散點(diǎn)圖中，除去有上述異性粒子存在的熒光強(qiáng)度較大的區(qū)域、以及分布有因溶血而產(chǎn)生的紅細(xì)胞血影的熒光強(qiáng)度較小的區(qū)域后的區(qū)域被設(shè)定為白細(xì)胞出現(xiàn)的區(qū)域。

特開2008-209386號(hào)公報(bào)中記述了作為異性粒子的腫瘤細(xì)胞存在于體液中一事，但未能判斷出現(xiàn)在體液中的異性粒子是巨噬細(xì)胞、間皮細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞中的哪一種。因此無法檢測(cè)出體液中包含腫瘤細(xì)胞。

本發(fā)明正是針對(duì)此類情況，其目的在于提供一種能夠檢測(cè)出體液中腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞分析裝置和細(xì)胞分析方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的范圍只由后附權(quán)利要求所規(guī)定，在任何程度上都不受這一節(jié)發(fā)明內(nèi)容的陳述所限。

本發(fā)明第一方案涉及的細(xì)胞分析裝置包括：供包含體液的測(cè)定試樣流動(dòng)的流動(dòng)室；光照在流動(dòng)室流動(dòng)的測(cè)定試樣的光照部件；檢測(cè)出從光照下的測(cè)定試樣中的細(xì)胞產(chǎn)生的前向散射光的光檢測(cè)部件；根據(jù)光檢測(cè)部件中檢測(cè)出的前向散射光信號(hào)檢測(cè)出體液中的細(xì)胞的解析部件；以及輸出部件。解析部件根據(jù)前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度向輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，所述解析部件對(duì)屬于前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度比白細(xì)胞分布區(qū)域大的凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，所述解析部件根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)的信息向所述輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，所述流動(dòng)室使體液中有核細(xì)胞的核酸已熒光染色的測(cè)定試樣流動(dòng)，所述光檢測(cè)部件檢測(cè)出光照下的所述測(cè)定試樣中的細(xì)胞產(chǎn)生的熒光，所述解析部件根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)強(qiáng)度向所述輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，所述解析部件對(duì)屬于熒光信號(hào)強(qiáng)度位于白細(xì)胞分布區(qū)域和間皮細(xì)胞分布區(qū)域之間的區(qū)域的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，所述解析部件根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)向所述輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，試樣制備部件，用于制備已使所述體液中的紅細(xì)胞溶血的測(cè)定試樣。

優(yōu)選地，所述試樣制備部件制備已將所述體液中的有核細(xì)胞的核酸熒光染色的測(cè)定試樣。

本發(fā)明第二方案涉及的細(xì)胞分析裝置包括：供已將體液中有核細(xì)胞的核酸熒光染色的測(cè)定試樣流動(dòng)的流動(dòng)室；光照在流動(dòng)室流動(dòng)的測(cè)定試樣的光照部件；檢測(cè)出從光照下的測(cè)定試樣中的細(xì)胞產(chǎn)生的熒光的光檢測(cè)部件；根據(jù)光檢測(cè)部件中檢測(cè)出的熒光信號(hào)強(qiáng)度檢測(cè)出體液中的細(xì)胞的解析部件；以及輸出部件。解析部件根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)強(qiáng)度向輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，所述解析部件對(duì)屬于熒光信號(hào)強(qiáng)度位于白細(xì)胞分布區(qū)域和間皮細(xì)胞分布區(qū)域之間的區(qū)域的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，所述解析部件根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)的信息向所述輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

本發(fā)明第三方案涉及的細(xì)胞分析方法包括如下步驟：光照包含體液的測(cè)定試樣，檢測(cè)出從光照下的測(cè)定試樣中的細(xì)胞產(chǎn)生的前向散射光，根據(jù)前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，對(duì)屬于前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度比白細(xì)胞的分布區(qū)域大的凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)；根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)信息輸出與體液中腫瘤細(xì)胞相關(guān)的信息。

優(yōu)選地，使體液中的紅細(xì)胞溶血并制備測(cè)定試樣。

優(yōu)選地，檢測(cè)出從所述測(cè)定試樣中的細(xì)胞產(chǎn)生的熒光；根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)強(qiáng)度向所述輸出部件輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，對(duì)屬于熒光信號(hào)強(qiáng)度位于白細(xì)胞分布區(qū)域和間皮細(xì)胞分布區(qū)域之間的區(qū)域的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)；根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)的信息輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，對(duì)體液中的有核細(xì)胞的核酸進(jìn)行熒光染色并制備測(cè)定試樣。

本發(fā)明第四方案涉及的細(xì)胞分析方法包括如下步驟：制備已將體液中有核細(xì)胞的核酸熒光染色的測(cè)定試樣，光照測(cè)定試樣，檢測(cè)出從測(cè)定試樣中的細(xì)胞發(fā)出的熒光，根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光強(qiáng)度輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

優(yōu)選地，對(duì)屬于熒光信號(hào)強(qiáng)度位于白細(xì)胞分布區(qū)域和間皮細(xì)胞分布區(qū)域之間的區(qū)域的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)；根據(jù)計(jì)數(shù)的屬于所述非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)的信息輸出與體液中腫瘤細(xì)胞相關(guān)的信息。

本發(fā)明第五方案涉及的細(xì)胞分析方法包括如下步驟：光照包含體液的測(cè)定試樣，檢測(cè)出從光照下的測(cè)定試樣中的細(xì)胞獲得的光，根據(jù)通過檢測(cè)出的光信息生成的細(xì)胞的分布信息，至少從白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和間皮細(xì)胞中分離出腫瘤細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，輸出體液中腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信息。

通過本發(fā)明的細(xì)胞分析裝置和細(xì)胞分析方法能夠檢測(cè)出體液中的腫瘤細(xì)胞。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的細(xì)胞分析裝置一實(shí)施方式的外觀斜視圖；

圖2為圖1所示細(xì)胞分析裝置中測(cè)定單元的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為圖1所示細(xì)胞分析裝置中光學(xué)檢測(cè)器的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為圖1所示細(xì)胞分析裝置中信息處理單元的結(jié)構(gòu)說明圖；

圖5為陰性樣本的散點(diǎn)圖一例；

圖6為在凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域檢測(cè)出凝集腫瘤細(xì)胞的散點(diǎn)圖一例；

圖7為在非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域檢測(cè)出非凝集腫瘤細(xì)胞的散點(diǎn)圖一例；

圖8為第一實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元和信息處理單元進(jìn)行處理的流程圖；

圖9為第一實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法所使用的散點(diǎn)圖的示意圖；

圖10為第二實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元和信息處理單元進(jìn)行處理的流程圖；

圖11為第二實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法所使用的散點(diǎn)圖的示意圖；

圖12為第三實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元和信息處理單元進(jìn)行處理的流程圖。

優(yōu)選實(shí)施方式

下面參照附圖就本發(fā)明的細(xì)胞分析裝置和細(xì)胞分析方法的實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明不限于這些例示，本發(fā)明由權(quán)利要求所示并包括與權(quán)利要求具有同等的含意和范圍的內(nèi)容下的所有的變更。

（細(xì)胞分析裝置）

本實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析裝置1是一種檢測(cè)出體液樣本中所包含的白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、間皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等有核細(xì)胞并對(duì)各細(xì)胞計(jì)數(shù)的細(xì)胞分析裝置。本發(fā)明中的“體液”指除血液以外的腦脊髓液、腹水、胸水、滑液、腹膜透析引流液等。細(xì)胞分析裝置1如圖1所示，其具有測(cè)定單元2、配置在測(cè)定單元2前面的運(yùn)送單元3、以及信息處理單元4。采自患者的體液樣本裝入樣本容器T中。復(fù)數(shù)個(gè)樣本容器T支撐在樣架L上。樣架L由運(yùn)送單元3運(yùn)送，由此使體液樣本供應(yīng)到測(cè)定單元2。

信息處理單元4具有輸出部件41和輸入部件42。信息處理單元4與測(cè)定單元2、運(yùn)送單元3及主計(jì)算機(jī)5（參照?qǐng)D2）進(jìn)行可通信連接。信息處理單元4控制測(cè)定單元2和運(yùn)送單元3的作業(yè)，根據(jù)測(cè)定單元2檢測(cè)的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行解析，將解析結(jié)果傳送至主計(jì)算機(jī)5。

如圖2所示，測(cè)定單元2具有手部件21、樣本容器放置部件22、條形碼單元23、樣本吸移部件24、試樣制備部件25和檢測(cè)部件26。樣本吸移部件24具有穿刺針24a并從樣本容器T吸移樣本。試樣制備部件25具有混合艙室MC和加熱器H，通過將試劑混入樣本來制備測(cè)定中使用的測(cè)定試樣。檢測(cè)部件26具有光學(xué)檢測(cè)器D，其從測(cè)定試樣中檢測(cè)出細(xì)胞。測(cè)定單元2的各部分由信息處理單元4控制。

被運(yùn)送單元3置于位置P1的樣本容器T由手部件21夾持并從樣架L向上方抽出。搖動(dòng)手部件21，以此攪拌樣本容器T內(nèi)的樣本。攪拌結(jié)束后的樣本容器T由手部件21放置到被置于位置P1的樣本容器放置部件22。然后，樣本容器T由樣本容器放置部件22運(yùn)送至位置P2。

樣本容器T被置于位置P2后，通過設(shè)置在位置P2附近的條形碼單元23從貼在樣本容器T上的條形碼標(biāo)簽讀取樣本號(hào)。然后，樣本容器T由樣本容器放置部件22運(yùn)送至位置P3。樣本容器T被置于位置P3后，由樣本吸移部件24通過穿刺針24a從樣本容器T吸移一定量樣本。樣本吸移結(jié)束后，樣本容器T由樣本容器放置部件22向前方運(yùn)送，并由手部件21將其送回原來的樣架L的支撐位置。在穿刺針24a被移送到混合艙室MC的位置后，由樣本吸移部件24向混合艙室MC排出一定量的通過穿刺針24a吸移的樣本。

試樣制備部件25通過管分別與裝第一試劑的試劑容器251、裝第二試劑的試劑容器252、裝鞘液（稀釋液）的試劑容器253連接。試樣制備部件25連接到壓縮機(jī)（無圖示），且能夠通過上述壓縮機(jī)生成的壓力從試劑容器251~253取用各試劑。試樣制備部件25在混合艙室MC內(nèi)混合體液樣本、第一試劑、第二試劑，并用加熱器H加熱此混合液一定時(shí)間，制備測(cè)定試樣。試樣制備部件25中制備的測(cè)定試樣供應(yīng)到檢測(cè)部件26的光學(xué)檢測(cè)器D。

檢測(cè)部件26通過管連接裝鞘液（稀釋液）的試劑容器253。檢測(cè)部件26還連接壓縮機(jī)（無圖示），且能夠通過由所述壓縮機(jī)產(chǎn)生的壓力從試劑容器253取用鞘液（稀釋液）。

如圖3所示，光學(xué)檢測(cè)器D具有流動(dòng)室D1、鞘流系統(tǒng)D2、射束點(diǎn)形成系統(tǒng)D3、前向散射光受光系統(tǒng)D4、側(cè)向散射光受光系統(tǒng)D5和熒光受光系統(tǒng)D6。

鞘流系統(tǒng)D2使測(cè)定試樣在被鞘液包被的狀態(tài)下送入流動(dòng)室D1，在流動(dòng)室D1內(nèi)產(chǎn)生液流。射束點(diǎn)形成系統(tǒng)D3使光照部件——即半導(dǎo)體激光器D31照射的光通過準(zhǔn)直鏡D32和聚光鏡D33并照射到流動(dòng)室D1。以此，激光照射到從流動(dòng)室D1內(nèi)通過的液流中所包含的細(xì)胞。射束點(diǎn)形成系統(tǒng)D3還具有束霖止器D34。

前向散射光受光系統(tǒng)D4通過前向集光鏡D41聚集向前方的散射光（前向散射光），并用光電二極管D43接收通過了針孔D42的光。光電二極管D43根據(jù)接收的前向散射光的峰值輸出前向散射光信號(hào)（FSC）。側(cè)向散射光受光系統(tǒng)D5以側(cè)向集光鏡D51聚集向側(cè)向的散射光（側(cè)向散射光），并用分色鏡D52將一部分光反射，由光電二極管D53接收這一部分的光。光電二極管D53根據(jù)接收的側(cè)向散射光的峰值輸出側(cè)向散射光信號(hào)（SSC）。

光散射是諸如細(xì)胞那樣的粒子作為障礙物擋在光的前進(jìn)方向上，使光因粒子而改變其前進(jìn)方向所產(chǎn)生的現(xiàn)象。檢測(cè)出此散射光就能獲得粒子大小和材質(zhì)的相關(guān)信息。特別是從前向散射光中能夠獲得粒子（細(xì)胞）大小的相關(guān)信息。此外，從側(cè)向散射光中能夠獲得粒子內(nèi)部的信息。當(dāng)激光照射到細(xì)胞時(shí)，側(cè)向散射光強(qiáng)度依賴于細(xì)胞內(nèi)部的復(fù)雜程度（核的形狀、大小、密度及顆粒的量）。

熒光受光系統(tǒng)D6進(jìn)一步讓側(cè)向散射光中透過分色鏡D52的光（熒光）通過分光濾光器D61，以雪崩光電二極管D62接收該光。雪崩光電二極管D62根據(jù)接收到的熒光峰值輸出熒光信號(hào)（SFL）。

光照被熒光物質(zhì)染色的細(xì)胞時(shí)，會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)比照射光波長(zhǎng)長(zhǎng)的熒光。而細(xì)胞染色越充分則熒光強(qiáng)度越強(qiáng)，測(cè)定此熒光強(qiáng)度就能獲得細(xì)胞染色程度的相關(guān)信息。

在本實(shí)施方式中，光電二極管D43、光電二極管D53和雪崩光電二極管D62構(gòu)成了光檢測(cè)部件。

返回圖2，通過光學(xué)檢測(cè)器D獲取的前向散射光信號(hào)、側(cè)向散射光信號(hào)和熒光信號(hào)傳送至信息處理單元4。信息處理單元4根據(jù)接收的這些信號(hào)進(jìn)行解析。

如圖4所示，信息處理單元4由個(gè)人電腦組成，由主機(jī)40、輸出部件41和輸入部件42構(gòu)成。主機(jī)40具有CPU401、ROM402、RAM403、硬盤404、讀取裝置405、圖像輸出接口406、輸入輸出接口407和通信接口408。本實(shí)施方式中的輸出部件41是能夠顯示圖像等的顯示器，但也可以采用以紙質(zhì)方式輸出信息的打印機(jī)等作為輸出部件。

構(gòu)成解析部件的CPU401執(zhí)行存儲(chǔ)在ROM402的計(jì)算機(jī)程序和下載到RAM403中的計(jì)算機(jī)程序。RAM403用于讀取存儲(chǔ)在ROM402和硬盤404的計(jì)算機(jī)程序。RAM403還作為執(zhí)行上述計(jì)算機(jī)程序時(shí)的CPU401的工作空間使用。

硬盤404中存儲(chǔ)有操作系統(tǒng)、供CPU401執(zhí)行的計(jì)算機(jī)程序、以及執(zhí)行計(jì)算機(jī)程序所用的數(shù)據(jù)。硬盤404中還存儲(chǔ)有執(zhí)行圖8、圖10和圖12所示信息處理單元4的處理的程序404a。讀取裝置405由CD驅(qū)動(dòng)器或DVD驅(qū)動(dòng)器等構(gòu)成，其能夠讀取存儲(chǔ)于存儲(chǔ)介質(zhì)405a的計(jì)算機(jī)程序和數(shù)據(jù)。程序404a存儲(chǔ)于存儲(chǔ)介質(zhì)405a時(shí)，由讀取裝置405從存儲(chǔ)介質(zhì)405a讀取的程序404a存儲(chǔ)到硬盤404。

圖像輸出接口406將與圖像數(shù)據(jù)相應(yīng)的影像信號(hào)輸出到輸出部件41，輸出部件41根據(jù)圖像輸出接口406輸出的影像信號(hào)顯示圖像。用戶通過輸入部件42輸入指示。輸入輸出接口407接收通過輸入部件42輸入的信號(hào)。通信接口408連接測(cè)定單元2、運(yùn)送單元3和主計(jì)算機(jī)5，CPU401通過通信接口408與這些裝置之間傳輸指示信號(hào)和數(shù)據(jù)。

在試樣制備部件25，混合體液樣本和試劑，以使體液中可能包含的紅細(xì)胞溶血，破壞白細(xì)胞等細(xì)胞的細(xì)胞膜直到熒光色素能透過的程度，染色細(xì)胞（有核細(xì)胞）的核酸，制備測(cè)定試樣。具體而言，將以下第一試劑和第二試劑混入體液樣本，制備測(cè)定試樣。

第一試劑含有能夠染色有核細(xì)胞的核酸的熒光色素，是一種對(duì)經(jīng)后述第二試劑處理后的體液試樣中的有核細(xì)胞的核酸進(jìn)行熒光染色的試劑。通過用第一試劑對(duì)血液試樣進(jìn)行處理，有核酸的白細(xì)胞等細(xì)胞被染色。

熒光色素只要能染色核酸即可，在本發(fā)明沒有特別限定，可以與光源（半導(dǎo)體激光器D31）照射的光的波長(zhǎng)相應(yīng)地進(jìn)行適當(dāng)選擇。這種熒光色素比如有：碘化丙啶（propidium Iodide）、溴化乙錠（Ethidium bromide）、乙錠－吖啶異質(zhì)二聚體（ethidium -acridine heterodimer）、乙錠二疊氮化物（Ethidium diazide）、乙錠同型二聚體－１（Ethidium homodimer－１）、乙錠同型二聚體－２（Ethidium homodimer－２）、乙錠單疊氮化物（Ethidium monoazide）、三亞甲基雙［［３‐［［４‐［［（３‐甲基苯并噻唑‐３‐鎓）‐２‐基］亞甲基］‐１，４‐二氫喹啉］‐１‐基］丙基］二甲基銨］?四碘化物（TOTO－１）（英文為：trimethylene bis［［３‐［［４‐［［（３‐methylbenzothiazole‐３‐ium）‐２‐yl］methylene］‐１，４‐Dihydroquinoline］‐１‐yl］propyl］dimethylaminium］?tetraiodide）、４‐［（３‐甲基苯并噻唑‐２（３Ｈ）‐亞基）甲基］‐１‐［３‐（三甲基氨基）丙基］喹啉鎓?二碘化物（TO－PRO－１）（英文為：４‐［（３‐Methylbenzothiazole‐２（３Ｈ）‐ylidene）methyl］‐１‐［３‐（Trimethylaminio）propyl］Quinolinium?diiodide）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐四甲基‐Ｎ，Ｎ'‐雙［３‐［４‐［３‐［（３‐甲基苯并噻唑‐３‐鎓）‐２‐基］‐２‐亞丙烯基］‐１，４‐二氫喹啉‐１‐基］丙基］‐１，３‐丙烷二銨?四碘化物（TOTO－3）（英文為：Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐tetramethyl‐Ｎ，Ｎ'‐bis［３‐［４‐［３‐［（３‐Methylbenzothiazole‐３‐ium）‐２‐yl］‐２‐propenylidene］‐１，４‐Dihydroquinoline‐１‐yl］propyl］‐１，３‐propanediaminium?tetraiodide）、或２‐［３‐［［１‐［３‐（三甲基氨基）丙基］‐１，４‐二氫喹啉］‐４‐亞基］‐１‐丙烯基］‐３‐甲基苯并噻唑‐3‐鎓?二碘化物（TO－PRO－3）（英文為：２‐［３‐［［１‐［３‐（Trimethylaminio）propyl］‐１，４‐Dihydroquinoline］‐４‐ylidene］‐１‐propenyl］‐３‐Methylbenzothiazole‐３‐ium?diiodide）以及以下通式（I）所示熒光色素。其中尤以以下通式（Ｉ）所示熒光色素為宜。

【化1】

式（I）中，R₁及R₄彼此相同或不同，為氫（hydrogen）原子、烷（alkyl）基、有羥（hydroxy）基的烷基（alkyl）鏈、有醚基（ether group）的烷基（alkyl）鏈、有酯（ester）基的烷基鏈（alkyl chain）、或可以有取代基的苯甲基（benzyl group）。R₂及R₃彼此相同或不同，為氫（hydrogen）原子、羥基（hydroxyl group）、鹵素（halogen）、烷（alkyl）基、鏈烯基（alkenyl group）、炔（alkynyl）基、烷氧（alkoxy）基、烷磺?；╝lkylsulfonyl group）或苯基（phenyl group）。Z為硫（sulfur ）原子、氧原子或有甲基（methyl group）的碳原子（carbon atom），n為0、1、2或3；X^－為陰離子。

在本實(shí)施方式中，烷基（alkyl group）是直鏈（linear-chain）或支鏈（branched-chain）都可。式（I）中，當(dāng)R₁和R₄其中之一為碳數(shù)6~18的烷基（alkyl group）時(shí)，另一者最好為氫原子（hydrogen atom）或碳數(shù)不足6的烷基（alkyl group）。碳數(shù)6~18的烷基（alkyl group）中以碳數(shù)為6、8或10的烷基（alkyl group）為宜。

式（I）中，R₁及R₄的苯甲基（benzyl group）的取代基例如可列舉出：碳數(shù)1~20的烷基（alkyl group）、碳數(shù)2~20的鏈烯基（alkenyl group）或碳數(shù)2~20的炔基（alkynyl group）。其中最好是甲基（methyl group）或乙基（ethyl group）。

式（I）中，R₂和R₃的鏈烯基（alkenyl group）例如可列舉出碳數(shù)2~20的鏈烯基（alkenyl group）。R₂和R₃的烷氧基（alkoxy group）可列舉出碳數(shù)1~20的烷氧基（alkoxy group）。其中尤以甲氧基（methoxy group）或乙氧基（ethoxy group）為宜。

式（I）中，陰離子X^－如有F^－、CI^－、Br^－、I^－一類的鹵素離子、CF₃SO₃^－、BF₄^－等。

第一試劑中的熒光色素可以是一種，也可以是二種以上。

第一試劑中的熒光色素濃度可以與熒光色素種類相應(yīng)地進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定，通常選擇0.01~100pg/μL，尤以0.1～10pg/μL為宜。比如，當(dāng)使用式（I）所示的熒光色素作為第一試劑的熒光色素時(shí)，第一試劑中的該熒光色素濃度以0.2~0.6pg/μL為宜，0.3～0.5pg/μL更佳。

第一試劑可以如下獲取：將所述熒光色素用適當(dāng)溶劑溶解，直至其達(dá)到上述濃度。溶劑只要能溶解上述熒光色素即可，無特別限定，比如有水、有機(jī)溶劑及其混合物。有機(jī)溶劑如有乙醇（alcohol）、乙二醇（ethylene glycol）、二甲基亞砜（DMSO）（Dimethyl Sulfoxide）等。熒光色素在水溶液中的保存穩(wěn)定性有時(shí)較差，故最好使其溶解在有機(jī)溶劑中。

第一試劑也可以使用市面出售的白細(xì)胞分類用染色試劑。此種染色試劑例如有希森美康株式會(huì)社生產(chǎn)的FLUOROCELL（注冊(cè)商標(biāo)）WDF。FLUOROCELLWDF是包含式（I）所示熒光色素的染色試劑。

第二試劑含有使紅細(xì)胞溶血并給細(xì)胞的細(xì)胞膜造成足以讓上述第一試劑中的熒光色素透過的破壞的表面活性劑——即陽離子型表面活性劑和/或非離子型表面活性劑。第二試劑以20mM以上50mM以下的濃度含有芳香族的有機(jī)酸。在此，第二試劑的特征是：當(dāng)芳香族有機(jī)酸的濃度為20mM以上且小于30mM時(shí)，第二試劑的pH為5．5以上6．4以下，當(dāng)芳香族有機(jī)酸的濃度為30mM以上50mM以下時(shí)，第二試劑的pH為5．5以上7．0以下。

在本實(shí)施方式中，第二試劑中的芳香族有機(jī)酸濃度為20mM以上且不到30mM時(shí)，第二試劑的pH以5．5以上6．4以下為宜，5．5以上6．2以下更為理想。當(dāng)?shù)诙噭┲械姆枷阕逵袡C(jī)酸濃度為30mM以上50mM以下——最好為40mM以上50mM以下時(shí)，第二試劑的pH為5．5以上7．0以下。最為理想的是，當(dāng)?shù)诙噭┲械姆枷阕逵袡C(jī)酸濃度為40mM以上50mM以下時(shí)，第二試劑的pH為5．5以上6．2以下。

在本實(shí)施方式中，所謂芳香族有機(jī)酸指分子中至少有一個(gè)芳香環(huán)的酸及其鹽。芳香族有機(jī)酸例如有芳香族羧酸（carboxylic acid）、芳香族磺酸（Sulfonic acid）等。在本實(shí)施方式中宜使用鄰苯二甲酸（Phthalic acid）、安息香酸（benzoic acid）、水楊酸（salicylic acid）、馬尿酸（hippuric acid）、對(duì)氨基苯磺酸（p- Aminobenzenesulfonic Acid）、苯磺酸（benzenesulfonic acid）及上述物質(zhì)的鹽。第二試劑中的芳香族有機(jī)酸可以是一種，也可以是二種以上。當(dāng)?shù)诙噭┲邪N以上芳香族有機(jī)酸時(shí)，其濃度合計(jì)在20mM以上50mM以下即可。

陽離子型表面活性劑可以使用季銨鹽（quaternary ammonium salt）類表面活性劑或吡啶鹽（Pyridinium Salt）類表面活性劑。

季銨鹽（quaternary ammonium salt）類表面活性劑例如有以下式（II）所示的總碳數(shù)為9~30的表面活性劑。

【化2】

（II）中，R₁是碳數(shù)為6~18的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group），R₂及R₃彼此相同或不同，是碳數(shù)為1~4的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group）。R₄是碳數(shù)為1~4的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group）、或者苯甲基（benzyl group），X^-是鹵素（halogen）原子。

式（II）中，R_１較為理想的是碳數(shù)為6、8、10、12和14的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group），尤以直鏈烷基（alkyl group）為宜。更具體而言，R_１可以列舉出辛基(octyl)、癸基(decyl)和十二烷基（dodecyl）。R_２和R₃以甲基（methyl group）、乙基（ethyl group）和丙基（propyl）較為理想。R₄較為理想的是甲基（methyl group）、乙基（ethyl group）和丙基（propyl group）。

吡啶鹽（Pyridinium Salt）類表面活性劑例如有以下式（III）中表示的表面活性劑。

【化3】

式（III）中，R₁是碳數(shù)為6~18的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group），X^-是鹵素（halogen）原子。

式（III）中，R_１較為理想的是碳數(shù)為6、8、10、12和14的烷基（alkyl group）或鏈烯基（alkenyl group），尤以直鏈烷基（alkyl group）為宜。更具體而言，R_１可以列舉出辛基（octyl）、癸基（decyl）和十二烷基（dodecyl）。

第二試劑中的陽離子型表面活性劑濃度可以根據(jù)表面活性劑的種類適當(dāng)調(diào)節(jié)，通常為10~10000ppm，尤以100~1000ppm為宜。

非離子型表面活性劑最好是以下式（VI）所示聚氧乙烯（polyoxyethylene）類非離子表面活性劑。

Ｒ_１－Ｒ_２－(ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ)_ｎ－Ｈ （ＶＩ）

式（VI）中，R₁為碳數(shù)8~25的烷基（alkyl group）、鏈烯基（alkenyl group）或炔基（alkynyl group），R₂為氧原子、-COO-或

【化4】

，

其中ｎ為10~50的整數(shù)。

上述非離子型表面活性劑具體可列舉出：聚氧乙烯烷基醚（polyoxyethylene alkyl ether）、聚氧乙烯甾醇（polyoxyethylene sterol）、聚氧乙烯蓖麻油（polyoxyethylene castor oil）、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯（polyoxyethylene sorbitol fatty acid ester ）、聚氧乙烯烷基胺（polyoxyethylene alkylamine）、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚（ polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ether）等。

第二試劑中的非離子型表面活性劑的濃度通常為10~100000ppm，最好為100~10000ppm，1000~5000ppm更佳。

第二試劑也可以包含緩沖劑以保持一定的pH值。此種緩沖劑例如有檸檬酸鹽（citrate）、HEPES和磷酸鹽等。有時(shí)上述芳香族有機(jī)酸會(huì)顯示出緩沖作用。使用此類芳香族有機(jī)酸時(shí)，向第二試劑中添加緩沖劑可以隨意。

第二試劑的滲透壓在本發(fā)明中無特別限定，但從高效地使紅細(xì)胞溶血的角度出發(fā)，最好為20~150mOsm/kg。

第二試劑可以如下獲?。涸谶m當(dāng)?shù)娜軇┲腥芙馍鲜霰砻婊钚詣┖头枷阕逵袡C(jī)酸或其鹽，根據(jù)需要也溶解上述緩沖劑，調(diào)整到上述芳香族有機(jī)酸濃度，再用NaOH和HCI等調(diào)整pH獲得。溶劑只要能夠溶解上述成分即可，本發(fā)明中無特別限定，比如有水、有機(jī)溶劑及其混合物。有機(jī)溶劑如有乙醇（alcohol）、甲醇（Methanol）、乙二醇（ethylene glycol）、DMSO等。

第二試劑還可以使用市場(chǎng)銷售的白細(xì)胞分類用溶血試劑。這種溶血試劑例如有希森美康株式會(huì)社生產(chǎn)的LYSERCELL（注冊(cè)商標(biāo)）WDF。LYSERCELLWDF是包含上述陽離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑的溶血試劑。

通過如上構(gòu)成的第二試劑使紅細(xì)胞溶血，給細(xì)胞的細(xì)胞膜造成第一試劑中的熒光色素能夠通過的程度的破壞。再通過如上構(gòu)成的第一試劑染色第二試劑破壞了細(xì)胞膜的細(xì)胞。

[細(xì)胞分析方法]

下面就用上述結(jié)構(gòu)的細(xì)胞分析裝置檢測(cè)出體液樣本中腫瘤細(xì)胞的方法進(jìn)行說明。

本發(fā)明是以腫瘤細(xì)胞的種類與各腫瘤細(xì)胞在分布圖（散點(diǎn)圖）中的分布區(qū)域之間存在相關(guān)性這一認(rèn)識(shí)為基礎(chǔ)的。本發(fā)明是在散點(diǎn)圖中設(shè)定不同種類腫瘤細(xì)胞分別特異性分布的區(qū)域，計(jì)數(shù)屬于所述區(qū)域的細(xì)胞數(shù)，根據(jù)計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)檢測(cè)出體液中腫瘤細(xì)胞。

在本實(shí)施方式中，鑒于腫瘤細(xì)胞中有細(xì)胞之間凝集而成的凝集腫瘤細(xì)胞和未凝集的非凝集腫瘤細(xì)胞，將這些凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞視為不同種類的腫瘤細(xì)胞。凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞在散點(diǎn)圖中分別特異性地分布在某個(gè)特定區(qū)域。

凝集腫瘤細(xì)胞比包括白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和間皮細(xì)胞在內(nèi)的有核細(xì)胞大，其特異性地分布在散點(diǎn)圖的“凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域”。因此，計(jì)數(shù)屬于凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)就能從體液中的其他細(xì)胞中識(shí)別并檢測(cè)出體液中的凝集腫瘤細(xì)胞。比如可以在前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度的散點(diǎn)圖中，將前向散射光信號(hào)寬度比非凝集粒子分布的區(qū)域大的區(qū)域設(shè)定為凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域。

另一方面，非凝集腫瘤細(xì)胞特異性地分布在熒光信號(hào)強(qiáng)度位于白細(xì)胞分布區(qū)域和間皮細(xì)胞分布區(qū)域之間的區(qū)域的、散點(diǎn)圖的“非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域”。因此，計(jì)數(shù)屬于非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)就能將體液中的非凝集腫瘤細(xì)胞從體液中的其他細(xì)胞識(shí)別出來并檢測(cè)出來。比如，可以在熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)強(qiáng)度的散點(diǎn)圖中，將熒光信號(hào)強(qiáng)度比白細(xì)胞分布區(qū)域大、且熒光信號(hào)強(qiáng)度比間皮細(xì)胞分布區(qū)域小的區(qū)域設(shè)定為非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域。

凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域和非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域以及巨噬細(xì)胞等有核細(xì)胞在散點(diǎn)圖中分布的區(qū)域例如可以如下求得。即，在顯微鏡下通過目測(cè)觀察細(xì)胞的涂片標(biāo)本，以此求出體液中凝集腫瘤細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等的比例（%）。然后，根據(jù)上述比例信息確定在散點(diǎn)圖中的某個(gè)區(qū)域分布有什么。比如，當(dāng)巨噬細(xì)胞在體液中以30%的比例存在時(shí)，推斷在散點(diǎn)圖中占整體的30%的個(gè)數(shù)集中分布的區(qū)域分布著巨噬細(xì)胞。對(duì)復(fù)數(shù)個(gè)樣本進(jìn)行此類工作，由此就能確定某種有核細(xì)胞在散點(diǎn)圖上分布在哪個(gè)區(qū)域。

圖5例示了不包含腫瘤細(xì)胞的陰性樣本的散點(diǎn)圖。在圖5和后面出現(xiàn)的圖6~7中，（a）為以前向散射光信號(hào)強(qiáng)度（FSC）為縱軸、以前向散射光信號(hào)寬度（FSCW）為橫軸的散點(diǎn)圖，（b）為以熒光信號(hào)強(qiáng)度（SFL）為縱軸、以前向散射光信號(hào)強(qiáng)度（FSC）為橫軸的散點(diǎn)圖。

腫瘤細(xì)胞在所述陰性樣本中的比例為0.00%，間皮細(xì)胞的比例為21.21%。另外，“%”表示相對(duì)于白細(xì)胞數(shù)的比例，間皮細(xì)胞的比例為21.21%指在100個(gè)白細(xì)胞中包含間皮細(xì)胞21.21個(gè)。

在凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域和非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域均未從上述陰性樣本中檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞。

圖6例示了包含凝集腫瘤細(xì)胞的樣本的散點(diǎn)圖。此樣本中的腫瘤細(xì)胞比例為66.2%，間皮細(xì)胞比例為13.14%。

關(guān)于此樣本，在圖6的（a）粗黑箭頭所示凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域檢測(cè)出凝集腫瘤細(xì)胞。

圖7例示了包含非凝集腫瘤細(xì)胞的樣本的散點(diǎn)圖。此樣本中的腫瘤細(xì)胞比例為662.0%，間皮細(xì)胞比例為8.00%。

關(guān)于此樣本，在圖7的（b）粗黑箭頭所示非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域檢測(cè)出非凝集腫瘤細(xì)胞。

[第一實(shí)施方式]

圖8為第一實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元2和信息處理單元4進(jìn)行處理的流程圖。第一實(shí)施方式能夠檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞中的凝集腫瘤細(xì)胞。凝集腫瘤細(xì)胞比包括白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和間皮細(xì)胞的有核細(xì)胞大，在前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度的散點(diǎn)圖中，其特異性分布在前向散射光信號(hào)寬度比非凝集粒子分布區(qū)域大的區(qū)域（凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域）。利用其特異性分布于上述區(qū)域這一特征檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞中的凝集腫瘤細(xì)胞。

首先，測(cè)定單元2在步驟S1中為使體液樣本中所包含的紅細(xì)胞溶血并對(duì)有核細(xì)胞的核酸進(jìn)行熒光染色而進(jìn)行測(cè)定試樣制備處理。具體而言，如上所述，將采自患者的體液樣本、第一試劑和第二試劑混合，此混合液經(jīng)加熱器H加熱，以此制備出測(cè)定試樣。

然后，測(cè)定單元2在步驟S2中根據(jù)在步驟S1制備的測(cè)定試樣進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)處理。具體而言，如上所述，通過光學(xué)檢測(cè)器D獲取與各細(xì)胞相關(guān)的前向散射光信號(hào)、側(cè)向散射光信號(hào)和熒光信號(hào)。

通過測(cè)定單元2獲取的信號(hào)在步驟S3傳送至信息處理單元4。

信息處理單元4的CPU401在步驟S11從測(cè)定單元2接收與各細(xì)胞相關(guān)的前向散射光信號(hào)、側(cè)向散射光信號(hào)和熒光信號(hào)，將所接收的信號(hào)存儲(chǔ)在硬盤404。

然后，CPU401在步驟S12根據(jù)所接收的信號(hào)繪制第一散點(diǎn)圖。第一散點(diǎn)圖是以前向散射光信號(hào)的強(qiáng)度（FSC）為縱軸、以前向散射光信號(hào)的寬度（FSCW）為橫軸的散點(diǎn)圖。

圖9為繪制的第一散點(diǎn)圖的示意圖。凝集腫瘤細(xì)胞比包括白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及間皮細(xì)胞的有核細(xì)胞大，故如前所述，其特異性分布在前向散射光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)寬度比白細(xì)胞等非凝集粒子分布區(qū)域（非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域）大的區(qū)域（凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域）。另外，前向散射光信號(hào)強(qiáng)度在一定值以上且從散點(diǎn)圖外擴(kuò)的大粒子顯示在散點(diǎn)圖上的最高強(qiáng)度的位置。

接著，CPU401在步驟S13對(duì)分布在凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)C1進(jìn)行計(jì)數(shù)。

然后，CPU401在步驟S14判斷在步驟S13計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)C1是否在一定值T1以上。如果判斷細(xì)胞數(shù)C1在一定值T1以上（是），則進(jìn)入步驟S15，CPU401將RAM403或硬盤404中存儲(chǔ)的判斷標(biāo)記的值設(shè)為1。而若判斷細(xì)胞數(shù)C1小于一定值T1（否），則CPU401使處理進(jìn)入步驟S16。

然后，CPU401在步驟S16在輸出部件41顯示分析結(jié)果界面。此分析結(jié)果界面上能夠顯示例如樣本號(hào)、考察項(xiàng)目、繪制的第一散點(diǎn)圖和后述警告等。

接下來，CPU401在步驟S17判斷判斷標(biāo)記的值是否為1。若判斷判斷標(biāo)記的值為1（是），則進(jìn)入步驟S18，在步驟S18，CPU401使輸出部件41的分析結(jié)果界面上顯示表示所測(cè)定的體液樣本中可能包含凝集腫瘤細(xì)胞的警告。另一方面，當(dāng)判斷判斷標(biāo)記的值不是1時(shí)（否）時(shí)，結(jié)束處理。

[第二實(shí)施方式]

圖10為第二實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元2和信息處理單元4進(jìn)行處理的流程圖。第二實(shí)施方式能夠檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞中的非凝集腫瘤細(xì)胞。非凝集腫瘤細(xì)胞在熒光信號(hào)強(qiáng)度和前向散射光信號(hào)強(qiáng)度的散點(diǎn)圖中，跨單核白細(xì)胞和間皮細(xì)胞出現(xiàn)的區(qū)域而出現(xiàn)。然而，其特異性分布在比單核白細(xì)胞分布區(qū)域熒光信號(hào)強(qiáng)度更大、且比間皮細(xì)胞分布區(qū)域熒光信號(hào)強(qiáng)度更小的區(qū)域（非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域）。利用其在上述區(qū)域特異性分布這一特征，檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞中的非凝集腫瘤細(xì)胞。在此方法中，當(dāng)非凝集腫瘤細(xì)胞只出現(xiàn)在單核白細(xì)胞和間皮細(xì)胞的出現(xiàn)區(qū)域時(shí)檢測(cè)不出來。但是，非凝集腫瘤細(xì)胞以非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域?yàn)橹行目鐔魏税准?xì)胞和間皮細(xì)胞出現(xiàn)區(qū)域而出現(xiàn)，因此，通過計(jì)數(shù)非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域中的細(xì)胞出現(xiàn)數(shù)，能夠以高特異度檢測(cè)出體液樣本中非凝集腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)。

測(cè)定單元2中測(cè)定試樣的制備處理（步驟S1）、細(xì)胞的檢測(cè)處理（步驟S2）、以及獲取信號(hào)向信息處理單元4的傳送（步驟S3）與第一實(shí)施方式的步驟S1到步驟S3相同。因此，為了簡(jiǎn)單，省略關(guān)于這些處理的說明。

信息處理單元4的CPU401在步驟S21從測(cè)定單元2接收與各細(xì)胞相關(guān)的前向散射光信號(hào)、側(cè)向散射光信號(hào)和熒光信號(hào)，并將所接收的信號(hào)存儲(chǔ)在硬盤404。

然后，CPU401在步驟S22根據(jù)接收的信號(hào)繪制第二散點(diǎn)圖。第二散點(diǎn)圖是以熒光信號(hào)強(qiáng)度（SFL）為縱軸，以前向散射光信號(hào)強(qiáng)度（FSC）為橫軸的散點(diǎn)圖。

圖11為繪制的第二散點(diǎn)圖的示意圖。非凝集腫瘤細(xì)胞在以熒光信號(hào)強(qiáng)度（SFL）為縱軸，以前向散射光信號(hào)強(qiáng)度（FSC）為橫軸的散點(diǎn)圖中，特異性分布在比白細(xì)胞分布區(qū)域的熒光信號(hào)強(qiáng)度大、且比間皮細(xì)胞分布區(qū)域的熒光信號(hào)強(qiáng)度小的區(qū)域（非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域）。

然后，CPU401在步驟S23計(jì)數(shù)分布在非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)C2。通過設(shè)定上述非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域，能夠根據(jù)通過檢測(cè)出的熒光信號(hào)等光信息繪制的第二散點(diǎn)圖如圖11所示地至少從白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和間皮細(xì)胞分離出并計(jì)數(shù)非凝集腫瘤細(xì)胞。

然后，CPU401在步驟S24判斷步驟S23計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)C2是否在一定值T2以上。如果判斷細(xì)胞數(shù)C2在一定值T2以上（是），則進(jìn)入步驟S25，CPU401將存儲(chǔ)在RAM403或硬盤404中的判斷標(biāo)記的值設(shè)為1。而若判斷細(xì)胞數(shù)C2小于一定值T2（否），則CPU401使處理進(jìn)入步驟S26。

然后，CPU401在步驟S26在輸出部件41顯示分析結(jié)果界面?？梢允勾朔治鼋Y(jié)果界面上顯示例如樣本號(hào)、考察項(xiàng)目、繪制的第二散點(diǎn)圖和后述警告等。

然后，CPU401在步驟S27判斷判斷標(biāo)記的值是否為1。若判斷判斷標(biāo)記的值為1（是），則進(jìn)入步驟S28，在步驟S28，CPU401使輸出部件41的分析結(jié)果界面上顯示表示所測(cè)定的體液樣本中可能包含非凝集腫瘤細(xì)胞的警告。另一方面，當(dāng)判斷判斷標(biāo)記的值不是1（否）時(shí)，結(jié)束處理。

[第三實(shí)施方式]

圖12為第三實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法中測(cè)定單元2和信息處理單元4進(jìn)行處理的流程圖。第三實(shí)施方式能夠分別檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞中的凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞。即，與第一實(shí)施方式同樣地進(jìn)行凝集腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)，與第二實(shí)施方式同樣地進(jìn)行非凝集腫瘤細(xì)胞檢測(cè)。因此，第三實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法與第一實(shí)施方式或第二實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法相比能夠進(jìn)一步提高腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)精度。此外，還可以與分析的可靠度相應(yīng)地改變警告的內(nèi)容，比如當(dāng)檢測(cè)出一定數(shù)以上的凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞時(shí)設(shè)為精確度高的警告（高），當(dāng)檢測(cè)出一定數(shù)以上的其中一種腫瘤細(xì)胞時(shí)，設(shè)為精確度略低的警告（低）等。

測(cè)定單元2中的測(cè)定試樣制備處理（步驟S1）、細(xì)胞檢測(cè)處理（步驟S2）、以及獲取的信號(hào)向信息處理單元4的傳送（步驟S3）與第一實(shí)施方式或第二實(shí)施方式的步驟S1到步驟S3相同。因此，為了簡(jiǎn)單，省略關(guān)于這些處理的說明。

信息處理單元4的CPU401在步驟S31從測(cè)定單元2接收與各細(xì)胞相關(guān)的前向散射光信號(hào)、側(cè)向散射光信號(hào)和熒光信號(hào)，將所接收的信號(hào)存儲(chǔ)在硬盤404。

然后，CPU401在步驟S32根據(jù)接收的信號(hào)繪制第一散點(diǎn)圖。第一散點(diǎn)圖是以前向散射光信號(hào)的強(qiáng)度（FSC）為縱軸，以前向散射光信號(hào)的寬度（FSCW）為橫軸的散點(diǎn)圖（參照?qǐng)D9）。

接著，CPU401在步驟S33對(duì)分布在凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)C1進(jìn)行計(jì)數(shù)。

然后，CPU401在步驟S34判斷在步驟S33計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)C1是否在一定值T1以上。如果判斷細(xì)胞數(shù)C1在一定值T1以上（是），則進(jìn)入步驟S35，CPU401將存儲(chǔ)在RAM403或硬盤404中的判斷標(biāo)記的值設(shè)為1。而若判斷細(xì)胞數(shù)C1小于一定值T1（否），則CPU401使處理進(jìn)入步驟S36。

然后，CPU401在步驟S36根據(jù)接受的信號(hào)繪制第二散點(diǎn)圖。第二散點(diǎn)圖是以熒光信號(hào)強(qiáng)度（SFL）為縱軸，以前向散射光信號(hào)強(qiáng)度（FSC）為橫軸的散點(diǎn)圖（參照?qǐng)D11）。

然后，CPU401在步驟S37計(jì)數(shù)分布在非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域的細(xì)胞數(shù)C2。

然后，CPU401在步驟S38判斷步驟S37計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)C2是否在一定值T2以上。如果判斷細(xì)胞數(shù)C2在一定值T2以上（是），則進(jìn)入步驟S39， 在步驟S39判斷判斷標(biāo)記是否為1。若判斷判斷標(biāo)記為1（是），則進(jìn)入步驟S40，在步驟S40，CPU401將存儲(chǔ)在RAM403或硬盤404中的判斷標(biāo)記的值設(shè)為2。另一方面，當(dāng)判斷判斷標(biāo)記不是1（否）時(shí)，CPU401使處理進(jìn)入步驟S41。

然后，CPU401在步驟S41在輸出部件41顯示分析結(jié)果界面。可以使此分析結(jié)果界面上顯示例如樣本號(hào)、考察項(xiàng)目、繪制的第一散點(diǎn)圖和第二散點(diǎn)圖、后述警告（高）或警告（低）等。

接著，CPU401在步驟S42判斷判斷標(biāo)記的值是否為2。若判斷判斷標(biāo)記的值為2（是），則進(jìn)入步驟S43，在步驟S43，CPU401使輸出部件41的分析結(jié)果界面上顯示表示所測(cè)定的體液樣本包含凝集腫瘤細(xì)胞的可能性大的警告（高）。另一方面，當(dāng)判斷判斷標(biāo)記的值不是2（否）時(shí)，CPU401使處理進(jìn)入步驟S44，在步驟S44，判斷判斷標(biāo)記的值是否為1。若在步驟S44判斷判斷標(biāo)記的值為1（是），則進(jìn)入步驟S45，在步驟S45，CPU401使輸出部件41的分析結(jié)果界面上顯示表示所測(cè)定的體液樣本有可能包含凝集腫瘤細(xì)胞的警告（低）。另一方面，當(dāng)判斷判斷標(biāo)記的值不是1（否）時(shí)，處理結(jié)束。

在本實(shí)施方式中，繪制第一散點(diǎn)圖，計(jì)數(shù)此第一散點(diǎn)圖的凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域中的細(xì)胞數(shù)C1之后，繪制第二散點(diǎn)圖，計(jì)數(shù)此第二散點(diǎn)圖的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域中的細(xì)胞數(shù)C2，并檢測(cè)出體液中的腫瘤細(xì)胞，但也可以先繪制第二散點(diǎn)圖，計(jì)數(shù)此第二散點(diǎn)圖的非凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域中的細(xì)胞數(shù)C2之后，再繪制第一散點(diǎn)圖，計(jì)數(shù)此第一散點(diǎn)圖的凝集細(xì)胞檢測(cè)區(qū)域中的細(xì)胞數(shù)C1，檢測(cè)出體液中的腫瘤細(xì)胞。

此外，在本實(shí)施方式中會(huì)發(fā)出二種警告，但也可以發(fā)出一種警告。即，也可以當(dāng)計(jì)數(shù)的凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞數(shù)中的至少其中之一在一定值以上時(shí)發(fā)出警告。與僅根據(jù)凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞其中一者的判斷情況來進(jìn)行有無腫瘤細(xì)胞的警告相比，此情況能夠更正確地檢測(cè)出體液樣本中有無腫瘤細(xì)胞。

[實(shí)施例]

下面說明本發(fā)明的細(xì)胞分析方法的實(shí)施例，但本發(fā)明從根本上并不是只限于此實(shí)施例。

[實(shí)施例1]

對(duì)220個(gè)樣本按照第一實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)。樣本種類是腦脊髓液、胸水，以被認(rèn)為會(huì)凝集的腺癌為對(duì)象。第一試劑使用了FluorocellWDF，第二試劑使用LysercellWDF。與目測(cè)法比較的結(jié)果見表1。在表1中，“1”表示陽性判斷（有凝集腫瘤細(xì)胞），“0”表示陰性判斷（無凝集腫瘤細(xì)胞）。

【表1】

在實(shí)施例1的靈敏度為72.2%，特異度為98.0%。陽性預(yù)測(cè)值（Positive Predictive Value, PPV）為76.5%，陰性預(yù)測(cè)值(Negative Predictive Value，NPV)為98.6%。

[實(shí)施例2]

對(duì)209個(gè)樣本按照第二實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)。樣本種類是腦脊髓液、胸水，以腺癌以外的腫瘤為對(duì)象。第一試劑使用了FluorocellWDF，第二試劑使用了LysercellWDF。與目測(cè)法比較的結(jié)果見表2。

【表2】

在實(shí)施例2的靈敏度為37.5%，特異度為95.0%。陽性預(yù)測(cè)值PPV為23.1%，陰性預(yù)測(cè)值NPV為97.4%。

[實(shí)施例3]

對(duì)220個(gè)樣本按照第三實(shí)施方式涉及的細(xì)胞分析方法進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)。樣本種類是腦脊髓液、胸水，第一試劑使用了FluorocellWDF，第二試劑使用了LysercellWDF。與目測(cè)法比較的結(jié)果見表3。檢測(cè)出在一定數(shù)以上的凝集腫瘤細(xì)胞和非凝集腫瘤細(xì)胞中的至少其中之一即是陽性判斷。

【表3】

在實(shí)施例3中的靈敏度為72.2%，特異度為98.0%。陽性預(yù)測(cè)值PPV為76.5%，陰性預(yù)測(cè)值NPV為97.5%。

[其他變更例]

本發(fā)明不限于上述實(shí)施方式，其在權(quán)利要求范圍內(nèi)可以有各種變更。