本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是指植物病理生物學(xué)測定方法。

背景技術(shù)：

近年來，廣東省部分煙草生產(chǎn)地區(qū)出現(xiàn)煙草畸形生長現(xiàn)象，大田表現(xiàn)為整塊田發(fā)生，卻畸形癥狀整齊一致。廣東煙區(qū)、湖南煙區(qū)及江西煙區(qū)相繼出現(xiàn)煙葉畸形現(xiàn)象，且有進一步擴展蔓延的趨勢，嚴(yán)重影響烤煙的產(chǎn)量和質(zhì)量以及煙農(nóng)的經(jīng)濟收入。

解決煙草畸形生長的問題，首先要解決的，即是了解導(dǎo)致煙草畸形的原因，這需要科學(xué)，準(zhǔn)確，可靠的研究分析方法進行確定，在現(xiàn)有的一些測定方法中，由于一般為囊括范圍較大的統(tǒng)一性的測定方法，雖然具有一定的指導(dǎo)意義，但在對具體的種類操作中，則可能會出現(xiàn)一定的差異，導(dǎo)致測定結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至不可行，而測定結(jié)果的不準(zhǔn)，直接對治理煙草畸形將產(chǎn)生非常大的影響，因此，如何針對煙草進一步提高檢測的準(zhǔn)確度，如何根據(jù)煙草的特性進行測定方法的優(yōu)化，成為解決問題的關(guān)鍵。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種植物病理生物學(xué)測定方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中，針對煙草畸形的病因測定方法中，生物學(xué)測定針對性不強，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：植物病理生物學(xué)測定方法，包括以下步驟：

(1)從田間采回的煙草畸形葉，取1.0g葉加上10mL 0.02mol/L磷酸緩沖液在研缽中完全碾碎，通過機械摩擦接種法，接種溫室培育的4～6葉期幼苗的頂部平展葉的若干種鑒別寄主各15株；

(2)以0.02mol/L磷酸緩沖液接種煙草為陰性對照，接種煙草花葉病毒(TMV)為陽性對照。

(3)觀察植株的畸形、不良癥狀并判定。

根據(jù)上述的方法與參數(shù)的設(shè)定，進行接種后的觀察，并判定結(jié)果，其中，結(jié)合發(fā)明人多年的煙草種植經(jīng)驗，在參數(shù)的設(shè)置上，針對煙草的接種量，以及接種時間上，均進行了優(yōu)化，保證了接種的有效性。

進一步，步驟(1)中，鑒別寄主包括普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎(學(xué)名)、黃瓜(學(xué)名)、西葫蘆(學(xué)名)，這些鑒別寄主的選取，也是針對當(dāng)?shù)氐纳L特性，精心選定而成。

進一步，為進一步提高接種的有效性，以及判定的準(zhǔn)確性，在過程控制上，進行更加精確的限定，包括：接種的植株置于網(wǎng)室內(nèi)，保持溫度20～27℃；接種后72h內(nèi)經(jīng)常灑水保持葉面濕潤；5d后第二次接種；從接種第7d起，每天觀察植株表現(xiàn)；第10d仍未顯癥者，再接種一次；觀察植株一直到開花才結(jié)束。

本發(fā)明相比于傳統(tǒng)的通用性的生物學(xué)測定技術(shù)而言，針對煙草的生長特性，結(jié)果多年的煙草種植經(jīng)驗，對測定的參數(shù)控制，接種優(yōu)化，鑒別寄主的選取上，均進行了調(diào)整，極大的提高了煙草生物學(xué)測定的可靠性，在煙草畸形的檢測中，更加有效。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明的實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

本實施例的實施地點為五華煙區(qū)的周江煙田。

從田間采回的煙草畸形葉，通過機械摩擦接種法接種普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎、黃瓜、西葫蘆等鑒別寄主。結(jié)果顯示，在接種5d后，其作為陽性對照(接種TMV)的煙草出現(xiàn)明顯的花葉癥狀，而陰性對照在觀察結(jié)束時都無任何癥狀，這表明本次實驗的接種方法是可行的。而用田間采回的煙草畸形葉接種煙草、以及其它任何病毒鑒別寄主，直至接種的所有植株開花，任何植株都沒有畸形或任何其它不良癥狀出現(xiàn)。這表明，這些畸形煙草葉標(biāo)樣不能使這些鑒別寄主發(fā)病或致畸，這些畸形葉可能不是由植物病毒引起的。

實施例2

本實施例的實施地點為五華煙區(qū)的平南煙田。

從田間采回的煙草畸形葉，通過機械摩擦接種法接種普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎、黃瓜、西葫蘆等鑒別寄主。結(jié)果顯示，在接種5d后，其作為陽性對照(接種TMV)的煙草出現(xiàn)明顯的花葉癥狀，而陰性對照在觀察結(jié)束時都無任何癥狀，這表明本次實驗的接種方法是可行的。用田間采回的煙草畸形葉接種煙草、以及其它病毒鑒別寄主，接種的植株開花超過50％有畸形或其它不良癥狀出現(xiàn)。這表明，這些畸形煙草葉標(biāo)樣使這些鑒別寄主發(fā)病或致畸，這些畸形葉可能是由植物病毒引起的。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。