本發(fā)明屬于新型功能納米材料、免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤的發(fā)病率高，不易察覺，我國病例數(shù)相當(dāng)龐大，對人類的健康產(chǎn)生極大危害。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產(chǎn)物存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或宿主體液中，其在臨床上對于原發(fā)腫瘤的發(fā)現(xiàn)，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發(fā)展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價及腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測產(chǎn)生極大的影響，引起人們的廣泛關(guān)注。
CA724、CA242、CEA、PSA等常見的腫瘤標(biāo)志物，對于癌癥的診斷都能起到一定的作用。夾心型電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了高特異性的免疫分析技術(shù)和高靈敏的電化學(xué)分析技術(shù)，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗、環(huán)境監(jiān)測、食品安全控制、生物監(jiān)測等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價值。
氧化石墨烯表面有大量的羧基官能團(tuán)，使得它更容易與有機(jī)物結(jié)合。且具有大的比表面積，良好的電子傳遞能力和催化性能，能有效固載抗體；金納米粒子具有生物相容性好、導(dǎo)電性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可以結(jié)合大量的抗體，多余的金納米粒子還可以增強(qiáng)電極的導(dǎo)電性。WO2.72/MWCNTs復(fù)合材料具有高的比表面積和導(dǎo)電率；將Ag@Au合金雜化到WO2.72/MWCNTs上，大大提高了材料的熱穩(wěn)定性，導(dǎo)電性，催化性，生物相容性，可以明顯的提高免疫傳感器的靈敏度。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，實現(xiàn)了對腫瘤標(biāo)志物的超靈敏檢測。
本發(fā)明的目的之一是提供一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法。
本發(fā)明的目的之二是將所制備的基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測腫瘤標(biāo)志物。
本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟。
一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，步驟如下：
（1）將直徑為3 ~ 5 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
（2）取6 μL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
（3）繼續(xù)將6 μL、8.0 ~ 12.0 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ℃冰箱中干燥；
（4）繼續(xù)將3 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
（5）繼續(xù)滴加6 μL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中干燥；
（6）將6 μL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器。
所述金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯的制備，步驟如下：
(1)金納米粒子溶膠的制備
將3.9 ~ 4.2 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的氯金酸HAuCl4和95 mL超純水加入250 mL的三口燒瓶中，在油浴中加熱至沸騰并回流，磁力攪拌下加入9 ~ 11 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液 ，持續(xù)攪拌并回流15 ~ 25 min，至溶液變?yōu)榫萍t色并不再改變， 將溶液室溫下冷卻，制得金納米粒子的溶膠；
(2)氨基化石墨烯的制備
將90 ~120 mg氧化石墨烯分散在40 mL乙二醇中，超聲30 min，加入1 mL的濃氨水，待懸濁液變?yōu)樽睾谏髮⑵滢D(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在180 ℃下反應(yīng)10 ~ 15 h；冷卻至室溫,用超純水和乙醇各洗滌三次，放于60℃的干燥箱中干燥10 h，制得氨基化石墨烯；
(3)負(fù)載金納米粒子的氨基化石墨烯的制備
將8 ~12mg氨基化石墨烯加入到上述步驟（1）所制得的金納米粒子溶膠中，攪拌3h，離心除去上清液，制得負(fù)載金納米粒子的石墨烯。
所述Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：
（1）WO2.72/MWCNTs的合成
將2 ~ 4 g氯化鎢 WCl6 分散在100 mL的無水乙醇中，再加入0.8 ~1.6 g的MWCNTs，將混合溶液加入聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜，密封，放入干燥箱中， 160 ℃下反應(yīng)24 h，室溫冷卻，用乙醇和超純水各洗滌三次，65 ℃ ~ 75℃的干燥箱中干燥10 h，得WO2.72/MWCNTs固體；
（2）Ag@Au溶液的制備
室溫下，向100 ~120 mL上述步驟2（1）中制得的金納米粒子溶膠中，邊攪拌邊依次加入20 ~ 24 mL、 0.1 mol/L的CTAB，2.2 ~ 2.6 mL、0.1 mol/L的抗壞血酸，50 ~ 60 mL、0.01 mol/L的AgNO3，以及5 ~ 6 mL、0.25 mol/L的NaOH溶液，持續(xù)攪拌20 ~30 min，制得Ag@Au溶液；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs的合成
將20 ~ 30 mg上述步驟（1）制得的WO2.72/MWCNTs加入到上述步驟（2）所得Ag@Au溶液中，攪拌下反應(yīng)2 h，用超純水和乙醇分別洗滌三次，65℃ ~ 75℃干燥箱中干燥12 h，得到Ag@Au-WO2.72/MWCNTs；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 ~ 8 mg的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs檢測抗體標(biāo)記物分散到1 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入1 mL、20 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物的檢測，檢測步驟如下：
（1）使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 6.10 ~ 8.50磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
（2）用時間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔 0.1 s，運(yùn)行時間400 s；
（3）當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
上述所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一： CA724、CA242、CEA、PSA。
本發(fā)明所用原材料均可在化學(xué)試劑公司或生物制藥公司購買。
本發(fā)明的有益成果
（1）本發(fā)明使用了金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯作為基底材料，石墨烯有大的比表面積，可提供更多金納米粒子的結(jié)合位點(diǎn)，金納米粒子的修飾提高了石墨烯的導(dǎo)電性，加快了電子的傳遞，同時可以固載大量的抗體，進(jìn)而能夠提高檢測的靈敏度；
（2）采用Ag@Au-WO2.72/MWCNTs作為檢測抗體標(biāo)記物，MWCNTs可以分隔海膽狀WO2.72，組織或減緩它們之間的堆積，增強(qiáng)復(fù)合材料的比表面積和導(dǎo)電率；Ag對過氧化氫有很強(qiáng)的催化作用，將Ag@Au合金雜化到WO2.72/MWCNTs上，大大提高了材料的熱穩(wěn)定性，導(dǎo)電性，催化性，因此，Ag@Au-WO2.72/MWCNTs作為二抗標(biāo)記物實現(xiàn)了信號的多重放大，從而提高了傳感器的靈敏度，降低了檢測限；
（3）一種Ag@Au-WO2.72/MWCNTs標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器對腫瘤標(biāo)志物CA724、CA242、CEA、PSA的檢測，其線性范圍1 fg/mL～ 10 ng/mL，檢測限最低0.33 fg/mL，表明一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器可以達(dá)到準(zhǔn)確測定的目的。
具體實施方式
現(xiàn)將本發(fā)明通過具體實施方式進(jìn)一步說明，但不限于此。
實施例1 一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：
（1）將直徑為3 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
（2）取6 μL、1.0 mg/mL的金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
（3）繼續(xù)將6 μL、8.0 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ℃冰箱中干燥；
（4）繼續(xù)將3 μL、1.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
（5）繼續(xù)滴加6 μL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中干燥；
（6）將6 μL、2.0 mg/mL的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器。
實施例2 一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：
（1）將直徑為4 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
（2）取6 μL、1.5 mg/mL的金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
（3）繼續(xù)將6 μL、10.0 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ℃冰箱中干燥；
（4）繼續(xù)將3 μL、2.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
（5）繼續(xù)滴加6 μL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中干燥；
（6）將6 μL、3.0 mg/mL的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器。
實施例3 一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：
（1）將直徑為5 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
（2）取6 μL、2.0 mg/mL的金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
（3）繼續(xù)將6 μL、12.0 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 ℃冰箱中干燥；
（4）繼續(xù)將3 μL、3.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；
（5）繼續(xù)滴加6 μL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中干燥；
（6）將6 μL、4.0 mg/mL的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一種基于Ag@Au納米復(fù)合材料的電化學(xué)免疫傳感器。
實施例4 金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯的制備，步驟如下：
(1)金納米粒子溶膠的制備
將3.9 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的氯金酸HAuCl4和95 mL超純水加入250 mL的三口燒瓶中，在油浴中加熱至沸騰并回流，磁力攪拌下加入9 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液 ，持續(xù)攪拌并回流15 min，至溶液變?yōu)榫萍t色并不再改變， 將溶液室溫下冷卻，制得金納米粒子的溶膠；
(2)氨基化石墨烯的制備
將90 mg氧化石墨烯分散在40 mL乙二醇中，超聲30 min，加入1mL的濃氨水，待懸濁液變?yōu)樽睾谏髮⑵滢D(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在180 ℃下反應(yīng)10 h；冷卻至室溫,用超純水和乙醇各洗滌三次，放于60 ℃的干燥箱中干燥10 h，制得氨基化石墨烯；
(3)負(fù)載金納米粒子的氨基化石墨烯的制備
將8 mg氨基化石墨烯加入到上述步驟（1）所制得的金納米粒子溶膠中，攪拌3 h，離心除去上清液，制得負(fù)載金納米粒子的石墨烯。
實施例5 金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯的制備，步驟如下：
(1)金納米粒子溶膠的制備
將4.1 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的氯金酸HAuCl4和95 mL超純水加入250 mL的三口燒瓶中，在油浴中加熱至沸騰并回流，磁力攪拌下加入10 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液，持續(xù)攪拌并回流20 min，至溶液變?yōu)榫萍t色并不再改變， 將溶液室溫下冷卻，制得金納米粒子的溶膠；
(2)氨基化石墨烯的制備
將105 mg氧化石墨烯分散在40 mL乙二醇中，超聲30 min，加入1 mL的濃氨水，待懸濁液變?yōu)樽睾谏髮⑵滢D(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在180 ℃下反應(yīng)13 h；冷卻至室溫,用超純水和乙醇各洗滌三次，放于60 ℃的干燥箱中干燥10 h，制得氨基化石墨烯；
(3)負(fù)載金納米粒子的氨基化石墨烯的制備
將10 mg氨基化石墨烯加入到上述步驟（1）所制得的金納米粒子溶膠中，攪拌3 h，離心除去上清液，制得負(fù)載金納米粒子的石墨烯。
實施例6 金納米粒子負(fù)載的氨基化石墨烯的制備，步驟如下：
(1)金納米粒子溶膠的制備
將4.2 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的氯金酸HAuCl4和95 mL超純水加入250 mL的三口燒瓶中，在油浴中加熱至沸騰并回流，磁力攪拌下加入11 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液 ，持續(xù)攪拌并回流25 min，至溶液變?yōu)榫萍t色并不再改變， 將溶液室溫下冷卻，制得金納米粒子的溶膠；
(2)氨基化石墨烯的制備
將120 mg氧化石墨烯分散在40 mL乙二醇中，超聲30 min，加入1 mL的濃氨水，待懸濁液變?yōu)樽睾谏髮⑵滢D(zhuǎn)移到聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，在180 ℃下反應(yīng)15 h；冷卻至室溫,用超純水和乙醇各洗滌三次，放于60 ℃的干燥箱中干燥10 h，制得氨基化石墨烯；
(3)負(fù)載金納米粒子的氨基化石墨烯的制備
將12 mg氨基化石墨烯加入到上述步驟（1）所制得的金納米粒子溶膠中，攪拌3 h，離心除去上清液，制得負(fù)載金納米粒子的石墨烯。
實施例7 Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：
（1）WO2.72/MWCNTs的合成
將2 g氯化鎢 WCl6 分散在100 mL的無水乙醇中，再加入0.8 g的MWCNTs，將混合溶液加入聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜，密封，放入干燥箱中， 160 ℃下反應(yīng)24 h，室溫冷卻，用乙醇和超純水各洗滌三次，65 ℃的干燥箱中干燥10 h，得WO2.72/MWCNTs固體；
（2）Ag@Au溶液的制備
室溫下，向100 mL上述步驟2（1）中制得的金納米粒子溶膠中，邊攪拌邊依次加入20 mL、 0.1 mol/L的CTAB，2.2 mL、0.1 mol/L的抗壞血酸，50 mL、0.01 mol/L的AgNO3，以及5 mL、0.25 mol/L的NaOH溶液，持續(xù)攪拌20 min，制得Ag@Au溶液；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs的合成
將20 mg上述步驟（1）制得的WO2.72/MWCNTs加入到上述步驟（2）所得Ag@Au溶液中，攪拌下反應(yīng)2 h，用超純水和乙醇分別洗滌三次，65℃干燥箱中干燥12 h，得到Ag@Au-WO2.72/MWCNTs；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將4 mg的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs檢測抗體標(biāo)記物分散到1 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入1 mL、 20 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實施例8 Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：
（1）WO2.72/MWCNTs的合成
將3 g氯化鎢 WCl6 分散在100 mL的無水乙醇中，再加入1.2 g的MWCNTs，將混合溶液加入聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜，密封，放入干燥箱中， 160 ℃下反應(yīng)24 h，室溫冷卻，用乙醇和超純水各洗滌三次，70 ℃的干燥箱中干燥10 h，得WO2.72/MWCNTs固體；
（2）Ag@Au溶液的制備
室溫下，向110 mL上述步驟2（1）中制得的金納米粒子溶膠中，邊攪拌邊依次加入22 mL、 0.1 mol/L的CTAB，2.4 mL、0.1 mol/L的抗壞血酸，55 mL、0.01 mol/L的AgNO3，以及5.5 mL、0.25 mol/L的NaOH溶液，持續(xù)攪拌25 min，制得Ag@Au溶液；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs的合成
將25 mg上述步驟（1）制得的WO2.72/MWCNTs加入到上述步驟（2）所得Ag@Au溶液中，攪拌下反應(yīng)2 h，用超純水和乙醇分別洗滌三次，70℃干燥箱中干燥12 h，得到Ag@Au-WO2.72/MWCNTs；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將6 mg的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs檢測抗體標(biāo)記物分散到1 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入1 mL 、20 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實施例9 Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：
（1）WO2.72/MWCNTs的合成
將4g氯化鎢 WCl6 分散在100 mL的無水乙醇中，再加入1.6 g的MWCNTs，將混合溶液加入聚四氟乙烯高壓反應(yīng)釜，密封，放入干燥箱中， 160 ℃下反應(yīng)24 h，室溫冷卻，用乙醇和超純水各洗滌三次， 75℃的干燥箱中干燥10 h，得WO2.72/MWCNTs固體；
（2）Ag@Au溶液的制備
室溫下，向100 ~120 mL上述步驟2（1）中制得的金納米粒子溶膠中，邊攪拌邊依次加入24 mL、 0.1 mol/L的CTAB， 2.6 mL、0.1 mol/L的抗壞血酸，60 mL、0.01 mol/L的AgNO3，以及6 mL、0.25 mol/L的NaOH溶液，持續(xù)攪拌30 min，制得Ag@Au溶液；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs的合成
將30 mg上述步驟（1）制得的WO2.72/MWCNTs加入到上述步驟（2）所得Ag@Au溶液中，攪拌下反應(yīng)2 h，用超純水和乙醇分別洗滌三次，75℃干燥箱中干燥12 h，得到Ag@Au-WO2.72/MWCNTs；
（3）Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液的制備
將8 mg的Ag@Au-WO2.72/MWCNTs檢測抗體標(biāo)記物分散到1 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，加入1 mL、 20 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體Ab2溶液，4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h，制得Ag@Au-WO2.72/MWCNTs-Ab2檢測抗體孵化物溶液，4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
實施例10 腫瘤標(biāo)志物CA724的檢測
（1）使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol /L的pH 6.10 ~ 8.50磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
（2）用時間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔 0.1 s，運(yùn)行時間400 s；
（3）當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol /L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol L-1的雙氧水溶液，記錄電流變化；
（4）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測得所制備傳感器對樣品中CA724檢測的線性范圍為1 fg/mL~10 ng/mL，檢測限為0.33 fg /mL。
實施例11 腫瘤標(biāo)志物CA242的檢測
按照實施例10的方法對樣品中CA242進(jìn)行檢測，其線性范圍為1 fg/mL~10 ng/mL，檢測限為0.33 fg /mL。
實施例12 腫瘤標(biāo)志物CEA的檢測
按照實施例10的方法對樣品中CEA進(jìn)行檢測，其線性范圍為1 fg /mL~10 ng /mL，檢測限為0.33 fg/ mL。
實施例13 腫瘤標(biāo)志物PSA的檢測
按照實施例10的方法對樣品中PSA進(jìn)行檢測，其線性范圍為1 fg /mL~10 ng /mL，檢測限為0.33 fg/ mL。