本發(fā)明涉及涼茶植物飲料質(zhì)量控制
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法。
背景技術(shù)：
：嶺南涼茶文化擁有悠久的歷史積蘊(yùn)和民俗內(nèi)涵。古時(shí)嶺南為百越之地，多瘴氣，染者無(wú)有不死。嶺南人民在與惡劣自然環(huán)境的不斷抗?fàn)幹?，積累了調(diào)理保健、防病治病的寶貴經(jīng)驗(yàn)。他們根據(jù)本地的氣候、水土特性，以一些具有清熱解毒、生津止渴、祛火除濕等功效的嶺南特色中草藥為基礎(chǔ)，在中醫(yī)養(yǎng)生理論指導(dǎo)下經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐，創(chuàng)造出各種各樣的″涼茶″，用于防病治病，形成了一條嶺南文化的獨(dú)特風(fēng)景線。王老吉涼茶是歷史最早的廣東涼茶，始創(chuàng)于1828年(清道光八年)，至今已有180多年歷史，被公認(rèn)為涼茶始祖，有″藥茶王″之稱。最近幾十年，隨著現(xiàn)代化生產(chǎn)設(shè)備和先進(jìn)管理理念的引入，涼茶業(yè)發(fā)生了大變革，過(guò)去守著涼茶鋪喝涼茶的局面被打破，涼茶被加工成飲用更方便的顆粒劑、袋泡茶、利樂(lè)包、罐裝等多種規(guī)格。王老吉涼茶以水、白砂糖、仙草、蛋花、菊花、夏枯草、甘草、金銀花、布渣葉為原料，經(jīng)提取、濃縮、配制、滅菌、包裝等主要加工工藝制成，其口感清涼爽口，冷熱飲用皆宜，受到消費(fèi)者的喜愛(ài)。為全面的反映及監(jiān)測(cè)該品種的內(nèi)在質(zhì)量，促進(jìn)該品種的發(fā)展，應(yīng)開(kāi)展該品種中各成分檢測(cè)方法的研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法，用以對(duì)王老吉涼茶的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，能夠?qū)ζ渲械亩喾N成分進(jìn)行定量檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)全面保證王老吉涼茶質(zhì)量的目的。一種HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法，包括以下步驟：供試品溶液的制備：取供試品，溶解定容后過(guò)微孔濾膜，制得供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備：精密稱取水仙苷、原兒茶醛、川續(xù)斷皂苷乙、咖啡酸、綠原酸、甘草苷、異綠原酸A、原兒茶酸、三葉豆苷、迷迭香酸、山奈酚-3-O-β-D葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、和咖啡酰雞蛋花苷對(duì)照品中的至少一種，以有機(jī)溶劑溶解定容，制得對(duì)照品溶液；檢測(cè)：將上述供試品溶液和對(duì)照品溶液分別注入液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中，對(duì)王老吉涼茶中成分進(jìn)行定量檢測(cè)。上述HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法，通過(guò)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可同時(shí)測(cè)定王老吉涼茶中多種成分的含量，從而以對(duì)王老吉涼茶的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)全面保證王老吉涼茶質(zhì)量的目的。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，所述質(zhì)譜為三重四極桿型質(zhì)譜。采用三重四極桿型質(zhì)譜，具有串級(jí)功能，不但具有較強(qiáng)的定性能力，在測(cè)試中可用做確認(rèn)檢測(cè)的手段，還具有非常好的定量能力，信噪比較佳。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，按照下述質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)：離子化方式：電噴霧離子化；檢出模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式，負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3200-3800V；噴嘴電壓：450-550V；霧化氣體、干燥氣體、和鞘氣氣體：氮?dú)?；干燥氣體溫度：250-350℃；干燥氣流：4-6L/min；霧化氣壓：40-50psi；鞘氣溫度：300-400℃；鞘氣流速：9-13L/min。采用上述質(zhì)譜條件，能夠提高樣品離子化效率，進(jìn)一步提高信噪比，進(jìn)而提高檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，按照下述質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)：離子化方式：電噴霧離子化；檢出模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式，負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3500V；噴嘴電壓：500V；霧化氣體、干燥氣體、和鞘氣氣體：氮?dú)?；干燥氣體溫度：300℃；干燥氣流：5L/min；霧化氣壓：45psi；鞘氣溫度：350℃；鞘氣流速：11L/min。采用上述質(zhì)譜條件，能夠使樣品具有最佳的離子化效率，在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，水仙苷的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為623.0±0.5m/z，子離子為315.1±0.5m/z，碎裂電壓為268V，碰撞能量為29V；原兒茶醛的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為137.0±0.5m/z，子離子為108.0±0.5m/z，碎裂電壓為112V，碰撞能量為25V；川續(xù)斷皂苷乙的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為1074.0±0.5m/z，子離子為749.4±0.5m/z，碎裂電壓為354V，碰撞能量為29V；咖啡酸的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為179.0±0.5m/z，子離子為135.1±0.5m/z，碎裂電壓為81V，碰撞能量為13V；綠原酸的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為353.0±0.5m/z，子離子為191.0±0.5m/z，碎裂電壓為77V，碰撞能量為9V；甘草苷的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為417.0±0.5m/z，子離子為255.1±0.5m/z，碎裂電壓為147V，碰撞能量為17V；異綠原酸A的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為515.0±0.5m/z，子離子為353.0±0.5m/z，碎裂電壓為143V，碰撞能量為9V；原兒茶酸的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為153.0±0.5m/z，子離子為109.1±0.5m/z，碎裂電壓為76V，碰撞能量為13V；三葉豆苷的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為447.0±0.5m/z，子離子為284.1±0.5m/z，碎裂電壓為226V，碰撞能量為25V；迷迭香酸的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為359.0±0.5m/z，子離子為161.0±0.5m/z，碎裂電壓為148V，碰撞能量為9V；山奈酚-3-O-β-D葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為593.0m/z±0.5，子離子為285.1±0.5m/z，碎裂電壓為266V，碰撞能量為29V；蘆丁的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為609.0±0.5m/z，子離子為300.1±0.5m/z，碎裂電壓為261V，碰撞能量為37V；咖啡酰雞蛋花苷的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的分析條件為：母離子為763.0±0.5m/z，子離子為213.0±0.5m/z，碎裂電壓為285V，碰撞能量為29V。以上述條件對(duì)各成分進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，所獲得的離子對(duì)具有信噪比高、穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，能夠準(zhǔn)確反映王老吉涼茶中各成分的含量。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，按照下述液相色譜條件進(jìn)行檢測(cè)：固定相：碳十八烷基硅烷基鍵合硅膠為填料的色譜柱；流動(dòng)相：體積百分比濃度為0.1％的甲酸水溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫方式；流速：0.2-0.3mL/min。以上述色譜條件進(jìn)行分離、檢測(cè)，能夠?qū)⑼趵霞獩霾柚卸喾N成分很好的分離，使各成分具有較好的分離度，利于后序的檢測(cè)和鑒定。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測(cè)步驟中，按照下述液相色譜條件進(jìn)行檢測(cè)：進(jìn)樣量：5μL；固定相：填料粒徑為2.7μm，直徑、長(zhǎng)度分別為3.0mm和50mm的AglientPoroshell120EC-C18色譜柱；流動(dòng)相：體積百分比濃度為0.1％的甲酸水溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：0-3min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由13％變化至25％；3-7min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為25％；7-8min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由25％變化至40％；8-12min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由40％變化至54％；12-16min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為13％；柱溫：20-30℃；流速：0.25mL/min。以上述色譜條件進(jìn)行分離、檢測(cè)，具有最佳的分離效果。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述對(duì)照品溶液的制備步驟中，將各對(duì)照品以甲醇溶解定容，制得混合對(duì)照品溶液，其中，水仙苷的濃度為0.15-0.25μg/ml、原兒茶醛的濃度為0.6-0.8μg/ml、川續(xù)斷皂苷乙的濃度為0.15-0.25μg/ml、咖啡酸的濃度為0.3-0.5μg/ml、綠原酸的濃度為2.0-3.0μg/ml、甘草苷的濃度為8-12μg/ml、異綠原酸A的濃度為5-7μg/ml、原兒茶酸的濃度為1.5-2.5μg/ml、三葉豆苷的濃度為1.5-2.5μg/ml、迷迭香酸的濃度為1.5-2.5μg/ml、山奈酚-3-O-β-D葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷的濃度為12-20μg/ml、蘆丁的濃度為8-12μg/ml、咖啡酰雞蛋花苷的濃度為1.2-1.5μg/ml。將對(duì)照品溶液的濃度限定在該范圍內(nèi)，與供試品溶液中各成分的濃度相適應(yīng)，具有較好的參照性。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述供試品溶液的制備步驟中，取王老吉涼茶，以體積百分含量為10-60％的甲醇稀釋4-6倍，過(guò)0.22μm微孔濾膜，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明的一種HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法，通過(guò)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，可同時(shí)測(cè)定王老吉涼茶中水仙苷、原兒茶醛、川續(xù)斷皂苷乙、咖啡酸、綠原酸、甘草苷、異綠原酸A、原兒茶酸、三葉豆苷、迷迭香酸、山奈酚-3-O-β-D葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、蘆丁、和咖啡酰雞蛋花苷等多種成分的含量，從而對(duì)王老吉涼茶的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)全面保證王老吉涼茶質(zhì)量的目的。并且，為王老吉涼茶譜效學(xué)的研究奠定了基礎(chǔ)。并且，該檢測(cè)方法還對(duì)其中的液相條件和質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，能夠?qū)⑼趵霞獩霾柚卸喾N成分很好的分離，使各成分具有較好的分離度和靈敏度，并且選取了能夠準(zhǔn)確反映王老吉涼茶中各成分的含量的離子對(duì)和子離子碎裂碰撞條件，進(jìn)一步提高了定量檢測(cè)的靈敏度和穩(wěn)定性。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1中混合對(duì)照品的總離子流圖；圖2為實(shí)施例1中王老吉涼茶的總離子流圖；圖3A-圖3B為實(shí)施例1中各對(duì)照品的提取離子流圖；圖4A-圖4B為實(shí)施例1中王老吉涼茶中各目標(biāo)化合物的提取離子流圖。具體實(shí)施方式為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。以下給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的理解更加透徹全面。除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。以下實(shí)施例中的儀器與試藥如下：儀器：Agilent1260HPLC高效液相色譜儀，配備二元梯度泵(1260BinPump，G1312B)；自動(dòng)進(jìn)樣器(1260HipALS，G1367E)；柱溫箱(1260TCC，G1316A)；Agilent6460三重四極桿HPLC-MS-MS儀，Chemstation在線工作站；AgilentPoroshell120EC-C18快速分離型高效液相色譜柱(3.0×50mm，2.7μm)；SI-114型電子天平(丹佛儀器有限公司，北京)。試藥：王老吉涼茶，配方所用藥材、王老吉涼茶陰性樣品均由王老吉藥業(yè)股份有限公司提供；川續(xù)斷皂苷乙、咖啡酰雞蛋花苷、水仙苷、蘆丁、山奈酚-3-O-β-D葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷(以下簡(jiǎn)稱山奈酚糖苷)、異綠原酸A、三葉豆苷、甘草苷、迷迭香酸、綠原酸、咖啡酸、原兒茶酸和原兒茶醛等對(duì)照品均為實(shí)驗(yàn)室自制，所有對(duì)照品經(jīng)HPLC面積歸一化法檢測(cè)，純度均高于98％；甲醇和乙腈為色譜純(默克)；甲酸為分析純(廣州化學(xué)試劑廠)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。實(shí)施例1一種HPLC-MS-MS測(cè)定王老吉涼茶成分含量的方法，包括以下步驟：一、供試品溶液的制備。精密吸取王老吉涼茶0.2ml，30％甲醇稀釋至1ml，過(guò)0.22μm微孔濾膜，作為王老吉成品供試品溶液。二、對(duì)照品溶液的制備。單一對(duì)照品溶液的制備：分別取各個(gè)對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇定容至2ml，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，于-4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩；旌蠈?duì)照品溶液的制備：分別精密吸取上述單一對(duì)照品儲(chǔ)備液，配置成混標(biāo)儲(chǔ)備液(各對(duì)照品濃度見(jiàn)下表)。表1.混合對(duì)照品溶液濃度三、檢測(cè)。(一)、檢測(cè)條件篩選。1、色譜條件的優(yōu)化。對(duì)甲醇-水和乙腈-水流動(dòng)相進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈的洗脫效果優(yōu)于甲醇，各色譜峰分離效果好且分析時(shí)間較短。另外，加入0.1％甲酸可以有效的改善有機(jī)酸成分色譜峰的拖尾現(xiàn)象，并且能提高負(fù)離子模式的質(zhì)譜響應(yīng)，因此采用乙腈-0.1％甲酸水溶液作為流動(dòng)相。2、質(zhì)譜條件的優(yōu)化。分別對(duì)比了正離子和負(fù)離子檢測(cè)模式，發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)條件下有機(jī)酸類成分在負(fù)離子模式下檢測(cè)靈敏度高，故選擇負(fù)離子模式掃描。在MRM模式下，對(duì)選定的各待測(cè)物的母離子和定量子離子進(jìn)行各種參數(shù)的優(yōu)化。(二)、檢測(cè)條件確定。分別將上述供試品溶液和對(duì)照品溶液分別注入液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中檢測(cè)，具體條件確定如下：液相色譜條件如下：進(jìn)樣量：5μL；固定相：AglientPoroshell120EC-C18(3.0×50mm，2.7μm)色譜柱；流動(dòng)相：體積百分比濃度為0.1％的甲酸水溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：0-3min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由13％變化至25％；3-7min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為25％；7-8min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由25％變化至40％；8-12min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為由40％變化至54％；12-16min，流動(dòng)相B的體積百分?jǐn)?shù)為13％；柱溫：25℃；流速：0.25mL/min。三重四極桿型質(zhì)譜的質(zhì)譜條件如下：離子化方式：電噴霧離子化(ESI)；檢出模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式，負(fù)離子模式；毛細(xì)管電壓：3500V；噴嘴電壓：500V；霧化氣體、干燥氣體、和鞘氣氣體：氮?dú)?；干燥氣體溫度：300℃；干燥氣流：5L/min；霧化氣壓：45psi；鞘氣溫度：350℃；鞘氣流速：11L/min。上述各對(duì)照品質(zhì)譜分析的條件參數(shù)見(jiàn)下表。表2.各對(duì)照品質(zhì)譜分析的條件按上述色譜和質(zhì)譜條件對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液中各成分進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。四、結(jié)果。按上述色譜和質(zhì)譜條件對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液中各成分進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。得到混合對(duì)照品的總離子流圖(TIC)和王老吉涼茶的總離子流圖(TIC)，分別如圖1、圖2所示；各對(duì)照品的MRM提取離子流圖和王老吉涼茶的MRM提取離子流圖，分別如圖3A-B、圖4A-B所示。按上述色譜和質(zhì)譜條件對(duì)供試品溶液(不同批次王老吉涼茶)中各成分進(jìn)行測(cè)定分析，用外標(biāo)法計(jì)算各樣品中14個(gè)目標(biāo)化合物的含量，結(jié)果如下表所示。表3.王老吉涼茶中各目標(biāo)化合物的含量(μg/ml，n＝2)表4王老吉涼茶中各目標(biāo)化合物占總量的比例(％)五、方法學(xué)考察。1、線性關(guān)系及檢出限、定量限。分別精密吸取混標(biāo)儲(chǔ)備液6，12，36，100，300，600，900，1200μL，甲醇定容至2ml，進(jìn)樣5μL，記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)，計(jì)算回歸方程。以信噪比(S/N)等于3及10為標(biāo)準(zhǔn)，分別測(cè)得各組分的檢出限與定量限，并計(jì)算線性方程(見(jiàn)下表)。表5線性方程及檢出限、定量限成分線性方程相關(guān)系數(shù)線性范圍(ng/ml)檢測(cè)限(ng/ml)定量限(ng/ml)川續(xù)斷皂苷乙Y＝2184.1x+3.84350.99923.6～12012咖啡酰雞蛋花苷Y＝24665x+78.3100.99984.08～40814水仙苷Y＝16622x+33.4440.99963.6～1500.51蘆丁Y＝13077x+369.100.999630～30000.51山奈酚糖苷Y＝13603x+559.910.999248～24000.51異綠原酸AY＝7453.0x-121.380.999436～27001020三葉豆苷Y＝27716x+277.580.99976～9000.21甘草苷Y＝52008x+417.680.99912.4～4800.20.5迷迭香酸Y＝12867x-23.7680.999612～1200510綠原酸Y＝15805x+137.7760.999214.4～1440510咖啡酸Y＝20031x+1383.50.999530～30002030原兒茶酸Y＝8599.2x+128.190.999536～900630原兒茶醛Y＝37255x+254.110.99902.1～31515從上述結(jié)果中可以看出，各化合物的響應(yīng)值與濃度間均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。2、精密度試驗(yàn)。精密吸取同一混合對(duì)照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰的峰面積，測(cè)得各目標(biāo)化合物的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.95％-3.78％，結(jié)果表明該方法有較好的精密度。3、重復(fù)性試驗(yàn)。取同一王老吉成品供試液6份，按上述檢測(cè)方法，稀釋5倍后進(jìn)樣5μL進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得各成分含量的RSD值為0.56％-4.93％，結(jié)果表明供試樣品重復(fù)性良好。4、穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一王老吉成品供試液分別于0，4，8，12，18，24h進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算得RSD值為2.26％-4.82％，結(jié)果表明供試樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。5、加樣回收試驗(yàn)分別取已知各目標(biāo)化合物含量的王老吉成品供試液0.1ml，6份，分別加入各化合物，按上述檢測(cè)方法，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)下表。表6加樣回收試驗(yàn)從上述結(jié)果中可以看出，該方法的回收率較好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定王老吉涼茶中各目標(biāo)化合物的含量。實(shí)驗(yàn)例1指標(biāo)成分的代表性與專屬性試驗(yàn)王老吉涼茶是由涼粉草、雞蛋花、菊花、金銀花、夏枯草、布渣葉和甘草等七味藥材提取加工制成的，其成分復(fù)雜多樣，本實(shí)驗(yàn)在前期化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，按照上述檢測(cè)方法，對(duì)王老吉涼茶與各陰性樣品進(jìn)行逐一分析，具體如下：一、供試品溶液的制備。王老吉涼茶陰性樣品的供試品溶液：分別精密吸取各陰性藥材王老吉涼茶0.2ml，30％甲醇稀釋至1ml，過(guò)0.22μm微孔濾膜，作為王老吉涼茶陰性樣品的供試品溶液。上述王老吉涼茶陰性樣品指的是，在制備涼茶過(guò)程中，分別不投料布渣葉、甘草、雞蛋花、金銀花、菊花、夏枯草、或仙草，制得分別不合布渣葉、甘草、雞蛋花、金銀花、菊花、夏枯草、仙草的七種涼茶成品。二、對(duì)照品溶液的制備。參照實(shí)施例1。三、檢測(cè)。參照實(shí)施例1。四、結(jié)果。按上述色譜和質(zhì)譜條件對(duì)供試品溶液(王老吉涼茶陰性樣品的供試品)中各成分進(jìn)行測(cè)定分析，用外標(biāo)法計(jì)算各樣品中6個(gè)目標(biāo)化合物，結(jié)果如下表所示。表7.王老吉涼茶陰性樣品中各目標(biāo)化合物的檢測(cè)結(jié)果注：″+″表示檢出，″-″表示未檢出。通過(guò)上述結(jié)果，我們可以分析出，這6個(gè)指標(biāo)成分是單藥味來(lái)源化合物：川續(xù)斷皂苷乙、水仙苷、咖啡酰雞蛋花苷、甘草苷、迷迭香酸和三葉豆苷，如下表所示。表8.13個(gè)指標(biāo)成分的化學(xué)信息化合物名稱分子式分子量主要來(lái)源甘草苷C21H12O9418甘草川續(xù)斷皂苷乙C53H86O221074金銀花水仙苷C29H34O16638布渣葉迷迭香酸C18H16O8360涼粉草三葉豆苷C21H20O11448涼粉草咖啡酰雞蛋花苷C35H40O19764雞蛋花由于單藥味來(lái)源的化合物具有較強(qiáng)的專屬性，提示在制定王老吉涼茶成品及原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)優(yōu)先考慮將該類化合物作為質(zhì)量控制指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)例2王老吉涼茶指標(biāo)成分的分析根據(jù)上述實(shí)施例1的測(cè)定結(jié)果，分析得到樣品中13個(gè)目標(biāo)化合物的相對(duì)含量歸屬，如下表所示。表9.樣品中13個(gè)目標(biāo)化合物的相對(duì)含量歸屬(mean±SD)成分相對(duì)含量％(n＝9)迷迭香酸29.84±0.40％綠原酸19.16±0.32％異綠原酸A9.29±0.25％咖啡酸8.69±0.36％三葉豆苷8.37±0.19％甘草苷7.20±0.60％水仙苷4.77±0.42％山奈酚糖苷3.62±0.14％原兒茶酸3.47±0.11％蘆丁3.24±0.21％原兒茶醛2.06±0.16％咖啡酰雞蛋花苷0.24±0.04％川續(xù)斷皂苷乙0.03±0.02％研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：對(duì)13個(gè)目標(biāo)化合物的相對(duì)含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)迷迭香酸含量最高，在20％以上；相對(duì)含量小于20％的成分有綠原酸、異綠原酸A、咖啡酸、三葉豆苷、甘草苷、水仙苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、原兒茶酸、蘆丁、原兒茶醛；相對(duì)含量在1％以下的成分為：咖啡酰雞蛋花苷、川續(xù)斷皂苷乙。以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書(shū)記載的范圍。以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3