本發(fā)明涉及一種西藏木瓜活性成分的檢測(cè)方法及多指標(biāo)定量指紋圖譜的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

西藏木瓜(Chaenomeles thibetica)為薔薇科木瓜屬植物，主要分布在西藏、四川等省區(qū)，具有舒經(jīng)活絡(luò)、和胃化濕、健胃之功效，藏醫(yī)將其果實(shí)用做木瓜(藏藥名賽亞)入藥?！吨袊?guó)藏藥》第一卷把西藏木瓜收錄其中，但有關(guān)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀、顯微和理化鑒別等方法。2015版《中國(guó)藥典》一部中僅采用皺皮木瓜Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai作為木瓜藥材的主要來源，有關(guān)西藏木瓜的藥用情況沒有表述。目前，《中國(guó)藥典》和相關(guān)文獻(xiàn)中有關(guān)木瓜的質(zhì)量控制也僅對(duì)其中齊墩果酸和熊果酸進(jìn)行了含量測(cè)定，然而單一的指標(biāo)成分難以反應(yīng)中藥多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)。有關(guān)西藏木瓜活性成分的分析測(cè)定和質(zhì)量控制對(duì)于安全合理利用西藏木瓜資源具有重要意義。然而至今為止，西藏木瓜的質(zhì)量控制仍然停留在性狀鑒別和少數(shù)主要活性成分含量測(cè)定，缺乏系統(tǒng)的研究報(bào)道。

多指標(biāo)定量指紋圖技術(shù)把指紋圖譜技術(shù)與藥效活性成分多指標(biāo)定量相結(jié)合，可以更加全面地控制中藥的質(zhì)量。近年來，多指標(biāo)定量指紋圖技術(shù)在中藥質(zhì)量控制研究中發(fā)揮了重要作用，并且越來越多的被用于中藥材及中成藥的質(zhì)量控制研究中。但目前還未有關(guān)于西藏木瓜多指標(biāo)定量指紋圖譜構(gòu)建的報(bào)道，因此，有必要進(jìn)行相關(guān)研究，以提高西藏木瓜的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別水平，以便于更好的開發(fā)利用西藏木瓜資源。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種西藏木瓜活性成分的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的另一目的是提供一種西藏木瓜多指標(biāo)定量指紋圖譜的構(gòu)建方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種西藏木瓜活性成分的檢測(cè)方法，步驟如下：

(1)對(duì)照品溶液的制備：分別制備綠原酸、香草酸、咖啡酸、藜蘆酸、蕓香苷、槲皮苷、金絲桃苷、齊墩果酸和熊果酸對(duì)照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：采用勻漿提取法對(duì)西藏木瓜鮮藥材進(jìn)行提取，制備供試品溶液；

(3)采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-DAD-ESI-TOF/MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)木瓜中的活性成分進(jìn)行快速分析鑒別。

步驟(1)中，制備的對(duì)照品溶液的濃度均為1mg/mL。

步驟(2)中，所述勻漿提取法的操作為：向西藏木瓜鮮藥材中加入甲醇溶液，水浴加熱，再加入水，12000-14000r/min勻漿提取0.5-2min。

西藏木瓜鮮藥材、甲醇溶液和水加入量的比為1g：2ml：1ml。

優(yōu)選的，所述甲醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為70％。

優(yōu)選的，水浴加熱的溫度為60℃，水浴時(shí)間為10min。

步驟(3)中，液相色譜條件為：乙腈作為流動(dòng)相A，0.5％冰乙酸+10mM醋酸銨水溶液作為流動(dòng)相B(即：以含有體積百分比為0.5％的冰乙酸和10mM醋酸銨的水溶液作為流動(dòng)相B)，進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫程序?yàn)椋?～20min，7％A→8％A；20～30min，8％A→10％A；30～50min，10％A→11％A；50～65min，11％A→13％A；65～90min，13％A→15％A；90～110min，15％A→20％A；110～115min，20％A→20％A；115～140min，20％A→45％A；140～150min，45％A→45％A；150min-151min,45％A→90％A；151～156min，90％A→100％A；156～165min，100％A→100％A。

進(jìn)一步的，液相色譜條件中，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6mm×250mm，5.0μm)；流速為0.8mL/min；柱溫為25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；進(jìn)樣量為10μL。

步驟(3)中，質(zhì)譜檢測(cè)條件為：電噴霧正負(fù)離子全掃描檢測(cè)；全掃描范圍m/z100-1000；錐孔電壓：60V；毛細(xì)管電壓：5.0kV；裂解電壓：100V；噴霧氣壓：310Kpa；干燥氣流速：11.0L/min；干燥氣溫度：350℃。

經(jīng)方法學(xué)考察，本發(fā)明檢測(cè)方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性良好，采用本發(fā)明的檢測(cè)方法可以對(duì)西藏木瓜中的綠原酸、香草酸、咖啡酸、藜蘆酸、蕓香苷、槲皮苷、金絲桃苷、齊墩果酸和熊果酸等九種活性成分進(jìn)行鑒別和檢測(cè)。

本發(fā)明還提供一種西藏木瓜多指標(biāo)定量指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：采用勻漿提取法對(duì)西藏木瓜鮮藥材進(jìn)行提取，制備供試品溶液；

(2)對(duì)照品溶液的制備：分別制備綠原酸、香草酸、咖啡酸、藜蘆酸、蕓香苷、槲皮苷、金絲桃苷、齊墩果酸和熊果酸對(duì)照品溶液；

(3)測(cè)定：分別精密量取供試品和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定，并記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算各樣品中目標(biāo)化合物的含量；

(4)用指紋圖譜軟件對(duì)所得圖譜進(jìn)行處理，即得到西藏木瓜多指標(biāo)定量指紋圖譜。

步驟(1)中，所述勻漿提取法的操作為：向西藏木瓜鮮藥材中加入甲醇，水浴加熱，再加入水，12000-14000r/min勻漿提取1-2min。

西藏木瓜鮮藥材、甲醇溶液和水加入量的比為1g：2ml：1ml。

優(yōu)選的，所述甲醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為70％。

優(yōu)選的，水浴加熱的溫度為60℃，水浴時(shí)間為10min。

步驟(2)中，測(cè)定的液相色譜條件為：乙腈作為流動(dòng)相A，0.5％冰乙酸+10mM醋酸銨水溶液作為流動(dòng)相B(即：以含有體積百分比為0.5％的冰乙酸和10mM醋酸銨的水溶液作為流動(dòng)相B)，進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫程序?yàn)椋?～20min，7％A→8％A；20～30min，8％A→10％A；30～50min，10％A→11％A；50～65min，11％A→13％A；65～90min，13％A→15％A；90～110min，15％A→20％A；110～115min，20％A→20％A；115～140min，20％A→45％A；140～150min，45％A→45％A；150min-151min,45％A→90％A；151～156min，90％A→100％A；156～165min，100％A→100％A。

上述方法構(gòu)建得到的西藏木瓜多指標(biāo)定量指紋圖譜，其特征峰為30個(gè)。各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD％均在1％以內(nèi)，而相對(duì)峰面積的RSD％均在5％以內(nèi)。

需要說明的是，本發(fā)明的指紋圖譜的構(gòu)建方法是經(jīng)過科學(xué)實(shí)驗(yàn)而篩選得到的，并非是本領(lǐng)域的常規(guī)選擇，本發(fā)明主要對(duì)供試品溶液的制備方法，色譜條件等進(jìn)行了優(yōu)選。

其中：

1)對(duì)于供試品溶液制備方法的優(yōu)化：

供試品溶液的制備方法對(duì)于西藏木瓜活性成分的檢測(cè)及指紋圖譜的構(gòu)建而言是至為關(guān)鍵，若供試品溶液制備方法選擇不當(dāng)，則可能會(huì)導(dǎo)致無法將西藏木瓜中的有效成分提取出來，從而無法正確的反應(yīng)西藏木瓜的質(zhì)量情況。本發(fā)明采用勻漿提取法對(duì)西藏木瓜的有效成分進(jìn)行了提取，將適當(dāng)溶媒加入到新鮮的生物組織中，在勻漿攪拌刀的強(qiáng)力作用下，細(xì)胞液中的活性成分迅速溶出到溶媒中的過程。具有操作簡(jiǎn)單、提取率高、能耗低、溫度低、速度快等優(yōu)點(diǎn)，物料破碎和有效成分的提取同步進(jìn)行，特別適合于西藏木瓜有效成分的提取。本發(fā)明對(duì)不同提取溶劑(水、50％甲醇、70％甲醇、100％甲醇)、不同勻漿轉(zhuǎn)速(14 000r/min，13 000r/min，10 000r/min，8 000r/min)、不同提取時(shí)間(0.5min、1min、2min、3min)時(shí)的提取效果，所得提取液在相同的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果表明，當(dāng)采用70％甲醇、13 000r/min、1min作為提取條件時(shí)，色譜峰較多，峰強(qiáng)度較好。

2)色譜條件的優(yōu)化：

本發(fā)明選擇了三根不同的反相色譜柱XSELECT^TM HSS T3(3.0mm×150mm，3.5μm)、Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6mm×250mm，5.0μm)、Agilent Kromasil 100-5C₁₈E103491(4.6mm×250mm，5.0μm)，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果表明，當(dāng)采用Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6mm×250mm，5.0μm)色譜柱時(shí)木瓜提取物中各化合物分離效果較好。木瓜果實(shí)中含有多種有機(jī)酸、黃酮、三萜等化學(xué)成分，采用等度洗脫難以實(shí)現(xiàn)其分離，因此采用梯度洗脫用于其分離研究?？疾炝思状?水和乙腈-水作為洗脫溶劑時(shí)的效果，結(jié)果表明，采用乙腈-水作為流動(dòng)相時(shí)各峰分離度較好、分布均勻，因此選擇乙腈-水用于木瓜提取物的分離研究。由于木瓜提取物中含有大量有機(jī)酸和黃酮成分，易與色譜柱填料殘留羥基發(fā)生作用，造成譜峰拖尾現(xiàn)象。進(jìn)一步考察了流動(dòng)相加入不同比例弱酸(0.3％冰乙酸、0.5％冰乙酸、0.7％冰乙酸)及緩沖鹽對(duì)色譜分離的影響，結(jié)果表明，水相中加入0.5％冰乙酸+10mM醋酸銨時(shí)各色譜峰對(duì)稱性較好、峰型尖銳。為選取最佳的檢測(cè)波長(zhǎng)作為西藏木瓜指紋圖譜的特征波長(zhǎng)，經(jīng)二極管陣列檢測(cè)器考察木瓜在不同波長(zhǎng)(190～400nm)下的色譜圖，結(jié)果表明，當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm時(shí)西藏木瓜樣品HPLC色譜峰較多、峰面積大、峰形對(duì)稱性較好且基線較平，因此，選擇280nm作為西藏木瓜樣品指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。

洗脫條件是指紋圖譜構(gòu)建的關(guān)鍵參數(shù)條件，本發(fā)明對(duì)指紋圖譜構(gòu)建的洗脫條件進(jìn)行了優(yōu)化和選擇，對(duì)于針對(duì)西藏木瓜測(cè)定的洗脫條件，本發(fā)明設(shè)計(jì)了多組流動(dòng)相體系和洗脫程序，例如，將洗脫過程調(diào)整為：流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的變化為：0～60min，流動(dòng)相A5％～20％；60～135min，流動(dòng)相A20％～45％；135～150min，流動(dòng)相A45％～50％；150～165min，流動(dòng)相A50％～90％。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與之相比，采用本發(fā)明的流動(dòng)相體系和洗脫條件，各色譜峰的保留時(shí)間適中，且基線平穩(wěn)，不易漂移，同時(shí)提高了色譜圖的分離度，有效避免了色譜圖的拖尾現(xiàn)象，有利于色譜指紋圖譜的檢測(cè)和分析。

上述構(gòu)建的指紋圖譜在西藏木瓜質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用也是本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明以西藏木瓜甲醇水提取物為研究對(duì)象，首次建立了HPLC-ESI-TOF/MS法分析測(cè)定西藏木瓜中活性成分的方法，在對(duì)多批次樣品分析基礎(chǔ)上，首次建立了西藏木瓜藥材的多指標(biāo)定量指紋圖譜，結(jié)合相似度分析，可以實(shí)現(xiàn)西藏木瓜與其他品種木瓜的正確區(qū)分。本發(fā)明的研究結(jié)果可以對(duì)西藏木瓜藥材的合理利用提供質(zhì)量評(píng)價(jià)方法和技術(shù)支持。

附圖說明

圖1：西藏木瓜樣品的HPLC圖；

圖2：西藏木瓜的HPLC特征指紋圖譜；

圖3：特征圖譜對(duì)比。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。

本發(fā)明實(shí)施例中所用到的儀器、材料如下：

安捷倫1260高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；G6520型四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源(美國(guó)Agilent公司)；萬分之一電子分析天平(SARTOURIUS BSA)；SB-5200D型高功率數(shù)控超聲波儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；THZ-8恒溫水浴鍋(浙江嘉興電熱儀器廠)。色譜柱：XSELECT^TM HSS T3(3.0mm×150mm，3.5μm)，美國(guó)Agilent Kromasil 100-5C₁₈E103491(4.6mm×250mm，5.0μm)，美國(guó)Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6mm×250mm，5.0μm)。

綠原酸(批號(hào)327-97-9)、香草酸(批號(hào)121-34-6)、咖啡酸(批號(hào)331-39-5)、藜蘆酸(批號(hào)93-07-2)、蕓香苷(批號(hào)153-18-4)、槲皮苷(批號(hào)522-12-3)、金絲桃苷(批號(hào)482-36-0)、齊墩果酸(批號(hào)508-02-1)、熊果酸(批號(hào)77-52-1)，標(biāo)準(zhǔn)品純度均≥98％，均購于上海源葉生物科技有限公司。乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher Scientific)，甲醇(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)，冰乙酸(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，無水乙醇(分析純，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司)，實(shí)驗(yàn)用水為哇哈哈純凈水。樣品信息見表1。

表1 樣品來源

實(shí)施例1：西藏木瓜活性成分的檢測(cè)及方法學(xué)考察

1.對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取1.0mg的綠原酸、香草酸、咖啡酸、藜蘆酸、蕓香苷、槲皮苷、金絲桃苷、齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品，各置于1mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配成各化合物質(zhì)量濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，備用。

2.供試品溶液的制備

精密稱取5.0g木瓜鮮藥材，置于50mL EP管中，加入10mL甲醇，于60℃水浴鍋中水浴10min，再加入5mL水，用勻漿提取法(13000r/min，1min)提取，濾液過0.22μm微孔濾膜后作為供試品溶液。

3.將制備供試品溶液采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-DAD-ESI-TOF/MS)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。其中：

3.1色譜分離條件

Agilent Zorbax SB-C₁₈(4.6mm×250mm，5.0μm)，流動(dòng)相：乙腈(A)-0.5％冰乙酸+10mM醋酸銨水溶液(B)；梯度洗脫(0～20min，7％A→8％A；20～30min，8％A→10％A；30～50min，10％A→11％A；50～65min，11％A→13％A；65～90min，13％A→15％A；90～110min，15％A→20％A；110～115min，20％A→20％A；115～140min，20％A→45％A；140～150min，45％A→45％A；150min-151min,45％A→90％A；151～156min，90％A→100％A；156～165min，100％A→100％A)；流速為0.8mL/min；柱溫為25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；進(jìn)樣量為10μL。樣品色譜圖見圖1。

3.2質(zhì)譜檢測(cè)條件

電噴霧正負(fù)離子全掃描檢測(cè)；全掃描范圍m/z100-1000；錐孔電壓：60V；毛細(xì)管電壓：5.0kV；裂解電壓：100V；噴霧氣壓：310Kpa；干燥氣流速：11.0L/min；干燥氣溫度：350℃。

3.3 ESI-TOF/MS鑒別

在3.1的色譜條件下，采用電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)色譜圖中的主要組分進(jìn)行高分辨質(zhì)譜鑒別，根據(jù)獲得的化合物的精確分子量信息，DAD檢測(cè)器獲得的紫外吸收信息，并參考相關(guān)文獻(xiàn)及中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫，對(duì)各化合物進(jìn)行鑒別。結(jié)果如表2所示：

表2 9個(gè)化合物的HPLC-ESI-TOF/MS精確質(zhì)量測(cè)量結(jié)果

4.方法學(xué)考察

4.1線性關(guān)系考察

配置不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)液，按“2。”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定各化合物的峰面積，以各化合物質(zhì)量濃度(μg·mL-¹)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程。將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至低濃度進(jìn)樣，以3倍信噪比計(jì)算各成分的檢測(cè)限，以10倍信噪比計(jì)算定量限，結(jié)果見表3。

表3 9種化合物的回歸方程、線性范圍及檢出限、定量限

4.2精密度考察

精密稱取“S1”號(hào)木瓜樣品，按“2.供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)得其中9個(gè)化合物的峰面積和保留時(shí)間，分別計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，其保留時(shí)間RSD依次是0.31％、0.24％、0.25％、0.17％、0.12％、0.15％、0.22％、0.27％、0.24％，均小于1％，峰面積RSD依次是0.80％、0.20％、1.35％、3.45％、1.98％、3.38％、1.09％、1.23％、1.14％，均小于5％，說明所使用的儀器性能良好,隨機(jī)誤差小，所采用的色譜分析方法適宜。

4.3重復(fù)性考察

準(zhǔn)確稱取“S1”號(hào)木瓜樣品6份，按“2.供試品溶液的制備”項(xiàng)下處理方法制成供試品溶液，按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得9個(gè)化合物的峰面積和保留時(shí)間，并計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果9個(gè)化合物的保留時(shí)間RSD依次是0.48％、0.43％、0.40％、0.26％、0.54％、0.65％、0.34％、0.51％、0.48％，均小于1％，峰面積RSD依次是1.63％、3.04％、1.93％、3.64％、2.86％、3.60％、3.34％、1.78％、2.01％，均小于5％，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好。

4.4穩(wěn)定性考察

取“S1”號(hào)木瓜供試品溶液按照“3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、3、6、12、18、24h進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果9個(gè)化合物保留時(shí)間RSD依次是0.35％、0.45％、0.44％、0.33％、0.18％、0.29％、0.34％、0.32％、0.29％，均小于1％，峰面積RSD依次是2.87％、3.36％、1.35％、3.45％、2.33％、3.58％、1.08％、2.45％、2.51％，均小于5％，表明樣品在24h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

4.5加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知各目標(biāo)化合物含量的木瓜樣品2.50g，分別準(zhǔn)確加入綠原酸、香草酸、咖啡酸、藜蘆酸、蕓香苷、槲皮苷、金絲桃苷、齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品適量，按照供試品溶液制備方法處理6份，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定各目標(biāo)化合物峰面積，計(jì)算平均加樣回收率(n＝6)分別為96.87％、98.80％、99.57％、97.74％、97.94％、96.94％、99.04％、97.70％、98.40％,RSD分別為3.28％、2.32％、2.15％、3.35％、1.45％、2.25％、1.19％、2.30％、3.27％。從試驗(yàn)結(jié)果可知，本方法的回收率良好。

5.樣品含量測(cè)定

按“2.供試品溶液的制備”項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制備10批樣品溶液，采用“3.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣分析，得到10批西藏木瓜和3批不同品種木瓜樣品中9種化合物的色譜峰面積，將測(cè)得結(jié)果帶入表3線性回歸方程中，得出木瓜樣品中9種化合物的含量(見表4)。

表4 木瓜中9種化合物含量(μg·g^-1)測(cè)定結(jié)果

從表4可以看出，西藏木瓜9種活性成分中槲皮苷的平均含量相對(duì)最高，其平均值556.14μg/g；金絲桃苷的含量相對(duì)最低，其平均值9.87μg/g；9種活性成分的加和平均值為1 250.15μg/g。相比之下，皺皮木瓜、毛葉木瓜和光皮木瓜中9種活性成分的加和平均值相對(duì)較低，分別為1 016.14μg/g、573.44μg/g和732.36μg/g。

實(shí)施例2：西藏木瓜指紋圖譜的構(gòu)建

將表1中S1-S10這10批不同批次的木瓜樣品，按實(shí)施例1中“2.供試品溶液的制備”項(xiàng)下的處理方法將其制備成供試品溶液，各取10μL分別進(jìn)樣，按“3.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，建立木瓜的HPLC特征指紋圖譜，見圖2。在本發(fā)明所建立的分析系統(tǒng)下，特征性明顯的主要有30個(gè)色譜峰，這30個(gè)色譜峰即構(gòu)成木瓜HPLC指紋圖譜的特征峰。結(jié)果表明，各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD％均在1％以內(nèi)，而相對(duì)峰面積的RSD％均在5％以內(nèi)。

采用本發(fā)明的方法對(duì)西藏木瓜、皺皮木瓜、毛葉木瓜和光皮木瓜進(jìn)行HPLC分析，所得色譜圖如圖3所示。從圖中可以看出，西藏木瓜與其他三種不同類型木瓜HPLC圖存在明顯不同，說明本發(fā)明建立的西藏木瓜HPLC指紋圖譜可以反應(yīng)西藏木瓜的特有屬性。

實(shí)施例3：相似度評(píng)價(jià)

通過“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”(《國(guó)家藥典委員會(huì)》2004A版)對(duì)表1中13批木瓜樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度分析。將色譜工作站數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件，選定上述30個(gè)共有峰進(jìn)行譜峰匹配，采用共有模式作為對(duì)照指紋圖譜，用于10批西藏木瓜和3批其他品種木瓜樣品的相似度評(píng)價(jià)，采用夾角余弦法用于其相似度計(jì)算，結(jié)果見表5。從表中可以看出，不同批次西藏木瓜的相似度較為接近，說明其質(zhì)量差別不大，而西藏木瓜與其他品種木瓜的相似度差別加大，所得結(jié)果與多指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果一致。

表5 相似度評(píng)價(jià)結(jié)果

上述雖然結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。