1.一種基于聚多巴胺納米微球的電致化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)將直徑4 mm的玻碳電極依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化鋁拋光粉依次做拋光處理,用超純水沖洗干凈;
(2)滴涂6 μL、0.3~0.7 mg/mL的氨基化多壁碳納米管/Nafion溶液至電極表面,將電極浸入1 mM的三聯(lián)吡啶釕溶液30 min,用超純水沖洗電極表面;
(3)滴加6 μL、5~10 μg/mL的抗體溶液,4℃冰箱中晾干后用超純水沖洗電極表面;
(4)滴加3 μL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的牛血清白蛋白溶液,4℃冰箱中晾干后用超純水沖洗電極表面;
(5)滴加6 μL、0.0001~20 ng/mL的一系列不同濃度的前列腺特異性抗原溶液,4℃冰箱中晾干后用超純水沖洗電極表面;
(6)將電極浸入聚多巴胺納米微球二抗標(biāo)記物溶液2~6 h,置于4℃冰箱中晾干后用超純水沖洗電極表面,制得聚多巴胺納米微球構(gòu)建的免疫傳感器。
2.一種基于聚多巴胺納米微球的電致化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法,其特征在于,所述的聚多巴胺納米微球二抗標(biāo)記物溶液制備步驟如下:
80~120 mg鹽酸多巴胺加入到80~120 mL pH = 8.8的Tris緩沖溶液與30~70 mL異丙醇的混合液中,在室溫下避光反應(yīng)24 h,將產(chǎn)品離心分離并用超純水洗滌三次,之后將產(chǎn)物分散到5 mL超純水中;在990 μL、100 μg/mL的抗體溶液中加入新鮮配制的5 μL、8 mg/mL EDC溶液和5 μL 22 mg/mL NHS溶液,室溫下震蕩15 min,之后加入1 mL聚多巴胺納米微球,在4℃下震蕩12 h,用超純水離心洗滌三次,得到聚多巴胺納米微球二抗標(biāo)記物溶液。
3.一種基于聚多巴胺納米微球的電致化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法,所述制備方法制備的電致化學(xué)發(fā)光傳感器用于前列腺特異性抗原的檢測(cè),步驟如下:
(1)使用電化學(xué)工作站的三電極體系進(jìn)行測(cè)試,Ag/AgCl電極作為參比電極,鉑絲電極為對(duì)電極,所制備的電致化學(xué)發(fā)光傳感器為工作電極,將電化學(xué)工作站和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀連接在一起,將光電倍增管的高壓設(shè)置為600 V,循環(huán)伏安掃描電位范圍為0 ~ 1.2 V,掃描速率為0.1 V/s;
(2)在10 mL、pH 7.4的含濃度為15 mmol/L三丙胺的磷酸鹽緩沖溶液中,通過(guò)電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng),檢測(cè)對(duì)不同濃度的前列腺特異性抗原產(chǎn)生的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度,繪制工作曲線。