本發(fā)明屬于食品檢測領(lǐng)域，涉及一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑含量的方法，具體來說，特別涉及蔬菜中6-芐基腺嘌呤、噻苯隆、氯吡脲、多效唑、烯效唑及氯苯胺靈等六種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量的快速測定的方法。
背景技術(shù)：
：蔬菜是人們?nèi)粘ｏ嬍持斜夭豢缮俚氖澄镏?，其質(zhì)量安全問題不僅與人們的身體健康息息相關(guān)，也關(guān)系到我國農(nóng)產(chǎn)品的國際競爭力。植物生長調(diào)節(jié)劑是用于調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的一類農(nóng)藥，由于其應(yīng)用技術(shù)相對比較復(fù)雜，一直以來發(fā)展不如殺蟲劑、殺菌劑及除草劑迅速，應(yīng)用規(guī)模相對較小，因而人們對植物生長調(diào)節(jié)劑的安全問題的關(guān)注度也相對較少。隨著人們生活水平的不斷提高，消費者對蔬菜品質(zhì)的要求越來越高，蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑引起的質(zhì)量安全問題也受到越來越多的關(guān)注。近年來，由于利益所驅(qū)使，濫用以及盲目改變植物生長調(diào)節(jié)劑的使用劑量，已經(jīng)影響了蔬菜使用安全，由此導(dǎo)致的食品安全問題日益增加。然而，眾多的檢測項目和較長的檢測周期不僅給新鮮蔬菜原料收購、出口通關(guān)帶來不便，還導(dǎo)致蔬菜保鮮品質(zhì)下降。如何縮短蔬菜檢驗周期，對快速檢測提出了客觀的要求。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，該方法縮短檢測周期，提高檢測效率，既滿足出口蔬菜檢測監(jiān)控要求，又為保障國內(nèi)食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑含量的方法，樣品用乙酸乙腈混合液提取后，經(jīng)鹽析分層，提取液采用分散固相萃取法凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測，外標法定量；所述植物生長調(diào)節(jié)劑為6-芐基腺嘌呤、噻苯隆、氯吡脲、多效唑、烯效唑和氯苯胺靈中的一種或多種。本發(fā)明的方法可以對上述任一種或多種植物生長調(diào)節(jié)劑進行檢測，優(yōu)選的是對上述六種植物生長調(diào)節(jié)劑同時進行檢測。進一步，所述的方法，所述乙酸乙腈混合液中乙酸含量為0.5-5％。優(yōu)選的，所述乙酸乙腈混合液中乙酸含量為1％。進一步，所述的方法，所述鹽析分層采用的鹽為無水硫酸鎂和無水乙酸鈉的混合粉末。優(yōu)選的，所述無水硫酸鎂與無水乙酸鈉的質(zhì)量比為4：1。進一步，所述的方法，所述分散固相萃取法凈化是采用乙二胺-N-丙基硅烷和C18粉的混合物進行凈化。優(yōu)選的，乙二胺-N-丙基硅烷與C18粉的質(zhì)量比為1：1。進一步，所述的方法，采用乙二胺-N-丙基硅烷、C18粉和無水硫酸鎂的混合物進行凈化。優(yōu)選的，乙二胺-N-丙基硅烷、C18粉與無水硫酸鎂的質(zhì)量比為1：1：3。進一步，所述的方法，所述液相色譜的色譜柱填料為硅膠鍵合C18柱填料。進一步，所述的方法，液相色譜以流動相A與流動相B的混合液進行梯度洗脫；所述流動相A為乙腈，流動相B為0.05％-1％的乙酸水溶液。優(yōu)選的，所述流動相B為0.2％的乙酸水溶液。進一步，所述的方法，所述洗脫條件為：0.0min時，流動相A與流動相B的體積比為5-15：85-95；0.5min時，流動相A與流動相B的體積比為5-15：85-95；1.0min時，流動相A與流動相B的體積比為90-100：0-10；3.0min時，流動相A與流動相B的體積比為90-100：0-10；3.1min時，流動相A與流動相B的體積比為5-15：85-95；4.0min時，流動相A與流動相B的體積比為5-15：85-95。優(yōu)選的，所述洗脫條件為：0.0min時，流動相A與流動相B的體積比為10：90；0.5min時，流動相A與流動相B的體積比為10：90；1.0min時，流動相A與流動相B的體積比為95：5；3.0min時，流動相A與流動相B的體積比為95：5；3.1min時，流動相A與流動相B的體積比為10：90；4.0min時，流動相A與流動相B的體積比為10：90。進一步，所述的方法，所述流動相流速為0.1-1mL/min。優(yōu)選的，所述流動相流速為0.4mL/min。進一步，所述的方法，所述色譜柱為HypersilGOLDaQ，規(guī)格為1.9μm，50mm×2.1mm(內(nèi)徑)或相當者。進一步，所述的方法，所述進樣量為1-10μL。優(yōu)選的，所述進樣量為5μL。進一步，所述的方法，所述柱溫為40±5℃。進一步，所述的方法，所述質(zhì)譜法離子化方式采用電噴霧電離，掃描方式為正離子掃描，檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測，離子傳輸管溫度為350±10℃，霧化溫度為300±10℃。進一步，所述的方法，所述6-芐基腺嘌呤的離子對為：母離子(m/z)226.0，子離子(m/z)91.2和148.1；所述噻苯隆的離子對為：母離子(m/z)221.0，子離子(m/z)102.1和94.2；所述氯吡脲的離子對為：母離子(m/z)248.0，子離子(m/z)129.1和155.0；所述多效唑的離子對為：母離子(m/z)294.0，子離子(m/z)125.1和139.1；所述烯效唑的離子對為：母離子(m/z)292.0，子離子(m/z)125.1和170.2；所述氯苯胺靈的離子對為：母離子(m/z)214.0，子離子(m/z)126.1和172.0。在本發(fā)明的一個具體實施例中，公開了質(zhì)譜條件為：a)離子化方式：電噴霧電離；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；d)電噴霧電壓：3500V；e)鞘氣壓力：45Arb；f)輔助氣壓力：13Arb；e)吹掃氣壓力：1Arb；f)離子傳輸管溫度：350℃；g)霧化溫度：300℃；i)監(jiān)測離子對、射頻透鏡電壓(RFLens)和碰撞能(CE)見表1。表16種植物生長調(diào)節(jié)劑的保留時間及質(zhì)譜參數(shù)注：*定量離子本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供的一種快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑含量的方法，該方法分離度好，專屬性強，靈敏度高；且操作簡單，具有簡便、快速的優(yōu)點。彌補了現(xiàn)有技術(shù)的空缺，該方法縮短檢測周期，提高檢測效率，既滿足出口蔬菜檢測監(jiān)控要求，又為保障國內(nèi)食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。附圖說明圖16種植物生長調(diào)節(jié)劑的質(zhì)量色譜圖。具體實施方式所舉實施例是為了更好地對本發(fā)明的內(nèi)容進行說明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所舉實施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容對實施方案進行非本質(zhì)的改進和調(diào)整，還包括各具體實施方式間的任意組合，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明所述植物生長調(diào)節(jié)劑指對植物的生長發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的一類農(nóng)藥。以下實施例所用的試劑：乙腈(CH3CN)：色譜純，乙酸(CH3COOH)：色譜純，無水硫酸鎂(MgSO4)，無水乙酸鈉(CH3COONa)，乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)填料，C18E填料。植物生長調(diào)節(jié)劑標準品：6-芐基腺嘌呤、氯吡脲、氯苯胺靈、噻苯隆、多效唑、烯效唑標準品純度均大于95％。除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。以下實施例所用的儀器：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。分析天平：感量為0.1mg和0.01g。離心機：≥10000轉(zhuǎn)/分鐘。渦旋混合器。濾膜：0.22μm(尼龍)。以下實施例所涉及的試樣制備與保存方法：試樣的制備按GB/T8855抽取的蔬菜樣品取可食部分切碎，混勻，密封，作為試樣，標明標記。試樣的保存：將試樣置于0℃-4℃冷藏保存。實施例1快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑含量的方法1、儀器與條件(1)液相色譜條件a)色譜柱：HypersilGOLDaQ，1.9μm，50mm×2.1mm(內(nèi)徑)或相當者；b)進樣量：5μL；c)柱溫：40℃；d)流動相及梯度洗脫條件見表2。表2流動相及梯度洗脫條件(2)質(zhì)譜條件a)離子化方式：電噴霧電離；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；d)電噴霧電壓：3500V；e)鞘氣壓力：45Arb；f)輔助氣壓力：13Arb；e)吹掃氣壓力：1Arb；f)離子傳輸管溫度：350℃；g)霧化溫度：300℃；i)監(jiān)測離子對、射頻透鏡電壓(RFLens)和碰撞能(CE)見表3。表36種植物生長調(diào)節(jié)劑的保留時間及質(zhì)譜參數(shù)注：*定量離子2、實驗步驟(1)溶劑的配制1％乙酸乙腈溶液：量取乙酸1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋并定容至刻度，搖勻備用。植物生長調(diào)節(jié)劑標準儲備溶液：準確稱取適量(精確至0.1mg)各植物生長調(diào)節(jié)劑標準品于50mL容量瓶中，分別用甲醇溶解定容，配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液，-18℃避光保存?；旌蠘藴嗜芤海阂迫∫欢康膯蝹€植物生長調(diào)節(jié)劑標準儲備溶液于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，4℃避光保存?；|(zhì)混合標準工作溶液：用空白樣品基質(zhì)溶液配成一系列不同濃度的基質(zhì)混合標準工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。(2)樣品的提取及鹽析分層稱取5g(精確至0.01g)搗碎的試樣于50mL具塞離心管中，加入10mL1％乙酸乙腈溶液，勻漿2min，渦旋混勻1min，加入4g無水硫酸鎂和1g無水乙酸鈉的混合粉末，迅速振搖，渦旋振蕩1min，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，取上清液待凈化。(3)凈化處理稱取50mg(±5mg)PSA，50mg(±5mg)C18E，150mg(±5mg)無水硫酸鎂置于2mL離心管中，移取上述步驟(2)中上清液1.5mL至此離心管中，渦旋混合1min，以10000轉(zhuǎn)/分鐘離心2min，取上清液過0.22μm濾膜，備用。(4)定性測定在相同實驗條件下測定標準溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時間與標準溶液中的某種組分色譜峰的保留時間一致，并且扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子豐度比與標準溶液的離子豐度比進行比較時，相對偏差不超過表4規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在該組分。表4定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/％＞5020-5010-20＜10允許的相對偏差/％±20±25±30±50(5)定量測定在儀器最佳狀態(tài)下，對基質(zhì)混合標準工作溶液進樣，以峰面積為縱坐標，植物生長調(diào)節(jié)劑濃度為橫坐標繪制標準曲線，外標法定量。在上述色譜和質(zhì)譜條件下，6種化合物的標準物質(zhì)的質(zhì)量色譜圖如圖1所示。采用基質(zhì)匹配標準曲線外標法定量，定量結(jié)果按式(1)計算：式中：Xi——試樣中被測組分含量，單位為微克每千克(μg/kg)；ci——從標準工作曲線得到的樣品溶液中被測組分的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V——樣品溶液提取體積，此處為10，單位為毫升(mL)；m——樣品質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值(空白試驗是除不稱取樣品外，按上述相同的步驟進行測定所得的值)。實施例2快速檢測蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑含量的方法(以葉菜類、瓜類、茄果類、塊莖類、豆類5種蔬菜作為代表基質(zhì)，研究了其中6種人工合成的植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量的快速精準分析方法)1、儀器與條件同實施例1。2、溶劑的配制、樣品的提取及鹽析分層及凈化處理同實施例1。3、基質(zhì)效應(yīng)的校正采用提取后添加法評價基質(zhì)效應(yīng)(ME)，如表5。除白菜基質(zhì)對6-芐基腺嘌呤以外，5種基質(zhì)對6種植物生長調(diào)節(jié)劑均表現(xiàn)出不同程度的基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此，在進行定量分析時需采用空白基質(zhì)配制標準工作溶液，以校正基質(zhì)效應(yīng)。表56種植物生長調(diào)節(jié)劑的基質(zhì)效應(yīng)3、線性方程、方法檢出限及定量限采用空白基質(zhì)溶液配制6種化合物的混合標準溶液，以峰面積(Y)對質(zhì)量濃度(X)進行線性回歸分析，這6種化合物在相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2＞0.99)，以3倍信噪比(S/N＝3)濃度估算方法檢出限(LOD)，以10倍信噪比(S/N＝10)所對應(yīng)濃度作為方法定量限(LOQ)，見表6。表66種化合物的線性范圍、回歸方程、方法檢出限和定量限4、方法回收率和精密度以黃瓜、番茄、土豆、白菜及四季豆為代表基質(zhì)，進行添加回收和精密度實驗。3個添加水平的回收率在83.9％-107.8％之間，相對標準偏差(RSD)均不大于9.1％，見表7。表76種植物生長調(diào)節(jié)劑的平均回收率和相對標準偏差(n＝6)實施例3實際樣品的測定1、儀器與條件同實施例1。2、溶劑的配制、樣品的提取及鹽析分層及凈化處理同實施例1。3、測定將該方法分別應(yīng)用于白菜、菠菜、番茄、黃瓜、豇豆、茄子、芹菜、青椒、四季豆、藤菜、土豆、萵筍12種蔬菜209批次樣品的檢測，結(jié)果在18批次樣品中檢出氯吡脲，含量在0.2-7.5μg/kg之間。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。當前第1頁1 2 3