本發(fā)明涉及食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種食用油中苯并芘的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

苯并芘又稱苯并（α）芘，英文縮寫(xiě) Ba P，是一種公認(rèn)的強(qiáng)致癌化合物，是多環(huán)芳烴中毒性最大的一種，被國(guó)際癌癥研究中心列為 2A 類致癌物。它經(jīng)過(guò)呼吸或飲食進(jìn)入體內(nèi)后，很容易和人的DNA 結(jié)合，擾亂了人體蛋白質(zhì)的合成程序。它在DNA 的活動(dòng)中，扮演著一個(gè)“扳機(jī)”的角色：只要極為微量- 納克級(jí)別的苯并芘，就可改變DNA 的結(jié)構(gòu)、方向和功能；結(jié)合了苯并芘的DNA，合成的細(xì)胞不再是正常細(xì)胞，而是腫瘤，也就導(dǎo)致了癌癥。它在水體，土壤和作物中都容易殘留。

苯并芘危害人類健康，隨著環(huán)境問(wèn)題的日趨惡化，苯并芘的檢測(cè)越來(lái)越受到人們的重視。常用的檢測(cè)苯并芘的方法有薄層層析法，熒光分光光度法，氣相色譜法，氣相色譜-質(zhì)譜法，高效液相色譜紫外法，高效液相色譜熒光法。其中熒光法有靈敏度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是較常用的方法。目前的食用油中苯并芘檢測(cè)方法中，樣品的前處理方法復(fù)雜，步驟繁瑣，很容易在前處理樣品過(guò)程中由于操作不慎吸入或皮膚接觸到苯并芘，這給實(shí)驗(yàn)人員的安全帶來(lái)了極大的威脅。還有，目前的苯并芘檢測(cè)方法一般檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，浪費(fèi)時(shí)間和流動(dòng)相，檢測(cè)成本高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡(jiǎn)便、步驟簡(jiǎn)單快速、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、操作時(shí)間短的食用油中苯并芘的檢測(cè)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種食用油中苯并芘的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1）凈化：稱取0.4-0.6g食用油，加入3mL正己烷渦旋混合震蕩溶解8-12s，待凈化；

2）活化：依次用4-6mL二氯甲烷，4-6mL正己烷活化SPE柱；

3）上樣：將待凈化液上樣到SPE柱上，然后再用1-3ml正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，然后也上樣到SPE柱上；

4）淋洗：用8-12mL正己烷淋洗SPE柱；

5）洗脫：5mL二氯甲烷，并收集；

6）濃縮定容：將收集液在38-42℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙睛定容，超聲0.8-1.5min，再漩渦混合8-12s，待上機(jī)檢測(cè)；

7）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：配制濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/L的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，定容溶液為有機(jī)溶劑，搖勻后過(guò)0.45μm微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，備用；

8）檢測(cè)：依次將苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測(cè)條件為：SPE柱；柱溫：28-32℃；流動(dòng)相：梯度洗脫：0→3min，乙腈0~20%；3→10min，乙腈20~25%；10→13min，乙腈25~60%；13→20min，乙腈60~100%；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述有機(jī)溶劑包括氯仿、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、正己烷、石油醚和環(huán)己烷中的任一種。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：SPE柱采用SBEQ-CA4854。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：超聲時(shí)需用封口膜將瓶口封住。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，步驟簡(jiǎn)單快速，能有效去除干擾因素，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，減少了人為誤操作導(dǎo)致吸入或皮膚接觸到苯并芘的幾率，大大提高了實(shí)驗(yàn)人員工作的安全性，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，真實(shí)可靠。本發(fā)明使用梯度洗脫的方式洗脫苯并芘，操作時(shí)間短，保證苯并芘洗脫完全，使檢測(cè)成本低。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

本發(fā)明實(shí)施例中，一種食用油中苯并芘的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1）凈化：稱取0.4g食用油，加入3mL正己烷渦旋混合震蕩溶解8s，待凈化。

2）活化：依次用4mL二氯甲烷，4mL正己烷活化SPE柱。

3）上樣：將待凈化液上樣到SPE柱上，然后再用1ml正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，然后也上樣到SPE柱上。

4）淋洗：用8mL正己烷淋洗SPE柱。SPE柱采用SBEQ-CA4854。

5）洗脫：5mL二氯甲烷，并收集。

6）濃縮定容：將收集液在38℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙睛定容，超聲0.8min，再漩渦混合8s，待上機(jī)檢測(cè)。超聲時(shí)需用封口膜將瓶口封住。

7）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：配制濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/L的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，定容溶液為有機(jī)溶劑，搖勻后過(guò)0.45μm微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，備用。所述有機(jī)溶劑采用氯仿。

8）檢測(cè)：依次將苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測(cè)條件為：SPE柱；柱溫：28℃；流動(dòng)相：梯度洗脫：0→3min，乙腈0~20%；3→10min，乙腈20~25%；10→13min，乙腈25~60%；13→20min，乙腈60~100%；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm。

實(shí)施例2

本發(fā)明實(shí)施例中，一種食用油中苯并芘的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1）凈化：稱取0.6g食用油，加入3mL正己烷渦旋混合震蕩溶解12s，待凈化。

2）活化：依次用6mL二氯甲烷，6mL正己烷活化SPE柱。

3）上樣：將待凈化液上樣到SPE柱上，然后再用3ml正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，然后也上樣到SPE柱上。

4）淋洗：用12mL正己烷淋洗SPE柱。SPE柱采用SBEQ-CA4854。

5）洗脫：5mL二氯甲烷，并收集。

6）濃縮定容：將收集液在42℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙睛定容，超聲1.5min，再漩渦混合12s，待上機(jī)檢測(cè)。超聲時(shí)需用封口膜將瓶口封住。

7）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：配制濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/L的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，定容溶液為有機(jī)溶劑，搖勻后過(guò)0.45μm微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，備用。所述有機(jī)溶劑采用丙酮。

8）檢測(cè)：依次將苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測(cè)條件為：SPE柱；柱溫：32℃；流動(dòng)相：梯度洗脫：0→3min，乙腈0~20%；3→10min，乙腈20~25%；10→13min，乙腈25~60%；13→20min，乙腈60~100%；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm。

實(shí)施例3

本發(fā)明實(shí)施例中，一種食用油中苯并芘的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

1）凈化：稱取0.5g食用油，加入3mL正己烷渦旋混合震蕩溶解10s，待凈化。

2）活化：依次用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化SPE柱。

3）上樣：將待凈化液上樣到SPE柱上，然后再用2ml正己烷潤(rùn)洗樣品瓶，然后也上樣到SPE柱上。

4）淋洗：用10mL正己烷淋洗SPE柱。SPE柱采用SBEQ-CA4854。

5）洗脫：5mL二氯甲烷，并收集。

6）濃縮定容：將收集液在40℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙睛定容，超聲1min，再漩渦混合10s，待上機(jī)檢測(cè)。超聲時(shí)需用封口膜將瓶口封住。

7）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：配制濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/L的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，定容溶液為有機(jī)溶劑，搖勻后過(guò)0.45μm微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，備用。所述有機(jī)溶劑包括正己烷。

8）檢測(cè)：依次將苯并芘標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測(cè)條件為：SPE柱；柱溫：30℃；流動(dòng)相：梯度洗脫：0→3min，乙腈0~20%；3→10min，乙腈20~25%；10→13min，乙腈25~60%；13→20min，乙腈60~100%；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書(shū)按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書(shū)的這種敘述方式僅僅是為清楚起見(jiàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書(shū)作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。