本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種治療糖病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

糖尿病腎病(DKD)是糖尿病(DM)最主要的微血管并發(fā)癥之一，為終末期腎病(ESRD)的首要病因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全球DM患者人數(shù)已達(dá)4.15億，預(yù)計(jì)2040年將增至6.42億，其中，20％～45％的DM患者將發(fā)生DKD。我國(guó)DM患者已經(jīng)達(dá)1.1億，且發(fā)病率逐年上升。2012年我國(guó)ESRD患者中19％是DKD導(dǎo)致，在日本、韓國(guó)、美國(guó)、澳大利亞等發(fā)達(dá)國(guó)家，這一比例高達(dá)38％～45.2％。DKD已成為威脅人類健康的重大社會(huì)問題，給社會(huì)和個(gè)人造成了巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

DKD的治療，西醫(yī)以控制血糖、控制血壓、減少尿蛋白為主，還包括生活方式干預(yù)、糾正脂質(zhì)代謝紊亂、治療腎功能不全的并發(fā)癥、透析治療等。在一定程度上解決了DKD患者血壓高及蛋白尿等臨床問題，但均不能有效阻止疾病進(jìn)展，甚至導(dǎo)致藥源性腎病，部分藥物的應(yīng)用尚存在爭(zhēng)議。且容易出現(xiàn)高鉀血癥、高肌酐血癥等副作用，使用期間需嚴(yán)格監(jiān)測(cè)血鉀、血清肌酐水平，限制其臨床使用。因此，開發(fā)能有效控制糖尿病腎病病程，毒副作用低的防治藥物迫在眉捷。

中醫(yī)藥治療糖尿病腎病歷史悠久，有豐富的中藥資源，完整的治療理論體系和豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，其治療通常在明確分期基礎(chǔ)上分型辨證。其中，腎功能代償期患者中本虛以氣虛、陰虛或氣陰兩虛為主，標(biāo)實(shí)可見血瘀、痰濕、濕濁；失代償期患者中本虛多見陽(yáng)虛、陰陽(yáng)俱虛，標(biāo)實(shí)以痰濕、血瘀為主，部分患者可見血虛。針對(duì)不同時(shí)期DKD患者證候類型、主證和兼證的不同，給予相應(yīng)益氣、滋陰、溫陽(yáng)、活血化瘀、化濕、泄?jié)?、解毒等治療，更能反映DKD不同階段不同體質(zhì)患者的異常復(fù)雜的證候特點(diǎn)，有利于突出中醫(yī)藥治療DKD的個(gè)體化優(yōu)勢(shì)。

古方黃耆散，北宋《圣濟(jì)總錄》(第五十九卷·消渴門·渴利)和明代《普濟(jì)方》(消渴門·渴利附論)均有收錄。全方由黃芪、葛根、桑白皮三味藥組成。方中黃芪補(bǔ)氣升陽(yáng)，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，為君藥；葛根生津止渴，通經(jīng)活絡(luò)，為臣藥；桑白皮瀉肺平喘，利水消腫，為佐藥。三藥相伍，共奏益氣養(yǎng)陰，通絡(luò)利水之效。以扶正治本為主，治療糖尿病腎臟疾病(DKD)氣虛、氣陰兩虛之證。

目前對(duì)該方的研究較少，并未有對(duì)上述古方相應(yīng)制劑進(jìn)行全面質(zhì)量控制的質(zhì)量檢測(cè)方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要針對(duì)上述問題，提供一種治療糖病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，上述治療糖病腎病的中藥組合物處方來(lái)源于古方黃耆散，申請(qǐng)人采用超濾技術(shù)及現(xiàn)代制劑技術(shù)將古方黃耆散開發(fā)成中藥制劑，在最大程度保留有效成分基礎(chǔ)上，提高生物利用度，便于攜帶和服用，本發(fā)明質(zhì)量檢測(cè)方法使上述中藥組合物在生產(chǎn)和使用中有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量，進(jìn)而保證藥品療效。

具體技術(shù)方案如下：

一種治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，所述治療糖尿病腎病的中藥組合物的有效成分主要由重量份比為0.5～1.5:1.5～2.5:0.5～1.5的黃芪、葛根和桑白皮制備而成，所述質(zhì)量檢測(cè)方法包括鑒別，所述鑒別包括采用薄層色譜法對(duì)所述桑白皮進(jìn)行鑒別，鑒別步驟為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，研碎，加入體積濃度為69～71％的乙醇水溶液回流提取，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤塍w積濃度為0.4～0.6％的硫酸水溶液回流，過濾，濾液用氯仿萃取2～6次，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液?/p>

另取桑白皮對(duì)照藥材適量，與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素對(duì)照品適量，加入甲醇制成東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；

吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6～7:3～4:0.04～0.06的沸點(diǎn)為60℃～90℃的石油醚、乙酸乙酯和乙酸為展開劑，展開，取出晾干，置于紫外光下觀察。

在其中一些實(shí)施例中，所述鑒別還包括采用薄層色譜法對(duì)所述黃芪進(jìn)行鑒別，鑒別步驟為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，研碎，加甲醇超聲提取，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀柡驼〈既芙獾谜〈家海〈家河觅|(zhì)量百分比為0.1～3％的氫氧化鈉溶液洗滌2～7次，棄去所述氫氧化鈉溶液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水層，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤海?/p>

另取黃芪對(duì)照藥材適量，與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成溶液，作為對(duì)照品溶液；

分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為12～14：6～8:2～4的三氯甲烷、甲醇和水的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，噴以硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置可見光下以及紫外光燈下檢視。

在其中一些實(shí)施例中，所述鑒別還包括采用薄層色譜法對(duì)所述葛根進(jìn)行鑒別，鑒別步驟為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，研碎，加入甲醇超聲提取，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液?/p>

另取葛根對(duì)照藥材，與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取葛根素對(duì)照品適量，加入甲醇制備成溶液，作為對(duì)照品溶液；

分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6～8:2～3:0.2～0.4的三氯甲烷、甲醇和水作為展開劑，展開，取出晾干，置于紫外光下觀察。

在其中一些實(shí)施例中，所述鑒別中對(duì)黃芪的鑒別方法為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物2g，研碎，加甲醇50mL超聲提取29～31min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀柡驼〈?0mL溶解得正丁醇液，正丁醇液用質(zhì)量百分比為0.1～3％的氫氧化鈉溶液洗滌2～7次(洗至氫氧化鈉溶液不變色為止)，每次20mL，棄去所述氫氧化鈉溶液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水層，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；

另取黃芪對(duì)照藥材2g，與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg所述黃芪甲苷對(duì)照品的溶液，作為對(duì)照品溶液；

分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為12～14：6～8:2～4的三氯甲烷、甲醇和水的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，噴以體積濃度為10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置可見光及波長(zhǎng)為365nm的紫外光燈下檢視；

所述鑒別中對(duì)葛根的鑒別方法為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物0.1g，研碎，加入甲醇20mL超聲提取29～31min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液；

另取葛根對(duì)照藥材0.25g，與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取葛根素對(duì)照品適量，加入甲醇制備成濃度為1.5mg/mL溶液，作為對(duì)照品溶液；

分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6～8:2～3:0.2～0.4的三氯甲烷、甲醇和水作為展開劑，展開，取出晾干，置于波長(zhǎng)為365nm的紫外光下觀察；

所述鑒別中的對(duì)桑白皮的鑒別方法為：

取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物1g，研碎，加入體積濃度為69～71％的乙醇水溶液100mL回流提取4～6h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤塍w積濃度為0.4～0.6％的硫酸水溶液50mL回流2.5～3.5h，過濾，濾液用氯仿萃取3～5次，每次30mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；

另取桑白皮對(duì)照藥材1.5g，與供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素對(duì)照品適量，加入甲醇制成東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素濃度均為0.1mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；

分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6～7:3～4:0.04～0.06的沸點(diǎn)為60～90℃的石油醚、乙酸乙酯和乙酸為展開劑，展開，取出晾干，置于波長(zhǎng)為365nm的紫外光下觀察。

在其中一些實(shí)施例中，所述質(zhì)量檢測(cè)方法還包括含量測(cè)定，所述含量測(cè)定包括采用高效液相色譜法測(cè)定所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的葛根素的含量，具體測(cè)定方法為：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為13.5：86.5的乙腈和體積濃度為0.2％的甲酸水溶液作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；

對(duì)照品溶液的制備：取葛根素對(duì)照品適量，精密稱定，加體積濃度為30％的乙醇水溶液制成溶液，即得；

供試品溶液的制備：取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，粉碎，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為30％的乙醇水溶液，密塞，稱重，超聲處理，放冷，再稱重，用體積濃度為30％的乙醇水溶液補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即可；

測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。

在其中一些實(shí)施例中，所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的葛根素的含量測(cè)定方法為：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為Phenomenex C18；柱溫為25～40℃；以體積比為13.5：86.5的乙腈和體積濃度為0.2％的甲酸水溶液作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；

對(duì)照品溶液的制備：取葛根素對(duì)照品適量，精密稱定，加體積濃度為30％的乙醇水溶液制成每1mL含有36～44μg所述葛根素對(duì)照品的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，粉碎，取粉末0.125g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為30％的乙醇水溶液100mL，密塞，稱重，超聲處理20min，放冷，再稱重，用體積濃度為30％的乙醇水溶液補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即可；所述超聲處理中的功率為120W，頻率為40kHz；

測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。

在其中一些實(shí)施例中，所述含量測(cè)定還包括采用高效液相色譜法測(cè)定所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的黃芪甲苷的含量，具體測(cè)定方法為：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為32:68的乙腈和水作為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；

對(duì)照品溶液的制備：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成溶液，即得；

供試品溶液的制備：取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，研碎，精密稱定，置錐形瓶中，加甲醇，超聲處理，放冷，過濾得濾液，蒸干，殘?jiān)铀芙?，再用水飽和正丁醇萃?次，合并正丁醇液；再用稀氨水洗滌，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，定容，搖勻，過濾，即得；

測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL，供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量。

在其中一些實(shí)施例中，所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的黃芪甲苷的含量測(cè)定方法為：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；柱溫為25～40℃；以體積比為32:68的乙腈和水作為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，所述蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的參數(shù)為N₂流速為2.8mL/min，溫度為105℃，理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；

對(duì)照品溶液的制備：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含有0.225～0.275mg所述黃芪甲苷對(duì)照品的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量，研碎，取2.5g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，加甲醇100mL，超聲處理30min，放冷，過濾得濾液，蒸干，殘?jiān)?0mL水溶解，再用水飽和正丁醇萃取4次，每次50mL，合并正丁醇液；再用稀氨水洗滌2次，每次50mL，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，定容至5mL，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得；所述超聲處理中的功率為120W，頻率為40KHz；

測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL，供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量。

在其中一些實(shí)施例中，所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中含葛根以葛根素計(jì)，不少于20mg/g；含黃芪以黃芪甲苷計(jì)，不少于0.4mg/g。

在其中一些實(shí)施例中，所述質(zhì)量檢測(cè)方法還包括有性狀檢測(cè)，所述性狀檢測(cè)為采用目測(cè)、鼻嗅及口嘗檢測(cè)所述治療糖尿病腎病的中藥組合物是否符合咖啡色包衣微丸，丸心黃褐色或褐色，氣微。

上述質(zhì)量檢測(cè)方法還包括檢查，所述檢查為參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則丸劑項(xiàng)下要求檢查，應(yīng)符合《中國(guó)藥典》2015年版四部通則丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。

本發(fā)明相較現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)以及有益效果為：

本發(fā)明經(jīng)過多大量研究建立針對(duì)本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法；

本發(fā)明質(zhì)量檢測(cè)方法通過建立專屬性強(qiáng)的鑒別以及進(jìn)一步地建立重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及精密度良好的含量測(cè)定方法，能夠有效控制本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量，使本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、可控、高效及安全。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物中黃芪TLC鑒別三批驗(yàn)證結(jié)果圖譜；

圖2為本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物中葛根TLC鑒別三批驗(yàn)證結(jié)果圖譜(UV365nm)；

圖3為本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物中桑白皮TLC鑒別三批驗(yàn)證結(jié)果圖譜(UV365nm)；

圖4為葛根素含量測(cè)定專屬性試驗(yàn)色譜圖；

圖5為葛根素含量測(cè)定不同色譜柱對(duì)應(yīng)的色譜圖；

圖6為葛根素含量測(cè)定流動(dòng)相不同比例條件下色譜圖；

圖7為葛根素含量測(cè)定不同柱溫HPLC色譜圖；

圖8為葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖9為黃芪甲苷含量測(cè)定專屬性試驗(yàn)色譜圖；

圖10為黃芪甲苷含量測(cè)定不同色譜柱對(duì)應(yīng)的色譜圖；

圖11為黃芪甲苷含量測(cè)定流動(dòng)相不同比例條件下色譜圖；

圖12為黃芪甲苷含量測(cè)定不同柱溫HPLC色譜圖；

圖13為黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

本發(fā)明實(shí)施例所用試劑、儀器均為市售普通產(chǎn)品：

其中，治療糖尿病腎病的中藥組合物為微丸，批號(hào)：20140801，20140802，20140803，均由廣州康臣藥物研究有限公司提供，制備工藝為：

1)準(zhǔn)備如下重量比的藥材：黃芪：葛根：桑白皮＝1：2：1；

2)以上三味藥材，加乙醇回流提取兩次，濾過，合并濾液，超濾，收集濾液，回收乙醇并濃縮至濃浸膏，收膏備用；

3)取以上浸膏，加適量藥用輔料，混勻，制軟材，制成微丸；干燥，過篩取合格微丸，包薄膜衣，干燥，過篩；收集合格微丸，質(zhì)檢，包裝，即得微丸成品。

實(shí)施例

一種治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括性狀、鑒別、檢查和含量測(cè)定，具體如下：

一、性狀：采用目測(cè)、鼻嗅及口嘗，質(zhì)量指標(biāo)為：本品為咖啡色包衣微丸，丸心黃褐色或褐色；氣微。

二、檢查：參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則丸劑項(xiàng)下要求檢查，質(zhì)量指標(biāo)為應(yīng)符合《中國(guó)藥典》2015年版四部通則丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。

三、鑒別：

(1)儀器：研缽、量筒、圓底燒瓶、冷凝管、蒸發(fā)皿、層析缸等均購(gòu)于廣州市東征化玻儀器有限公司、電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)、BS224S分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、Linomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(瑞士卡瑪)、硅膠G薄層板(青島海洋化工廠有限公司)、Reprostar3成像系統(tǒng)(瑞士卡瑪)、GZX-GFC-01-2-BS烘箱(上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、TH-II加熱器(上海科哲生化科技有限公司)；

(2)對(duì)照品：黃芪對(duì)照藥材、葛根對(duì)照藥材、桑白皮對(duì)照藥材、黃芪甲苷對(duì)照品、葛根素對(duì)照品、東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；

(3)試劑：甲醇、鹽酸、乙酸乙酯、三氯甲烷、水、石油醚(60～90℃沸程)、氫氧化鈉、硫酸、乙酸、正丁醇、氯仿、硫酸乙醇試液；

(4)樣品：批號(hào)：20140801，20140802，20140803，均由廣州康臣藥物研究有限公司提供。

(5)鑒別的檢測(cè)方法：

①對(duì)黃芪的鑒別：

取樣品2g，研碎，加甲醇50mL超聲提取30min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀柡驼〈?0mL溶解得正丁醇液，正丁醇液用質(zhì)量百分比為1％的氫氧化鈉溶液洗滌3～5次(洗至氫氧化鈉溶液不變色為止)，每次20mL，棄去氫氧化鈉溶液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水層，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；按上述方法分別制備批號(hào)：20140801，20140802，20140803的三批次樣品各三組供試品溶液，共9組供試品溶液。

另取黃芪對(duì)照藥材2g，與供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液；

再取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg黃芪甲苷對(duì)照品的溶液，作為對(duì)照品溶液；

取缺黃芪的樣品處方藥材，與供試品溶液同法制得陰性樣品溶液。

照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502項(xiàng))試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水(體積比為13:7:3)的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，噴以體積濃度為10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置可見光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1，圖1中的1～3為批號(hào)20140801的供試品溶液；4～6為批號(hào)20140802的供試品溶液；7～9為批號(hào)20140803的供試品溶液；10為黃芪對(duì)照藥材溶液；11為黃芪甲苷對(duì)照品溶液；12為陰性樣品溶液，A為置UV365nm檢視，B為置可見光下檢視。

②對(duì)葛根的鑒別：

取樣品0.1g，研碎，加入甲醇20mL超聲提取30min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液；按上述方法分別制備批號(hào)：20140801，20140802，20140803的三批次樣品各三組供試品溶液，共9組供試品溶液。

另取葛根對(duì)照藥材0.25g，與供試品溶液同法制得葛根對(duì)照藥材溶液；

再取葛根素對(duì)照品適量，加入甲醇制備成濃度為1.5mg/mL溶液，作為葛根素對(duì)照品溶液。

取缺葛根的樣品處方藥材，與供試品溶液同法制得陰性樣品溶液。

照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502項(xiàng))試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：水(體積比為7:2.5:0.3)的溶液為展開劑，展開，取出晾干，置于紫外光(365nm)下觀察。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，結(jié)果見圖2，圖2中，1～3為批號(hào)20140801的供試品溶液；4～6為批號(hào)20140802的供試品溶液；7～9為批號(hào)20140803的供試品溶液；10為葛根對(duì)照藥材溶液；11為葛根素對(duì)照品溶液；12為陰性樣品溶液。

③對(duì)桑白皮的鑒別：

取樣品1g，研碎，加入體積濃度為70％的乙醇水溶液100mL回流提取5h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤塍w積濃度為0.5％的硫酸水溶液50mL回流3h，過濾，濾液用氯仿萃取4次，每次30mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；按上述方法分別制備批號(hào)：20140801，20140802，20140803的三批次樣品各三組供試品溶液，共9組供試品溶液。

另取桑白皮對(duì)照藥材1.5g，與供試品同法制得桑白皮對(duì)照藥材溶液；

再取東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素對(duì)照品適量，加入甲醇制成東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素濃度均為0.1mg/mL的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

取缺桑白皮的樣品處方藥材，與供試品溶液同法制得陰性樣品溶液。

照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2015版四部通則0502項(xiàng))試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(沸點(diǎn)為60～90℃)：乙酸乙酯：乙酸(體積比為6.5:3.5:0.05)的溶液為展開劑，展開，取出晾干，置于紫外光(365nm)下觀察。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，結(jié)果見圖3，圖3中1～3為批號(hào)20140801的供試品溶液；4～6為批號(hào)20140802的供試品溶液；7～9為批號(hào)20140803的供試品溶液；10為桑白皮對(duì)照藥材溶液；11為東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素混合對(duì)照品溶液(Rf_{東莨菪內(nèi)酯}>Rf_{7-羥基香豆素})；12為陰性樣品溶液。

四、含量測(cè)定

1、葛根素含量測(cè)定：

(1.1)儀器與試藥

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀；DAD檢測(cè)器；色譜柱：Phenomenex C₁₈(250×4.6mm，5μm)；KQ3200DB型數(shù)控超聲儀(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)、BS224S分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；研缽、量筒、圓底燒瓶、冷凝管、蒸發(fā)皿等均購(gòu)于廣州市東征化玻儀器有限公司；電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

試藥：乙腈(色譜純)；超純水；甲酸(色譜純)，乙醇、甲醇、葛根素對(duì)照品，樣品(批號(hào)：20140801，20140802，20140803，均由廣州康臣藥物研究有限公司提供)。

(1.2)色譜條件

色譜柱：Phenomenex C₁₈(250×4.6mm，5μm)

流動(dòng)相：乙腈-0.2％甲酸＝13.5:86.5

檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

進(jìn)樣量：10μL

(1.3)樣品制備方法考察

提取溶劑考察：本品(批號(hào)：20140801)適量，粉碎，取粉末約0.125g，平行5份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入體積濃度為70％的乙醇水溶液、體積濃度為70％甲醇水溶液、體積濃度為30％乙醇水溶液、體積濃度為30％甲醇水溶液、水100mL，密塞，稱重，超聲(功率120W，頻率40kHz)處理30min，放冷，再稱重，用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，精密吸取濾液10μL，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，體積濃度為30％乙醇水溶液提取時(shí)葛根素含量最高，故選用體積濃度為30％乙醇水溶液作為提取溶劑，結(jié)果見表1。

表1不同提取溶劑考察結(jié)果

超聲時(shí)間考察：本品(批號(hào)20140801)適量，粉碎，取粉末約0.125g，精密稱定，平行4份，以體積濃度為30％乙醇水溶液為提取溶劑，分別考察超聲時(shí)間為5、10、20、30min，結(jié)果超聲20min時(shí)，葛根素含量最高，故制備供試品溶液采用體積濃度為30％乙醇水溶液超聲時(shí)間提取20min。結(jié)果見表2。

表2超聲時(shí)間考察結(jié)果

(1.4)色譜條件研究

(1.4.1)系統(tǒng)適應(yīng)性研究：

色譜分離：本色譜條件下，葛根素的色譜峰保留時(shí)間約為11min，與其它峰分離良好，分離度大于1.5，對(duì)稱性為0.98，符合標(biāo)準(zhǔn)。

理論塔板數(shù)：按公式n＝5.54(t_R/W_h/2)計(jì)算葛根素峰的理論塔板數(shù)為13744，考慮到不同色譜柱條件：柱長(zhǎng)、載體性能、填充情況、流動(dòng)相、使用時(shí)間等差異，暫定葛根素色譜峰的理論塔板數(shù)不小于4000。

(1.4.2)對(duì)照品及供試品溶液制備：

對(duì)照品溶液1：取葛根素對(duì)照品適量，精密稱定，置100mL量瓶中，加體積濃度為30％的乙醇水溶液溶解定容至刻度(0.169mg/mL)，作為葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液。再取儲(chǔ)備液適量制成每1mL含有42.25μg葛根素對(duì)照品的對(duì)照品溶液1。

對(duì)照品溶液2：取葛根素對(duì)照品適量，精密稱定，置100mL量瓶中，加體積濃度為30％的乙醇水溶液溶解定容至刻度(0.169mg/mL)，作為葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液。再取儲(chǔ)備液適量制成每1mL含有42.25μg葛根素對(duì)照品的對(duì)照品溶液2。

供試品溶液：本品(批號(hào)：20140801)適量，粉碎，取粉末約0.125g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積濃度為30％的乙醇水溶液100mL，密塞，稱重，超聲(功率120W，頻率40kHz)處理20min，放冷，再稱重，用體積濃度為30％的乙醇水溶液補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即可。

陰性樣品溶液：取不含葛根的樣品處方量藥材，按成品制備工藝及供試品溶液制備方法制備。

(1.4.3)波長(zhǎng)選擇：

根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版一部葛根素含量測(cè)定方法，確定葛根素的檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。

(1.4.4)專屬性試驗(yàn)

分別取30％乙醇(體積濃度為30％的乙醇水溶液，溶劑對(duì)照)，對(duì)照品溶液1，供試品溶液以及陰性樣品溶液各10μL，按本發(fā)明色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖4，結(jié)果表明陰性無(wú)干擾。

(1.4.5)色譜柱考察

采用供試品溶液為樣品，比較多個(gè)不同品牌色譜柱，包括Phenomenex、Agilent、Alltima。比較其色譜分離情況，結(jié)果見表3，色譜圖見圖5。結(jié)果表明Phenomenex色譜柱分離效果最好。

表3不同色譜柱分離情況比較

(1.4.6)流動(dòng)相考察

采用供試品溶液為樣品，比較多個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)，色譜圖見圖6。包括以體積比13:87的乙腈-體積濃度為0.2％甲酸水溶液為流動(dòng)相，以體積比為13.5:86.5的乙腈-體積濃度為0.2％甲酸水溶液為流動(dòng)相，以體積比為14:86的乙腈-體積濃度為0.2％甲酸水溶液為流動(dòng)相：最終確定流動(dòng)相為乙腈：體積濃度0.2％甲酸水溶液＝13.5:86.5。

(1.4.7)柱溫考察

采用供試品溶液為樣品，考察柱溫25℃、30℃、35℃對(duì)色譜分離的影響，結(jié)果表明溫度對(duì)分離無(wú)影響，本研究選擇25℃。見圖7。

(1.5)方法學(xué)驗(yàn)證

(1.5.1)線性范圍考察

精密量取葛根素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，倍比稀釋成濃度為169.00、84.500、42.250、21.125、10.563μg/mL的對(duì)照品溶液。分別精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，照(1.2)中所述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y＝231.77X+206.07(R²＝0.9999)?？梢?，進(jìn)樣量在0.10563～1.69000μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。取濃度為10.563μg/mL的對(duì)照品溶液適量，分別稀釋至濃度為26.406、79.219ng/mL的對(duì)照品溶液，各精密吸取10μL，測(cè)定，取峰面積為噪音三倍(S/N＝3)時(shí)的進(jìn)樣量為最低檢測(cè)限(LOD)；取峰面積為噪音十倍(S/N＝10)時(shí)的進(jìn)樣量為最低定量限(LOQ)。結(jié)果見表4、5及圖8。

表4不同濃度的峰面積

表5檢測(cè)限、定量限測(cè)定結(jié)果

(1.5.2)精密度試驗(yàn)

取濃度為42.250μg/mL葛根素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算RSD為0.35％，結(jié)果表明精密度良好。結(jié)果見表6。

表6精密度試驗(yàn)結(jié)果

(1.5.3)穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液，于配制后0、2、4、8、24、48、96h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明96小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，見表7。

表7穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

(1.5.4)重復(fù)性試驗(yàn)

本品(批號(hào)：20140801)適量，粉碎，取粉末約0.125g，精密稱定，平行6份，按本發(fā)明供試品溶液制備方法制備，分別進(jìn)樣2次，測(cè)定葛根素的含量。結(jié)果RSD為0.68％，表明本法重復(fù)性良好，見下表8。

表8重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

(1.5.5)加樣回收試驗(yàn)

取本品(批號(hào)：20140802)粉末約0.06g，分別平行6份，精密稱定；分別精密加入濃度為1.8448mg/mL的葛根素對(duì)照品1mL，揮干，按本發(fā)明供試品制備方法處理，按本發(fā)明色譜條件項(xiàng)下方法進(jìn)樣10μL測(cè)定，每份樣品進(jìn)樣兩針，計(jì)算其回收率及RSD值，結(jié)果見表9。

表9加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

(1.5)中試樣品含量測(cè)定

分別取三批中試樣品(批號(hào)：20140801、20140802、20140803)粉末約0.125g，精密稱定，平行2份，按本發(fā)明供試品制備方法處理，按本發(fā)明色譜條件項(xiàng)下方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果見表10。

表10三批樣品中葛根素含量

結(jié)果三批樣品中葛根素含量均大于20mg/g。

2、黃芪甲苷含量測(cè)定：

(2.1)儀器與試藥

儀器：Agilent1260高效液相色譜儀；蒸發(fā)光檢測(cè)器(ALLTECH，2000ES)；色譜柱：Agilent EXTEND C₁₈(4.6×250mm，5μm)；研缽、量筒、圓底燒瓶、冷凝管、蒸發(fā)皿等均購(gòu)于廣州市東征化玻儀器有限公司；電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；電熱套(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)、BS224S分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

試藥：乙腈(色譜純)；超純水；正丁醇；甲醇；氨水；黃芪甲苷對(duì)照品，樣品(批號(hào)：20140801，20140802，20140803)。

(2.2)色譜條件

色譜柱：Agilent EXTEND C₁₈(4.6×250mm，5μm)

流動(dòng)相：乙腈-水溶液(32:68)

檢測(cè)器參數(shù)：N₂流速為2.8mL/min，溫度為105℃

流速：1mL/min

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：10μL

(2.3)樣品制備方法考察

根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》方法，確定甲醇為提取溶劑，并對(duì)提取方式、提取時(shí)間和萃取次數(shù)進(jìn)行考察。

提取方式考察：本品(批號(hào)：20140801)粉碎，取粉末約2.5g，精密稱定，采用不同提取方式進(jìn)行樣品處理，結(jié)果表明甲醇超聲與索氏提取效果無(wú)明顯差異，考慮到成本、工作效率等方面因素，選擇甲醇超聲提取。結(jié)果見表11。

表11提取方式考察結(jié)果

超聲時(shí)間考察：本品(批號(hào)：20140801)粉碎，取粉末約2.5g，精密稱定，采用不同超聲時(shí)間進(jìn)行樣品處理，結(jié)果表明30min即可提取完全，故選擇30min。結(jié)果見表12。

表12超聲時(shí)間考察結(jié)果

萃取次數(shù)的考察：本品(批號(hào)：20140801)粉碎，取粉末約2.5g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，加甲醇100mL，超聲處理(功率120W，頻率40KHz)30min，放冷，過濾得濾液，蒸干，殘?jiān)?0mL水溶解，采用水飽和正丁醇萃取不同次數(shù)進(jìn)行樣品處理，結(jié)果表明萃取4次與5次無(wú)明顯差異，提取較為充分，故選擇水飽和正丁醇萃取4次。結(jié)果見表13。

表13萃取次數(shù)考察結(jié)果

(2.4)色譜條件研究

(2.4.1)系統(tǒng)適應(yīng)性研究

色譜分離：本色譜條件下，黃芪甲苷的色譜峰的保留時(shí)間約為13min，與其它色譜峰分離良好，分離度大于1.5，對(duì)稱性為0.98，符合標(biāo)準(zhǔn)。

理論塔板數(shù)按公式n＝5.54(t_R/W_h/2)計(jì)算黃芪甲苷峰的理論塔板數(shù)為14294，考慮到不同色譜柱條件(柱長(zhǎng)、載體性能、填充情況、流動(dòng)相比例、使用時(shí)間等)差異，暫定黃芪甲苷峰的理論塔板數(shù)不小于4000。

(2.4.2)對(duì)照品及供試品溶液制備

對(duì)照品溶液1：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成母液1(2.350mg/mL)，將其繼續(xù)稀釋至每1mL含有0.235mg黃芪甲苷對(duì)照品的對(duì)照品溶液1，備用。

對(duì)照品溶液2：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成母液2(2.472mg/mL)，將其繼續(xù)稀釋至每1mL含有0.2472mg黃芪甲苷對(duì)照品的對(duì)照品溶液2，備用。

供試品溶液：本品(批號(hào)：20140801)適量，粉碎，取粉末約2.5g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，加甲醇100mL，超聲處理(功率120W，頻率40KHz)30min，過濾，得濾液，蒸干，殘?jiān)?0mL水溶解，再用水飽和正丁醇萃取4次，每次50mL，合并正丁醇液；再用稀氨水洗滌2次，每次50mL，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，定容至5mL，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得，備用。

陰性樣品溶液：取不含黃芪的樣品處方量藥材，按成品制備工藝及供試品溶液的制備方法制備。

(2.4.3)專屬性試驗(yàn)

分別取甲醇空白溶劑，對(duì)照品溶液1，供試品溶液以及陰性樣品溶液各10μL，按本發(fā)明色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，色譜圖見圖9，結(jié)果表明陰性無(wú)干擾。

(2.4.4)色譜柱考察

參考《中國(guó)藥典》2015年版一部關(guān)于黃芪甲苷含量測(cè)定，其色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。采用供試品溶液為樣品，比較多個(gè)不同品牌色譜柱，包括Phenomenex、Agilent、Alltima。比較其色譜分離情況，結(jié)果見圖10、表14。結(jié)果三個(gè)廠家的色譜柱均能使黃芪甲苷達(dá)到很好的分離效果，本研究選用Agilent色譜柱。

表14不同色譜柱分離情況比較

(2.4.5)流動(dòng)相考察

以《中國(guó)藥典》2015版一部黃芪甲苷含量測(cè)定方法為基礎(chǔ)，采用供試品溶液為樣品，比較多個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)，包括：乙腈-水溶液(體積比為31:69)，乙腈-水溶液(體積比為32:68)以及乙腈-水溶液(體積比為33:67)，色譜圖見圖11。最終確定流動(dòng)相為：乙腈-水溶液(體積比為32:68)。

(2.4.6)柱溫考察

本發(fā)明采用供試品溶液為樣品，分別考察柱溫25℃、30℃、40℃對(duì)黃芪甲苷分離度的影響，見圖12。結(jié)果表明當(dāng)柱溫為30℃時(shí)效果最好，選擇柱溫為30℃。

(2.5)方法學(xué)驗(yàn)證

(2.5.1)線性范圍考察

分別精密量取濃度為2.350mg/mL的對(duì)照儲(chǔ)備液(母液1)適量置于容量瓶中，加甲醇分別稀釋至濃度為0.705mg/mL、0.470mg/mL、0.235mg/mL、0.1175mg/mL、0.05875mg/mL的對(duì)照品溶液，照(2.2)中所述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以濃度與峰面積的對(duì)數(shù)分別為X軸和Y軸的對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸。再取濃度為0.05875mg/mL的對(duì)照品溶液適量，分別稀釋至濃度為29.375，19.583μg/mL的對(duì)照品溶液，取峰面積為噪音三倍(S/N＝3)時(shí)的進(jìn)樣量為最低檢測(cè)限(LOD)；取峰面積為噪音十倍(S/N＝10)時(shí)的進(jìn)樣量為最低定量限(LOQ)。結(jié)果見表15、16，及圖13。

表15不同濃度的峰面積

表16檢測(cè)限、定量限測(cè)定結(jié)果

黃芪甲苷線性方程為：Y＝1.9012x+4.6015(R²＝0.9997)，可見，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.5875～7.0500μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)限(LOD)為0.1959μg；最低定量限(LOQ)為0.2938μg。

(2.5.2)精密度試驗(yàn)

取濃度為0.235mg/mL黃芪甲苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為2.89％。結(jié)果表明精密度良好。結(jié)果見表17。

表17精密度試驗(yàn)結(jié)果

(2.5.3)穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于配制后0、4、8、12、16、24h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表18。

表18穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

(2.5.4)重復(fù)性試驗(yàn)

本品(批號(hào)：20140801)適量，粉碎，取粉末約2.5g，精密稱定，平行6份，按本發(fā)明供試品溶液制備方法制備，測(cè)定黃芪甲苷的含量，RSD為2.21％，結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。見表19。

表19重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

(2.5.5)加樣回收試驗(yàn)

分別取本品(批號(hào)：20140801，黃芪甲苷含量為0.7962mg/g微丸)1.00g，1.25g，1.50g，平行3份，精密稱定；另取黃芪甲苷對(duì)照品15.924mg溶于20mL容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度制得對(duì)照品溶液，精密移取0.8mL、1.0mL、1.2mL加入樣品瓶中，按本發(fā)明供試品制備方法處理，按本發(fā)明色譜條件項(xiàng)下方法進(jìn)樣10μL測(cè)定，制成高中低三種濃度樣品溶液各三份，每份樣品進(jìn)樣兩針，結(jié)果見表20，回收率在98-101％之間，RSD≤3％。

表20加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

(2.6)中試樣品含量測(cè)定

分別取三批中試樣品(批號(hào)：20140801，20140802，20140803)，粉碎，取粉末約2.5g，平行2份，按本發(fā)明供試品制備方法處理，按本發(fā)明色譜條件項(xiàng)下方法分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL，供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量，結(jié)果見表21。

表21三批樣品中黃芪甲苷含量

結(jié)果三批樣品中黃芪甲苷含量均大于0.4mg/g。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。