本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度進(jìn)而推斷死亡時(shí)間的方法。

背景技術(shù)：

鉀離子(K⁺)是人體內(nèi)含量最豐富的陽離子之一，對生物體具有重要的生理功能。為保持機(jī)體的正常酸堿平衡和滲透壓，參與各種蛋白質(zhì)及糖代謝所必需；是維持細(xì)胞新陳代謝、調(diào)節(jié)體液滲透壓、維持酸堿平衡和保持細(xì)胞應(yīng)激功能的重要電解質(zhì)之一。其含量是機(jī)體生理活動(dòng)非常重要的指標(biāo)，同時(shí)血液、尿液中鉀離子的含量水平可用于診斷心臟、腎臟等方面的疾病以及判斷疾病的預(yù)后。

此外，在法醫(yī)鑒定中，由于醫(yī)療事故等時(shí)有發(fā)生；尤其電解質(zhì)紊亂，心肌細(xì)胞機(jī)能與細(xì)胞膜內(nèi)外一些陽離子的濃度有比較直接的關(guān)系，其中以鈣離子和鉀離子濃度的影響最明顯。其中尤以玻璃體液中K⁺含量為法醫(yī)學(xué)研究熱點(diǎn)；在人體死后，玻璃體液內(nèi)K⁺的含量呈規(guī)律性上升，與死亡時(shí)間關(guān)系極為密切，通過測量玻璃體液中K⁺的含量來推斷人體死亡時(shí)間；同時(shí)已證實(shí)玻璃體液中K⁺含量受外界污染、尸體腐敗以及環(huán)境因素影響很小。因此，準(zhǔn)確測量K⁺含量對推斷人體死亡時(shí)間具有非常重要意義。

現(xiàn)有技術(shù)中測定K⁺含量的方法主要有：化學(xué)測定法、同位素質(zhì)譜法、火焰光度法、原子分光光度法、酶法以及離子選擇電極法等。其中常規(guī)檢測方法是離子選擇電極法和火焰光度法。

(1)火焰光度法：該方法利用火焰中激發(fā)態(tài)原子回降至基態(tài)時(shí)發(fā)射的光譜強(qiáng)度進(jìn)行含量分析，是一種發(fā)射光譜分析法，可檢測玻璃體液、尿液、血清、腦脊液中的K⁺含量。常見的定量方法包括內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法，其中外標(biāo)法一般操作誤差較大，并不常用；內(nèi)標(biāo)法將標(biāo)準(zhǔn)液和標(biāo)本中加入相同濃度的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定，通常加入鋰內(nèi)標(biāo)，隨后測定鋰/鉀電流比值，而不是單獨(dú)測量鉀離子的電流，這樣便可減少誤差，提高測量的準(zhǔn)確性。其缺點(diǎn)在于，火焰光度法在檢測過程中，靈敏度受燃?xì)鈮毫Α⒅細(xì)獾膲毫?、?biāo)本進(jìn)樣速度影響，標(biāo)本加入蒸餾水后要充分混勻，否則分析的樣本與實(shí)際值有一定偏差。此外，火焰光度法最大不足在于所使用的是丙烷等燃?xì)?，給實(shí)驗(yàn)室?guī)戆踩[患。

(2)化學(xué)測定法：主要利用離子載體復(fù)環(huán)王冠化合物進(jìn)行測定，由于環(huán)內(nèi)部有大小不一的空腔結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部氧原子電子對可與金屬離子螯合。不同大小的空腔可選擇性結(jié)合不同直徑的金屬離子，從而測量離子濃度。但是陰離子、溶劑、王冠化合物濃度、液膜厚度和溫度等因素對金屬離子在化合物中的遷移速率影響較大，容易導(dǎo)致測量結(jié)果不準(zhǔn)確。

(3)離子選擇電極法：在專用儀器上進(jìn)行尿液、血液、水中鉀離子測定。其原理為：離子選擇性電極是一類化學(xué)傳感器，在一定范圍內(nèi)，其電位與溶液中所給定的離子活度的對數(shù)呈直線關(guān)系，可利用該線性關(guān)系測定液體試樣，溶液的顏色和渾濁度一般不會對測量結(jié)果有影響。該方法又分為直接測定和間接測定法，目前常采用后者測定。由于間接測定法將待測物稀釋后測定，所得離子活度更接近離子濃度。主要采用的電極有：固相電極、液態(tài)膜電極、玻璃膜電極等。但這些電極會隨使用時(shí)間而老化，價(jià)格較貴。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法，目的是通過基于DNA鏈合成的DNA-AgNCs熒光探針測定鉀離子濃度，使得鉀離子測定更簡便、更快速、更準(zhǔn)確。

本發(fā)明提供的銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)制備熒光DNA-AgNCs：首先設(shè)計(jì)含有鉀離子適配體且可裝載AgNCs的DNA鏈，在DNA鏈中加入AgNO₃溶液，振蕩后加入NaHB₄溶液，再次振蕩后放入冰箱3小時(shí)，得棕黃色液體，即熒光DNA-AgNCs；

(2)制備鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制不同濃度鉀鹽溶液，將其加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，反應(yīng)一段時(shí)間后測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度，得到鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)實(shí)際玻璃體液樣本鉀離子濃度檢測：將已知死亡時(shí)間的待測玻璃體液加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，反應(yīng)一段時(shí)間后測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度，根據(jù)制備步驟(2)的鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線得出所測樣本中K⁺濃度；

(4)制備鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)步驟(3)中所測得已知死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度與已知樣本的死亡時(shí)間，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)死亡時(shí)間推斷：測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)步驟(4)的鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

其中，所述的含有鉀離子適配體且可裝載AgNCs的DNA鏈?zhǔn)悄軌蛐纬蒅-四聚體的DNA鏈，選自核苷酸序列表ID NO.1、核苷酸序列表ID NO.2、核苷酸序列表ID NO.3、核苷酸序列表ID NO.4、核苷酸序列表ID NO.5、核苷酸序列表ID NO.6、核苷酸序列表ID NO.7、核苷酸序列表ID NO.8、核苷酸序列表ID NO.9、核苷酸序列表ID NO.10、核苷酸序列表ID NO.11、核苷酸序列表ID NO.12、核苷酸序列表ID NO.13所示DNA序列。。

所述的DNA鏈與AgNO₃、NaHB₄摩爾濃度比為1:2～10:2～10，優(yōu)選1:6:6。

所述熒光AgNCs溶液的pH值為6-7.5。

所述鉀鹽包括氯化鉀、硝酸鉀和溴化鉀及其它含鉀化合物。

所述待測溶液為人或動(dòng)物的玻璃體液、血液、尿液或其他液體。

所述的步驟(2)和步驟(3)的反應(yīng)時(shí)間為0.1～4小時(shí)。

所述利用銀納米簇檢測液體中鉀離子濃度在法醫(yī)鑒定用來準(zhǔn)確推測死亡時(shí)間。

所述方法用于檢測玻璃體液中其他成分，包括ATP、次黃嘌呤、鎂離子。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的特點(diǎn)和有益效果是：

本發(fā)明的銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法的基本原理是基于DNA鏈合成DNA-AgNCs熒光探針測定鉀離子濃度，即利用DNA單體中的N原子與Ag形成較強(qiáng)的配位鍵，通過氨基特異性連接DNA-AgNCs后發(fā)出強(qiáng)熒光，本發(fā)明中是將AgNO₃、NaHB₄按一定比例通過化學(xué)鍵偶聯(lián)于目標(biāo)DNA上，物理降溫后得到熒光DNA-AgNCs，隨后該熒光納米族再次特異性的螯合K⁺使其熒光猝滅，根據(jù)熒光的變化可測定K⁺濃度。將待測鉀離子溶液滴在上述熒光DNA-AgNCs溶液中，檢測其熒光變化，通過與所制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，得出被測體液的鉀離子水平。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

(1)本發(fā)明利用DNA鏈特異性識別并結(jié)合K⁺，形成調(diào)控的G-四聚體構(gòu)象，可不受其他離子的影響，對鉀離子具有極高的特異性。

(2)本發(fā)明使用DNA-AgNCs作為熒光探針，對K⁺調(diào)控的G-四聚體構(gòu)象非常敏感，具有較高的靈敏度。

(3)本發(fā)明設(shè)計(jì)的基于DNA鏈的DNA-AgNCs熒光探針，只需熒光光譜儀，成本較低，可廣泛推廣。

(4)本發(fā)明的用于K⁺檢測的基于DNA鏈的DNA-AgNCs熒光探針制備過程要求的條件易控制，操作簡潔，低能耗，為清潔生產(chǎn)工藝，可進(jìn)行批量生產(chǎn)。

(5)本發(fā)明的用于K⁺檢測的基于DNA鏈的DNA-AgNCs熒光探針，所用試劑均為普通的化學(xué)試劑安全無毒，環(huán)保無污染，能夠廣泛應(yīng)用。

(6)本發(fā)明所用試劑種類較少，簡單操作、快捷且成本低廉；物質(zhì)穩(wěn)定性好，可長時(shí)間儲存，可保證測定效果。

(7)本發(fā)明所提供的鉀離子測定方法不僅可以測定人體、動(dòng)物體內(nèi)血液、尿液、玻璃體液等體液中的K⁺濃度，還可以對水質(zhì)等其他樣品中的鉀離子濃度進(jìn)行測定，應(yīng)用廣泛。

(8)本發(fā)明所提供的測定玻璃體液中鉀離子濃度的方法，可快速、精確地測定鉀離子濃度，首次將熒光技術(shù)運(yùn)用到法醫(yī)鑒定，為法醫(yī)工作者準(zhǔn)確地推斷死者死亡時(shí)間提供方法。

附圖說明

圖1是本發(fā)明制備標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)測量含鉀溶液在630nm處的熒光強(qiáng)度示意圖；

圖2是根據(jù)圖1得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例2中的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例3中的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施案例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。

實(shí)施例1：

本實(shí)施例的銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法按照以下步驟進(jìn)行：

(1)制備熒光DNA-AgNCs：取90μL 50μM的DNA溶液在4℃條件下以12000rpm,取50μL底層液體至離心管，在離心管中加入54μL 500μM的AgNO₃溶液和102μL二次水，在室溫下震蕩30分鐘；隨后，在其中加入54μL 500μM用冰水配制的NaHB₄溶液，震蕩5分鐘后放入4℃冰箱儲存3小時(shí)，得棕黃色液體，即熒光DNA-AgNCs溶液，溶液的pH為7.4，分裝于離心管中，每份滴加30μLDNA-AgNCs溶液，備用；

在本實(shí)例中所用的DNA鏈核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.6所示DNA序列；

(2)制備鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制濃度為0.1、0.4、0.8、1.2、1.8、3.0、5.0、7.5、10.0、20.0mM的硝酸鉀溶液，將其加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，待溶液反應(yīng)一分鐘后，測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度，繪制溶液K⁺濃度與熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)實(shí)際玻璃體液樣本鉀離子濃度檢測：將20μL待測玻璃體液(已知死亡13.2小時(shí)后取得)樣本溶液加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，并加入100μL二次水稀釋，1分鐘后測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度。

(4)制備鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)步驟(3)中所測得已知死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度與已知樣本的死亡時(shí)間，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)死亡時(shí)間推斷：根據(jù)制備步驟(2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出所測樣本中K⁺濃度為8.6mM；步驟(4)的鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷得到所檢測樣本的死亡時(shí)間為13.6小時(shí)，與本實(shí)施例的實(shí)際樣本死亡時(shí)間情況基本相符。再取該玻璃體液樣本溶液用標(biāo)準(zhǔn)的EDTA滴定法進(jìn)行測定，得到K⁺濃度為8.71mM；測量結(jié)果誤差小于2％。測定結(jié)果具有良好的一致性，說明本發(fā)明方法可定量測量不同濃度的K⁺，濃度區(qū)間為0.1～20.0mM。。

實(shí)施例2：

本實(shí)施例的銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法按照以下步驟進(jìn)行：

(1)制備熒光DNA-AgNCs：取100μL 50μM的DNA溶液在4℃條件下以12000rpm,取60μL底層液體至離心管，在離心管中加入108μL 500μM的AgNO₃溶液和204μL二次水，在室溫下震蕩30分鐘；隨后，在其中加入108μL 500μM用冰水配制的NaHB₄溶液，震蕩5分鐘后放入4℃冰箱儲存3小時(shí)，得棕黃色液體，即熒光DNA-AgNCs溶液，溶液的pH為7.4，分裝于離心管中，每份滴加50μL DNA-AgNCs溶液，備用；

在本實(shí)例中所用的DNA鏈核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.6所示DNA序列；

(2)制備鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制濃度為0.1、0.8、2.4、5.0、10.0、18.0、25.0、30.0、40.0mM的硝酸鉀溶液，將20μL硝酸鉀溶液加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中并加入100μL二次水稀釋，待溶液反應(yīng)一分鐘后，測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度，繪制溶液K⁺濃度與熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)實(shí)際玻璃體液樣本鉀離子濃度檢測：將20μL待測玻璃體液(已知死亡19.5小時(shí)后取得)樣本加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，并加入100μL二次水稀釋，1分鐘后測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度。

(4)制備鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)步驟(3)中所測得已知死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度與已知樣本的死亡時(shí)間，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)死亡時(shí)間推斷：根據(jù)制備步驟(2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出所測樣本中K⁺濃度為11.8mM；步驟(4)的鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷得到所檢測樣本的死亡時(shí)間為18.9小時(shí)，與本實(shí)施例的實(shí)際樣本死亡時(shí)間情況相符。再取該玻璃體液樣本用標(biāo)準(zhǔn)的EDTA滴定法進(jìn)行測定，得到K⁺濃度為11.67mM；測量結(jié)果誤差小于1％。測定結(jié)果具有良好的一致性，說明本發(fā)明方法可定量測量不同濃度的K⁺，濃度區(qū)間為0.1～40.0mM。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例的銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法按照以下步驟進(jìn)行：

(1)制備熒光DNA-AgNCs：取100μL 50μM的DNA溶液在4℃條件下以12000rpm,取60μL底層液體至離心管，在離心管中加入108μL 500μM的AgNO₃溶液和204μL二次水，在室溫下震蕩30分鐘；隨后，在其中加入108μL 500μM用冰水配制的NaHB₄溶液，震蕩5分鐘后放入4℃冰箱儲存3小時(shí)，得棕黃色液體，即熒光DNA-AgNCs溶液，溶液的pH為7.4，分裝于離心管中，每份滴加50μL DNA-AgNCs溶液，備用；

在本實(shí)例中所用的DNA鏈核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.6所示DNA序列；

(2)制備鉀離子濃度與熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線：配制濃度為0.1、0.8、2.4、5.0、10.0、18.0、25.0、30.0、40.0mM的硝酸鉀溶液，將20μL硝酸鉀溶液加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中并加入100μL二次水稀釋，待溶液反應(yīng)一分鐘后，測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度，繪制溶液K⁺濃度與熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)實(shí)際玻璃體液樣本鉀離子濃度檢測：將20μL待測玻璃體液(已知死亡6小時(shí)后取得)樣本加入至步驟(1)的熒光DNA-AgNCs溶液中，并加入100μL二次水稀釋，1分鐘后測量其在630nm處的熒光強(qiáng)度。

(4)制備鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)步驟(3)中所測得已知死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度與已知樣本的死亡時(shí)間，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)死亡時(shí)間推斷：根據(jù)制備步驟(2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出所測樣本中K⁺濃度為4.2mM；步驟(4)的鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷得到所檢測樣本的死亡時(shí)間為6.3小時(shí)，與本實(shí)施例的實(shí)際樣本死亡時(shí)間情況相符。再取該玻璃體液樣本用標(biāo)準(zhǔn)的EDTA滴定法進(jìn)行測定，得到K⁺濃度為4.1mM；測量結(jié)果誤差小于1％。測定結(jié)果具有良好的一致性，說明本發(fā)明方法可定量測量不同濃度的K⁺，濃度區(qū)間為0.1～40.0mM。

實(shí)施例4：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例1相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.1所示DNA序列，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

實(shí)施例5：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例2相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.2所示DNA序列，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

實(shí)施例6：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例3相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.8所示DNA序列的DNA鏈，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

實(shí)施例7：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例1相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.9所示DNA序列的DNA鏈，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

實(shí)施例8：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例2相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.5所示的DNA序列，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

實(shí)施例9：

本實(shí)施例的檢測方法與實(shí)施例3相同，僅將實(shí)施例中的DNA鏈換成核苷酸序列為核苷酸序列表ID NO.13所示DNA序列，最終測量結(jié)果同樣可以實(shí)現(xiàn)對K⁺濃度的定量測定，，測定一系列不同死亡時(shí)間的玻璃體液K⁺濃度，繪制線性關(guān)系圖，制得鉀離子濃度與死亡時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知死亡時(shí)間的待測玻璃體液K⁺濃度，根據(jù)鉀離子濃度與死亡時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推斷出所測樣本的死亡時(shí)間。

SEQUENCE LISTING

<110> 中南大學(xué)

艷君, 丁

江, 凌

杏梅, 李

繼峰, 蔡

亞東, 郭

白乙拉, 扎拉嘎

<120> 一種銀納米簇檢測玻璃體液中鉀離子濃度推斷死亡時(shí)間的方法

<130> 1.01

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 32

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 1

cccccccccc ccaaaaaggt tggtgtggtt gg 32

<210> 2

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 2

cccccccccc ccaaccacac caacc 25

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 3

ccaaccacac caaccccccc ccccc 25

<210> 4

<211> 32

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 4

ggttggtgtg gttggaaaaa cccccccccc cc 32

<210> 5

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 5

cccccccccc ccatggttgg tgtggttgg 29

<210> 6

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 6

ggttggtgtg gttggatccc ccccccccc 29

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 7

tttggttggt gtggttggtt t 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 8

gggttagggt tagggttagg g 21

<210> 9

<211> 12

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 9

ggggttttgg gg 12

<210> 10

<211> 15

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 10

ggttggtgtg gttgg 15

<210> 11

<211> 12

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 11

taagggattg gg 12

<210> 12

<211> 12

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列

<400> 12

gggttagggt ta 12

<210> 13

<211> 12

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 人工合成序列，可由6至12個(gè)堿基胞嘧啶C組成

<400> 13

cccccccccc cc 12