本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種食用油中苯并芘的快速檢測方法。

背景技術(shù)：

苯并芘又稱苯并（а）芘，英文縮寫B(tài)aP，是一類具有明顯致癌作用的有機化合物。它是由一個苯環(huán)和一個芘分子結(jié)合而成的多環(huán)芳烴類化合物。經(jīng)檢測，多次使用的高溫植物油、油炸過火的食品都會產(chǎn)生B(a)P，反復(fù)使用高溫煎炸方式，食物中的有機質(zhì)受熱分解，經(jīng)環(huán)化、聚合而形成B(a)P等致癌成分。

植物油中常發(fā)生苯并芘超標的事件，1996年巴西市場上的40種橄欖油樣品均被檢出含有苯并芘，最高含量達164微克/千克。2001年7月《新華每日電訊》報道西班牙的橄欖油中BaP含量超標，主要認為是二次提煉的橄欖油。2006年10月，《消費日報》和《福州日報》報道湖北、安徽等地生產(chǎn)的芝麻油BaP超標。2010年9月以來，國內(nèi)多家山茶油生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品被檢出高致癌物苯并芘超標，引發(fā)業(yè)內(nèi)極度震蕩，造成消費者對山茶油產(chǎn)品缺乏信心，使山茶油市場受到極大的打擊，不利于山茶油產(chǎn)業(yè)的健康快速發(fā)展。按照中國GB2716-2005《食用植物油衛(wèi)生標準》要求，在食用植物油類產(chǎn)品中苯并芘的安全限量為不超過10微克/千克。

常用的檢測苯并芘的方法有薄層層析法，熒光分光光度法，氣相色譜法，氣相色譜-質(zhì)譜法，高效液相色譜紫外法，高效液相色譜熒光法。其中熒光法有靈敏度高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點，是較常用的方法。然而，目前的苯并芘檢測方法中，樣品的前處理方法復(fù)雜，步驟繁瑣，很容易在前處理樣品過程中由于操作不慎吸入或皮膚接觸到苯并芘，這給實驗人員的安全帶來了極大的威脅。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便而安全、低成本、結(jié)果準確的食用油中苯并芘的快速檢測方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種食用油中苯并芘的快速檢測方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：準確稱取食用油樣品適量于具塞錐形瓶中，加入相當于食用油樣品16～18倍量的有機溶劑，加塞后振搖；超聲提取15～22min，離心后收集上清液；殘留食用油樣品中再加入相當于殘留食用油樣品8～12倍量的有機溶劑，超聲提取12～18min，離心，合并上清液；取有機溶劑加入固相萃取柱進行活化，活化完成后將合并的上清液轉(zhuǎn)移到活化后的固相萃取柱中，用有機溶劑洗脫，收集洗脫液至量瓶，定容，過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（2）標準品溶液的制備：配制濃度為1μg/kg、2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg的苯并芘標準系列溶液，定容溶液為有機溶劑，搖勻后過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（3）檢測：依次將苯并芘標準系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測條件為：ODS柱；柱溫：30℃；梯度洗脫與流動相的對應(yīng)關(guān)系：0～3min，乙腈5～10%、甲酸10～15%、水75～85%；3→10min，乙腈15～25%、甲酸20～25%、水50～65%；10→13min，乙腈35～50%、甲酸15～20%、水30～50%；13→20min，乙腈70～80%、甲酸10～15%、水5～20%；熒光檢測器：激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長420nm。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的有機溶劑為氯仿、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、石油醚和環(huán)己烷中的任一種。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，超聲提取工藝參數(shù)為：超聲波頻率為35～40kHz、超聲波功率為400～450W；超聲提取時需用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，食用油樣品的超聲提取工藝參數(shù)為：超聲波頻率為40kHz、超聲波功率為400W，時間為20min；殘留食用油樣品的超聲提取工藝參數(shù)為：超聲波頻率為35kHz、超聲波功率為450W，時間為15min。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，離心速率為12000～18000r/min，時間為5～10min。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，離心速率為15000r/min，時間為8min。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，固相萃取柱的活性完成標準為：取有機溶劑加入固相萃取柱進行活化，至有機溶劑自然下滴18～22ml，活化完成。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（1）中，固相萃取柱的活性完成標準為：取有機溶劑加入固相萃取柱進行活化，至有機溶劑自然下滴20ml，活化完成。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的步驟（3）中，梯度洗脫與流動相的對應(yīng)關(guān)系：0～3min，乙腈8%、甲酸12%、水80%；3→10min，乙腈20%、甲酸22%、水58%；10→13min，乙腈42%、甲酸18%、水40%；13→20min，乙腈75%、甲酸12%、水13%。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明首先采用兩次超聲提取，再用固相萃取柱富集純化食用油樣品中的苯并芘，該法操作簡便，步驟簡單，減少了人為誤操作導致吸入或皮膚接觸到苯并芘的幾率，大大提高了實驗人員工作的安全性，并且該法中的苯并芘提取完全，并得到了一定的純化效果，使進入高效液相色譜檢測時無雜質(zhì)峰干擾，檢測結(jié)果準確，真實可靠。本發(fā)明使用梯度洗脫的方式洗脫苯并芘，該法洗脫時間短，并能保證苯并芘洗脫完全，節(jié)約時間和流動相，使檢測成本低。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

本發(fā)明實施例中，一種食用油中苯并芘的快速檢測方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：準確稱取食用油樣品適量于具塞錐形瓶中，加入相當于食用油樣品16倍量的石油醚，加塞后振搖；用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為35kHz、超聲波功率為400W，時間為22min，12000r/min離心10min，收集上清液；殘留食用油樣品中再加入相當于殘留食用油樣品12倍量的石油醚，用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為35kHz、超聲波功率為400W，時間為18min，12000r/min離心10min，合并上清液；取石油醚加入固相萃取柱進行活化，至石油醚自然下滴18ml，活化完成后將合并的上清液轉(zhuǎn)移到活化后的固相萃取柱中，用石油醚洗脫，收集洗脫液至量瓶，定容，過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（2）標準品溶液的制備：配制濃度為1μg/kg、2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg的苯并芘標準系列溶液，定容溶液為石油醚，搖勻后過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（3）檢測：依次將苯并芘標準系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測條件為：ODS柱；柱溫：30℃；梯度洗脫與流動相的對應(yīng)關(guān)系：0～3min，乙腈5%、甲酸10%、水85%；3→10min，乙腈15%、甲酸20%、水65%；10→13min，乙腈35%、甲酸15%、水50%；13→20min，乙腈70%、甲酸10%、水20%；熒光檢測器：激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長420nm。

實施例2

本發(fā)明實施例中，一種食用油中苯并芘的快速檢測方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：準確稱取食用油樣品適量于具塞錐形瓶中，加入相當于食用油樣品18倍量的二甲苯，加塞后振搖；用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為40kHz、超聲波功率為450W，時間為15min，18000r/min離心5min，收集上清液；殘留食用油樣品中再加入相當于殘留食用油樣品8倍量的二甲苯，用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為40kHz、超聲波功率為450W，時間為12min，18000r/min離心5min，合并上清液；取二甲苯加入固相萃取柱進行活化，至二甲苯自然下滴22ml，活化完成后將合并的上清液轉(zhuǎn)移到活化后的固相萃取柱中，用二甲苯洗脫，收集洗脫液至量瓶，定容，過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（2）標準品溶液的制備：配制濃度為1μg/kg、2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg的苯并芘標準系列溶液，定容溶液為二甲苯，搖勻后過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（3）檢測：依次將苯并芘標準系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測條件為：ODS柱；柱溫：30℃；梯度洗脫與流動相的對應(yīng)關(guān)系：0～3min，乙腈10%、甲酸15%、水75%；3→10min，乙腈25%、甲酸25%、水50%；10→13min，乙腈50%、甲酸20%、水30%；13→20min，乙腈80%、甲酸15%、水5%；熒光檢測器：激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長420nm。

實施例3

本發(fā)明實施例中，一種食用油中苯并芘的快速檢測方法，包括以下步驟：

（1）供試品溶液的制備：準確稱取食用油樣品適量于具塞錐形瓶中，加入相當于食用油樣品17倍量的氯仿，加塞后振搖；用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為40kHz、超聲波功率為400W，時間為20min，15000r/min離心8min，收集上清液；殘留食用油樣品中再加入相當于殘留食用油樣品10倍量的氯仿，用封口膜將具塞錐形瓶的瓶口封住后，超聲提取，超聲波頻率為35kHz、超聲波功率為450W，時間為15min，15000r/min離心8min，合并上清液；取氯仿加入固相萃取柱進行活化，至氯仿自然下滴20ml，活化完成后將合并的上清液轉(zhuǎn)移到活化后的固相萃取柱中，用氯仿洗脫，收集洗脫液至量瓶，定容，過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（2）標準品溶液的制備：配制濃度為1μg/kg、2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg的苯并芘標準系列溶液，定容溶液為氯仿，搖勻后過0.22μm微孔濾膜至進樣瓶，備用；

（3）檢測：依次將苯并芘標準系列溶液和供試品溶液注入HPLC，HPLC檢測條件為：ODS柱；柱溫：30℃；梯度洗脫與流動相的對應(yīng)關(guān)系：0～3min，乙腈8%、甲酸12%、水80%；3→10min，乙腈20%、甲酸22%、水58%；10→13min，乙腈42%、甲酸18%、水40%；13→20min，乙腈75%、甲酸12%、水13%；熒光檢測器：激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長420nm。

本發(fā)明首先采用兩次超聲提取，再用固相萃取柱富集純化食用油樣品中的苯并芘，該法操作簡便，步驟簡單，減少了人為誤操作導致吸入或皮膚接觸到苯并芘的幾率，大大提高了實驗人員工作的安全性，并且該法中的苯并芘提取完全，并得到了一定的純化效果，使進入高效液相色譜檢測時無雜質(zhì)峰干擾，檢測結(jié)果準確，真實可靠。本發(fā)明使用梯度洗脫的方式洗脫苯并芘，該法洗脫時間短，并能保證苯并芘洗脫完全，節(jié)約時間和流動相，使檢測成本低。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。