1.一種用于凝血酶檢測的紙基適體熒光傳感器的構(gòu)建,其特征是包括以下步驟:
1.1在計算機(jī)上設(shè)計如附圖1所示的紙芯片疏水蠟打印圖案;
1.2將步驟1.1中設(shè)計的打印圖案通過蠟打印機(jī)打印在已裁剪為A4大小的色譜紙上,然后將帶有蠟圖案的A4色譜紙通過加熱到125oC的平板加熱器加熱2 min,使蠟融化并浸透整個紙的厚度,形成疏水墻;
1.3將步驟1.2中得到的色譜紙的工作區(qū)域進(jìn)行功能化,生長AuPt雙金屬后進(jìn)行適配體1的修飾,滴加50μL待檢測的凝血酶,反應(yīng)45 min后用磷酸緩沖溶液清洗,然后用牛血清白蛋白封鎖非活性位點(diǎn);
1.4在步驟1.2中得到的色譜紙的孵化區(qū)域滴40μL合成好的QDs@ZnO熒光標(biāo)記物和 60μL的1 μM適配體2,進(jìn)行熒光標(biāo)記物和適配體2的反應(yīng);
1.5將紙芯片沿著折疊線折疊,連有適配體2的熒光標(biāo)記物QDS@ZnO到達(dá)含有目標(biāo)物的工作區(qū)域,反應(yīng)30 min后用磷酸緩沖溶液洗滌;
1.6將步驟1.5中紙芯片工作區(qū)放入熒光設(shè)備中,在340 nm的激發(fā)波長下進(jìn)行熒光測定,繪制熒光強(qiáng)度與凝血酶的濃度關(guān)系,實(shí)現(xiàn)對凝血酶的精確檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求書1所述用于凝血酶檢測的紙基適體熒光傳感器的構(gòu)建,其特征在于,在步驟1.3中所述對色譜紙的工作區(qū)域進(jìn)行功能化地具體步驟為:用移液槍量取100 μL 金納米粒子滴于親水的工作區(qū)域,然后在室溫下自然干燥,重復(fù)5次,二次水洗滌,室溫下干燥靜置;將1.0 mL 1wt% 氯金酸水溶液和2.5 mL 1% 氯鉑酸溶液快速混勻,移液槍量取60 μL混合液滴加到工作區(qū)域,然后用移液槍迅速量取40 μL新鮮配制的1wt%檸檬酸鈉水溶液滴到工作區(qū)域,反應(yīng)30 min后用二次水沖洗,然后用移液槍量取100μL 1 μM 適配體1滴于工作區(qū)域孵化1 h, 用pH為 7.4 磷酸緩沖溶液清洗三次后用1%的牛血清白蛋白溶液封鎖非活性位點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求書1所述用于凝血酶檢測的紙基適體熒光傳感器的構(gòu)建,其特征在于,在步驟1.4中所述的QDs@ZnO的制備步驟為:稱取0.3 g 炭黑溶于60 mL 6 M硝酸中,超聲2 h后在120 °C條件下回流24 h,將上述溶液降到室溫后離心并干燥,然后將產(chǎn)物溶于二次水后透析三天,得到石墨烯量子點(diǎn);稱取3.5 g可溶性淀粉溶于80 mL 沸水中,在85 oC下攪拌5 min后加入6 mmol 六水合硝酸鋅,通過逐滴加入氫氧化鈉將溶液pH調(diào)至8-9后繼續(xù)加熱30 min,然后將獲得的沉淀離心、洗滌并在500 oC下焙燒2 h獲得多孔氧化鋅,稱取0.6 g獲得的多孔氧化鋅溶于0.1 mM 的對巰基苯胺溶液中攪拌4 h;移液槍量取500μL合成好的量子點(diǎn)與2 mL 功能化的氧化鋅混合后在10 mg·mL-1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和20 mg·mL-1的 N-羥基丁二酰亞胺作用下反應(yīng)30 min,離心,洗滌后溶于3 mL磷酸緩沖溶液中。