本發(fā)明屬于藥物分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

5-HT3受體拮抗劑應(yīng)用于治療化療導(dǎo)致的惡心和嘔吐，其機(jī)制是化療實(shí)際可導(dǎo)致大量來(lái)自腸粘膜腸嗜鉻細(xì)胞釋放5-HT，從而特異性的刺激迷走傳入神經(jīng)上的5-HT3受體，使迷走神經(jīng)傳入沖動(dòng)增多，同時(shí)在化療藥物的作用下，伴有局部腦最后區(qū)的5-HT神經(jīng)元釋放5-HT，再刺激化學(xué)感受器觸發(fā)區(qū)的5-HT3受體產(chǎn)生沖動(dòng)，觸發(fā)催吐反射。由于5-HT3受體拮抗劑的結(jié)構(gòu)與5-HT極其相似，可與5-HT競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合5-HT3受體，阻止5-HT引起的嘔吐反射沖動(dòng)的傳導(dǎo)。因此，5-HT3受體拮抗劑通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)受體有效的阻止外周和中樞的5-HT3受體來(lái)抑制或減少惡心和嘔吐反射的發(fā)生。同時(shí)5-HT3受體拮抗劑一類藥物自身高效，耐受性良好，無(wú)椎體外系副作用等優(yōu)點(diǎn)。

甲磺酸多拉司瓊是一種5-HT3受體拮抗劑，強(qiáng)效且具有高度選擇性，對(duì)其他的5-HT受體，a或β腎上腺素能受體，多巴胺受體等均無(wú)明顯作用。耐受性好，LD50值高，安全性好，更加保證其在臨床應(yīng)用中具有廣闊的市場(chǎng)前景。

但是，據(jù)FDA報(bào)道：甲磺酸多拉司瓊注射液(Dolasetron Mesylate Injection)具有明顯的心臟節(jié)律的副作用，而其片劑具有良好的安全性。在樣品檢測(cè)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)注射劑中存在主成分與甘露醇產(chǎn)生的特定雜質(zhì)。USP36中僅僅收錄了多拉司瓊原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法，而該USP方法無(wú)法對(duì)該特定雜質(zhì)進(jìn)行有效檢測(cè)。楊秀麗等在《國(guó)產(chǎn)甲磺酸多拉司瓊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定及其穩(wěn)定性的初步研究》(藥物分析雜志，2008,28(1))中將USP方法略作改進(jìn)，仍然保留均含有乙腈的雙流動(dòng)相，對(duì)甲磺酸多拉司瓊注射液進(jìn)行高溫、高濕、酸、堿破壞后進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)椴⑽礄z測(cè)出特殊雜質(zhì)，因而認(rèn)為高溫對(duì)甲磺酸多拉司瓊注射液并無(wú)影響。專利CN201110295660.3也提供了類似的檢測(cè)方法，對(duì)各處方下的注射液進(jìn)行檢測(cè)，但仍未能檢測(cè)到新的特有雜質(zhì)，并認(rèn)為多羥基物質(zhì)如甘露醇等的增加可以增強(qiáng)甲磺酸多拉司瓊注射液的穩(wěn)定性。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用現(xiàn)有方法并不能很好的將甲磺酸多拉司瓊注射液中的一些特殊有關(guān)雜質(zhì)分離和檢測(cè)出來(lái)，因而影響對(duì)雜質(zhì)的判斷和控制。

因此本發(fā)明能夠彌補(bǔ)甲磺酸多拉司瓊注射液在實(shí)際生產(chǎn)和儲(chǔ)藏過(guò)程中產(chǎn)生的特定雜質(zhì)進(jìn)行很好的檢測(cè)分析，從而保證甲磺酸多拉司瓊注射液產(chǎn)品的質(zhì)量和患者的安全用藥。所以本發(fā)明對(duì)甲磺酸多拉司瓊注射液的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)和控制非常具有實(shí)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于在生產(chǎn)和儲(chǔ)存過(guò)程中，甲磺酸多拉司瓊注射液可能產(chǎn)生具有心臟節(jié)律副作用的特殊有關(guān)雜質(zhì)，而現(xiàn)有方法，包括USP(美國(guó)藥典)方法均不能提供有效的分離和檢測(cè)該有關(guān)雜質(zhì)的方法，本發(fā)明的目的在于提供一種甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，能有效檢測(cè)甲磺酸多拉司瓊注射液特殊有關(guān)物質(zhì)，從而保證藥物的安全性、質(zhì)量可控性。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，該方法為高效液相色譜法，其特征在于，色譜條件為：以硅膠表面鍵合C8官能團(tuán)的填充劑為色譜柱固定相；以pH為6.5～7.5的緩沖液-乙腈為流動(dòng)相A，緩沖液和乙腈的體積比為(900～1100):(50～56)，以甲醇為流動(dòng)相B，按照下表進(jìn)行梯度洗脫：

根據(jù)本發(fā)明的一些具體實(shí)施例，所述梯度洗脫按照下表進(jìn)行：

所述硅膠表面鍵合C8官能團(tuán)的填充劑為色譜柱固定相，優(yōu)選的色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)。

作為優(yōu)選，緩沖液和乙腈的體積比為(900～1100):(50～56)，更優(yōu)選為1000:53。

作為優(yōu)選，所述緩沖液pH為6.8～7.0。

根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或乙酸鹽緩沖液。

所述磷酸鹽優(yōu)選為磷酸二氫鈉或磷酸氫二銨，在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，以0.01mol/L的磷酸二氫鈉溶液用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH至6.5～7.5，更優(yōu)的調(diào)pH至6.8～7.0，緩沖液和乙腈的體積比為1000:53。

根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，流動(dòng)相流速為1.0ml/min～2.0ml/min，優(yōu)選為1.5ml/min；其中色譜柱的柱溫為20～30℃，優(yōu)選為25℃；采用的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm～220nm，優(yōu)選為210nm。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，具體步驟如下

a).取甲磺酸多拉司瓊注射液用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg的樣品溶液；

b).取甲磺酸多拉司瓊注射液150℃破壞5小時(shí)后用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg高溫降解溶液；

c).取a)、b)的溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)主要是雜質(zhì)，本發(fā)明采用高效液相色譜法用C8柱對(duì)其進(jìn)行分離，采用不同于現(xiàn)有方法和USP方法的流動(dòng)相以及洗脫程序，實(shí)現(xiàn)了雜質(zhì)的有效分離。并通過(guò)高溫加速甲磺酸多拉司瓊注射液降解增加降解雜質(zhì)，來(lái)考察本發(fā)明方法的專屬性。

本發(fā)明的高溫加速試驗(yàn)將甲磺酸多拉司瓊注射液在150℃破壞5小時(shí)，用本發(fā)明的檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)其有關(guān)雜質(zhì)明顯增加，而且本發(fā)明的方法在樣品溶液和加速降解溶液中都有效的分離和檢測(cè)出現(xiàn)有方法不能分離的雜質(zhì)(參見(jiàn)附圖1-7中的雜質(zhì)1-6)，可見(jiàn)甲磺酸多拉司瓊注射液并不是對(duì)熱穩(wěn)定的，加速試驗(yàn)的條件和檢測(cè)手段對(duì)檢測(cè)結(jié)果有重要影響。由于現(xiàn)有方法的局限性，并不能有效分離和檢測(cè)出甲磺酸多拉司瓊注射液中雜質(zhì)1-6，因此不能對(duì)所述雜質(zhì)進(jìn)行研究和有效控制，也影響藥品儲(chǔ)存的指導(dǎo)的正確性。

通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)，本發(fā)明的方法檢測(cè)出采用現(xiàn)有技術(shù)方法不能有效分離和檢測(cè)到的雜質(zhì)，這對(duì)確定影響甲磺酸多拉司瓊注射液質(zhì)量的因素，從而調(diào)整甲磺酸多拉司瓊注射液的生產(chǎn)工藝和儲(chǔ)藏條件，減少最終產(chǎn)品中雜質(zhì)含量，保證產(chǎn)品質(zhì)量和患者用藥安全具有十分重要的意義。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖2為實(shí)施例1甲磺酸多拉司瓊注射液高溫降解有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖3為對(duì)比試驗(yàn)1下甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖4為對(duì)比試驗(yàn)1下甲磺酸多拉司瓊注射液高溫降解有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖5為對(duì)比試驗(yàn)2下甲磺酸多拉司瓊注射液高溫降解有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖6為對(duì)比試驗(yàn)3下甲磺酸多拉司瓊注射液高溫降解有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖；

圖7為對(duì)比試驗(yàn)4下甲磺酸多拉司瓊注射液高溫降解有關(guān)物質(zhì)的HPLC圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清晰明白，下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本方面進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1

檢測(cè)儀器與色譜條件

檢測(cè)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀

色譜條件：色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色譜柱柱溫為25℃，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為210nm；流動(dòng)相流速為1.5ml/min；以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸二氫鈉溶液用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：

實(shí)驗(yàn)步驟

取甲磺酸多拉司瓊注射液用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg的樣品溶液；取甲磺酸多拉司瓊注射液于150℃破壞5小時(shí)后用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg高溫降解樣品溶液。

取樣品溶液和高溫降解樣品溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；圖1為樣品溶液的HPLC圖，圖2為高溫降解樣品的HPLC圖。

從檢測(cè)結(jié)果可看出，本發(fā)明方法對(duì)甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)均能有效分離，通過(guò)高溫降解使降解雜質(zhì)增大后，仍能實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)的有效分離，方法專屬性好。

對(duì)比試驗(yàn)1(甲磺酸多拉司瓊USP標(biāo)準(zhǔn)條件)

檢測(cè)儀器與色譜條件

檢測(cè)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀

色譜條件：色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色譜柱柱溫為25℃，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為210nm；流動(dòng)相流速為1.5ml/min；以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸氫二銨溶液用2mol/L的磷酸調(diào)pH置7.0)-乙腈(1000:53)為流動(dòng)相A，以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸氫二銨溶液用2mol/L的磷酸調(diào)pH置7.0)-乙腈(295:795)為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：

實(shí)驗(yàn)步驟：取甲磺酸多拉司瓊注射液于150℃破壞5小時(shí)后用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg高溫降解樣品溶液；另取甲磺酸多拉司瓊注射液用20％乙腈稀釋制成每1ml中約甲磺酸多拉司瓊6.25mg的樣品溶液。

取高溫降解樣品溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；圖3為此條件下的樣品HPLC圖，圖4為此條件下的高溫降解樣品HPLC圖。

從檢測(cè)結(jié)果可看出，主峰前后的雜質(zhì)均未實(shí)現(xiàn)有效分離，不能達(dá)到分離要求，USP標(biāo)準(zhǔn)中原料所用色譜條件是不能實(shí)現(xiàn)注射液有關(guān)物質(zhì)的分離的。

對(duì)比試驗(yàn)2

檢測(cè)儀器與色譜條件

檢測(cè)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀

色譜條件：色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色譜柱柱溫為25℃，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為210nm；流動(dòng)相流速為1.5ml/min；以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸二氫鈉溶液用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：

實(shí)驗(yàn)步驟：按對(duì)比實(shí)驗(yàn)1方法配制系統(tǒng)溶液。

取高溫降解樣品溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；圖5為此條件下的高溫降解樣品HPLC圖。

從檢測(cè)結(jié)果可看出，主峰后的雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)基線分離，但主峰前的雜質(zhì)均未實(shí)現(xiàn)有效分離，不能達(dá)到分離要求。

對(duì)比試驗(yàn)3

檢測(cè)儀器與色譜條件

檢測(cè)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀

色譜條件：色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色譜柱柱溫為25℃，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為210nm；流動(dòng)相流速為1.5ml/min；以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸二氫鈉溶液用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：

時(shí)間(min) A(％) B(％)

0 75 25

90 10 95

實(shí)驗(yàn)步驟：按對(duì)比實(shí)驗(yàn)1方法配制系統(tǒng)溶液。

取高溫降解樣品溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；圖6為此條件下的高溫降解樣品HPLC圖。

從檢測(cè)結(jié)果可看出，主峰前的雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)基線分離，但主峰后的雜質(zhì)均未實(shí)現(xiàn)有效分離，不能達(dá)到分離要求。

對(duì)比試驗(yàn)4

檢測(cè)儀器與色譜條件

檢測(cè)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀

色譜條件：色譜柱為ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色譜柱柱溫為25℃，采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為210nm；流動(dòng)相流速為1.5ml/min；以磷酸緩沖鹽(0.01mol/L的磷酸二氫鈉溶液用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，洗脫梯度為：

實(shí)驗(yàn)步驟：按對(duì)比實(shí)驗(yàn)1方法配制系統(tǒng)溶液。

取高溫降解樣品溶液100μl，注入液相色譜儀，按所述的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，完成有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定；圖7為此條件下的高溫降解樣品HPLC圖。

從檢測(cè)結(jié)果可看出，主峰后的雜質(zhì)基本實(shí)現(xiàn)基線分離但主峰前的雜質(zhì)任有兩個(gè)未實(shí)現(xiàn)有效分離，不能達(dá)到分離要求。

通過(guò)對(duì)比研究可見(jiàn)，本發(fā)明的檢測(cè)方法專屬性良好，能達(dá)到檢測(cè)要求，在檢測(cè)濃度下能有效的對(duì)甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。所以本發(fā)明用于甲磺酸多拉司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)是一行之有效的方法。

同時(shí)，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，仍可做出若干改進(jìn)和潤(rùn)色，這些改進(jìn)和潤(rùn)色也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。