本發(fā)明涉及到化學
技術領域：
，尤其涉及一種測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法。
背景技術：
：目前蔬菜和水果中矮壯素、氯吡脲、赤霉素、脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺17種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中日益增長，使用后對人體健康存在極大風險，然而。在我國未出現(xiàn)對蔬菜和水果中矮壯素、氯吡脲、赤霉素、脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸、2-萘氧乙酸、3-吲哚丙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、3-吲哚乙酸、4-氟苯氧乙酸、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺17種植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量的測定?，F(xiàn)有國標中未見專門針對蔬菜水果中多種植物生長調(diào)節(jié)劑同時檢測的方法，而且單一成分檢測多為液相分析法，檢出限較高，很多無參考檢測方法。文獻對植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量未見報道。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，旨在解決現(xiàn)有技術測定不準確、不精確的問題，該方法簡便、穩(wěn)定，完全滿足國內(nèi)外有關法規(guī)對蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的要求，可為蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的監(jiān)管提供技術支持。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，所述測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法的計算公式為：被測植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分數(shù)計，單位以微克每千克表示，按公式計算：式中：X——樣品中植物生長調(diào)節(jié)劑含量，單位為微克每千克；C——從標準曲線上得到的被測組分溶液質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升；V——樣品提取液體積，單位為毫升；m——試樣的質(zhì)量，單位為克。進一步，所述標準曲線的繪制方法包括：分別吸取混合標準溶液，用空白基質(zhì)溶液配制標準系列溶液；矮壯素、氯吡脲、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL；脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、4-氟苯氧乙酸濃度為5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL；赤霉素濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL；3-吲哚丁酸、3-吲哚丙酸、3-吲哚乙酸濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS分析，采用外標法建立標準曲線；以濃度為橫坐標(x，ng/mL)，定量離子對峰面積為縱坐標(y)，進行線性回歸計算，所得相關系數(shù)均大于0.99。進一步，所述樣品的處理及測定包括：稱取試樣10g于50mL離心管中，加入10mL含1％V/V乙酸的乙腈溶液，渦旋2min后，超聲10min，加入脫水試劑，4g無水硫酸鎂和1g氯化鈉，渦旋振蕩1min，以10000r/min離心3min，取2.0mL上清液于，加入100mgC18和100mg無水硫酸鎂，渦旋混勻1min后于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾后，上機測定。本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法測定的蔬菜。本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法測定的水果。本發(fā)明的測定方法采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，方法簡便、快速、準確、可靠，檢測限、回收率和精密度均符合要求；本發(fā)明線性范圍和檢測下限能夠滿足產(chǎn)品檢測的要求，準確度和精密度符合檢測方法要求。以濃度為橫坐標(x，ng/mL)，定量離子對峰面積為縱坐標(y)，進行線性回歸計算，所得相關系數(shù)均大于0.99，線性良好。以3倍信噪比估算檢出限(LOD)，以10倍信噪比對應濃度作為定量限(LOQ)，17種植物生長調(diào)節(jié)劑的檢出限在0.09—15.7μg/kg之間，較文獻低(2,4一二氯苯氧乙酸(3.5μg/kg),氯吡脲(5.0μg/kg)。對含糖量不同的紅棗樣品，進行添加回收和精密度實驗。3個添加水平的回收率為76.6％—119.0％，相對標準偏差(RSD)均不大于9.1％本發(fā)明首次開發(fā)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法，填補了技術空白；本發(fā)明用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術，能夠?qū)崿F(xiàn)對果蔬中17種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時檢測，減少分析時間，降低檢測成本，本標準中針對水果蔬菜中廣泛使用的17種植物生長調(diào)節(jié)劑的殘留檢測問題進行研究，解決了目前缺乏專門針對植物生長調(diào)節(jié)劑多殘留檢測標準的問題。為農(nóng)產(chǎn)品中植物生長調(diào)節(jié)劑殘留篩查和控制提供重要的手段，有助于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平的提高提供了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法的最優(yōu)條件。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例提供的測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法流程圖。具體實施方式為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的應用原理作詳細的描述。如圖1所示，本發(fā)明實施例提供的測定蔬菜和水果中生長調(diào)節(jié)劑殘留量的方法包括以下步驟：S101：對樣品去除雜質(zhì)、粉碎、密封、貯存處理；S102：標準工作液和樣品溶液在設定的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件下測定；S103：除不加試樣外，均按上述步驟1)、步驟2)操作進行空白試驗；S104：按照公式計算試樣中被測植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分數(shù)計；S105：相對離子豐度與濃度接近的對照品相對離子豐度進行比較，若偏差不超過規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。下面結(jié)合實驗對本發(fā)明的應用原理作進一步的描述。(1)樣品處理稱取試樣10g(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入10mL含1％(V/V)乙酸的乙腈溶液，渦旋2min后，超聲10min，加入脫水試劑(4g無水硫酸鎂和1g氯化鈉)，渦旋振蕩1min，以10000r/min離心3min，取2.0mL上清液于，加入100mgC18和100mg無水硫酸鎂，渦旋混勻1min后于10000r/min速率下離心5min，所得上清液經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾后，上機測定。蔬菜、水果樣品，去除雜質(zhì)，取可食部分切碎，用粉碎機粉碎混勻，密封，標明標記。將試樣于－20℃貯存?zhèn)溆谩?2)測定標準工作液和樣品溶液在以下設定的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件下進樣：色譜條件色譜柱：AcquityUPLCBEHC18柱，100mm×2.1mm(內(nèi)徑)，粒徑1.7μm或相當者；流動相：A相:乙腈；B相：5mM乙酸銨溶液(0.1％甲酸)；柱溫：30℃；進樣量：5μL；洗脫程序見表。洗脫程序時間min流速mL/minA相％B相％00.259520.2595120.27030140.2595180.2595質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源；電離方式：正負離子電離ESI±；監(jiān)測模式：多離子反應監(jiān)測MRM；毛細管電壓：2.8kV(+)；2.8kV(-)；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：350℃；脫溶劑氣流量：1000L/H；錐孔氣流量：50L/H；質(zhì)譜采集參數(shù)見表。質(zhì)譜采集參數(shù)*為定量離子。測定方式：LC-MS/MS分析，根據(jù)保留時間定性，外標峰面積法定量；定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差：相對離子豐度＞50％，允許的相對偏差±20％相對離子豐度＞20％～50％，允許的相對偏差±25％相對離子豐度＞10％～20％，允許的相對偏差±30％相對離子豐度≤10％，允許的相對偏差±50％；定性每種被測組分選擇1個母離子，2個子離子，在儀器最佳工作條件下，以保留時間和離子比率相結(jié)合進行定性。樣品圖譜中各組分定性離子的相對離子豐度與濃度接近的對照品工作液中對應的定性離子的相對離子豐度進行比較，若偏差不超過規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。相對離子豐度偏差范圍見表。相對離子豐度偏差范圍相對豐度％允許偏差％＞50±2020～50±2510～20±30≤10±50檢出限本標準檢出限見表。17種植物生長調(diào)節(jié)劑的檢出限化合物檢出限(μg/kg)矮壯素0.27縮節(jié)胺0.39噻苯隆0.346-芐基嘌呤0.09烯效唑0.11多效唑0.134-氟苯氧乙酸2.943-吲哚乙酸15.73-吲哚丙酸10.63-吲哚丁酸14.41-萘乙酸3.104-氯苯氧乙酸3.012,4-二氯苯氧乙酸1.32氯吡脲0.18脫落酸1.82赤霉素5.432-萘氧乙酸1.52(3)空白試驗除不加試樣外，均按上述步驟1)、步驟2)操作步驟進行；(4)結(jié)果計算和表述用色譜數(shù)據(jù)處理機或按以下公式計算試樣中被測植物生長調(diào)節(jié)劑殘留量以質(zhì)量分數(shù)計，單位以微克每千克(μg/kg)表示，按公式(1)計算。式中：X——樣品中植物生長調(diào)節(jié)劑含量，單位為微克每千克(μg/kg)；C——從標準曲線上得到的被測組分溶液質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V——樣品提取液體積，單位為毫升(mL)；m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。(5)判斷分別吸取混合標準溶液適量，用空白基質(zhì)溶液配制標準系列溶液。矮壯素、氯吡脲、多效唑、烯效唑、6-芐基嘌呤、噻苯隆、縮節(jié)胺濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL；脫落酸、2,4-二氯苯氧乙酸、2-萘氧乙酸、4-氯苯氧乙酸、1-萘乙酸、4-氟苯氧乙酸濃度為5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL；赤霉素濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL；3-吲哚丁酸、3-吲哚丙酸、3-吲哚乙酸濃度為50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS分析，采用外標法建立標準曲線?；|(zhì)標準曲線應現(xiàn)用現(xiàn)配。以質(zhì)量濃度X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制5點標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中藥物的響應值應在儀器檢測的線性范圍內(nèi)；在上述色譜條件下，判斷樣品中是否存在相應的被測物，需要滿足如下條件：樣品溶液中出現(xiàn)的質(zhì)量色譜峰保留時間與混合標準工作液一致，允許偏差小于±0.5％，該色譜峰所對應的藥物在質(zhì)譜定性離子的相對豐度與濃度相當?shù)幕旌匣|(zhì)標準工作液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過上述的規(guī)定，則可確定含有該藥物。在測定中判斷參數(shù)為：精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的15％。準確度在測定過程中，建議每測定20個～30個樣品用同一份標準溶液或標準物質(zhì)檢查儀器的穩(wěn)定性。為了保證分析結(jié)果的準確，要求每批樣品至少做一個加標回收實驗，當樣品加標為10倍檢出限時，回收率為在80％～120％之間。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3