本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留檢測領(lǐng)域，具體涉及一種檢測仲丁胺殘留的方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：目前，進(jìn)行仲丁胺檢測多采用氣相或者紫外檢測法，該方法易產(chǎn)生假陽性，且前期處理步驟繁瑣，回收率低，穩(wěn)定性差，針對(duì)基質(zhì)單一，不適于實(shí)際應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種檢測仲丁胺殘留的方法，利用甲醇水溶液提取樣品中的仲丁胺，碳酸鹽緩沖溶液和丹酰氯丙酮溶液進(jìn)行衍生，之后使用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測；所述甲醇溶液的濃度為80％。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述檢測仲丁胺殘留的方法步驟如下：1)提取純化稱取10g樣品，加入15mL80％甲醇水溶液，超聲15min，然后定容至20mL，4000r/min離心5min；移取5mL上清液于離心管中，加入2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，吸取1mL過濾膜，待測；2)高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測色譜參數(shù)：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱溫：40度；流速：0.4mL/min；進(jìn)樣量：1μL；流動(dòng)相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；質(zhì)譜參數(shù)：離子源：ESI+；離子源溫度：325℃；霧化氣流速：10L/min；噴嘴壓力：40psi；輔助加熱器溫度：375℃；輔助加熱器流量：11L/min。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述檢測仲丁胺殘留的方法應(yīng)用于檢測蔬菜水果的仲丁胺殘留。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述蔬菜水果為葡萄、卷心菜、白菜、蘋果、彩椒和韭菜。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所要檢測的仲丁胺是強(qiáng)極性物質(zhì)，易溶于極性有機(jī)溶劑和水溶液中，故采用80％的甲醇水溶液進(jìn)行提取；純化時(shí)，加入碳酸鹽緩沖溶液PH始終維持在9.8左右，使仲丁胺成分子態(tài)，丹酰氯丙酮溶液是一種強(qiáng)熒光劑，它能專一地與仲丁胺上的氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，有利于仲丁胺的純化。本發(fā)明的方法的檢出限為100μg/kg，比國標(biāo)或文獻(xiàn)資料中檢出限600μg/kg低；此外，本發(fā)明的方法檢測范圍較廣，相比于其他方法只檢測葡萄的單一基質(zhì)，本方法適用于多種蔬菜水果等復(fù)雜基質(zhì)的檢測；本發(fā)明的方法采用液質(zhì)檢測仲丁胺殘留是改革性的進(jìn)步，文獻(xiàn)和國標(biāo)中采用的氣相或者紫外檢測法易產(chǎn)生假陽性，且前期處理方法繁瑣，回收率低及穩(wěn)定性差；本發(fā)明采用甲醇水溶液作為提取溶劑，耗材少，節(jié)約成本。附圖說明圖1仲丁胺質(zhì)譜圖，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為m/z。圖2仲丁胺定量定性離子明細(xì)，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。圖3仲丁胺保留時(shí)間的測定，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。圖4仲丁胺定量離子S/N圖，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。圖5仲丁胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中縱坐標(biāo)為峰面積響應(yīng)，橫坐標(biāo)為仲丁胺濃度。具體實(shí)施方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)的描述本發(fā)明。以下實(shí)施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制1.1儲(chǔ)備液的配制準(zhǔn)確稱量10.00mg仲丁胺溶解到超純水中，定容到10mL，作為1000μg/mL的儲(chǔ)備液(實(shí)際濃度應(yīng)乘以仲丁胺的純度)，置于4℃冷藏保存；1.2工作液的配制準(zhǔn)確移取1mL100μg/mL的仲丁胺儲(chǔ)備液于50mL離心管內(nèi)，加入1mL80％甲醇水溶液和2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，在50℃下水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，過濾膜即為10ppm工作液。1.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制用工作液配制成5、10、20、50、100ng/mL的標(biāo)液(用80％甲醇水溶液定容)，作為工作曲線用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.樣品的處理稱取10g樣品，加入15mL80％甲醇水溶液，超聲15min，然后定容至20mL，4000r/min離心5min；移取5mL上清液于離心管中，加入2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，吸取1mL過濾膜，待測。3.高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測使用的高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀為AgilentLC-MSMS1290/6460；色譜參數(shù)：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱溫：40度；流速：0.4mL/min；進(jìn)樣量：1μL；流動(dòng)相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；流動(dòng)相的梯度如表1所示：表1流動(dòng)相的梯度時(shí)間B相濃度0.00501.00503.00954.00954.01505.5040質(zhì)譜參數(shù)：離子源：ESI+；離子源溫度：325℃；霧化氣流速：10L/min；噴嘴壓力：40psi；輔助加熱器溫度：375℃；輔助加熱器流量：11L/min。4.結(jié)果及分析4.1專屬性如圖1所示，1ppm仲丁胺衍生物上機(jī)，通過質(zhì)譜優(yōu)化各得到4個(gè)離子對(duì)，縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為m/z。仲丁胺的質(zhì)譜結(jié)果如表2所示：表2質(zhì)譜結(jié)果仲丁胺衍生物定量定性離子明細(xì)如圖2所示，其中縱坐標(biāo)為響應(yīng)，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。4.2保留時(shí)間10ppb仲丁胺衍生物通過C18色譜柱分離，確定保留時(shí)間，如圖3所示，保留時(shí)間約為2.994min，且色譜的峰形較佳，無干擾峰出現(xiàn)。4.3檢出限在基質(zhì)中添加相當(dāng)于樣品含有5.0μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)前處理上機(jī)檢測，計(jì)算其信噪比(S/N)＞10，如圖4所示。測得本發(fā)明方法對(duì)仲丁胺的檢出限為5.0μg/kg。4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取仲丁胺衍生物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液稀釋成系列濃度為5，10，20，50，100μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣測定，以峰面積響應(yīng)為縱坐標(biāo)，仲丁胺衍生物濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5所示，得到仲丁胺衍生物的回歸方程為Y＝13952.16*X+62582.37，R2＝0.9991，由相關(guān)系數(shù)可見，在5ng/mL～100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，UPLC-MSMS法測定線性關(guān)系良好，此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以用于準(zhǔn)確定量。4.5驗(yàn)證基體及回收率空白樣品添加回收如表3所示：表3空白樣品添加回收針對(duì)客戶需求量較大的葡萄進(jìn)行平行及多濃度加標(biāo)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，RSD＜10％，回收率穩(wěn)定，具體如表4所示：表4葡萄的回收率5.結(jié)論通過運(yùn)用UPLC-LCMSMS法對(duì)蔬菜水果中的仲丁胺進(jìn)行測定，確定用80％甲醇水溶液提取，用丹酰氯丙酮溶液進(jìn)行衍生，仲丁胺色譜峰達(dá)到基線分離，峰形良好，檢測限低，靈敏度高，方法回收穩(wěn)定，本研究為蔬菜水果中的仲丁胺殘留量的測定建立了一種可靠地分析方法。當(dāng)前第1頁1 2 3