本申請(qǐng)涉及一種山莨菪堿及其對(duì)映體的分離方法。

背景技術(shù)：

山莨菪堿為我國(guó)首先從茄科植物唐古特山莨菪中分離出的一種生物堿，5個(gè)手性中心。它具有平滑肌松弛，解除血管痙攣因此具有鎮(zhèn)痛的作用，成藥有片劑和注射劑。臨床上多用注射劑，可用于治療感染中毒性休克、坐骨神經(jīng)痛、胃及十二指腸潰瘍、視網(wǎng)膜色素變性等疾病。

理論上，山莨菪堿具有5個(gè)(1-,3-,5-,6-和2'-)手性碳，1-,3-,5-,不能自由旋轉(zhuǎn)，故認(rèn)為只有6-，2'-位存在異構(gòu)體，即2對(duì)對(duì)映體。并且目前文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于山莨菪堿的手性結(jié)構(gòu)也只有2對(duì)對(duì)映體。但在合成過(guò)程中，中間體的3-可能發(fā)生異構(gòu)化，故實(shí)際應(yīng)為4對(duì)對(duì)映體。

對(duì)于山莨菪堿的手性拆分較多，主要是利用環(huán)糊精及其衍生物為手性拆分劑，利用毛細(xì)管電泳法、高效毛細(xì)管電泳法或高效液相色譜法能夠?qū)?對(duì)對(duì)映體進(jìn)行手性分離，并達(dá)到良好的拆分效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本申請(qǐng)發(fā)現(xiàn)山莨菪堿除了現(xiàn)有技術(shù)中存在的2對(duì)對(duì)映體外，還存在2對(duì)對(duì)映體。即在人工合成的山莨菪堿中，實(shí)際上有8個(gè)異構(gòu)體的存在，而非4個(gè)?？赡苁窃谄渲虚g體外消旋3-羥基-6-乙酰氧基莨菪烷的3-發(fā)生異構(gòu)化，從而產(chǎn)生8個(gè)異構(gòu)體。但是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的分離方法，無(wú)法對(duì)8個(gè)異構(gòu)體進(jìn)行有效的分離，而本申請(qǐng)通過(guò)改變分離條件實(shí)現(xiàn)了對(duì)8個(gè)異構(gòu)體的分離。

本申請(qǐng)之一提供了一種山莨菪堿，所述山莨菪堿的結(jié)構(gòu)式如式I-IV所示：

所述山莨菪堿能夠從購(gòu)自南京澤朗生物科技有限公司的消旋山莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品中分離得到。從消旋山莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品中分離所述式I-IV所示的化合物的具體條件如下：利用毛細(xì)管電泳法在pH 3.0，在電泳緩沖液中的濃度為10mg/mL磺丁基-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣5s的對(duì)映體拆分條件下進(jìn)行拆分。

另外，其也能夠從購(gòu)自杭州民生藥業(yè)有限公司消旋山莨菪堿藥品(批號(hào)：T15j033)中分離得到。

本申請(qǐng)之二提供了一種分離山莨菪堿對(duì)映體的方法，所述方法為毛細(xì)管電泳法，包括如下步驟：1)電泳緩沖液中含有手性拆分劑，所述手性拆分劑選自磺丁基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-β-環(huán)糊精的混合物和/或磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的混合物中的一種；優(yōu)選所述手性拆分劑選自磺丁基-β-環(huán)糊精，或磺丁基-β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的混合物；2)分離電壓為-8kV至-18kV。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述手性拆分劑在所述電泳緩沖液中的濃度獨(dú)立地為2.5mg/mL至15mg/mL。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述手性拆分劑在所述電泳緩沖液中的濃度獨(dú)立地為8.5mg/mL至11.5mg/mL。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-β-環(huán)糊精和/或磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的混合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為2.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的濃度為2.5mg/mL至11.5mg/mL；優(yōu)選地當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精與羥丙基-β-環(huán)糊精和/或磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的混合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為2.5mg/mL至8.5mg/mL，磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的濃度為2.5mg/mL至8.5mg/mL。

例如，在一個(gè)具體實(shí)施方式中，當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的混合物，或磺丁基-β-環(huán)糊精和磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度、羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度和磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的濃度獨(dú)立地為2.5mg/mL至15mg/mL。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的混合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為2.5mg/mL至11.5mg/mL；優(yōu)選地當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精的混合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為2.5mg/mL至8.5mg/mL。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精和磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的濃度為2.5mg/mL至11.5mg/mL；優(yōu)選地當(dāng)所述手性拆分劑為磺丁基-β-環(huán)糊精和磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的混合物時(shí)，磺丁基-β-環(huán)糊精的濃度為8.5mg/mL至11.5mg/mL，磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的濃度為2.5mg/mL至8.5mg/mL。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述電泳緩沖液的pH值為2至5。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述電泳緩沖液的pH值為2.5至4。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述電泳緩沖液中含有20mM至40mM的磷酸鹽。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述電泳緩沖液中含有28mM至32mM的磷酸鹽。

在本申請(qǐng)中，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)證實(shí)，所述電泳緩沖液不適合使用Tris緩沖液。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可明顯的得知在緩沖液中最好不含甲醇。不過(guò)，在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述電泳緩沖液中可以還包括體積含量在30％以下的甲醇。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，優(yōu)選所述電泳緩沖液中還包括體積含量為0.001％至20％的甲醇。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述分離電壓為-11kV至-17kV。

在一個(gè)具體實(shí)施方式中，毛細(xì)管電泳操作條件：采用的石英毛細(xì)管柱總長(zhǎng)度為60cm，其有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑為50μm；實(shí)驗(yàn)條件為25℃±5℃；山莨菪堿樣品和緩沖液分別經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾；

檢測(cè)波長(zhǎng)：山莨菪堿-214nm；

進(jìn)樣條件：重力進(jìn)樣，3-7s(例如5s)；

毛細(xì)管柱的處理：分析前依次用1mol/L的氫氧化鈉溶液、電泳緩沖液對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗；并且在每次分析之間用電泳緩沖液沖洗2min；

溶液及樣品配置：磷酸儲(chǔ)備液配制方法：精密量取磷酸5.080mL(0.075mol)，溶于約200mL的純水中，移入250mL容量瓶中配成300mmol/L的磷酸儲(chǔ)備液；

磷酸鹽緩沖液配制方法：配制30mM的pH 3-9磷酸鹽緩沖液；即精密量取磷酸儲(chǔ)備液25mL，溶于約180mL的純水中，用1mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度至所需pH；調(diào)節(jié)好pH后，移入250mL容量瓶中定容；

電泳緩沖液配制方法：按實(shí)驗(yàn)所需條件計(jì)算好β-環(huán)糊精衍生物的用量，稱(chēng)量好后，溶于少量所需pH的磷酸鹽緩沖液，移入10mL容量瓶中定容；再用0.45μm濾器過(guò)濾，裝入電泳緩沖液進(jìn)樣瓶中，每瓶容積約4.5mL；

樣品的配置：將含有山莨菪堿的樣品研碎，加入適量所需純水，超聲20min；10000r/min離心10min，取上清液，用0.45μm濾膜過(guò)濾，配成濃度為1mg/mL的溶液；

電泳實(shí)驗(yàn)前緩沖液超聲脫氣15min。

附圖說(shuō)明

圖1為在pH 3.0，10mg/mL磺丁基-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣5s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖2為在pH 4.0，10mg/mL的磺丁基-β-環(huán)糊精和甲基化-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣7s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖3為在pH 3.0，10mg/mL的磺丁基-β-環(huán)糊精和羥丙基-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣7s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖4為在pH 3.0，10mg/mL的磺丁基-β-環(huán)糊精和磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物，電壓-15kV，重力進(jìn)樣5s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖5為在pH 3.0，20mg/mL的甲基化-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣7s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖6為在pH 7.0，5mg/mL的羥丙基-β-環(huán)糊精，電壓-15kV，重力進(jìn)樣7s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖7為在pH 7.0，5mg/mL的磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物，電壓-15kV，重力進(jìn)樣7s的對(duì)映體拆分條件下的毛細(xì)管電泳圖。

圖8為實(shí)施例2中pH值為2、2.5、3、4和5時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

圖9為實(shí)施例2中pH值為6時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

圖10為實(shí)施例2中pH值為7、8和9時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

圖11為實(shí)施例3中磺丁基-β-環(huán)糊精濃度為2.5mg/mL、5mg/mL、7.5mg/mL、8.5mg/mL、10mg/mL、11.5mg/mL、12.5mg/mL、15mg/mL時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

圖12為實(shí)施例4中電壓為-8kV、-10kV、-11kV、-12kV、-15kV、-17kV、-18kV、時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

圖13為實(shí)施例5中甲醇體積濃度(含量)為0％、5％、10％、15％、20％、30％時(shí)的毛細(xì)管電泳圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例詳述本申請(qǐng)，但本申請(qǐng)并不局限于這些實(shí)施例。

如無(wú)特別說(shuō)明，本申請(qǐng)的實(shí)施例中的原料均通過(guò)商業(yè)途徑購(gòu)買(mǎi)。

山莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：ZL20140522SSD)購(gòu)自南京澤朗生物科技有限公司；磺丁基-β-環(huán)糊精(SE-β-CD，批號(hào)：136019-12-0)、羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD，批號(hào)：128446-35-5)、甲基化-β-環(huán)糊精(Me-β-CD批號(hào)：128446-34-4)均為醫(yī)藥級(jí)，購(gòu)自山東濱州智源生物科技有限公司；H₃PO₄、NaOH、HCl、甲醇等均為分析純?cè)噭?，?gòu)自北京化工廠；乙腈購(gòu)自Fisher。石英毛細(xì)管柱總長(zhǎng)度為60cm，其有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑為50μm，360μm外徑(河北永年銳灃色譜器件有限公司)。

磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物的合成：稱(chēng)取40gβ-環(huán)糊精于三口瓶中，加入60mL 10％(w/V)NaOH溶液，攪拌至完全溶解后，用滴液漏斗逐漸加入28mL環(huán)氧氯丙烷，90℃反應(yīng)6h。反應(yīng)停止后，加入大量丙酮沉淀聚合物，將油狀沉淀進(jìn)行透析，以0.1mol/L AgNO₃溶液檢測(cè)直至無(wú)沉淀產(chǎn)生。透析液濃縮后，烘干得到白色β-環(huán)糊精聚合物24.2g。

取β-環(huán)糊精聚合物1.0g，加人干燥好的N,N’一二甲基甲酰胺適量，磁力攪拌使之溶解。再迅速加入1.5g三氧化硫吡啶復(fù)合物，80℃反應(yīng)6h。反應(yīng)液用NaOH溶液調(diào)至pH 10后進(jìn)行透析，用BaCl₂：溶液檢測(cè)透析袋外水溶液至無(wú)沉淀產(chǎn)生。將透析液濃縮后80℃烘干，得到黃色固體，即磺酸化-β-環(huán)糊精聚合物1.25g。

本實(shí)驗(yàn)中的毛細(xì)管電泳采用的石英毛細(xì)管柱總長(zhǎng)度為60cm，其有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑為50μm。每天分析前依次用1mol/L的NaOH溶液、電泳緩沖液對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗。每次分析之間用電泳緩沖液沖洗2min。

磷酸儲(chǔ)備液配制方法：精密量取磷酸5.080mL(0.075mol)，溶于約200mL的純水中，移入250mL容量瓶中配成300mmol/L的磷酸儲(chǔ)備液。

磷酸鹽緩沖液配制方法：配制30mM的pH 3-9磷酸鹽緩沖液。每次精密量取磷酸儲(chǔ)備液25mL，溶于約180mL的純水，用1mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度至所需pH，以pH計(jì)測(cè)量。調(diào)節(jié)好pH后，移入250mL容量瓶中定容。

電泳緩沖液配制方法：按實(shí)驗(yàn)所需條件計(jì)算好β-環(huán)糊精衍生物的用量，稱(chēng)量好后，溶于少量所需pH的磷酸鹽緩沖液，移入10mL容量瓶中定容。再用0.45μm濾器過(guò)濾，裝入電泳緩沖液進(jìn)樣瓶中，每瓶容積約4.5mL。

樣品的配置：將山莨菪堿藥片研碎，加入適量所需的純水，超聲20min。10000r/min離心10min，取上清液，用0.45μm濾膜過(guò)濾，配成濃度為1mg/mL的溶液。

實(shí)驗(yàn)條件為室溫(20℃-30℃，即25℃±5℃)。所有樣品和緩沖液都經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾。電泳實(shí)驗(yàn)前緩沖液應(yīng)超聲脫氣15min。進(jìn)樣條件：重力進(jìn)樣3s-7s。檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm。

實(shí)施例1

環(huán)糊精衍生物種類(lèi)的選擇

分別采取磺酸化-β-糊精聚合物、HP-β-CD、Me-β-CD、SE-β-CD、SE-β-CD與Me-β-CD的混合物、SE-β-CD與HP-β-CD的混合物、SE-β-CD與磺酸化-β-糊精聚合物的混合物作為拆分劑對(duì)山莨菪堿進(jìn)行拆分。拆分劑在電泳緩沖液中的濃度為10mg/mL，電泳緩沖液的pH值為3，溫度為室溫，電壓為-15kV，重力進(jìn)樣5s。結(jié)果如圖1-7所示。其中單獨(dú)使用磺酸化-β-糊精聚合物、HP-β-CD、Me-β-CD，以及組合使用SE-β-CD與Me-β-CD的混合物均未對(duì)其有良好的拆分效果；SE-β-CD可將其拆分，并達(dá)到基線分離。在以SE-β-CD為手性拆分劑時(shí)，加入HP-β-CD或磺酸化-β-糊精聚合物，雖然分離度沒(méi)有更高改善，但是其可以與SE-β-CD混用。因此電泳緩沖液中含有SE-β-CD，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離。

實(shí)施例2

緩沖液pH值對(duì)山莨菪堿分離度的影響

考察了pH值在2.0-9.0變動(dòng)時(shí)對(duì)手性分離的影響。其中在電泳緩沖液中SE-β-CD的濃度為10mg/mL，溫度為室溫，電壓為-15kV。結(jié)果如圖8-10所示。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在pH為2.0-5.0時(shí)，由于電滲流較小，不能帶動(dòng)樣品向負(fù)極遷移，因此正向電壓下無(wú)法檢測(cè)到樣品峰。在pH 2.0-5.0范圍內(nèi)使用反向電壓，依靠山莨菪堿與環(huán)糊精包結(jié)物電泳作用，將山莨菪堿從負(fù)極帶向正極，實(shí)現(xiàn)了對(duì)映體在不同程度的分離。在pH＝2.5時(shí)，山莨菪堿的4對(duì)對(duì)映體能夠分離。在pH＝3時(shí)，山莨菪堿的4對(duì)對(duì)映體完全分離，出峰時(shí)間最快，且重現(xiàn)性良好。在pH＝4時(shí)，山莨菪堿的4對(duì)對(duì)映體完全分離，出峰時(shí)間與pH＝3.0時(shí)相近。在pH5.0-9.0時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)山莨菪堿的4對(duì)對(duì)映體部分分離。在pH＝6.0時(shí)，電滲流較小，樣品出峰時(shí)間較晚。因此實(shí)驗(yàn)中選擇2.5-4為較優(yōu)的分離pH值，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離。

實(shí)施例3

SE-β-CD濃度對(duì)山莨菪堿分離度的影響

實(shí)驗(yàn)中考察了在溫度為室溫，pH為3.0，電壓為-15kV運(yùn)行電壓條件下，SE-β-CD濃度在2.5-15mg/mL時(shí)，山莨菪堿分離度的變化。結(jié)果如圖11所示。在所選擇的范圍內(nèi)山莨菪堿均能實(shí)現(xiàn)不同程度的分離，SE-β-CD濃度2.5mg/mL時(shí)，有3對(duì)對(duì)映體實(shí)現(xiàn)分離；SE-β-CD濃度5-7.5mg/mL時(shí)，有4對(duì)對(duì)映體實(shí)現(xiàn)分離，但第3對(duì)對(duì)映體和第4對(duì)對(duì)映體間色譜峰有重疊；SE-β-CD濃度為10mg/mL時(shí)，山莨菪堿的分離度最好，4對(duì)對(duì)映體完全拆分；SE-β-CD濃度為11.5mg/mL時(shí)，山莨菪堿的4對(duì)對(duì)映體可以分離，但是最后兩個(gè)峰不能完全分開(kāi)；SE-β-CD濃度8.5-15mg/mL，隨著SE-β-CD濃度的增加，出峰時(shí)間逐漸變快，樣品與拆分劑的作用時(shí)間變短，不同對(duì)映體間色譜峰出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，分離度有所降低。因此實(shí)驗(yàn)中選擇8.5mg/mL-11.5mg/mL為較優(yōu)的分離濃度，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離。

另外，在上述條件下，考察了SE-β-CD與HP-β-CD的混合物、SE-β-CD與磺酸化-β-糊精聚合物的混合物中HP-β-CD、磺酸化-β-糊精聚合物的濃度，得出HP-β-CD的濃度可以為2.5-15mg/mL、磺酸化-β-糊精聚合物的濃度可以為2.5-15mg/mL；較優(yōu)地，HP-β-CD的濃度可以在2.5-11.5mg/mL、磺酸化-β-糊精聚合物的濃度可以為2.5-11.5mg/mL；較優(yōu)地，HP-β-CD的濃度可以為2.5-8.5mg/mL、磺酸化-β-糊精聚合物的濃度可以為2.5-8.5mg/mL。

實(shí)施例4

運(yùn)行電壓對(duì)山莨菪堿分離度的影響

在溫度為室溫，pH為3.0，SE-β-CD濃度為10mg/mL條件下考察了分離電壓在-8到-18kV變動(dòng)時(shí)對(duì)手性拆分的影響。結(jié)果如圖12所示。當(dāng)分離電壓為-8到-12kV時(shí)，有4對(duì)對(duì)映體實(shí)現(xiàn)分離，同時(shí)樣品存在一定的擴(kuò)散，無(wú)法實(shí)現(xiàn)峰最后2個(gè)峰的完全分離。當(dāng)分離電壓為-15kV時(shí)，樣品實(shí)現(xiàn)基線分離。隨著電壓的增加，出峰時(shí)間加快，但分離度降低。當(dāng)分離電壓為-18kV時(shí)，出峰時(shí)間最快，但分離度降低，也未完全達(dá)到基線分離。因此實(shí)驗(yàn)中選擇-11kV至-18kV為較優(yōu)的分離電壓，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離且分離速度較快。

實(shí)施例5

有機(jī)溶劑對(duì)山莨菪堿分離度的影響

有機(jī)添加劑可能與手性藥物和環(huán)糊精形成三元包結(jié)物，促進(jìn)包結(jié)作用，也可能與手性藥物競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)入環(huán)糊精的空腔，抑制包結(jié)作用。在溫度為室溫，pH＝3.0，SE-β-CD濃度為10mg/mL，-15kV電壓條件下考察了有機(jī)添加劑甲醇或乙腈對(duì)山莨菪堿拆分的影響。結(jié)果見(jiàn)圖13。從出峰時(shí)間方面看，出峰時(shí)間隨著甲醇含量增加，藥物出峰時(shí)間逐漸變慢，緩沖溶液中不含甲醇時(shí)，出峰時(shí)間較快。隨著甲醇含量增加，使出峰時(shí)間變慢；從分離度方面，當(dāng)緩沖溶液中不含甲醇時(shí)，山莨菪堿可以實(shí)現(xiàn)完全分離，當(dāng)甲醇含量為10％時(shí)，分離度降低；當(dāng)甲醇在緩沖液中的體積含量分別為20％和30％時(shí)，峰開(kāi)始往后遷移，部分無(wú)法實(shí)現(xiàn)基線分離。此外，實(shí)驗(yàn)中還考察了乙腈作為有機(jī)添加劑對(duì)手性分離的影響，結(jié)果表明乙腈含量為10％時(shí)，僅使山莨菪堿的1對(duì)對(duì)映體實(shí)現(xiàn)手性分離，且出峰時(shí)間在50min之后。因此乙腈的加入不利于山莨菪堿的手性拆分，而電泳緩沖液中在含有一定濃度的甲醇，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離。因此實(shí)驗(yàn)中，可以選擇在電泳緩沖液中添加體積含量在30％以下的甲醇，這時(shí)，樣品能夠?qū)崿F(xiàn)分離且分離速度較快。

實(shí)施例6

緩沖液濃度對(duì)山莨菪堿分離度的影響

考察了緩沖液的濃度對(duì)手性分離的影響。其中在電泳緩沖液中SE-β-CD的濃度為10mg/mL，溫度為室溫，電壓為-15kV，重力進(jìn)樣3s。其中，緩沖液分別為20mM、28mM、32mM和40mM的磷酸鹽緩沖液。結(jié)果顯示20mM-40mM的磷酸鹽緩沖液對(duì)山莨菪堿的分離沒(méi)有顯著的影響，并且28mM-32mM的磷酸鹽緩沖液對(duì)山莨菪堿的分離更佳。

以上所述，僅是本申請(qǐng)的幾個(gè)實(shí)施例，并非對(duì)本申請(qǐng)做任何形式的限制，雖然本申請(qǐng)以較佳實(shí)施例揭示如上，然而并非用以限制本申請(qǐng)，任何熟悉本專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本申請(qǐng)技術(shù)方案的范圍內(nèi)，利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容做出些許的變動(dòng)或修飾均等同于等效實(shí)施案例，均屬于技術(shù)方案范圍內(nèi)。