本實(shí)用新型屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種醫(yī)用檢測(cè)耗材，具體涉及一種分級(jí)快速半定量測(cè)試早早孕膠體金試紙及試劑盒。

背景技術(shù)：

目前市面上大多數(shù)的早早孕檢測(cè)試紙都是采用膠體金方法進(jìn)行檢測(cè)的，但均只能告知被檢者有沒(méi)有懷孕，只能定性檢測(cè)尿液中是否含有hCG，只有當(dāng)尿液中hCG濃度≥25mIU/ml時(shí)T線才顯色，用于育齡婦女的早期妊娠診斷，不能定量檢測(cè)尿液中hCG的濃度，不能對(duì)育齡婦女的早期妊娠作出妊娠周數(shù)和是否正常妊娠的預(yù)判。而對(duì)于一些意外懷孕或月經(jīng)期不準(zhǔn)的女性，在6-8周之前都是沒(méi)有明顯的早孕反應(yīng)的，此時(shí)需要一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單的方法知道懷孕的具體周數(shù)，以備對(duì)自己后期的工作以及生活作進(jìn)一步的計(jì)劃，以及對(duì)自己后期的身體健康等起到提示作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)上述領(lǐng)域的需求和不足，本實(shí)用新型旨在提供一種分級(jí)半定量測(cè)試早早孕膠體金試紙，本實(shí)用新型試紙用于懷孕早期分級(jí)半定量快速檢測(cè)人尿液中hCG的濃度，本實(shí)用新型方法利用不同濃度的顯示，一是可以用于妊娠早期的檢測(cè)，預(yù)估早期的受孕周數(shù)，二是可以根據(jù)不同懷孕周數(shù)HCG濃度的變化輔助判斷是否為正常妊娠，如果濃度一直處于較低濃度，可以推測(cè)是否為宮外孕、胎停育等非正常妊娠情況。

本實(shí)用新型的技術(shù)方案如下：

一種分級(jí)半定量測(cè)試早早孕膠體金試紙，其特征在于，包括左側(cè)試紙和右側(cè)試紙，兩側(cè)試紙?jiān)诟叨确较蛏习ɑ逯螌印⒎磻?yīng)試劑載體吸附層，反應(yīng)試劑載體吸附層固定在基板支撐層上，且從加樣端到手持端依次設(shè)有樣品纖維墊，金標(biāo)纖維墊，硝酸纖維素藥膜，手持端吸水材料墊，在金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，在硝酸纖維素藥膜上印制有條狀的且均與試紙長(zhǎng)度方向垂直的檢測(cè)線和質(zhì)控線C線，從手持端到加樣端，所述左側(cè)試紙上的檢測(cè)線依次為T3，T1，所述右側(cè)試紙上的檢測(cè)線依次為T4，T2。

在所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的α-hCG單抗；在所述T1、T2、T3、T4線上分別包被有包被濃度為1.0-2.0mg/ml，包被濃度為0.1-0.5mg/ml，包被濃度為0.2-1.0mg/ml，包被濃度為0.05-0.25mg/ml的β-hCG單抗；所述質(zhì)控線C線包被有羊抗鼠IgG多抗，其包被濃 度為1-2mg/ml。

所述T1、T2、T3、T4線上的β-HCG抗體的單位面積包被量比值為20:2:4:1-8:2:4:1。

所述試紙為測(cè)試條二合一、雙聯(lián)板，或雙聯(lián)筆。

一種分級(jí)快速半定量測(cè)試早早孕膠體金雙聯(lián)試劑盒，其特征在于：包括上述的膠體金試紙。

還包括由盒體和盒蓋構(gòu)成的兩個(gè)并列的盒封閉體，所述盒體內(nèi)設(shè)有安裝膠體金試紙條的定位槽，所述兩個(gè)盒封閉體之間設(shè)有連接裝置，兩個(gè)盒封閉體之間通過(guò)連接裝置可拆卸式連接。當(dāng)兩個(gè)試劑盒封閉體拆開時(shí)可分別單獨(dú)使用。

所述盒蓋上均設(shè)有加樣孔和結(jié)果觀察孔；當(dāng)所述膠體金試紙條放置于盒體內(nèi)的定位槽時(shí)，對(duì)應(yīng)于盒蓋加樣孔處為樣品纖維墊；對(duì)應(yīng)于結(jié)果觀察孔處為硝酸纖維素藥膜。

所述連接裝置為兩個(gè)，分別為可拆卸式裝置1和可拆卸式裝置2，并分別設(shè)于兩個(gè)盒封閉體的對(duì)應(yīng)于加樣孔和結(jié)果觀察孔的邊緣處。

兩個(gè)并列的盒封閉體均為長(zhǎng)方形。生產(chǎn)、安裝、運(yùn)輸、使用、保存極為方便，簡(jiǎn)單大方。

技術(shù)效果：

本實(shí)用新型通過(guò)四條檢測(cè)線實(shí)現(xiàn)4種濃度范圍的檢測(cè)，左側(cè)反應(yīng)區(qū)包被有C、T3、T1三條線，T1為高靈敏度，最低能檢測(cè)出孕3-4周的尿液(25mIU/ml≤hCG濃度＜100mIU/ml)，T3最低能檢測(cè)出孕5-6周的尿液(300mIU/ml≤hCG濃度＜1000mIU/ml)，右側(cè)反應(yīng)區(qū)包被有C、T4、T2三條線，T2最低能檢測(cè)孕4-5周的尿液(100mIU/ml≤hCG濃度＜300mIU/ml)，T4最低能檢測(cè)孕6周以上的尿液(hCG濃度≥1000mIU/ml)。

本實(shí)用新型一是采用包被不同濃度的捕捉抗體可以捕捉不同濃度的hCG，來(lái)區(qū)分不同的檢測(cè)靈敏度，二是采用包被不同位置的捕捉抗體，來(lái)區(qū)分不同的檢測(cè)靈敏度。如果尿液中含有hCG，將與金標(biāo)α-hCG單抗反應(yīng)形成復(fù)合物，在層析作用下，被預(yù)先固定在膜上的β-HCG單抗捕獲，在檢測(cè)區(qū)內(nèi)形成1-4條紫紅色條帶(T1/T2/T3/T4)，根據(jù)尿液中HCG的濃度決定與反應(yīng)區(qū)的T1、T2、T3、T4哪條線反應(yīng)。

本實(shí)用新型產(chǎn)品在使用時(shí)，同時(shí)在兩側(cè)試紙的加樣端加入尿液，根據(jù)檢測(cè)線的顯色情況從而預(yù)測(cè)出妊娠早期的hCG水平預(yù)估早期的受孕周數(shù)，進(jìn)而輔助判斷是否為正常妊娠。

本實(shí)用新型可以預(yù)測(cè)妊娠早期的hCG水平，是否呈遞增趨勢(shì)，從而判斷受精后的早期的妊娠周數(shù)，根據(jù)以下參考值，將測(cè)試條設(shè)計(jì)成四條檢測(cè)線：

參考值:正常人:0-3mIU/ml

本實(shí)用新型可以根據(jù)不同檢測(cè)線的出現(xiàn)，確定尿液中HCG的濃度，從而預(yù)測(cè)早期的懷孕 周數(shù)，懷孕周數(shù)對(duì)應(yīng)的HCG濃度(mIU/ml)如下：

孕早期(孕周是從未次月經(jīng)開始計(jì)算)

孕3周5.8-71.2mIU/ml

孕4周9.5-750mIU/ml

孕5周217-7138mIU/ml

孕6周158-31795mIU/m

孕7周3697-163563mIU/mL

孕8周32065-149571mIU/mL

孕9周63803-151410mIU/ml

孕10周46509-186977mIU/ml

孕11-12周27832-210612mIU/ml

孕13-14周13950-62530mIU/ml

孕15周12039-70971mIU/ml

孕16周9040-56451mIU/ml

孕17周8175-55868mIU/ml

孕18周8099-58176mIU/ml

T1敏感性25mIU/ml：T1線會(huì)顯色，提示最低能檢測(cè)出孕3-4周的尿液(25mIU/ml≤hCG濃度＜100mIU/ml)。

T2敏感性100mIU/ml：，T1和T2線會(huì)顯色，提示最低能檢測(cè)孕4-5周的尿液(100mIU/ml≤hCG濃度＜300mIU/ml)。

T3敏感性300mIU/ml：T1、T2和T3線會(huì)顯色，提示最低能檢測(cè)出孕5-6周的尿液(300mIU/ml≤hCG濃度＜1000mIU/ml)。

T4敏感性1000mIU/ml：T1、T2、T3和T4線會(huì)顯色，提示最低能檢測(cè)孕6周以上的尿液(hCG濃度≥1000mIU/ml)。

本實(shí)用新型產(chǎn)品及方法為半定量測(cè)試，可以得知受孕早期尿液中HCG濃度范圍值，從而利用不同含量的顯示用于受孕早期的檢測(cè)，可以預(yù)估受孕后前四周的情況，其次可以根據(jù)不同懷孕周期HCG濃度的變化輔助判斷是否為正常妊娠，如果濃度一直處于較低濃度，可以推測(cè)是否為宮外孕、胎停育等非正常妊娠情況。

現(xiàn)有方法學(xué)試劑的現(xiàn)狀及局限

1、25年前經(jīng)典傳統(tǒng)的方法學(xué)、產(chǎn)品設(shè)計(jì)和使用理念；

2、被人詬病的單一定性主觀性判讀或經(jīng)驗(yàn)型猜測(cè)結(jié)果；

3、20多年如一日缺乏創(chuàng)新和研發(fā)；

4、良莠不齊的廠家，偽劣品質(zhì)的粗糙亂造，OEM和假冒品牌，價(jià)格貧瘠和市場(chǎng)的混亂，被作死的產(chǎn)品。

本實(shí)用新型產(chǎn)品的新方法和試劑特點(diǎn)

1、新概念的引領(lǐng)使用，方法學(xué)原劑型生命周期的延展和更新；

2、科學(xué)客觀地實(shí)現(xiàn)了從定性到半定量的快速檢測(cè)；

3、依然是用尿液樣本測(cè)試，較比血定量更有實(shí)用性、普遍性和經(jīng)濟(jì)性；

4、分級(jí)區(qū)劃可以直觀地判讀妊娠早期周數(shù)；

5、輔助性的配件還可以勾畫出孕期曲線。

附圖說(shuō)明：

圖1本實(shí)用新型左側(cè)試紙的俯視圖；

圖2本實(shí)用新型右側(cè)試紙的俯視圖；

圖3本實(shí)用新型試紙的單側(cè)縱向剖面圖；

圖4本實(shí)用新型雙聯(lián)試劑盒俯視圖；

圖5本實(shí)用新型雙聯(lián)試劑盒仰視圖；

其中：1-手持端，2-質(zhì)控線C線，3-檢測(cè)線T1線，4-MAX標(biāo)志線，5-加樣端，6-硝酸纖維素膜層，7-樣品纖維層,8-手持端吸水材料層，9-金標(biāo)纖維層,10-大無(wú)紡布，11-小無(wú)紡布，12-手持端膠帶，13-箭頭膠帶,14-基板支撐層，15-檢測(cè)線T3線，16-檢測(cè)線T2線，17-檢測(cè)線T4線，18-盒蓋，19-盒體，20-加樣孔，21-結(jié)果觀察孔，22-可拆卸連接裝置1，23-可拆卸連接裝置2。

具體實(shí)施方式：

提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本實(shí)用新型，并不局限于所述最佳實(shí)施方式，不對(duì)本實(shí)用新型的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成限制，任何人在本實(shí)用新型的啟示下或是將本實(shí)用新型與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本實(shí)用新型相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。

根據(jù)膠體金免疫層析法檢測(cè)的原理，將本實(shí)用新型的膠體金試紙條的加樣端加入尿液，尿液在纖維層材料的毛細(xì)作用下沿著試紙條從加樣端向手持端移動(dòng)，當(dāng)尿液中含有hCG時(shí)， 尿液隨著層析作用先與膠體金標(biāo)記的α-hCG單抗反應(yīng)，當(dāng)爬行至反應(yīng)區(qū)又與β-HCG單抗反應(yīng)，根據(jù)尿液中hCG的濃度決定與反應(yīng)區(qū)的T1、T2、T3、T4哪條線反應(yīng)。

實(shí)施例1.試劑盒的制備

1試紙條的制備：

1.1包被

1.1.1準(zhǔn)備：用pH7.4 10mM PBS稀釋?duì)?hCG單抗，分別配制成2.0mg/ml，1.0mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml用于T1、T3、T2、T4線的包被；用pH7.4 10mM PBS稀釋抗鼠IgG多抗，配制成2.0mg/ml用于C線的包被。將硝酸纖維素膜裁切成270mm*19mm。

1.1.2包被

1.1.2.1左側(cè)反應(yīng)區(qū)包被

用BIODOT包被機(jī)進(jìn)行包被，左側(cè)反應(yīng)區(qū)的包被尺寸為C線上邊緣距膜上邊緣為6.5mm，T1下邊緣距膜下邊緣為6.5mm，然后將C、T3、T1三條線均分，三條線中心線間距約為2.6mm，CT線寬度為0.8±0.1mm，三條線的包被量為0.8μl/cm，包被速度為70mm/s。包被完畢后，干燥6小時(shí)，干燥溫度控制在35-40℃，濕度≤35％，干燥后加干燥劑4-30℃密封保存。

1.1.2.2右側(cè)側(cè)反應(yīng)區(qū)包被

用BIODOT包被機(jī)進(jìn)行包被，右側(cè)反應(yīng)區(qū)的包被尺寸為C線上邊緣距膜上邊緣為6.5mm，T2下邊緣距膜下邊緣為6.5mm，然后將C、T4、T2三條線均分，三條線中心線間距約為2.6mm，CT線寬度為0.8±0.1mm，三條線的包被量為0.8μl/cm，包被速度為70mm/s。包被完畢后，干燥6小時(shí)，干燥溫度控制在35-40℃，濕度≤35％，干燥后加干燥劑4-30℃密封保存。

1.2標(biāo)記

1.2.1膠體金顆粒的制備

1.2.1.1準(zhǔn)備：所用玻璃儀器為2L三角燒瓶，用之前反復(fù)清洗，晾干后備用。配制2％氯金酸40ml和2％檸檬酸三鈉50ml備用。

1.2.2.2量取2000ml電阻18MΩ以上超純水于三角燒瓶中，并量取2％氯金酸溶液40ml也加入三角燒瓶中，此時(shí)溶液為黃色，將其加熱至沸騰后再加入2％檸檬酸三鈉溶液50ml，沸騰后溶液變成紫紅色，繼續(xù)煮沸后5分鐘停止加熱，并加上蓋，室溫中自然冷卻備用。

1.2.3膠體金標(biāo)記α-hCG單抗

1.2.3.1首先取膠體金35ml，先加入0.2M K2CO3調(diào)節(jié)pH，加入量為10μl/ml，然后加入α-hCG單抗與膠體金結(jié)合，蛋白濃度為10μg/ml，反應(yīng)15分鐘，然后加入牛血清白蛋白20μl/ml進(jìn)行封閉，再反應(yīng)15分鐘后，進(jìn)行10000rpm，30分鐘離心，棄上清液，沉淀用10mM Tris 緩沖系統(tǒng)(含有檸檬酸三鈉0.3％，1.2％casein，0.05％PVP40，0.7％TW20，2.5％蔗糖，1％葡萄糖，0.1％NaN3)10％復(fù)溶，即得膠體金標(biāo)記α-hCG單抗原液3.5ml。

1.3金標(biāo)墊的制備

量取10mM Tris緩沖溶液(含有檸檬酸三鈉0.3％，1.2％casein，0.05％PVP40，0.7％TW20，2.5％蔗糖，1％葡萄糖，0.1％NaN3)31.5ml，與膠體金標(biāo)記α-hCG單抗原液3.5ml混合均勻，鋪在30cm*30cm玻璃纖維上，干燥6小時(shí)，干燥溫度控制在35-40℃，濕度≤35％，干燥后加干燥劑4-30℃密封保存。

1.4樣品墊的制備：首先配制pH 9.0的10mM Tris緩沖液，并同時(shí)加入0.5％casein，1％PVP40，0.1％triton100，0.05％NaN3混勻，量取35ml液體鋪在30*30cm玻璃纖維上，干燥6小時(shí)，干燥溫度控制在35-40℃，濕度≤35％，干燥后加干燥劑4-30℃密封保存。

1.4產(chǎn)品貼板、裁測(cè)

將1.1-1.3以上組分分別貼在帶有背膠的塑料板上，切成規(guī)定條寬的測(cè)試條，用hCG陰性尿液進(jìn)行在線檢測(cè)，合格后送QC進(jìn)行半成品檢測(cè)。

1.5包裝

將QC檢測(cè)合格的測(cè)試條組裝成條型、板型或筆型，裝入鋁箔袋中，裝干燥劑，封口，裝盒，裝箱，然后送QC進(jìn)行成品檢測(cè)。

2.使用方法：

條型：

1.待測(cè)樣本、檢測(cè)試紙條或其他檢測(cè)用材料等均在室溫10℃-30℃平衡后取出。

2.將測(cè)試條有箭頭的一端插入尿液標(biāo)本容器中，5秒鐘后取出平放，5分鐘觀察顯示結(jié)果。

3.測(cè)試條插入尿液深度不可超過(guò)MAX標(biāo)志線。

板型：

1.待測(cè)樣本、檢測(cè)板或其他檢測(cè)用材料等均在室溫10℃-30℃平衡后沿鋁箔袋切口撕開，取出檢測(cè)板及滴管。

2.將測(cè)試板平放，用滴管垂直加2-3滴尿樣于各加樣孔中。5分鐘在觀察孔中觀察顯示結(jié)果。

筆型：

1.待測(cè)樣本、檢測(cè)筆或其他檢測(cè)用材料等均在室溫10℃-30℃平衡后沿鋁箔袋切口撕開，取出檢測(cè)筆。

2.將筆帽拔開，拿住檢測(cè)試筆手持端，將尿液直接淋在試筆采集孔處約5秒鐘左右。5分鐘后在觀察孔中觀察顯示結(jié)果。

3.判讀結(jié)果

3.1.1陽(yáng)性

在質(zhì)控線位置(C)及檢測(cè)線位置(T1-T4)顯色，提示可能已懷孕。

3.1.1.1 C線、T1線顯色，提示：25mIU/ml≤hCG濃度＜100mIU/ml，可能懷孕3-4周。

3.1.1.2 C線、T1和T2線顯色，提示：100mIU/ml≤hCG濃度＜300mIU/ml，可能懷孕4-5周。

3.1.1.3 C線、T1、T2和T3線顯色，提示：300mIU/ml≤hCG濃度＜1000mIU/ml，可能懷孕5-6周。

3.1.1.4 C線、T1、T2、T3和T4線顯色，提示：hCG濃度≥1000mIU/ml，可能懷孕6周以上。

3.1.2陰性

僅在質(zhì)控線位置(C)顯色，提示hCG濃度＜25mIU/ml,可能未懷孕或懷孕濃度很低，需隔1-2天后再測(cè)。

3.1.3無(wú)效

質(zhì)控線不顯色，或僅在檢測(cè)線位置(T1-T4)顯色，表明實(shí)驗(yàn)失敗或產(chǎn)品失效。

包被及檢測(cè)情況如表1：

表1如下

結(jié)果分析：

通過(guò)以上結(jié)果可知，包被濃度和最低檢測(cè)濃度呈反向關(guān)系，包被濃度越高，所能檢測(cè)的濃度越低；捕捉抗體先后和最低檢測(cè)濃度呈反向關(guān)系，先和T線反應(yīng)的靈敏度較高，也就是所能檢測(cè)的濃度較低。

實(shí)施例2.本實(shí)用新型產(chǎn)品的效果性能驗(yàn)證。

表2

結(jié)果分析：

通過(guò)對(duì)懷孕前五周尿液的檢測(cè)，可以看出T1-T4檢測(cè)線的逐漸顯色，能大概判斷孕婦尿液中HCG濃度以及懷孕周數(shù)。

實(shí)施例3.本實(shí)用新型產(chǎn)品與現(xiàn)有技術(shù)的產(chǎn)品的對(duì)比試驗(yàn)

表3

結(jié)果分析：

根據(jù)以上結(jié)果得知，現(xiàn)有技術(shù)只能區(qū)分陰性和陽(yáng)性，而本實(shí)用新型產(chǎn)品可以根據(jù)不同檢測(cè)線的出現(xiàn)大概判讀孕婦尿液中hCG濃度以及懷孕周數(shù)。

實(shí)施例4.本實(shí)用新型產(chǎn)品的效果驗(yàn)證

表4型式檢驗(yàn)報(bào)告

結(jié)果分析：

根據(jù)以上結(jié)果得知，本實(shí)用新型產(chǎn)品的物理性狀、最低檢測(cè)限、特異性、重復(fù)性、穩(wěn)定性、批間差均滿足目前行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，而且在此基礎(chǔ)上區(qū)分了懷孕早期的hCG濃度范圍。