本實(shí)用新型涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)。

背景技術(shù)：

免疫側(cè)向?qū)游鲈\斷技術(shù)作為一種穩(wěn)定和實(shí)用的技術(shù)適合在多樣的即時(shí)檢驗(yàn)(POCT)或者現(xiàn)場(chǎng)使用。按標(biāo)記部分分為主要有膠體金免疫側(cè)向?qū)游龇?、普通熒光免疫?cè)向?qū)游龇?、時(shí)間分辨熒光免疫側(cè)向?qū)游龇ā⑸限D(zhuǎn)發(fā)光免疫側(cè)向?qū)游龇?、量子點(diǎn)熒光免疫側(cè)向?qū)游龇ǖ龋窗徊糠种饕邢跛崂w維素膜、復(fù)合材料(fusion5)、微流控等。

隨著免疫層析技術(shù)(immunochromatography)和膠體金技術(shù)的發(fā)展，尤其是90年代后，膠體金免疫側(cè)向?qū)游龇?Gold immunochromatography assay,GICA)在體外診斷疾病檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用。不過現(xiàn)在進(jìn)行定量檢測(cè)，對(duì)項(xiàng)目精密度及重復(fù)性要求越來(lái)越高，經(jīng)過許多年的發(fā)展，最近各類熒光免疫側(cè)向?qū)游龇椒▽映霾桓F。已成為主流先進(jìn)技術(shù)被許多公司推崇。

然而，現(xiàn)有的免疫側(cè)向?qū)游龇ㄒ话愣紝?biāo)記物浸泡或噴在專門的標(biāo)記物墊內(nèi)或上，這樣做的缺點(diǎn)如下：組分眾多，影響產(chǎn)品的爬水和標(biāo)記物的釋放；由于組分眾多，生產(chǎn)起來(lái)麻煩，費(fèi)人工，間接提高了產(chǎn)品的成本，社會(huì)資源的極大浪費(fèi)。還有些將標(biāo)記物放到熒光槍頭內(nèi)，此方法操作要求高，導(dǎo)致不簡(jiǎn)便。標(biāo)記物用量大，導(dǎo)致生產(chǎn)成本高昂。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型的目的在于提供一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)，本實(shí)用新型的檢測(cè)系統(tǒng)通過將標(biāo)記物設(shè)置在硝酸纖維素膜上來(lái)減少檢測(cè)系統(tǒng)的組分，從而提高檢測(cè)系統(tǒng)的爬水性能，降低操作難度和生產(chǎn)成本。

本實(shí)用新型的目的是通過如下方式實(shí)現(xiàn)的：

一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)，包括：

底板，其包括近樣品端和遠(yuǎn)樣品端；所述的底板上由近樣品端到遠(yuǎn)樣品端依次連接地設(shè)置有樣品墊，硝酸纖維素膜和吸水墊；所述的硝酸纖維素膜上設(shè)置有標(biāo)記物帶，所述的標(biāo)記物帶和吸水墊之間設(shè)置有檢測(cè)帶和質(zhì)控帶。

進(jìn)一步的，所述的標(biāo)記物帶上含有標(biāo)記物，所述的標(biāo)記物為乳膠熒光、時(shí)間分辨熒光、上轉(zhuǎn)移發(fā)光、量子點(diǎn)熒光、熒光染料或膠體金。

進(jìn)一步的，所述的檢測(cè)帶上含有檢測(cè)抗體，所述的檢測(cè)抗體為C反應(yīng)蛋白檢測(cè)抗體。

進(jìn)一步的，所述的質(zhì)控帶上含有對(duì)照抗體，所述的對(duì)照抗體為羊抗雞IgY。

進(jìn)一步的，所述的檢測(cè)系統(tǒng)的長(zhǎng)度為6-8cm，寬度為3-6mm。

另一方面，本實(shí)用新型還提供了一種免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)的制備方法，包括如下步驟：

(1)將第一檢測(cè)抗體或抗原包被到硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)帶，將第一對(duì)照試劑包被到硝酸纖維素膜上作為質(zhì)控帶；

(2)用膜處理液將所述的硝酸纖維素膜進(jìn)行封閉處理；

(3)制備標(biāo)記試劑：將第二抗體或抗原、第二對(duì)照試劑進(jìn)行標(biāo)記得到所述的標(biāo)記試劑；

(4)制備標(biāo)記物帶：將所述的標(biāo)記試劑涂覆在所述的硝酸纖維素膜上形成標(biāo)記物帶；

(5)制備樣品墊和吸水墊；

(6)組裝：將所述的樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次連接地固定在底板上并裁成所需尺寸即得所述的檢測(cè)系統(tǒng)，所述的標(biāo)記物帶距樣品墊的距離小于所述的檢測(cè)帶和質(zhì)控帶距樣品墊的距離。

進(jìn)一步的，所述的封閉處理方法具體包括如下步驟：膜處理液A浸泡所述的硝酸纖維素膜50-70min，然后再用膜處理液B浸泡10-30min后干燥；

其中，所述的膜處理液A中碳酸緩沖液的摩爾濃度為10-100mMol/l，牛血清蛋白的質(zhì)量百分含量為0.01-2.0％，表面活性劑的質(zhì)量百分含量為0.1-2.0％；

所述的膜處理液B中磷酸緩沖液的摩爾濃度為10-100mMol/l，蔗糖的質(zhì)量百分含量為0.1-1.0％，表面活性劑的質(zhì)量百分含量為1-20％。

這里碳酸緩沖液的摩爾濃度指碳酸氫鈉和碳酸鈉的摩爾濃度；磷酸緩沖液濃度指磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉和氯化鈉的摩爾濃度。

進(jìn)一步的，所述的封閉處理具體包括如下步驟：用質(zhì)量百分比為1-10％牛血清白蛋白噴膜處理硝酸纖維素膜上，干燥。

進(jìn)一步的，所述的步驟(3)中標(biāo)記采用的標(biāo)記物為乳膠熒光、時(shí)間分辨熒光、上轉(zhuǎn)移發(fā)光、量子點(diǎn)熒光、熒光染料或膠體金。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型方案至少具有如下優(yōu)點(diǎn)：

本實(shí)用新型申請(qǐng)的方案將標(biāo)記物直接標(biāo)記在硝酸纖維素膜上，其減少了檢測(cè)系統(tǒng)的組成，有利于樣品的爬水，提高檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確性。

組分的減少也可以減少生產(chǎn)工序，提高生產(chǎn)效率，從而降低檢測(cè)系統(tǒng)的生產(chǎn)成本。

標(biāo)記物在硝酸纖維素膜上，有利于樣品爬水的同時(shí)也有利于標(biāo)記物的釋放，這樣使檢測(cè)效果更加明顯、準(zhǔn)確。

本實(shí)用新型方法對(duì)硝酸纖維素膜進(jìn)行了封閉處理，改變了硝酸纖維素膜的疏水性，實(shí)現(xiàn)了將標(biāo)記物包被到硝酸纖維素膜上，而現(xiàn)有的都是直接采用硝酸纖維素膜，那將標(biāo)記物包被到硝酸纖維素膜上會(huì)使標(biāo)記物結(jié)合在硝酸纖維素膜上，無(wú)法釋放。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)中現(xiàn)有的免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本實(shí)用新型免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)中一種免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

為方便本領(lǐng)域技術(shù)人員理解本實(shí)用新型技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖及較佳實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案作進(jìn)一步闡述，應(yīng)當(dāng)理解，較佳實(shí)施例是為了方便本方案的理解，并不作為本實(shí)用新型的限定。

現(xiàn)有的免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)都是將標(biāo)記物以單獨(dú)的組分存在(標(biāo)記物墊或熒光槍頭等形式)，圖1為現(xiàn)有的免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖(以標(biāo)記物墊為例)，如圖1所示，現(xiàn)有的免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)包括底板1，底板1上由近樣品端到遠(yuǎn)樣品端依次設(shè)置有樣品墊2、標(biāo)記物墊7、硝酸纖維素膜3和吸水墊4，硝酸纖維素膜3上設(shè)置有檢測(cè)帶5和質(zhì)控帶6；本實(shí)用新型方案將標(biāo)記物包被到硝酸纖維素膜上，減少了組分；現(xiàn)有的硝酸纖維素膜如果直接將標(biāo)記物標(biāo)記到上面標(biāo)記效果很差，影響檢測(cè)結(jié)果，分析其原因是硝酸纖維素膜具有疏水性，因此本方案對(duì)硝酸纖維素膜進(jìn)行了封閉處理，改變了其疏水性，從而可以將標(biāo)記物包被到硝酸纖維素膜上，減少了生產(chǎn)成本，節(jié)約了人力物力。下面對(duì)本實(shí)用新型方案進(jìn)行詳細(xì)闡述。

圖2為本實(shí)用新型免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖，如圖2所示，一種免疫側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)系統(tǒng)，包括：

底板1，其包括近樣品端和遠(yuǎn)樣品端；所述的底板上由近樣品端到遠(yuǎn)樣品端依次連接地設(shè)置有樣品墊2，硝酸纖維素膜3和吸水墊4；所述的硝酸纖維素膜上設(shè)置有標(biāo)記物帶8，所述的標(biāo)記物帶8和吸水墊4之間設(shè)置有檢測(cè)帶5和質(zhì)控帶6；硝酸纖維素膜3的疏水性是其和抗體等蛋白質(zhì)結(jié)合的基礎(chǔ)，同時(shí)也會(huì)對(duì)標(biāo)記物帶8的釋放起到阻礙作用，本實(shí)用新型對(duì)所述的硝酸纖維素膜3表面進(jìn)行了處理，改變其疏水性，達(dá)到將標(biāo)記物帶8放在所述的硝酸纖維素膜的目的。

以上方案已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)將標(biāo)記物包被到硝酸纖維素膜上達(dá)到降低檢測(cè)成本的目的，下面在此基礎(chǔ)上給出優(yōu)化方案：

作為優(yōu)選，所述的標(biāo)記物帶8上含有標(biāo)記物，所述的標(biāo)記物為乳膠熒光、時(shí)間分辨熒光、上轉(zhuǎn)移發(fā)光、量子點(diǎn)熒光、熒光染料或膠體金。

作為優(yōu)選，所述的檢測(cè)帶5上含有檢測(cè)抗體，所述的檢測(cè)抗體為C反應(yīng)蛋白檢測(cè)抗體。

作為優(yōu)選，所述的質(zhì)控帶6上含有對(duì)照抗體，所述的對(duì)照抗體為羊抗雞IgY。

作為優(yōu)選，所述的檢測(cè)系統(tǒng)的長(zhǎng)度為6-8cm，寬度為3-6mm。

實(shí)施例1

一種免疫側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)的制備方法，包括如下步驟：

(1)將CRP檢測(cè)抗體1用包被緩沖液稀釋成2.0mg/ml，另對(duì)照抗體1(羊抗雞IgY)也稀釋成2.0mg/ml，采用專門的包被設(shè)備將上述兩個(gè)液體包被到賽多利斯公司(Sartorius)的硝酸纖維素膜(NC)上分別形成檢測(cè)帶和質(zhì)控帶，37℃干燥箱干燥4小時(shí)。包被緩沖液為0.01Mol/l的磷酸緩沖液(PBs)加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％的蔗糖作為保護(hù)劑。

(2)將硝酸纖維素膜進(jìn)行封閉處理：用膜處理液A浸泡處理1小時(shí)，再用膜處理液B浸泡處理20分鐘，干燥。

其中，所述的膜處理液A包括如下組分：其中CB為摩爾濃度，其余為質(zhì)量百分比，具體配方如下：50mMol/l的CB，0.01％的BSA，0.4％的S3(上海捷寧)；

膜處理液B為其中PBs為摩爾濃度，其余為質(zhì)量百分比，具體配方如下：10mMol/l的PBs，0.32％的蔗糖，4％的CNB5000(上海捷寧)；

縮寫：S3：表面活性劑的一種；CNB5000：表面活性劑的一種；BSA：牛血清白蛋白；CB：碳酸緩沖液，含碳酸氫鈉和碳酸鈉；PBs：磷酸緩沖液，內(nèi)含磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉和氯化鈉；

(3)制備標(biāo)記試劑：CRP檢測(cè)抗體2用乳膠熒光標(biāo)記，對(duì)照抗體(雞IgY)也用乳膠熒光標(biāo)記，儲(chǔ)存在儲(chǔ)存液內(nèi)(其中Tris-cl為摩爾濃度，其余為質(zhì)量百分比，具體配方如下：50mMol/l Tris-cl，0.5％BSA，pH 7.8)備用。

(4)制備標(biāo)記物帶：將標(biāo)記物按5.0mg/ml配制后，用BIODOT XYZ3060噴膜設(shè)備將其噴在硝酸纖維素膜，干燥(蒸發(fā)、真空、凍干)形成標(biāo)記物帶。注意：標(biāo)記物帶、檢測(cè)帶和質(zhì)控帶的排列順序?yàn)轫樦鴺悠放浪较蛞来螢闃?biāo)記物帶、檢測(cè)帶和質(zhì)控帶。

(5)制備樣品墊：樣品墊用樣品處理液噴點(diǎn)在樣品墊，進(jìn)行預(yù)處理，干燥(蒸發(fā)、真空、凍干)備用。

處理液配方為：其中Tri-cl為摩爾濃度，其余為質(zhì)量百分比，具體配方如下50mMol/l的Tris-CL，0.5％的Casein，0.5％的BSA，0.1％的Tween-20，0.05％的PEG，0.1％的Tween-80，0.05％的PVP，0.3％的二水合檸檬酸酸鈉，2％的蔗糖。

縮寫：BSA：牛血清白蛋白，Casein：酪蛋白，Tris-CL：三羥甲基氨基甲烷鹽酸，PEG：聚乙二醇，Tween-20：吐溫20，Tween-80：吐溫80，PVP：聚乙烯吡咯烷酮

備好吸水墊。

(6)組裝：將所述的樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次連接地固定在底板上并裁成寬度為3-5mm即得所述的檢測(cè)系統(tǒng)，所述的標(biāo)記物帶、檢測(cè)帶和質(zhì)控帶由樣品墊到吸水墊方向依次排列。

將所述的檢測(cè)系統(tǒng)放到帶有觀察窗(用于采集檢測(cè)帶和質(zhì)控帶上的數(shù)據(jù))和加樣孔(用于滴加待測(cè)樣品)的卡塞中，通過加樣孔向樣品墊上加樣，樣品經(jīng)爬水經(jīng)過標(biāo)記物帶、檢測(cè)帶和質(zhì)控帶，經(jīng)觀察窗收集檢測(cè)帶和質(zhì)控帶上的數(shù)據(jù)并分析檢測(cè)結(jié)果。吸取5微升樣品，用生理鹽水作為稀釋液(1000微升)，反復(fù)吹打混勻，再加到卡塞加樣孔內(nèi)，標(biāo)記物含在硝酸纖維素膜上。由于樣品的加入，標(biāo)記物溶解、釋放，和樣品內(nèi)被測(cè)物反應(yīng)。由于毛細(xì)血管作用向前側(cè)向?qū)游觯?分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。

表1

由表1可以看出，本方法標(biāo)記物用量少于原先方法3倍時(shí)，在CRP項(xiàng)目上檢測(cè)線和質(zhì)控線的熒光值都大于原先方法，所以標(biāo)記物用量節(jié)省很多。本方法樣本稀釋倍數(shù)100倍，原先方法300倍。

本實(shí)用新型未盡之處，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)現(xiàn)有知識(shí)根據(jù)需要進(jìn)行選擇，比如，根據(jù)需要可以選擇標(biāo)記物為乳膠熒光、時(shí)間分辨熒光、上轉(zhuǎn)移發(fā)光、量子點(diǎn)熒光、熒光染料或膠體金；比如標(biāo)檢測(cè)帶和質(zhì)控帶的先后順序等等。

以上所述，僅為本實(shí)用新型的具體實(shí)施方式，但本實(shí)用新型的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本實(shí)用新型揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本實(shí)用新型的保護(hù)范圍應(yīng)以所述權(quán)利要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。