本發(fā)明屬于生物檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種模塊化生物樣本分析芯片。
背景技術(shù)：
：進(jìn)入21世紀(jì)，生物芯片技術(shù)迎來(lái)了高速的發(fā)展，自動(dòng)打印或光引導(dǎo)化學(xué)合成技術(shù)在硅片、玻璃、凝膠或尼龍膜等材料上制造的微陣列生物分子芯片，實(shí)現(xiàn)對(duì)化合物、蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞或其它生物組分的檢測(cè)已經(jīng)廣泛報(bào)道。目前的生物芯片的制備技術(shù)主要是將蛋白等分子偶聯(lián)或包被于基板上進(jìn)行檢測(cè)，專利200710134477.9公開了一種共價(jià)偶聯(lián)包被的芯片，專利US20040009528A1公開了一種帶有巰基的共價(jià)包被的芯片，而這些方法都是直接包被于芯片的基片上，而在檢測(cè)過(guò)程抗體的包被量一般都通過(guò)點(diǎn)樣機(jī)把待偶聯(lián)的分子配置成溶液，點(diǎn)樣在芯片上進(jìn)行包被，專利01105795.5公開了一種利用高速點(diǎn)樣方法制備生物芯片的方法，但是利用點(diǎn)樣的方法對(duì)機(jī)器的要求極高，即使最好的機(jī)器也會(huì)有故障或者加樣失敗的情況，而且這種情況很難檢測(cè)，同時(shí)每個(gè)液滴與基板之間都是一個(gè)獨(dú)立的偶聯(lián)反應(yīng)體系，專利200510013108.5公開了利用光刻技術(shù)對(duì)基板進(jìn)行加工，保留有效的反應(yīng)面積對(duì)技術(shù)進(jìn)行了一定的改進(jìn)，但是仍然解決不了點(diǎn)樣精度和反應(yīng)體系獨(dú)立的問(wèn)題，理論上每個(gè)點(diǎn)樣點(diǎn)都是一個(gè)包被體系，這從原理上限制了生物芯片在定量檢測(cè)的應(yīng)用潛力，這也是生物芯片目前的主要應(yīng)用痛點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明實(shí)施例提供一種模塊化生物樣本分析芯片。本發(fā)明改變傳統(tǒng)的點(diǎn)樣思路，發(fā)明了一種模塊化高精度分析芯片，旨在解決目前生物樣本分析芯片對(duì)點(diǎn)樣機(jī)器要求高、點(diǎn)樣精度不高和反應(yīng)體系不夠獨(dú)立的問(wèn)題。本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種模塊化生物樣本分析芯片，包括親水表面的基板材料、分析模塊；所述的親水表面的基板材料用于支撐、固定和集成分析模塊；所述分析模塊組裝于基板材料上；所述的分析模塊表面上包被有捕獲分子；所述分析模塊表面和組裝分析模塊后的基板材料表面至少包含一種封閉組分，所述的閉組分用于避免蛋白或其他生物及有機(jī)分子的非特異性吸附；所述的分析模塊為包被完成后組裝于基板材料上。本發(fā)明中的親水性基板可以為基板材料本身親水或疏水材料改性后親水或經(jīng)過(guò)試劑或封閉劑處理變?yōu)橛H水性質(zhì)，親水性質(zhì)和封閉兩個(gè)過(guò)程均可降低非特異性結(jié)合和干擾。所述的基板材料為金屬材料、玻璃材料、硅材料或高分子塑料材料的基板材料中的一種。所述親水表面為基板材料本身親水、疏水材料改性后親水或經(jīng)過(guò)封閉劑處理變?yōu)橛H水性質(zhì)的親水表面。所述的捕獲分子用于捕獲生物樣品中的待分析物質(zhì)，所述捕獲分子為自蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、有機(jī)小分子、多糖或抗體類生物分子。所述的分析模塊選自于表面具有羧基、氨基、氯甲基、環(huán)氧烷基、生物素、醛基或巰基修飾的具備偶聯(lián)生物分子能力的材料；具備偶聯(lián)生物分子能力的金屬材料；以及表面具備生物分子吸附能力的聚苯乙烯、尼龍或醋酸纖維素材料中的一種。所述的封閉分子為牛血清白蛋白、吐溫、脫脂奶粉、酪蛋白、氨基酸或木糖醇類具有疏水結(jié)合特性的生物或有機(jī)分子。所述的模塊化生物樣本分析芯片進(jìn)一步作為模塊組裝在更大的基板上組成新的芯片。所述的模塊化生物樣本分析芯片，還包括用于內(nèi)參的參比模塊，參比模塊直接標(biāo)記有待測(cè)物或待測(cè)物的類似物，用于對(duì)芯片和對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行參比。一種應(yīng)用上述模塊化生物樣本分析芯片的生物樣本分析方法，包括以下步驟：(1)將捕獲分子包被于具備吸附能力或共價(jià)偶聯(lián)能力的材料A上或?qū)⒉牧锨懈畛尚〉哪K進(jìn)行包被；(2)將切割好的材料A或?qū)⒉牧螦進(jìn)行切割后組裝于基板材料B上，或?qū)⒉牧螦組裝于基板B上進(jìn)行切割，形成分析芯片C，分析芯片C可進(jìn)一步切割產(chǎn)生多個(gè)芯片或由多個(gè)分析芯片C進(jìn)一步組裝在基板上形成的新的分析芯片；(3)分析芯片C用含有封閉組分的試劑進(jìn)行封閉；(4)將分析芯片C于待檢測(cè)分子物接觸；(5)清洗分析芯片C；(6)分析芯片C與含帶有標(biāo)記的分子試劑接觸；(7)如果步驟(6)的標(biāo)記分子為熒光分子或量子點(diǎn)則通過(guò)光源激發(fā)，用信號(hào)采集裝置進(jìn)行檢測(cè)；如果步驟(6)的標(biāo)記分子為酶類或直接發(fā)光分子，分析芯片進(jìn)一步與反應(yīng)試劑接觸形成發(fā)光信號(hào)利用信號(hào)采集裝置進(jìn)行檢測(cè)。所述的信號(hào)采集裝置可以選自CCD(電耦合元件)、PMT(光電倍增管)，PD(光電管)，優(yōu)選CCD。一種試劑盒，包括(1)上述的模塊化生物樣本分析芯片；(2)清洗用試劑；(3)含有標(biāo)記的與被檢物有結(jié)合能力組分的試劑。(4)如果(3)中的標(biāo)記為酶類或直接發(fā)光分子，則試劑盒進(jìn)一步包括一種發(fā)光反應(yīng)試劑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明改變傳統(tǒng)的點(diǎn)樣思路，發(fā)明了一種模塊化高精度分析芯片，旨在解決目前生物樣本分析芯片對(duì)點(diǎn)樣機(jī)器要求高、點(diǎn)樣精度不高和反應(yīng)體系不夠獨(dú)立的問(wèn)題。本發(fā)明的模塊化生物樣本分析芯片包含基板材料用于支撐、固定和集成分析模塊，基板上集成有分析模塊，分析模塊表面上可包被有蛋白、核酸、多肽等生物分子或有機(jī)分子作為捕獲分子；分析芯片表面進(jìn)一步至少包含一種封閉組分，用于避免蛋白或其他生物及有機(jī)分子的非特異性吸附，親水性基板可以為基板材料本身親水或疏水材料改性后親水或經(jīng)過(guò)試劑或封閉劑處理變?yōu)橛H水性質(zhì)，親水性質(zhì)和封閉兩個(gè)過(guò)程均可降低非特異性結(jié)合和干擾。附圖說(shuō)明圖1是模塊化生物樣本分析芯片的包被、切割、組裝、封閉過(guò)程示例圖，其中(a)先包被再切割組裝，(b)先切割再包被組裝，(c)組裝的過(guò)程中進(jìn)行切割,(d)組裝后進(jìn)行切割再組裝。圖2是模塊化生物樣本分析芯片的示意圖。圖3是分析模塊與基板材料的組裝示意圖；其中圖(a)為分析模塊組裝至有凹陷的基板上；圖(b)利用蓋板覆蓋調(diào)整分析模塊表面與基板表面齊平。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例1本發(fā)明提供了一種模塊化生物樣本分析芯片，包括親水表面的基板材料、分析模塊；所述的親水表面的基板材料用于支撐、固定和集成分析模塊；所述分析模塊組裝于基板材料上；所述的分析模塊表面上包被有捕獲分子；所述分析模塊表面和組裝分析模塊后的基板材料表面至少包含一種封閉組分，所述的閉組分用于避免蛋白或其他生物及有機(jī)分子的非特異性吸附；所述的分析模塊為包被完成后組裝于基板材料上。本發(fā)明中的親水性基板可以為基板材料本身親水或疏水材料改性后親水或經(jīng)過(guò)試劑或封閉劑處理變?yōu)橛H水性質(zhì)，親水性質(zhì)和封閉兩個(gè)過(guò)程均可降低非特異性結(jié)合和干擾。所述的基板材料為金屬材料、玻璃材料、硅材料或高分子塑料材料的基板材料中的一種。所述親水表面為基板材料本身親水、疏水材料改性后親水或經(jīng)過(guò)封閉劑處理變?yōu)橛H水性質(zhì)的親水表面。所述的捕獲分子用于捕獲生物樣品中的待分析物質(zhì)，所述捕獲分子為自蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、有機(jī)小分子、多糖或抗體類生物分子。所述的分析模塊選自于表面具有羧基、氨基、氯甲基、環(huán)氧烷基、生物素、醛基或巰基修飾的具備偶聯(lián)生物分子能力的材料；具備偶聯(lián)生物分子能力的金屬材料；以及表面具備生物分子吸附能力的聚苯乙烯、尼龍或醋酸纖維素材料中的一種。所述的封閉分子為牛血清白蛋白、吐溫、脫脂奶粉、酪蛋白、氨基酸或木糖醇類具有疏水結(jié)合特性的生物或有機(jī)分子。所述的模塊化生物樣本分析芯片進(jìn)一步作為模塊組裝在更大的基板上組成新的芯片。所述的模塊化生物樣本分析芯片，還包括用于內(nèi)參的參比模塊，參比模塊直接標(biāo)記有待測(cè)物或待測(cè)物的類似物，用于對(duì)芯片和對(duì)檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行參比。一種應(yīng)用上述模塊化生物樣本分析芯片的生物樣本分析方法，包括以下步驟：(1)將捕獲分子包被于具備吸附能力或共價(jià)偶聯(lián)能力的材料A上或?qū)⒉牧锨懈畛尚〉哪K進(jìn)行包被；(2)將切割好的材料A或?qū)⒉牧螦進(jìn)行切割后組裝于基板材料B上，或?qū)⒉牧螦組裝于基板B上進(jìn)行切割，形成分析芯片C，分析芯片C可進(jìn)一步切割產(chǎn)生多個(gè)芯片或由多個(gè)分析芯片C進(jìn)一步組裝在基板上形成的新的分析芯片；(3)分析芯片C用含有封閉組分的試劑進(jìn)行封閉；(4)將分析芯片C于待檢測(cè)分子物接觸；(5)清洗分析芯片C；(6)分析芯片C與含帶有標(biāo)記的分子試劑接觸；(7)如果步驟(6)的標(biāo)記分子為熒光分子或量子點(diǎn)則通過(guò)光源激發(fā)，用信號(hào)采集裝置進(jìn)行檢測(cè)；如果步驟(6)的標(biāo)記分子為酶類或直接發(fā)光分子，分析芯片進(jìn)一步與反應(yīng)試劑接觸形成發(fā)光信號(hào)利用信號(hào)采集裝置進(jìn)行檢測(cè)。所述的信號(hào)采集裝置可以選自CCD(電耦合元件)、PMT(光電倍增管)，PD(光電管)，優(yōu)選CCD。一種試劑盒，包括(1)上述的模塊化生物樣本分析芯片；(2)清洗用試劑；(3)含有標(biāo)記的與被檢物有結(jié)合能力組分的試劑。(4)如果(3)中的標(biāo)記為酶類或直接發(fā)光分子，則試劑盒進(jìn)一步包括一種發(fā)光反應(yīng)試劑。一種模塊化生物樣本分析芯片的制備方法，具體步驟如下：首先將捕獲分子包被于具備吸附能力或共價(jià)偶聯(lián)能力的材料上，該材料可以用相對(duì)較大的面積，包被之后將材料進(jìn)行切割組裝于基板材料之上形成分析芯片，分析芯片可以進(jìn)一步切割產(chǎn)生多個(gè)芯片模塊或多個(gè)切割后進(jìn)一步組裝與基板上(包括但不限于圖1中(d)所示的組裝過(guò)程)；或包被之前進(jìn)行切割，然后進(jìn)行包被，包被后組裝于基板之上；或包被之后于基板組裝后進(jìn)一步切割；包括但不限于圖1中(a)，(b)，(c)，(d)所示的芯片制作過(guò)程。如圖2所示本發(fā)明的模塊化芯片由基板、分析模塊組裝而成，基板材料包括但不限于金屬、玻璃、尼龍、硅、高分子塑料等具備支撐性的材料，基板上可以組裝多個(gè)分析模塊，亦可組裝多個(gè)由分析模塊和基板組成為單位的多個(gè)模塊如圖1中(d)所示，分析模塊表面包被有生物分子，生物分子包括但不限于蛋白、抗體、多肽、氨基酸、糖類、酶類、核酸等生物分子及有機(jī)分子，芯片表面進(jìn)一步包含一種封閉分子，封閉分子用于封閉芯片表面的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，封閉分子包括不限于BSA，氨基酸，糖，牛奶，酪蛋白，表面活性劑，聚乙二醇、糖醇等具有疏水結(jié)合特性的生物分子和有機(jī)分子，不同的芯片的分析模塊由同一個(gè)反應(yīng)條件生成，基板可以制作成凹陷結(jié)構(gòu)將芯片置于其上并保持表面的平整如圖3所示。本發(fā)明發(fā)明的生物樣本的分析方法：(1)將捕獲分子包被于具備吸附能力或共價(jià)偶聯(lián)能力的材料A上或?qū)⒉牧锨懈畛尚〉哪K進(jìn)行包被；(2)將切割好的材料A或?qū)⒉牧螦進(jìn)行切割后組裝于基板材料B上，或?qū)⒉牧螦組裝于基板B上進(jìn)行切割，形成分析芯片C，分析芯片C可進(jìn)一步切割產(chǎn)生多分析芯片，切割后的芯片C可以進(jìn)一步組裝在基板上形成的新的分析芯片；(2)分析芯片C用含有封閉組分的試劑進(jìn)行封閉；(3)將分析芯片C于待檢測(cè)分子物接觸；(4)清洗分析芯片C；(5)分析芯片C與含帶有標(biāo)記的分子試劑接觸；(6)如果步驟6的標(biāo)記分子為熒光分子或量子點(diǎn)則利用光源激發(fā)，使用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；(7)如果步驟6的標(biāo)記分子為酶類或直接發(fā)光分子，分析芯片進(jìn)一步與反應(yīng)試劑接觸形成發(fā)光信號(hào)利用發(fā)光信號(hào)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；分析芯片的封閉可以為基板和分析模塊單獨(dú)封閉后組裝在一起，亦可分析模塊和基板組裝在一起后進(jìn)行封閉，標(biāo)記的分子包括但不限于熒光分子、量子點(diǎn)、可催化底物發(fā)光的酶、可以直接通過(guò)反應(yīng)觸發(fā)發(fā)光的分子。在分析信號(hào)的檢測(cè)過(guò)程，本發(fā)明的方法中，如果標(biāo)記分子的標(biāo)記物為熒光分子或量子點(diǎn)則需要利用光源進(jìn)行激發(fā)，再利用信號(hào)采集的CCD或PMT或PD(光電管)進(jìn)行信號(hào)采集，如果標(biāo)記的分子為可觸發(fā)化學(xué)發(fā)光的分子，則先進(jìn)行發(fā)光的觸發(fā)反應(yīng)，例如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記需要與魯米諾底物試劑進(jìn)行反應(yīng)來(lái)觸發(fā)化學(xué)發(fā)光信號(hào)，本發(fā)明的芯片基板亦可集成有電極電路用于對(duì)芯片上反應(yīng)產(chǎn)生電信號(hào)的檢測(cè)。本發(fā)明的芯片可以制作一種試劑盒，試劑盒中包含芯片，該芯片上包括了基板和集成的分析模塊，分析模塊包被有捕獲分子，芯片上含有封閉分子可以有效的降低非特異性的結(jié)合，試劑盒中包含清洗用試劑，清洗用試劑至少包含一種緩沖鹽和一種防腐組分用于清洗芯片的非特異性結(jié)合分子和發(fā)光的底物分子，試劑盒中包含標(biāo)記試劑，該試劑中的標(biāo)記分子可以與被捕獲分子結(jié)合，捕獲分子、被捕獲分子、標(biāo)記分子形成復(fù)合體。如果標(biāo)記分子為熒光分子或量子點(diǎn)分子直接可以通過(guò)光學(xué)激發(fā)和CCD或PMT或PD(光電管)進(jìn)行的檢測(cè)。如果標(biāo)記分子的標(biāo)記物為酶類，如辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶則試劑盒進(jìn)一步包含一種底物試劑，底物試劑中含有發(fā)光底物，如果標(biāo)記分子的標(biāo)記物為直接發(fā)光分子，如吖啶酯、吖啶磺酰胺、吖啶酰氨或其類似物，則底物試劑中含有反應(yīng)試劑與直接發(fā)光分子反應(yīng)形成發(fā)光信號(hào)，通過(guò)CCD或PMT進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。應(yīng)用實(shí)施例：試劑1:Tris10mL0.01M/L；HCL0.0003N/L；調(diào)節(jié)pHto8.5,0.22μm過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾試劑2:咪唑2.72g/L；吐溫0.2mL/l；NaCL8.76g/L；pHto8.5，0.22μm,過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾試劑3:0.58g/LNa2HPO4,0.05g/LKCl,0.05g/LK3PO4,2.0g/LNaCl，BSA10g/L，TWEEN4mL/l；pH7.4.,0.22μm過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾試劑4:MabPCT16B5Cat.#4PC47hytest1mg/mL疊氮鈉0.1％試劑5:MabPCT42Cat.#4C10hytest2mg/mL疊氮鈉0.1％試劑6：PCT重組蛋白Cat.#8PC550ng/mL疊氮鈉0.1％試劑7:MabCRPC2Cat.#4C28hytest1mg/mL疊氮鈉0.1％試劑8：MabCRPC6Cat.#4C28hytest2mg/mL疊氮鈉0.1％試劑9CRP抗源Cat.#8C72hytest20ug/mL疊氮鈉0.1％試劑10HNO30.15M；H2O20.7％，Triton-1000.25％；NaOH0.125M；試劑119-(4-氯苯基硫代苯酰氧亞甲基)-10-甲基-9,10-二氫化吖啶-二鈉鹽100mg/L，N，N二甲基吖啶硝酸鹽，1.0mg/L十二烷基硫酸鈉，0.8g/L亞硫酸鈉，5mg/LTWEEN-20，0.31g/L0.26mol/L的Tris緩沖體系PH9.10。應(yīng)用實(shí)施例1取100mmX100mmX1mm的聚苯乙烯塑料板用試劑1清洗烘干，放置于平皿中，將試劑4蛋白濃度稀釋至20ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4℃度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱PCT分析模塊)；取100mmX100mmX1mm的聚苯乙烯塑料板用試劑1清洗烘干，放置于平皿中，將試劑7蛋白濃度稀釋至15ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱CRP分析模塊)；切割玻璃板成1cmX3cmx2mm小塊作為基板；每個(gè)基板上粘附PCT分析模塊和CRP分析模塊，形成分析芯片；分析芯片放置如平皿中注入試劑3進(jìn)行封閉，室溫3小時(shí)取出；取試劑580ul加入600ul試劑1，然后加入150ul的0.5mmol/l吖啶酯,混合，室溫避光20分鐘，加入賴氨酸，180ul試劑1，放置30分鐘，得到吖啶酯標(biāo)記。PCT-標(biāo)記試劑，取試劑870ul加入600ul試劑1，然后加入150ul的0.5mmol/l吖啶酯,混合，室溫避光20分鐘，加入賴氨酸，180ul試劑1，放置30分鐘，得到吖啶酯標(biāo)記。CRP-標(biāo)記試劑；將PCT-標(biāo)記試劑和CRP標(biāo)記試劑按照1：1比例進(jìn)行混合，獲得PCT-CRP標(biāo)記試劑；將試劑6稀釋PCT濃度，試劑9稀釋配置：標(biāo)準(zhǔn)溶液1：PCT0.1ng/mLCRP0.5ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液2：PCT0.5ng/mLCRP1ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液3：PCT1ng/mLCRP2ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液4：PCT10ng/mLCRP10ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液5：PCT30ng/mLCRP20ug/mL；測(cè)試流程如下，用分析芯片浸沒(méi)于標(biāo)準(zhǔn)溶液中(作為樣品)，室溫孵育5分鐘，用試劑2清洗芯片兩次，再將分析芯片浸沒(méi)于PCT-CRP標(biāo)記試劑中孵育5分鐘，用清洗試劑2清洗芯片兩次，將芯片置于試劑10中同時(shí)進(jìn)行CCD檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試劑檢測(cè)建立發(fā)光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線后，用試劑6和試劑9加入血清中，通過(guò)稱重法配置獲得，樣本1：CRP2ug/MLPCT0.5ng/mL，樣本2：CRP5ug/MLPCT5ng/mL，樣本3：CRP10ug/MLPCT30ng/mL，重復(fù)上述流程用分析芯片對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果如表1所示：表1CRP(ug/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本122.102.102.042.102.201.902.202.204.86％2.11樣本255.155.155.155.154.854.854.855.153.08％5.04樣本31010.8010.409.409.609.609.809.9010.404.92％9.99PCT(ng/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本10.50.510.480.520.520.530.560.530.485.45％0.51樣本255.155.155.155.005.154.905.155.805.16％5.18樣本33030.9029.1029.1030.9029.1029.1029.1029.102.82％29.55應(yīng)用實(shí)施例2環(huán)氧烷基修飾芯片(telecheminternationalCAT：SME225X76mm)用試劑1進(jìn)行清洗，放置于平皿中，將試劑4蛋白濃度稀釋至20ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱PCT分析模塊)；環(huán)氧烷基修飾芯片(telecheminternationalCAT：SME225X76mm)用試劑1進(jìn)行清洗，放置于平皿中，將試劑7蛋白濃度稀釋至15ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱PCT分析模塊)；切割玻璃板成1cmX3cmx2mm小塊作為基板；每個(gè)基板上粘附PCT分析模塊和CRP分析模塊，形成分析芯片；取試劑5，300uL，加入14uLSulfo-NHS-LC-BiotinylationKit(THERMO)，37℃孵育39分鐘，加入超濾管中，12000Xg離心10分鐘，移液器混勻再離心10分鐘，加入0.3mL標(biāo)記緩沖液6000Xg離心10分鐘。收集離心管中的溶液，補(bǔ)充標(biāo)記緩沖液至0.5mL，加入0.4mL鏈霉親和素標(biāo)記堿性磷酸酶(THERMOAPStreptavidin434322)室溫孵育30分鐘。將交聯(lián)物過(guò)Sephadexg200進(jìn)行純化，獲得PCT-標(biāo)記試劑。取試劑8，500uL，加入14uLSulfo-NHS-LC-BiotinylationKit(THERMO)，37℃孵育39分鐘，加入超濾管中，12000Xg離心10分鐘，移液器混勻再離心10分鐘，加入0.3mL標(biāo)記緩沖液6000Xg離心10分鐘。收集離心管中的溶液，補(bǔ)充標(biāo)記緩沖液至0.5mL，加入0.6mL鏈霉親和素標(biāo)記堿性磷酸酶(THERMOAPStreptavidin434322)室溫孵育30分鐘。將交聯(lián)物過(guò)Sephadexg200進(jìn)行純化，獲得CRP-標(biāo)記試劑。將PCT標(biāo)記試劑與CRP標(biāo)記試劑1∶1按比例進(jìn)行混合；分析芯片放置如平皿中注入試劑3進(jìn)行封閉，室溫3小時(shí)取出；將試劑6稀釋PCT濃度，試劑9稀釋配置：標(biāo)準(zhǔn)溶液1：CRP0.5ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液2：PCT0.5ng/mLCRP1ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液3：PCT1ng/mLCRP2ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液4：PCT10ng/mLCRP10ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液5：PCT30ng/mLCRP20ug/mL：測(cè)試流程如下，用分析芯片浸沒(méi)于標(biāo)準(zhǔn)溶液中(作為樣品)，室溫孵育5分鐘，用試劑2清洗芯片兩次，再將分析芯片浸沒(méi)于PCT-CRP標(biāo)記試劑中孵育5分鐘，用清洗試劑2清洗芯片兩次，將芯片置于試劑11中同時(shí)進(jìn)行CCD檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試劑檢測(cè)建立發(fā)光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線后，用試劑6和試劑9加入血清中，通過(guò)稱重法配置獲得，樣本1：CRP2ug/MLPCT0.5ng/mL，樣本2：CRP5ug/mLPCT5ng/mL，樣本3：CRP10ug/MLPCT30ng/mL，重復(fù)上述流程用分析芯片對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果如表2所示：表2CRP(ug/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本121.921.921.922.082.082.082.081.924.28％2.00樣本254.855.154.855.154.854.854.855.153.13％4.96樣本31010.259.759.759.759.7510.259.759.752.34％9.88PCT(ng/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本10.50.530.480.480.530.530.480.530.485.35％0.50樣本255.154.855.155.155.155.155.154.852.74％5.08樣本33030.8130.8130.8130.8130.8129.1929.1929.192.78％30.20應(yīng)用實(shí)施例3環(huán)氧烷基修飾芯片(telecheminternationalCAT：SME225X76mm)用試劑1進(jìn)行清洗，放置于平皿中，將試劑4蛋白濃度稀釋至20ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱PCT分析模塊)；環(huán)氧烷基修飾芯片(telecheminternationalCAT：SME225X76mm)用試劑1進(jìn)行清洗，放置于平皿中，將試劑7蛋白濃度稀釋至10ug/mL，加入平皿中浸沒(méi)聚苯乙烯板，室溫2小時(shí)，4度過(guò)夜；用試劑對(duì)平板進(jìn)行清洗，并于潔凈條件下晾干。激光精密切割5mmX5mm的小塊(以下簡(jiǎn)稱PCT分析模塊)；切割玻璃板成1cmX3cmx2mm小塊作為基板；每個(gè)基板上粘附PCT分析模塊和CRP分析模塊，形成分析芯片；分析芯片放置如平皿中注入試劑3進(jìn)行封閉，室溫3小時(shí)取出；將帶有羧基的熒光乳膠微球粒徑100nm，激發(fā)波長(zhǎng)480nm用pH6.0，50mMMES緩沖液進(jìn)行清洗，稀釋濃度為0.01mg/mL，取2mL，加入EDC(5mg/mL)200uL，混勻加入sulfo-NHS(2mg/ML)200uL，反應(yīng)活化反應(yīng)0.5小時(shí)，試劑5加入80uL室溫反應(yīng)2小時(shí)，加入0.01g/mL的乙二胺500uL，反應(yīng)1小時(shí)，離心用緩沖液清洗加入試劑3清洗兩遍，加入緩沖液試劑3，10mL，獲得PCT-微球標(biāo)記試劑。將帶有羧基的熒光乳膠微球粒徑100nm，激發(fā)波長(zhǎng)480nm用pH6.0，50mMMES緩沖液進(jìn)行清洗，稀釋濃度為0.01mg/mL，取2mL，加入EDC(5mg/mL)200uL，混勻加入sulfo-NHS(2mg/ML)200uL，反應(yīng)活化反應(yīng)0.5小時(shí)，試劑8加入60uL室溫反應(yīng)2小時(shí)，加入0.01g/mL的乙二胺500uL，反應(yīng)1小時(shí)，離心用緩沖液清洗加入試劑3清洗兩遍，加入緩沖液試劑3，10mL，獲得CRP微球標(biāo)記試劑。將PCT-微球標(biāo)記涉及與CRP微球標(biāo)記試劑進(jìn)行混合獲得PCT-CRP微球標(biāo)記試劑；將試劑6稀釋PCT濃度，試劑9稀釋配置；標(biāo)準(zhǔn)溶液1：CRP0.5ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液2：PCT0.5ng/mLCRP1ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液3：PCT1ng/mLCRP2ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液4：PCT10ng/mLCRP10ug/mL；標(biāo)準(zhǔn)溶液5：PCT30ng/mLCRP20ug/mL；測(cè)試流程如下，用分析芯片浸沒(méi)于標(biāo)準(zhǔn)溶液中(作為樣品)，室溫孵育5分鐘，用試劑2清洗芯片兩次，再將分析芯片浸沒(méi)于PCT-CRP標(biāo)記試劑中孵育5分鐘，用清洗試劑2清洗芯片兩次，用激光激發(fā)，同時(shí)利用PMT檢測(cè)熒光信號(hào)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試劑檢測(cè)建立發(fā)光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線后，用試劑6和試劑9加入血清中，通過(guò)稱重法配置獲得，樣本1：CRP2ug/MLPCT0.5ng/mL，樣本2：CRP5ug/MLPCT5ng/mL，樣本3：CRP10ug/MLPCT30ng/mL，重復(fù)上述流程用分析芯片對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果如表3：表3cRP(ug/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本121.862.102.102.141.901.861.861.866.55％1.96樣本255.305.305.205.305.104.705.305.104.705.16樣本3109.409.4010.6010.609.4010.5010.509.406.17％9.98PcT(ng/ml)配置濃度芯片1芯片2芯片3芯片4芯片5芯片6芯片7芯片8CV均值樣本10.50.460.460.460.490.470.540.460.465.95％0.48樣本254.654.654.655.354.655.354.654.656.72％4.83樣本33032.1027.9027.9027.9027.9032.1032.1027.907.37％29.48以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3