本發(fā)明涉及鰻魚檢測領域，具體涉及一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法。
背景技術：
：：磺胺類藥物是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物的總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。因其具有抗菌譜廣、抗球蟲和價廉易得等特點，至今仍在獸醫(yī)臨床和畜牧業(yè)中廣泛應用?；前奉愃幬锸菄以试S限量使用的一類抗菌藥物，可被飼料生產(chǎn)者采用。目前，國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《NY5070無公害食品水產(chǎn)品中魚藥殘留限量》中規(guī)定，磺胺類藥物在水產(chǎn)品組織中的最高殘留總量為0.1mg/kg。該藥在體內(nèi)的代謝時間較長，當達到一定濃度時就會對人體的機能產(chǎn)生損害，破壞人的造血系統(tǒng)，造成溶血性貧血，磺胺二甲基嘧啶等還存在潛在的致癌性。因此，為保護消費者的健康安全，建立靈敏、準確、快速的水產(chǎn)品中磺胺類藥物的檢測方法是十分緊迫的。目前磺胺類藥物的檢測方法主要包括免疫學方法、微生物學法、高效液相色譜法、氣相色譜法、液質聯(lián)用法、薄層色譜法和毛細管電泳法等。我國農(nóng)業(yè)部頒布的檢測方法有“動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測方法-高效液相色譜法”、“動物性食品中磺胺二甲嘧啶檢測方法-高效液相色譜法”。這些方法優(yōu)缺點各異：微生物學法檢測速度較快，但檢測靈敏度和特異性較差；薄層色譜法靈敏度、選擇性較好，但重復性不夠好；毛細管電泳最大的不足是其進樣量小，限制了靈敏度、無法測定μg/kg級或更低濃度的殘留量。液質聯(lián)用儀雖然檢測靈敏度和分辨率很高，但一般實驗室很難配置這樣的儀器，為了解決上述技術問題，特提出一種新的技術方案。技術實現(xiàn)要素：：本發(fā)明的目的是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的不足之處，而提供一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法。本發(fā)明采用的技術方案為：一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：步驟一、篩選：從鰻魚養(yǎng)殖池中隨機抽取3-5條鰻魚，并將鰻魚進行宰殺，將宰殺后的鰻魚進行清洗，清洗結束后放置到托盤上，待檢測使用；步驟二、取樣：將步驟一種清洗完畢的鰻魚頭利用刀具從待檢測鰻魚肉上切下，切下部分放置到電子稱上進行稱重，稱取重量為3-6g的樣品；步驟三、將步驟二中取樣放置到離心管中，向濃縮瓶中加入5-20g的無水硫酸鈉，再向濃縮瓶中加入10-30ml的乙腈，并放置到均質機中均質2-4min；步驟四、將均質好的樣品放置到離心機內(nèi)部，開啟離心機開關進行離心，離心機的轉速為4000rpm/5min；步驟五、待離心結束后，取上層液并將上層液放置到分液漏斗內(nèi)部；步驟六、重復上述步驟三、步驟四及步驟五一次，得到新的溶液；步驟七、向步驟六中所得到的溶液中加入20-40ml的乙腈飽和正已烷溶液，然后通過震蕩機進行震蕩3-5min，震蕩結束后將濃縮瓶靜置3-5min，將溶液進行分層，取濃縮瓶中下層溶液；步驟八、將步驟七中獲取的溶液放置到蒸餾裝置中，對溶液進行減壓濃縮至干，其中水溫控制在35-40度；步驟九、向步驟八所得到的溶液中加入1-4ml的甲醇水溶液，并將加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超聲波震蕩機中，利用超聲波震蕩機進行溶解洗脫，待震蕩結束后將溶液放置到濃縮瓶中；步驟十、向步驟九中所得到的溶液中加入0.5-2ml的乙腈飽和正已烷溶液，并將其振搖混合，將混合后的溶液放入到4-6ml的離心管中，再次振搖混合；步驟十一、將步驟十所得到的溶液放置到離心機中，利用離心機進行凈化離心4-6min，離心機的轉速為16000rpm/min，待離心結束后取下層溶液，并將下層溶液通過0.22μm微孔過濾膜進行過濾；步驟十二、將步驟十一中過濾后的溶液放置到HPLC/MS機上進行分析，最后得到檢測的數(shù)據(jù)。本發(fā)明的有益效果為：采用液-液萃取的經(jīng)典樣品處理方法結合固相萃取對樣品進行預處理，可以有效減少魚肉組織中雜質的含量和基質干擾；同時采用乙腈飽和正己烷溶液代替二氯甲烷，減少了實驗過程中有機溶劑對操作者和環(huán)境的污染，使對鰻魚肉內(nèi)部磺胺類藥物檢測更加準確，同時此檢測方法檢測步驟少還能節(jié)約檢測時間使工作效率大大的提高。具體實施方式：結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步說明：實施例一：一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法，該方法包括以下步驟：步驟一、篩選：從鰻魚養(yǎng)殖池中隨機抽取3-5條鰻魚，并將鰻魚進行宰殺，將宰殺后的鰻魚進行清洗，清洗結束后放置到托盤上，待檢測使用；步驟二、取樣：將步驟一種清洗完畢的鰻魚頭利用刀具從待檢測鰻魚肉上切下，切下部分放置到電子稱上進行稱重，稱取重量為3g的樣品；步驟三、將步驟二中取樣放置到離心管中，向濃縮瓶中加入5g的無水硫酸鈉，再向濃縮瓶中加入10ml的乙腈，并放置到均質機中均質2min；步驟四、將均質好的樣品放置到離心機內(nèi)部，開啟離心機開關進行離心，離心機的轉速為4000rpm/5min；步驟五、待離心結束后，取上層液并將上層液放置到分液漏斗內(nèi)部；步驟六、重復上述步驟三、步驟四及步驟五一次，得到新的溶液；步驟七、向步驟六中所得到的溶液中加入20ml的乙腈飽和正已烷溶液，然后通過震蕩機進行震蕩3min，震蕩結束后將濃縮瓶靜置3min，將溶液進行分層，取濃縮瓶中下層溶液；步驟八、將步驟七中獲取的溶液放置到蒸餾裝置中，對溶液進行減壓濃縮至干，其中水溫控制在35度；步驟九、向步驟八所得到的溶液中加入1ml的甲醇水溶液，并將加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超聲波震蕩機中，利用超聲波震蕩機進行溶解洗脫，待震蕩結束后將溶液放置到濃縮瓶中；步驟十、向步驟九中所得到的溶液中加入0.5ml的乙腈飽和正已烷溶液，并將其振搖混合，將混合后的溶液放入到4ml的離心管中，再次振搖混合；步驟十一、將步驟十所得到的溶液放置到離心機中，利用離心機進行凈化離心4min，離心機的轉速為16000rpm/min，待離心結束后取下層溶液，并將下層溶液通過0.22μm微孔過濾膜進行過濾；步驟十二、將步驟十一中過濾后的溶液放置到HPLC/MS機上進行分析，最后得到檢測的數(shù)據(jù)。實施例二：一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法，該方法包括以下步驟：步驟一、篩選：從鰻魚養(yǎng)殖池中隨機抽取3-5條鰻魚，并將鰻魚進行宰殺，將宰殺后的鰻魚進行清洗，清洗結束后放置到托盤上，待檢測使用；步驟二、取樣：將步驟一種清洗完畢的鰻魚頭利用刀具從待檢測鰻魚肉上切下，切下部分放置到電子稱上進行稱重，稱取重量為5g的樣品；步驟三、將步驟二中取樣放置到離心管中，向濃縮瓶中加入10g的無水硫酸鈉，再向濃縮瓶中加入20ml的乙腈，并放置到均質機中均質3min；步驟四、將均質好的樣品放置到離心機內(nèi)部，開啟離心機開關進行離心，離心機的轉速為4000rpm/5min；步驟五、待離心結束后，取上層液并將上層液放置到分液漏斗內(nèi)部；步驟六、重復上述步驟三、步驟四及步驟五一次，得到新的溶液；步驟七、向步驟六中所得到的溶液中加入30ml的乙腈飽和正已烷溶液，然后通過震蕩機進行震蕩4min，震蕩結束后將濃縮瓶靜置4min，將溶液進行分層，取濃縮瓶中下層溶液；步驟八、將步驟七中獲取的溶液放置到蒸餾裝置中，對溶液進行減壓濃縮至干，其中水溫控制在38度；步驟九、向步驟八所得到的溶液中加入3ml的甲醇水溶液，并將加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超聲波震蕩機中，利用超聲波震蕩機進行溶解洗脫，待震蕩結束后將溶液放置到濃縮瓶中；步驟十、向步驟九中所得到的溶液中加入1ml的乙腈飽和正已烷溶液，并將其振搖混合，將混合后的溶液放入到5ml的離心管中，再次振搖混合；步驟十一、將步驟十所得到的溶液放置到離心機中，利用離心機進行凈化離心4-6min，離心機的轉速為16000rpm/min，待離心結束后取下層溶液，并將下層溶液通過0.22μm微孔過濾膜進行過濾；步驟十二、將步驟十一中過濾后的溶液放置到HPLC/MS機上進行分析，最后得到檢測的數(shù)據(jù)。實施例三：一種鰻魚肉中磺胺類藥物的檢測方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：步驟一、篩選：從鰻魚養(yǎng)殖池中隨機抽取3-5條鰻魚，并將鰻魚進行宰殺，將宰殺后的鰻魚進行清洗，清洗結束后放置到托盤上，待檢測使用；步驟二、取樣：將步驟一種清洗完畢的鰻魚頭利用刀具從待檢測鰻魚肉上切下，切下部分放置到電子稱上進行稱重，稱取重量為6g的樣品；步驟三、將步驟二中取樣放置到離心管中，向濃縮瓶中加入20g的無水硫酸鈉，再向濃縮瓶中加入30ml的乙腈，并放置到均質機中均質4min；步驟四、將均質好的樣品放置到離心機內(nèi)部，開啟離心機開關進行離心，離心機的轉速為4000rpm/5min；步驟五、待離心結束后，取上層液并將上層液放置到分液漏斗內(nèi)部；步驟六、重復上述步驟三、步驟四及步驟五一次，得到新的溶液；步驟七、向步驟六中所得到的溶液中加入40ml的乙腈飽和正已烷溶液，然后通過震蕩機進行震蕩5min，震蕩結束后將濃縮瓶靜置5min，將溶液進行分層，取濃縮瓶中下層溶液；步驟八、將步驟七中獲取的溶液放置到蒸餾裝置中，對溶液進行減壓濃縮至干，其中水溫控制在40度；步驟九、向步驟八所得到的溶液中加入4ml的甲醇水溶液，并將加入甲醇水溶液的混合溶液放置到超聲波震蕩機中，利用超聲波震蕩機進行溶解洗脫，待震蕩結束后將溶液放置到濃縮瓶中；步驟十、向步驟九中所得到的溶液中加入2ml的乙腈飽和正已烷溶液，并將其振搖混合，將混合后的溶液放入到6ml的離心管中，再次振搖混合；步驟十一、將步驟十所得到的溶液放置到離心機中，利用離心機進行凈化離心6min，離心機的轉速為16000rpm/min，待離心結束后取下層溶液，并將下層溶液通過0.22μm微孔過濾膜進行過濾；步驟十二、將步驟十一中過濾后的溶液放置到HPLC/MS機上進行分析，最后得到檢測的數(shù)據(jù)。使用效果實驗：本研究連續(xù)檢測50次，考察該磺胺類藥物的檢測效果。檢測項目評分標準為：非常滿意5分，滿意4分，一般3分，不滿意2分，非常不滿意1分。其中普通組為利用常規(guī)方法檢測鰻魚肉內(nèi)部的磺胺類藥物；測試項目實施例一實施例二實施例三普通組磺胺嘧啶4.84.94.93.0磺胺間二甲氧嘧啶4.84.95.01.0磺胺喹噁啉4.74.94.83.0磺胺甲噁唑4.74.94.93.0綜上所述，本發(fā)明實施例二的數(shù)據(jù)最穩(wěn)定，故實施例二的數(shù)最符合本發(fā)明，本發(fā)明其不僅可以準確的檢測出鰻魚肉中磺胺類藥物，而且檢測的效率高，給使用者的工作效率得到提高，同樣給使用者帶來方便。對于本領域的技術人員來說，可根據(jù)以上技術方案以及構思，做出其他各種相應的改變以及變形，而所有的這些改變和變形都應該屬于本發(fā)明權利要求的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3