本發(fā)明涉及一種檢測(cè)試劑盒，具體涉及一種用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，屬于化學(xué)成份檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

由于人類對(duì)鉛的開采、冶煉和含鉛產(chǎn)品的廣泛使用，如油漆、涂料、印刷、電子產(chǎn)品、五金加工及蓄電池制造等活動(dòng)日益增多，工廠三廢的排放及汽車尾氣的排放，造成大量鉛塵和含鉛化合物進(jìn)入大氣、水和土壤，極易引起生活環(huán)境的污染。

鉛是一種重金屬元素，不能被生物降解，鉛塵或含鉛化合物在局部環(huán)境大量積累很容易被人類吸收直接引起鉛中毒事件。鉛塵或含鉛化合物在局部環(huán)境長(zhǎng)期蓄積，通過稻谷和小麥等農(nóng)作物、水產(chǎn)和禽畜等動(dòng)物的濃積，間接被人類所食,引起慢性蓄積和中毒。因此，積極檢測(cè)環(huán)境中尤其是水樣中鉛的存在，是人類防治環(huán)境鉛損傷的重要手段。

目前，檢測(cè)水樣中鉛的方法有：原子吸收法、微分電位溶出法、極譜法、氣相色譜法、分光光度法等。

這些方法雖靈敏、準(zhǔn)確，但普遍存在前處理繁瑣、所需儀器設(shè)備昂貴、檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)、檢測(cè)技術(shù)要求高等問題，很難將其應(yīng)用于食品、水樣、尿液等環(huán)境和生物樣品的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

一種用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，包括：鉛檢測(cè)試劑、鉛檢測(cè)試紙、鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡和耗材，分別獨(dú)立包裝，其中，

前述鉛檢測(cè)試劑包括：鹽酸洗脫液和氫氧化鈉中和液，其中，鹽酸洗脫液為O.1M鹽酸溶液，氫氧化鈉中和液為O.4M氫氧化鈉溶液；

前述鉛檢測(cè)試紙為：巰基雙硫腙試紙；

前述鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡為：10μl鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液在巰基雙硫腙試紙上顯色反應(yīng)后的彩色照片；

前述耗材包括：巰基吸附濾紙、水樣采集吸管、外盒、過濾洗脫支架、移液吸頭、廢液池和洗脫板，其中，過濾洗脫支架為安裝有2ml移液器吸頭的塑料托架，移液吸頭根據(jù)用途分為250μl鹽酸洗脫液吸頭、250μl氫氧化鈉中和液吸頭和10μl點(diǎn)樣吸頭。

前述的用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，前述巰基雙硫腙試紙的制備方法為：

將定量分析濾紙烘干，每100g烘干的定量分析濾紙浸入含300ml-400ml硫代乙醇酸、200ml-300ml醋酸酐、90ml-120ml濃度為36v/v％的乙酸、0.8ml-1.2ml濃硫酸和25ml-35ml去離子水的溶液中，于37℃-39℃電熱恒溫密閉干燥箱中放置96h，取出后用去離子水洗至中性，最后擠去水分并于37℃-39℃電熱恒溫干燥箱中烘干得到巰基吸附濾紙，將已烘干的巰基吸附濾紙浸入到濃度為0.5g/L的雙硫腙氯仿溶液中，浸泡1min-5min，取出后于陰涼干燥處晾干，黑塑料袋避光密封保存。

前述的用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，前述巰基吸附濾紙的制備方法為：

將定量分析濾紙烘干，每100g烘干的定量分析濾紙浸入含300ml-400ml硫代乙醇酸、200ml-300ml醋酸酐、90ml-120ml濃度為36v/v％的乙酸0.8ml-1.2ml濃硫酸和25ml-35ml去離子水的溶液中，于37℃-39℃電熱恒溫密閉干燥箱中放置96h，取出后用去離子水洗至中性，最后擠去水分并于37℃-39℃電熱恒溫干燥箱中烘干。

前述的用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，前述水樣采集吸管、250μl鹽酸洗脫液吸頭、250μl氫氧化鈉中和液吸頭、10μl點(diǎn)樣吸頭、洗脫板和過濾洗脫支架上的2ml移液器吸頭，在使用前都先用3％硝酸浸泡12h，然后用去離子水沖洗至中性，最后65℃控溫烘干。

前述的用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，在前述鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡上，紫藍(lán)色的顯色圓斑從小到大依次排列，對(duì)應(yīng)的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的鉛含量依次為1.0mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L、1.6mg/L、1.8mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L和5.0mg/L。

前述的用于水樣鉛現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，使用方法如下：

(1)將安裝在過濾吸附支架上的2ml移液器吸頭與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)應(yīng)并進(jìn)行編號(hào)，然后將巰基吸附濾紙折疊成錐形并插入安裝在過濾吸附支架上的2ml移液器吸頭內(nèi)，備用；

(2)以去離子水作為空白對(duì)照，從疑似鉛污染的多個(gè)水樣中依次取樣1ml滴注在對(duì)應(yīng)編號(hào)的巰基吸附濾紙內(nèi)，過濾完畢后移開廢液池，用濾紙吸干過濾吸附支架上的各2ml移液器吸頭下的殘液，在過濾吸附支架下安放洗脫板，使過濾吸附支架上的各2ml移液器吸頭尖與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)準(zhǔn)；

(3)用鹽酸洗脫液對(duì)巰基吸附濾紙進(jìn)行洗脫，每次滴淋100μl，共洗脫兩次；

(4)取出洗脫板，在反應(yīng)孔中加入氫氧化鈉中和液50μl進(jìn)行中和，振蕩搖勻；

(5)用微量移液器依次吸取各樣本10μl，滴在預(yù)先編號(hào)的巰基雙硫腙試紙上，觀察各樣本在巰基雙硫腙試紙上的展開和顯色反應(yīng)，最后將巰基雙硫腙試紙與鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡比色，據(jù)此判斷各水樣中鉛的含量，通過數(shù)碼攝影進(jìn)行資料留存。

本發(fā)明的有益之處在于：

(1)使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)水樣鉛時(shí)，可以大大簡(jiǎn)化操作過程，縮短檢測(cè)時(shí)間，能在30min內(nèi)完成檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了鉛的采樣現(xiàn)場(chǎng)快速定性測(cè)定，測(cè)定結(jié)果可作為初步判斷事件性質(zhì)的重要參考依據(jù)，尤其適用于污染水樣品和尿液中鉛的現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定；

(2)使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)水樣鉛時(shí)，不需要配備昂貴的設(shè)備和高技術(shù)人員，避免了人力和物力的浪費(fèi)；

(3)使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)水樣鉛時(shí)，檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性、可靠性均達(dá)到衛(wèi)生評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的要求，最低檢出限為1.0mg/L；

(4)試紙、耗材和試劑分別獨(dú)立包裝，方便攜帶，使用周期長(zhǎng)。

附圖說明

圖1是水樣采集吸管的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2是外盒的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3是過濾洗脫支架的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4是移液吸頭的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5是廢液池的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖6是洗脫板的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖7是制作得到的鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體的介紹。

一、巰基吸附濾紙

巰基吸附濾紙是經(jīng)巰基化處理的定量分析濾紙，用于過濾、吸附和洗脫水樣標(biāo)本。

巰基吸附濾紙的制備方法：

將定量分析濾紙烘干，每100g烘干的定量分析濾紙浸入含300ml(可適當(dāng)提高至400ml)硫代乙醇酸、200ml(可適當(dāng)提高至300ml)醋酸酐、90ml(可適當(dāng)提高至120ml)濃度為36v/v％的乙酸、0.8ml(可適當(dāng)提高至1.2ml)濃硫酸和25ml(可適當(dāng)提高至35ml)去離子水的溶液中，于37℃-39℃電熱恒溫密閉干燥箱中放置96h，取出后用去離子水洗至中性，最后擠去水分并于37℃-39℃電熱恒溫干燥箱中烘干。

二、鉛檢測(cè)試紙

鉛檢測(cè)試紙為巰基雙硫腙試紙。

巰基雙硫腙試紙的制備方法：

將上一步制備得到的已烘干的巰基吸附濾紙浸入到濃度為0.5g/L的雙硫腙氯仿溶液中，浸泡1min(可適當(dāng)延長(zhǎng)至5min)，取出后于陰涼干燥處晾干，黑塑料袋避光密封保存。

三、鉛檢測(cè)試劑

鉛檢測(cè)試劑包括：鹽酸洗脫液和氫氧化鈉中和液，二者分別裝于試劑瓶中。

鹽酸洗脫液為O.1M鹽酸溶液，采用常規(guī)方法制得。

氫氧化鈉中和液為O.4M氫氧化鈉溶液，采用常規(guī)方法制得。

四、其他耗材

水樣采集吸管：標(biāo)有0.5ml、1.0ml、1.5ml和2ml四個(gè)刻度的一次性醫(yī)用2ml塑料吸管，用于采集水樣，如圖1所示。

外盒：銅版紙制的盒體或者塑料材質(zhì)的盒體，用于放置過濾洗脫支架，如圖2所示。

過濾洗脫支架：安裝有2ml移液器吸頭的塑料托架，如圖3所示，其中，2ml移液器吸頭用于支撐巰基吸附濾紙完成水樣標(biāo)本的過濾、吸附和洗脫。

移液吸頭：一次性醫(yī)用移液器吸頭，如圖4所示，根據(jù)用途分為250μl鹽酸洗脫液吸頭、250μl氫氧化鈉中和液吸頭和10μl點(diǎn)樣吸頭。

廢液池：塑料方盒，可以放置在過濾洗脫支架下，用于收集過濾廢液，如圖5所示。

洗脫板：多孔塑料PCR反應(yīng)板，用于收集洗脫液，如圖6所示。

水樣采集吸管、250μl鹽酸洗脫液吸頭、250μl氫氧化鈉中和液吸頭、10μl點(diǎn)樣吸頭、洗脫板和過濾洗脫支架上的2ml移液器吸頭，在使用前都先用3％硝酸浸泡12h，然后用去離子水沖洗至中性，最后65℃控溫烘干。

五、鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡

鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡為10μl鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液在巰基雙硫腙試紙上顯色反應(yīng)后的彩色照片，如圖7所示。

鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作方法：

在安裝在過濾洗脫支架上的的多個(gè)2ml移液器吸頭內(nèi)插入錐形折疊的巰基吸附濾紙，并依次編號(hào)，將配制好的鉛濃度分別為0.4mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L、1.8mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L和5.0mg/L的醋酸鉛溶液各取1ml，分別滴注在已編號(hào)的巰基吸附濾紙內(nèi)，過濾后移開過濾洗脫支架下的廢液池，用濾紙吸干過濾洗脫支架上各移液器吸頭下的殘液，根據(jù)編號(hào)在各個(gè)移液器吸頭下安放洗脫板，務(wù)必使移液器吸頭尖對(duì)準(zhǔn)洗脫板的反應(yīng)孔，之后在各巰基吸附濾紙內(nèi)分兩次加入鹽酸洗脫液，每次加100μl，洗脫完畢后取出洗脫板，在每個(gè)反應(yīng)孔中加入氫氧化鈉中和液50μl，振蕩搖勻，然后依次吸取10μl滴在巰基雙硫腙試紙上，觀察各樣本在巰基雙硫腙試紙上的展開和顯色反應(yīng)，通過數(shù)碼攝影制作出鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡。

參照?qǐng)D7，在鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡上，紫藍(lán)色的顯色圓斑從小到大依次排列，對(duì)應(yīng)的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的鉛含量依次為1.0mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L、1.6mg/L、1.8mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L和5.0mg/L。

六、檢測(cè)原理

水樣中的鉛離子被巰基吸附濾紙吸附和濃集，經(jīng)少量鹽酸溶液洗脫和氫氧化鈉溶液中和后，極易在巰基雙硫腙試紙上顯色，鉛含量越多，紫藍(lán)色的顯色圓斑越大，通過顯色圓斑的面積或平均直徑即可初步判斷樣本中鉛的含量。

七、檢測(cè)方法

實(shí)施例1：多個(gè)污染水樣中重金屬鉛的快速檢測(cè)

將安裝在過濾吸附支架上的2ml移液器吸頭與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)應(yīng)并進(jìn)行編號(hào)，然后將巰基吸附濾紙折疊成錐形并插入安裝在過濾吸附支架上的2ml移液器吸頭內(nèi)，備用。

以去離子水作為空白對(duì)照，從疑似鉛污染的多個(gè)水樣中依次取樣1ml滴注在對(duì)應(yīng)編號(hào)的巰基吸附濾紙內(nèi)，過濾完畢后移開廢液池，用濾紙吸干過濾吸附支架上的各2ml移液器吸頭下的殘液，在過濾吸附支架下安放洗脫板，使過濾吸附支架上的各2ml移液器吸頭尖與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)準(zhǔn)。

之后用鹽酸洗脫液對(duì)巰基吸附濾紙進(jìn)行洗脫，每次滴淋100μl，共洗脫兩次。通過洗脫板與吸頭尖多次貼壁，確保各反應(yīng)管洗脫液收集完全。取出洗脫板，在反應(yīng)孔中加入氫氧化鈉中和液50μl進(jìn)行中和，振蕩搖勻，用微量移液器依次吸取各樣本10μl，滴在預(yù)先編號(hào)的巰基雙硫腙試紙上，觀察各樣本在巰基雙硫腙試紙上的展開和顯色反應(yīng)，最后將巰基雙硫腙試紙與鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡比色，據(jù)此判斷各水樣中鉛的含量，通過數(shù)碼攝影進(jìn)行資料留存。

整個(gè)檢測(cè)過程耗時(shí)28min。

實(shí)施例2：職業(yè)工人尿樣中鉛的檢測(cè)

將安裝在過濾吸附支架上的2ml移液器吸頭與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)應(yīng)并進(jìn)行編號(hào)，然后將巰基吸附濾紙折疊成錐形并插入安裝在過濾吸附支架的2ml移液器吸頭內(nèi)，備用。

以去離子水作為空白對(duì)照，從疑似鉛暴露的職業(yè)工人的尿樣中取樣1ml滴注在對(duì)應(yīng)編號(hào)的巰基吸附濾紙內(nèi)，過濾完畢后移開廢液池，用濾紙吸干過濾吸附支架上的各2ml移液器吸頭下的殘液，在過濾吸附支架下安放洗脫板，使2ml移液器吸頭尖與洗脫板上的反應(yīng)孔一一對(duì)準(zhǔn)。

之后用鹽酸洗脫液對(duì)巰基吸附濾紙進(jìn)行洗脫，每次滴淋100μl，共洗脫兩次。通過洗脫板與吸頭尖多次貼壁，確保各反應(yīng)管洗脫液收集完全。取出洗脫板，在反應(yīng)孔中加入氫氧化鈉中和液50μl進(jìn)行中和，振蕩搖勻，用微量移液器依次吸取各樣本10μl，滴在預(yù)先編號(hào)的巰基雙硫腙試紙上，觀察各樣本在巰基雙硫腙試紙上的展開和顯色反應(yīng)，最后將巰基雙硫腙試紙與鉛標(biāo)準(zhǔn)色卡比色，據(jù)此判斷各尿樣中鉛的含量，通過數(shù)碼攝影進(jìn)行資料留存。

整個(gè)檢測(cè)過程耗時(shí)27min。

由此可見，使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)水樣鉛時(shí)，能在30min內(nèi)完成檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了采樣現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)鉛含量。

八、檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)

取5個(gè)本發(fā)明的試劑盒，用這5個(gè)試劑盒分別對(duì)5個(gè)不同濃度的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品進(jìn)行測(cè)試，連續(xù)5天每天每個(gè)樣品用不同的試劑盒分別測(cè)定一次，記錄結(jié)果，分別計(jì)算測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確率及變異系數(shù)。

在鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品中分別加入不同濃度的鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、汞和鎘離子，觀察這些離子對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。

經(jīng)測(cè)試我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的試劑盒：

(1)靈敏度：大于95％，最低檢出限為1.0mg/L。

(2)穩(wěn)定性：在避光、密封、干燥的室溫環(huán)境下存放12個(gè)月，該試劑盒穩(wěn)定性良好。

(3)可靠性：測(cè)試樣品中的鉀、鈉、鈣、鎂、鐵離子對(duì)測(cè)試結(jié)果沒有影響；鋅、銅、汞和鎘離子會(huì)對(duì)測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，通過用氫氧化鈉中和液微調(diào)溶液的pH值在8.5-9.5范圍，即可提高鉛螯合效果，保證檢測(cè)的可靠性。

由此可見，使用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)水樣鉛時(shí)，檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性、可靠性均達(dá)到衛(wèi)生評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的要求，檢測(cè)結(jié)果可作為初步判斷事件性質(zhì)的重要參考依據(jù)，尤其適用于污染水樣品和尿液中鉛的現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定。

需要說明的是，上述實(shí)施例不以任何形式限制本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。