本發(fā)明屬于生物技術(shù)及臨床醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，涉及一種基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒的修飾纖維化紙傳感器的制備方法，主要用于對(duì)腫瘤標(biāo)志物-端粒酶的檢測(cè)，利用纖維化紙的毛細(xì)作用承載待測(cè)液進(jìn)行生物反應(yīng)，分別應(yīng)用功能化介導(dǎo)的亞甲基藍(lán)與上轉(zhuǎn)換納米粒子表征細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌癥腫瘤疾病的早期診斷。

背景技術(shù)：

端粒是一種特殊的核酸復(fù)合物，以其內(nèi)在rna為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄的方式，催化人類染色體3’端重復(fù)序列(ttaggg)n的生成，防止染色體dna的重組、融合、損失。端粒酶可以調(diào)控端粒的長(zhǎng)短，進(jìn)而控制細(xì)胞生命活動(dòng)。研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶的活性在人類正常體細(xì)胞內(nèi)受到抑制，而在絕大多數(shù)癌變細(xì)胞(85-90％)中被重新激活，從而賦予腫瘤細(xì)胞無限增殖的能力。由于細(xì)胞的癌變與發(fā)生、發(fā)展都與端粒酶活性有關(guān)，端粒酶已成為最常見的腫瘤標(biāo)志物之一，此外，端粒酶和端粒結(jié)構(gòu)在其他疾病、細(xì)胞的衰老、基因調(diào)控和哺乳動(dòng)物的克隆中也起到關(guān)鍵作用。因此，準(zhǔn)確而靈敏的端粒酶活性檢測(cè)技術(shù)的建立對(duì)于基于端粒酶的癌癥診斷與治療來說至關(guān)重要。

過去的幾十年里，許多端粒酶活性檢測(cè)技術(shù)建立了起來，其中最常用的檢測(cè)方式為基于聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)的端粒重復(fù)序列擴(kuò)增協(xié)議法(trap)。[參見：j.p.jakupciak，w.wang，p.e.barker，s.srivastava，d.h.atha.journalofmoleculardiagnostics.2004，6，157-165.]但是，此法存在許多缺點(diǎn)，包括昂貴的儀器與試劑、耗時(shí)費(fèi)力、聚合酶限制。[參見：g.krupp，k.kuhne，s.tamm，w.klapper，k.heidom，a.rott，r.parwaresch.nucleicacidsres.1997，25，919-921.]為了克服這些缺陷，眾多非pcr協(xié)議法發(fā)展起來，如光學(xué)傳感器法、表面等離子體共振法、熒光法、電化學(xué)發(fā)光法等。[參見：(a)p.m.schmidt，etal，biol.chem.2002，383，1659.(b)c.maesawa，etal.nucleicacidsres.2003，31.(c)c.ding，x.li，y.ge，s，zhang.anal.chem.2010，82，2850.(d)v.pavlov，etal.anal.chem.2004，76，2152.]近年來，改性金納米粒子傳感器和基于場(chǎng)效應(yīng)的硅納米線也被應(yīng)用于端粒酶檢測(cè)中。[參見：(a)y.xiao，k.y.dane，t.uzawa，a.csordas，j.qian，h.t.soh，p.s.daugherty，e.t.lagally，a.j.heeger，k.w.plaxco.j.am.chem.soc.2010，132，15299.(b)g.zhang，w.l.daniel，c.a.mirkin.j.am.chem.soc.2008，130，9644.(c)g.f.zheng，f.patolsky，y.cui，w.u.wang，c.m.lieber.nat.biotechnol.2005，23，1294.]盡管這些方法設(shè)計(jì)巧妙并且有些彌補(bǔ)了pcr技術(shù)的不足，但是這些新方法大多仍舊存在著檢測(cè)步驟繁多、需要復(fù)雜儀器設(shè)備以及費(fèi)時(shí)問題，更重要的是，這些研究大多集中于液相的反應(yīng)體系，通常是不穩(wěn)定的，并且在實(shí)驗(yàn)室外進(jìn)行也是不切實(shí)際的。因此，上述檢測(cè)方法不適用于針對(duì)嚴(yán)重疾病進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)醫(yī)療即時(shí)(poc)診斷。[參見：k.pardee，a.a.green，d.e.cameron，a.d.keyser，p.yin，j.j.collins.cell.2014，159，940-954.]

近年來，擴(kuò)增技術(shù)已被應(yīng)用至腫瘤細(xì)胞內(nèi)微核糖核酸原位成像的熒光增強(qiáng)中和藥物的腫瘤特異性交付中。[參見：(a)r.deng，l.tang，q.tian，y.wang，l.lin，j.li.angew.chem.int.ed.2014，53，2389-2393.(b)j.ge，l.zhang，s.liu，r.yu，x.chu.anal.chem.2014，86，1808-1815.(c)j.h.kim，m.jang，y.kim，h.j.ahn.j.med.chem.2015，58，7863-7873.]纖維化紙與液相體系相比具有良好的穩(wěn)定性、可視性與便捷性，適用于許多生物檢測(cè)，如電化學(xué)檢測(cè)、血糖監(jiān)測(cè)等。[參見：(a)r.f.carvalhal，m.s.kfouri，m.h.o.piazetta，a.l.gobbi，l.t.kubota.anal.chem.2010，82，1162-1165.(b)y.song，p.gyarmati，a.c.araujo，j.lundeberg，h.brnmer，p.l.stahl.anal.chem.2014，86，1575-1582.]

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)端粒酶的亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾纖維化紙傳感器，采用端粒延長(zhǎng)滾換擴(kuò)增技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)端粒酶活性的檢測(cè)。

采用的技術(shù)方案：

一種基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾的纖維化紙傳感器，所述的纖維化紙規(guī)格為15*15mm，厚度為0.54mm，通過兩片正中開有直徑5mm圓孔，15*15mm大小，厚度為2mm的亞克力板材進(jìn)行夾持固定成紙基板。

制備所述的纖維化紙傳感器，按以下步驟進(jìn)行：

(1)、纖維化紙的預(yù)處理：將纖維化紙裁剪成15*15mm大小，浸于100～200mlnaio4和licl混合溶液中，50～80℃水浴條件下加熱30～90分鐘，反應(yīng)完成后，用蒸餾水洗滌纖維化紙，30～60℃下干燥，得干燥后的纖維化紙。

(2)、纖維化紙基板的制備：將步驟(1)所制得的纖維化紙用兩片正中開有直徑3～7mm圓孔，15*15mm大小，厚度為2mm的亞克力板材進(jìn)行夾持固定成紙基板，將制成的紙基板于紫外線下滅菌30～90min。隨后進(jìn)行纖維化紙基板修飾。

所述的修飾纖維化紙傳感器的制備方法為：

在纖維化紙基板中央凹槽滴加10～40μl含氨基修飾的適配體(ts-nh2)3-8μm)和nacnbh3(20～80mm)的hepes緩沖液溶液，20～40℃下培育30～90分鐘，培育結(jié)束后，先后用pbs緩沖液和蒸餾水洗滌，凍干備用。適配體序列為：ts-nh2：5’-nh2(ch2)6ttttttaatccgtcgagcagagtt-3’；擴(kuò)增適配體(te)：5’-sh(ch2)6tt(ttaggg)9-3’；捕捉適配體(tc-nh2)：5’-ccctaaccctaaaaaa(ch2)3nh2-3’。

所述的基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾的纖維化紙傳感器檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物-端粒酶活性的方法步驟包括：

取5～10μl1×trap緩沖液，3～8μldntps(10mm)溶液，2～3μl核苷酸酶抑制劑(rnaseinhibitor)，10～40μl擴(kuò)增適配體te(3-8μm)和4～10μl細(xì)胞提取溶液于紙基板中央凹槽，在20～40℃條件下孵育60分鐘擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后先用ph8.0的tris-hcl輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，然后滴加10～30μl備好的tc-ucnps或tc-亞甲基藍(lán)溶液于紙基板凹槽中，在37℃條件下孵育20～60分鐘，后用trap緩沖溶液輕輕地充分洗滌，37℃下干燥，然后分別進(jìn)行上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度分析和顏色色度分析。

與現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)分析方法pcr-trap法以及相繼發(fā)展的非pcr技術(shù)的熒光法、電化學(xué)發(fā)光法等相比，本發(fā)明所提供的基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒的修飾纖維化紙傳感器具有以下優(yōu)點(diǎn)：

(1)、無需復(fù)雜的儀器設(shè)備，試劑用量少，檢測(cè)成本低。而pcr-trap法需要用到凝膠電泳、密度測(cè)定儀等儀器，一些非pcr技術(shù)如熒光法等需要昂貴的熒光染料，試劑價(jià)格昂貴。

(2)、檢測(cè)時(shí)間短，在2小時(shí)內(nèi)就可完成。而pcr-trap法需要27～72小時(shí)。

(3)、穩(wěn)定性好，可以長(zhǎng)時(shí)間保存，檢測(cè)結(jié)果肉眼可見。而pcr-trap法及其他眾多非pcr法均為液相檢測(cè)體系，不穩(wěn)定，難以長(zhǎng)時(shí)間保存。

在完成發(fā)明的過程中，選擇人hela宮頸癌細(xì)胞、鼠腸上皮細(xì)胞iec-18作為檢測(cè)目標(biāo)物，對(duì)所述的基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾纖維化紙傳感器進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果表明，制備得到的亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾纖維化紙傳感器對(duì)于hela宮頸癌細(xì)胞有陽(yáng)性結(jié)果顯示，而對(duì)于鼠腸上皮細(xì)胞iec-18陰性結(jié)果顯示，檢測(cè)癌細(xì)胞在0-100cells/μl范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r＝0.99)。

附圖說明

圖1為上轉(zhuǎn)換納米粒子ucnps的tem、hrtem圖；

圖2為上轉(zhuǎn)換納米粒子ucnps修飾捕捉適配體(te)后的紫外-吸收?qǐng)D及上轉(zhuǎn)換熒光圖；

圖3為基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾的纖維化紙傳感器對(duì)人hela宮頸癌細(xì)胞、鼠腸上皮細(xì)胞iec-18檢測(cè)結(jié)果圖；

圖4為基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾的纖維化紙傳感器對(duì)人hela宮頸癌細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果線性關(guān)系圖；

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

下面結(jié)合附圖，通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳述。

實(shí)施例1：修飾纖維化紙傳感器的制備

實(shí)驗(yàn)材料：普通纖維化濾紙，標(biāo)準(zhǔn)gb/t1914-2007，泰州金奧濾紙公司；無水氯化鋰(licl)，批號(hào)為f20130906，上海埃彼化學(xué)試劑有限公司；高碘酸鈉(naio4)，批號(hào)sb0875，生工生物工程(上海)股份有限公司；適配體序列為：ts-nh2：5’-nh2(ch2)6ttttttaatccgtcgagcagagtt-3’，生工生物工程(上海)股份有限公司。

實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備：kq-500de超聲波清洗器、dhg-9143bs電熱鼓風(fēng)干燥箱、ay120電子分析天平、tgl-16c離心機(jī)。

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)纖維化紙的預(yù)處理

在250ml燒杯中，將0.4glicl和1.0gnaio4充分溶解于200ml蒸餾水中，將纖維化紙裁剪成15*15mm大小浸泡于燒杯中，在60℃下水浴加熱60分鐘，取出紙片，用蒸餾水反復(fù)洗滌三次后，置于烘箱50℃下干燥，即得氧化、干燥的纖維化紙。

(2)纖維化紙傳感器基板的制備

將厚度為2mm的亞克力板材加工成15*15mm，中央開有孔徑為5mm圓孔的薄片，將一片步驟(1)所得氧化的纖維化紙放入兩片亞克力板材中固定，于紫外線下滅菌30分鐘，即得纖維化紙傳感器基板。

(3)纖維化紙傳感器基板的修飾

將20μl濃度為50mm，ph為8.0含有5μmts-nh2溶液和50mmnacnbh3溶液的hepes緩沖溶液，少量多次滴加于步驟(2)所得的纖維化紙基板中央凹槽中，然后在37℃下培育60分鐘，培育結(jié)束后，先用pbs緩沖溶液輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，凍干備用，即得修飾后的纖維化紙傳感器基板。

實(shí)施例2：端粒互補(bǔ)寡核苷酸(tc-nh2)修飾上轉(zhuǎn)換納米粒

實(shí)驗(yàn)材料：牛血清白蛋白，批號(hào)為140318，上海阿拉丁試劑有限公司；1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)，批號(hào)090m14531v，上海阿拉丁試劑有限公司；琥珀酰亞胺(nhs)，批號(hào)mkbg7914v，上海阿拉丁試劑有限公司；乙醇，批號(hào)為：14021710247，購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司。捕捉適配體序列為：tc-nh2：捕捉適配體(tc-nh2)：5’-ccctaaccctaaaaaa(ch2)3nh2-3’，生工生物工程(上海)股份有限公司。

實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備：kq-500de超聲波清洗器、dhg-9143bs電熱鼓風(fēng)干燥箱、ay120電子分析天平、tgl-16c離心機(jī)。

實(shí)驗(yàn)過程：將1ml濃度為1mg/ml的羧基化上轉(zhuǎn)換納米粒子(ucnps)用25mm，ph為6的mes緩沖溶液洗滌兩次后離心，取上清液，滴加100μl濃度為5mg/ml的edc溶液與100μl濃度為5mg/ml的nhs溶液，室溫下緩慢振搖60分鐘后，滴加78μl濃度為100μm的端粒互補(bǔ)寡核苷酸(捕捉適配體tc-nh2)，室溫下孵育18小時(shí)。孵育結(jié)束后，用50000分子量超濾管超濾，取上層用tris-hcl緩沖液稀釋后離心，重復(fù)兩次，棄液體，用含0.1％bsa的ph為7.4的pbs緩沖液洗滌三次，即得胺基化的端?；パa(bǔ)寡核苷酸修飾上轉(zhuǎn)換納米粒子溶液。進(jìn)行tem、hrtem以及紫外、熒光表征。如圖1，圖2所示。

實(shí)施例3：選擇人宮頸癌細(xì)胞(hela細(xì)胞)為研究目標(biāo)物，對(duì)所述的基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒修飾纖維化紙傳感器進(jìn)行測(cè)試

實(shí)驗(yàn)材料：乙醇，批號(hào)為：14021710247，購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司。hepes緩沖液，批號(hào)為：e607018，購(gòu)自上海生工生物試劑有限公司；5′-三磷酸腺苷二鈉鹽三水(atp)，批號(hào)為：a600020，購(gòu)自上海生工生物試劑有限公司；

實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備：kq-500de超聲波清洗器、dhg-9143bs電熱鼓風(fēng)干燥箱、ay120電子分析天平、tgl-16c離心機(jī)。

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)人宮頸癌細(xì)胞端粒酶的提取

取指數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌細(xì)胞于10ml離心管，用冰預(yù)冷的pbs緩沖液洗滌兩次，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，將1ml濃度為0cell/μl、20cell/μl、40cell/μl、60cell/μl、80cell/μl、100cell/μl的宮頸癌細(xì)胞pbs緩沖液分別裝于六支1.5ml離心管中，在4℃，10000g的條件下離心1分鐘，棄去上清液。在每支離心管中滴加200μl冰預(yù)冷的細(xì)胞端粒酶裂解液，在0℃，450轉(zhuǎn)/分鐘的條件下于自動(dòng)勻漿機(jī)中培育25分鐘后在4℃，16000g的條件下離心20分鐘，移取160μl上清液分裝于六支新的1.5ml離心管中立即使用或者在-80℃條件下凍存?zhèn)溆谩?/p>

(2)基于亞甲基藍(lán)的修飾纖維化紙傳感器對(duì)端粒酶活性的檢測(cè)

將5μl1×trap緩沖液(含20mm，ph8.3tris-hcl緩沖液，1.5mm氯化鎂溶液，63mm氯化鉀溶液，0.005％吐溫20，1mmegta溶液，0.1mg/mlbsa溶液)，5μl濃度為10mm的dntps溶液，20μl擴(kuò)增適配體te(5μm)，1μl核苷酸酶抑制劑，5μl步驟(1)六個(gè)不同濃度的樣品溶液分別滴加于6個(gè)所述的修飾纖維化紙基板中央凹槽，在37℃條件下孵育60分鐘，孵育結(jié)束后，先用20mmph8.0的tris-hcl緩沖液輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，37℃下干燥后，分別滴加20μl捕捉適配體(tc-亞甲基藍(lán))溶液于凹槽中，在37℃條件下孵育30分鐘，孵育結(jié)束后，用trap緩沖液輕輕地充分洗滌，37℃條件下干燥，用數(shù)碼相機(jī)拍攝6個(gè)紙基板中央凹槽的圖片，利用色度分析軟件進(jìn)行分析。

(3)基于上轉(zhuǎn)換納米粒的修飾纖維化紙基板對(duì)端粒酶活性的檢測(cè)

將5μl1×trap緩沖液(含20mm，ph8.3tris-hcl緩沖液，1.5mm氯化鎂溶液，63mm氯化鉀溶液，0.005％吐溫20，1mmegta溶液，0.1mg/mlbsa溶液)，5μl濃度為10mm的dntps溶液，1μl核苷酸酶抑制劑，20μl擴(kuò)增適配體te(5μm)和5μl步驟(1)六個(gè)不同濃度的樣品溶液分別滴加于6個(gè)所述的修飾纖維化紙基板中央凹槽，在37℃條件下孵育60分鐘，孵育結(jié)束后，先用20mm，ph8.0的tris-hcl緩沖液輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，37℃下干燥后，分別滴加20μl實(shí)施例2中的捕捉適配體(tc-上轉(zhuǎn)換納米粒)溶液于凹槽中，在37℃條件下孵育30分鐘，孵育結(jié)束后，用trap緩沖液輕輕地充分洗滌，37℃條件下干燥，用數(shù)碼相機(jī)拍攝下近紅外光照射中央凹槽處的熒光圖片，進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。

實(shí)施例4：選擇鼠腸上皮細(xì)胞iec-18細(xì)胞為研究目標(biāo)物，對(duì)所述的基于亞甲基藍(lán)、上轉(zhuǎn)換納米粒的修飾纖維化紙傳感器進(jìn)行測(cè)試

實(shí)驗(yàn)材料：乙醇，批號(hào)為：14021710247，購(gòu)自南京化學(xué)試劑有限公司。hepes緩沖液，批號(hào)為：e607018，購(gòu)自上海生工生物試劑有限公司；5′-三磷酸腺苷二鈉鹽三水(atp)，批號(hào)為：a600020，購(gòu)自上海生工生物試劑有限公司；

實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備：kq-500de超聲波清洗器、dhg-9143bs電熱鼓風(fēng)干燥箱、ay120電子分析天平、tgl-16c離心機(jī)。

實(shí)驗(yàn)過程：

(1)人宮頸癌細(xì)胞端粒酶的提取

取指數(shù)生長(zhǎng)期的鼠腸上皮細(xì)胞iec-18細(xì)胞于10ml離心管，用冰預(yù)冷的pbs緩沖液洗滌兩次，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，將1ml濃度為0cell/μl、20cell/μl、40cell/μl、60cell/μl、80cell/μl、100cell/μl的鼠腸上皮細(xì)胞iec-18細(xì)胞pbs緩沖液分別裝于六支1.5ml離心管中，在4℃，10000g的條件下離心1分鐘，棄去上清液。在每支離心管中滴加200μl冰預(yù)冷的細(xì)胞端粒酶裂解液，在0℃，450轉(zhuǎn)/分鐘的條件下于自動(dòng)勻漿機(jī)中培育25分鐘后在4℃，16000g的條件下離心20分鐘，移取160μl上清液分裝于六支新的1.5ml離心管中立即使用或者在-80℃條件下凍存?zhèn)溆谩?/p>

(2)基于亞甲基藍(lán)的修飾纖維化紙傳感器對(duì)端粒酶活性的檢測(cè)

將5μl1×trap緩沖液(含20mm，ph8.3tris-hcl緩沖液，1.5mm氯化鎂溶液，63mm氯化鉀溶液，0.005％吐溫20，1mmegta溶液，0.1mg/mlbsa溶液)，5μl濃度為10mm的dntps溶液，20μl擴(kuò)增適配體te(5μm)，1μl核苷酸酶抑制劑，5μl步驟(1)六個(gè)不同濃度的樣品溶液分別滴加于6個(gè)所述的修飾纖維化紙基板中央凹槽，在37℃條件下孵育60分鐘，孵育結(jié)束后，先用20mmph8.0的tris-hcl緩沖液輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，37℃下干燥后，分別滴加20μl捕捉適配體(tc-亞甲基藍(lán))溶液于凹槽中，在37℃條件下孵育30分鐘，孵育結(jié)束后，用trap緩沖液輕輕地充分洗滌，37℃條件下干燥，用數(shù)碼相機(jī)拍攝6個(gè)紙基板中央凹槽的圖片，利用色度分析軟件進(jìn)行分析。

(3)基于上轉(zhuǎn)換納米粒的修飾纖維化紙基板對(duì)端粒酶活性的檢測(cè)

將5μl1×trap緩沖液(含20mm，ph8.3tris-hcl緩沖液，1.5mm氯化鎂溶液，63mm氯化鉀溶液，0.005％吐溫20，1mmegta溶液，0.1mg/mlbsa溶液)，5μl濃度為10mm的dntps溶液，1μl核苷酸酶抑制劑，20μl擴(kuò)增適配體te(5μm)和5μl步驟(1)六個(gè)不同濃度的樣品溶液分別滴加于6個(gè)所述的修飾纖維化紙基板中央凹槽，在37℃條件下孵育60分鐘，孵育結(jié)束后，先用20mm，ph8.0的tris-hcl緩沖液輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，37℃下干燥后，分別滴加20μl實(shí)施例2中的捕捉適配體(tc-上轉(zhuǎn)換納米粒)溶液于凹槽中，在37℃條件下孵育30分鐘，孵育結(jié)束后，用trap緩沖液輕輕地充分洗滌，37℃條件下干燥，用數(shù)碼相機(jī)拍攝下近紅外光照射中央凹槽處的熒光圖片，進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果如圖3，圖4所示。

以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式，在所述領(lǐng)域普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替代和改進(jìn)等，其均應(yīng)在本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案范圍之內(nèi)。