本發(fā)明屬于煙草化學(xué)分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體提供一卷煙主流煙氣中殺菌劑截留量的高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：殺菌劑是用于防治由各種病原微生物引起的植物病害的一類農(nóng)藥，一般指殺真菌劑。但國(guó)際上，通常是作為防治各類病原微生物的藥劑的總稱。從控制作物病害的角度來(lái)說(shuō)，目前殺菌劑有著其他物質(zhì)無(wú)法替代的作用，殺菌劑的總體需求在持續(xù)增加，全球殺菌劑增長(zhǎng)速度達(dá)到近8％，三唑類殺菌劑仍將是主角。為了防止煙葉為病蟲害侵噬，保證煙葉產(chǎn)量，在煙葉的種植過(guò)程中也不可避免地使用了殺菌劑。目前，煙草中農(nóng)藥殘留的問(wèn)題已經(jīng)越來(lái)越引起煙草界和全社會(huì)的關(guān)注。煙草作為一種特殊的消費(fèi)品，是通過(guò)煙支燃燒形成煙氣后進(jìn)入人體消費(fèi)，在此過(guò)程煙絲中的農(nóng)藥殘留以一定的遷移率轉(zhuǎn)移到了煙氣中。因此，單純以煙葉中的農(nóng)藥殘留限量來(lái)判斷卷煙煙氣的農(nóng)藥殘留安全性是不準(zhǔn)確的，必須明確煙葉中農(nóng)藥殘留向主流煙氣中的遷移情況，才能更準(zhǔn)確評(píng)價(jià)卷煙煙氣農(nóng)藥殘留的安全性。因此，建立一種卷煙主流煙氣中殺菌劑遷移量的檢測(cè)方法，對(duì)研究卷煙抽吸過(guò)程中殺菌劑向主流煙氣中的遷移量和遷移率有著重要意義。目前，在煙草中使用的殺菌劑常見(jiàn)的測(cè)定方法有氣相色譜法、液相色譜法或者氣質(zhì)、氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器和質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法、氣相色譜火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)法、液質(zhì)聯(lián)用法等，但評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有待提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明采用劍橋?yàn)V片捕集煙氣粒相物，經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化，用超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定煙氣粒相物中殺菌劑的遷移量。經(jīng)文獻(xiàn)搜索，未發(fā)現(xiàn)與本
發(fā)明內(nèi)容相同文獻(xiàn)的公開(kāi)報(bào)道。本發(fā)明的目的在于提供一種卷煙主流煙氣總粒相物中殺菌劑遷移量的檢測(cè)方法，以研究煙葉中農(nóng)藥殘留向主流煙氣粒相物中的遷移情況。本發(fā)明的提供一種卷煙主流煙氣中殺菌劑截留量的高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)在吸煙機(jī)上對(duì)卷煙進(jìn)行抽吸，用劍橋?yàn)V片捕集主流煙氣總粒相物；(2)取下步驟(1)的劍橋?yàn)V片，將劍橋?yàn)V片剪碎后放入離心管中，加入乙腈和內(nèi)標(biāo)液，振蕩使至樣品浸潤(rùn)；(3)加入固相萃取試劑，振蕩后離心分離；(4)取步驟(3)離心后的上層清液至凈化離心管中，振蕩后離心分離；(5)取步驟(4)離心后的上層清液采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析；(6)步驟(5)所述高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜的條件為：色譜柱：c18液相色譜分析柱；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相組成為水和乙腈的梯度混合物、流速為200ul/min；掃描方式：正離子掃描；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；電噴霧電壓：5500v；霧化氣壓力：0.414mpa；離子源溫度：500℃。優(yōu)選地，步驟(2)所述的內(nèi)標(biāo)液為1ug/1000ml的丙草丹甲醇溶液。優(yōu)選地，步驟(2)、(3)和(4)所述振蕩的頻率2500r/min，時(shí)間為6min。優(yōu)選地，步驟(3)和(4)所述離心分離的轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心時(shí)間為10min。優(yōu)選地，步驟(3)所述固相萃取試劑為質(zhì)量比為2:1:8:2的檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、無(wú)水硫酸鎂和氯化鈉的混合物。優(yōu)選地，步驟(4)所述凈化離心管中含有質(zhì)量比為1:1:2的n-丙基乙二胺、石墨化碳和無(wú)水硫酸鎂混合物。優(yōu)選地，步驟(6)所述水和乙腈的梯度混合物為體積比90:10，50:50，50:50，40:60，20:80，5:95，5:98，90:10，90:10。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：用分散固相萃取凈化劍橋?yàn)V片上的總粒相物的提取液，采用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)煙氣總粒相物中殺菌劑遷移量的檢測(cè)。從而為考察不同卷煙在燃燒過(guò)程中殺菌劑向主流煙氣中的遷移量和遷移率打下基礎(chǔ)。評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性有所提高。附圖說(shuō)明無(wú)。具體實(shí)施方式：本發(fā)明的卷煙主流煙氣中殺菌劑截留量的高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，具體步驟如下：a.在吸煙機(jī)上裝上待測(cè)卷煙，按照gb/t16450-2004常規(guī)分析用吸煙機(jī)定義和標(biāo)準(zhǔn)條件，設(shè)置參數(shù)(抽吸容量：35ml，抽吸持續(xù)時(shí)間：2s，抽吸周期：60s)，共抽吸20支卷煙，用劍橋?yàn)V片捕集主流煙氣總粒相物；b.卷煙抽吸完畢后，取下捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片，并將其撕碎，放入50ml離心管中，加乙腈15ml，100ul內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙腈充分浸潤(rùn)；c.加入固相萃取試劑，固相萃取試劑為1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；2500r/min振蕩，6min充分混合后4000r/m離心10min；d.移取離心上清液2ml至凈化離心管(美國(guó)agilent公司產(chǎn)品)中,凈化離心管中含50mg的n-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂。2500r/min振蕩6min，然后4000r/m離心10min，取上清液1ml經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，之后采用超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析。e.高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜的條件為：色譜柱：c18液相色譜分析柱；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相組成為水和乙腈的梯度混合物、流速為200ul/min；掃描方式：正離子掃描；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；電噴霧電壓：5500v；霧化氣壓力：0.414mpa；離子源溫度：500℃。1、儀器與試劑watersacquityuplc超高效液相色譜儀(美國(guó)waters公司)，ab3200qtrap串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)absciex公司)，talboys多管旋渦混合儀(美國(guó)talboys公司)，millipore超純水機(jī)(美國(guó)millipore公司)，eppendorf5804臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)eppendorf公司)。乙腈、甲醇：色譜級(jí)，購(gòu)自美國(guó)tiade公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)丙草丹，用作內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，純度≥95％：購(gòu)自dr.ehrenstorfer公司；基質(zhì)分散固相萃取試劑盒：提取試劑包含1.0g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉、4.0g無(wú)水硫酸鎂、1.0g氯化鈉；凈化離心管含50mg的n-丙基乙二胺、50mg石墨化碳、100mg無(wú)水硫酸鎂購(gòu)自美國(guó)agilent公司。2.具體實(shí)驗(yàn)步驟將待測(cè)市售卷煙，在gb/t16447-2004規(guī)定的煙草及煙草制品調(diào)節(jié)和測(cè)試的大氣環(huán)境條件下平衡48h，經(jīng)分選后，用符合iso30008要求的吸煙機(jī)，在常規(guī)分析用吸煙機(jī)標(biāo)準(zhǔn)條件(1口/分鐘，2秒/口，35.0ml/口)下抽吸。卷煙抽吸完畢后，取下捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片，并將其撕碎至長(zhǎng)0.5cm，寬0.2cm，放入50ml離心管中，加乙腈30ml，100ul內(nèi)標(biāo)液，2500r/min振蕩6min至樣品被乙腈充分浸潤(rùn)、提取。用固相萃取試劑進(jìn)行凈化。加入固相萃取試劑充分混合(置于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min)，然后以4000r/min離心10min；移取離心上清液2ml至凈化離心管中,于漩渦混合振蕩儀上以2500r/min振蕩6min，然后以4000r/m離心10min，取上清液1ml經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，得到待檢測(cè)液。3、測(cè)定條件——色譜柱：c-sc18液相色譜分析柱(柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑2.1.imm，固定相粒徑3pμm)或相當(dāng)者；——柱溫：25℃；——進(jìn)樣量：10uμl；——流動(dòng)相組成、流速及梯度變化，見(jiàn)表1；——掃描方式：正離子掃描；——監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；——電噴霧電壓：5500v；——霧化氣壓力：0.414mpa；——離子源溫度：500℃；表1液相色譜流動(dòng)相組成、流速及梯度變化時(shí)間(min)流速(ul/min)水(％)乙腈(％)0.0020090101.0020050505.00200505016.00200406025.00200208030.0020059540.0020059840.01200901045.002009010標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到每個(gè)農(nóng)藥目標(biāo)化合物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比以及濃度之比，通過(guò)線性擬合檢查質(zhì)譜檢測(cè)器的響應(yīng)是否呈線性。當(dāng)相關(guān)系數(shù)r2≥0.99，可以采用單一水平的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。單一水平混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)使用中等濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制作。每次試驗(yàn)均應(yīng)制作混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，每進(jìn)樣10次后應(yīng)加入一個(gè)中等濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果測(cè)得值與原值相差超過(guò)10％，則應(yīng)重新進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作。樣品測(cè)定對(duì)試樣進(jìn)行分析，依據(jù)內(nèi)標(biāo)法由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到測(cè)定值。平行進(jìn)行兩次樣品測(cè)定，以兩次平行測(cè)定結(jié)果的平均值作為最終測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差應(yīng)小于10％。實(shí)施例1選取市售國(guó)內(nèi)卷煙樣品，按照上述測(cè)試方法進(jìn)行卷煙主流煙氣總粒相物中殺菌劑遷移量的測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。卷煙主流煙氣總粒相物中沒(méi)檢出甲基硫菌靈、多菌靈、霜霉威、菌核凈等殺菌劑殘留。其中：濾嘴的截留率(wt％)＝(濾嘴中截留量/卷煙抽吸前煙絲中殘留量)×100wt％。表1卷煙主流煙氣總粒相物中殺菌劑遷移量檢測(cè)結(jié)果注：表中/表示未檢出。實(shí)施例2由于市售卷煙主流煙氣總粒相物中沒(méi)檢出上述殺菌劑，采用外加注射不同濃度的殺菌劑(甲基硫菌靈、多菌靈和霜霉威)，分別注射1ug/20支、4ug/20支、20ug/20支和80ug/20支到煙支中，抽吸后按照上述測(cè)試方法對(duì)卷煙主流煙氣總粒相物中甲基硫菌靈、多菌靈和霜霉威進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示：外加到煙支中的甲基硫菌靈量在1.0ug/20支和4.0ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中未檢測(cè)到甲基硫菌靈和其代謝物多菌靈；外加到煙支中的甲基硫菌靈量在20ug/20支和80ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中檢測(cè)到三甲基硫菌靈和其代謝物多菌靈，并且隨著外加量的增加煙氣粒相物中甲基硫菌靈和其代謝物多菌靈的遷移量、遷移率升高。外加到煙支中的霜霉威量在1.0ug/20支和4.0ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中未檢測(cè)到霜霉威；外加到煙支中的霜霉威量在20ug/20支和80ug/20支時(shí)，在卷煙主流煙氣粒相物中檢測(cè)到霜霉威，并且隨著外加量的增加煙氣粒相物中霜霉威遷移量、遷移率升高。結(jié)果見(jiàn)表2。其中：濾嘴的截留率(wt％)＝(濾嘴中截留量/卷煙抽吸前煙絲中殘留量)×100wt％。因此該方法可以用來(lái)檢測(cè)卷煙主流煙氣粒相物中殺菌劑的含量。表2外加甲基硫菌靈和霜霉威后卷煙粒相物中的遷移量/率檢測(cè)結(jié)果注：表中/表示未檢出。當(dāng)前第1頁(yè)12