本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及免疫調(diào)節(jié)信號(hào)通路技術(shù)。更具體地，涉及抗人β3腎上腺素受體的單克隆抗體在制備抗癌、抗炎、抗毒、抗休克、抗過(guò)敏、抗病毒感染、抗自身免疫病、抗惡病質(zhì)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗神經(jīng)退行變、調(diào)控自噬和抗衰老藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
：人體內(nèi)的β3腎上腺素受體(adrenoceptorbeta3，adrb3，b3ar，beta3adrenoceptor，β3受體)是介導(dǎo)兒茶酚胺作用的一類組織受體，為g蛋白耦聯(lián)型。目前對(duì)于adrb3的研究主要集中于對(duì)體脂、血糖與血脂水平、胰島素分泌及作用的影響。而對(duì)于adrb3在惡性腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病、炎癥、膿毒癥、多器官功能障礙綜合征、病毒感染、自身免疫性疾病、器官移植免疫排斥、衰老、骨質(zhì)疏松癥、嚴(yán)重創(chuàng)傷、中毒、惡病質(zhì)等疾病領(lǐng)域的作用，尚無(wú)相關(guān)研究和報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供人adrb3及其單克隆抗體在治療腫瘤(惡性腫瘤)、炎癥(機(jī)體慢性系統(tǒng)性炎癥)、膿毒癥、哮喘、糖尿病、多器官功能障礙綜合征、病毒感染、衰老性疾病、貧血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、過(guò)敏性疾病、惡病質(zhì)疾病、中毒、自身免疫性疾病、器官移植免疫排斥、肺動(dòng)脈高壓、動(dòng)脈粥樣硬化、神經(jīng)退行性疾病、骨質(zhì)疏松癥等骨退行性變疾病、肥厚型心肌病或阿爾茨海默病等疾病方面的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的是通過(guò)公開(kāi)了以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的：人β3腎上腺素受體(adrb3)作為檢測(cè)g0期細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、人髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)、造血干細(xì)胞、淋巴系祖細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞、髓系細(xì)胞、破骨細(xì)胞或小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物的應(yīng)用。特別是作為檢測(cè)原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、調(diào)節(jié)性t細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、漿細(xì)胞、原始淋巴細(xì)胞或幼稚淋巴細(xì)胞的標(biāo)志物的應(yīng)用。人β3腎上腺素受體作為腫瘤(惡性腫瘤)、炎癥(機(jī)體慢性系統(tǒng)性炎癥)、膿毒癥、哮喘、糖尿病、多器官功能障礙綜合征、病毒感染性疾病、衰老性疾病、貧血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、過(guò)敏性疾病、惡病質(zhì)疾病、中毒性疾病、自身免疫性疾病、器官移植免疫排斥、肺動(dòng)脈高壓、急性冠脈綜合征、心腦血管疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化)、骨退行性變、mdsc相關(guān)性疾病、肥厚型心肌病或神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病)的診斷標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)的應(yīng)用。人β3腎上腺素受體作為檢測(cè)診斷腫瘤細(xì)胞惡性程度、腫瘤病情程度、腫瘤大小、分期、轉(zhuǎn)移情況、以及預(yù)后和療效的標(biāo)志物，評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力和/或細(xì)胞分化能力的標(biāo)志物，和評(píng)價(jià)特異免疫功能和/或衰老程度的標(biāo)志物的應(yīng)用。制備抗人β3腎上腺素受體的單克隆抗體的多肽片段，包括但不限于以下多肽：人adrb3全長(zhǎng)蛋白、adrb3蛋白的n端1-155位氨基酸殘基片段、adrb3蛋白的c端156-408位氨基酸殘基片段、adrb3蛋白中的296-317位氨基酸的亮氨酸拉鏈片段、adrb3蛋白中的351-369位氨基酸的核定位序列、adrb3蛋白中的1-36位氨基酸的e1片段、adrb3蛋白中的101-111位氨基酸殘基的e2片段、adrb3蛋白中的134-155位氨基酸的i2片段、adrb3蛋白中的315-326位氨基酸的e4片段、adrb3蛋白中的348-408位氨基酸的i4片段、344-349位的氨基酸殘基片段、143-148位的itim1片段、140-146位的itim1片段、202-207位的itim2片段、199-204位的itim2片段、212-217位的itim3片段。抗人adrb3單克隆抗體在調(diào)控腫瘤細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、調(diào)節(jié)性t細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞的增殖和分化中的應(yīng)用。起到抗癌、抗炎、逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫耐受的作用。抗人adrb3單克隆抗體在制備治療p62，hk2，gapdh，vegf，cyclind1，cdk3，cdk4，rb，ki-67，mtor，rictor，akt，tubulin，traf6，pd-l1，p53，p63，il-2，il-6，il-10，tgfβ或tnfa信號(hào)通路相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在制備治療腫瘤、炎癥(機(jī)體慢性系統(tǒng)性炎癥)、膿毒癥、哮喘、糖尿病、內(nèi)毒素血癥、感染性休克、多器官功能障礙綜合征、急性化膿性感染、再生功能障礙導(dǎo)致的疾病、病毒感染性疾病、淋球菌感染、衰老性疾病、貧血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、過(guò)敏性疾病、惡病質(zhì)疾病、中毒性疾病、自身免疫性疾病、器官移植免疫排斥、肺動(dòng)脈高壓、急性冠脈綜合征、心腦血管疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化)、骨退行性變、肥厚型心肌病、mdsc相關(guān)性疾病、神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病)或精神疾病的藥物，或在制備延緩衰老和/或調(diào)控恢復(fù)免疫系統(tǒng)功能(包括非特異免疫和特異免疫)的藥物中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在作為或制備治療惡性腫瘤藥物、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移藥物、治療不孕不育藥物、抗病毒疫苗、抗腫瘤疫苗、治療血栓栓塞性疾病藥物、抗血小板藥物、抗粒細(xì)胞藥物、化療藥物增敏劑、止血藥物、降血壓藥物、治療酒精和毒品成癮的藥物、補(bǔ)體拮激動(dòng)劑、免疫佐劑、雙特異性抗體、誘導(dǎo)分化劑、腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑、器官移植免疫抑制劑、去乙酰化酶抑制劑、彈性蛋白酶抑制劑中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在判斷惡性腫瘤預(yù)后和監(jiān)測(cè)治療效果中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在制備護(hù)膚類化妝品中的應(yīng)用。具有延緩皮膚衰老、恢復(fù)皮膚彈性、減少皺紋、減少色素沉著的功效?？谷薬drb3單克隆抗體在調(diào)控心臟、肝臟、骨髓、胰腺、腦、神經(jīng)、腎臟、肺、肌肉等組織的再生中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在調(diào)控糖酵解、自噬、核仁功能、核糖體合成、溶酶體功能、線粒體功能、細(xì)胞骨架中的應(yīng)用。抗人adrb3單克隆抗體作為涂層藥物在制備藥物洗脫支架或洗脫球囊方面的應(yīng)用。抗人adrb3單克隆抗體在鑒定、篩選g0期細(xì)胞中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在調(diào)控腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期和有絲分裂功能中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體在診斷惡性腫瘤、自身免疫性疾病、炎癥、treg相關(guān)性疾病等疾病中的應(yīng)用。具體地，可利用adrb3抗體檢測(cè)血液、腦脊液、胸水和腹水等體液中的可溶性adrb3，用于診斷惡性腫瘤等?？筧drb3嵌合抗原受體修飾后的t淋巴細(xì)胞在制備治療惡性腫瘤、自身免疫性疾病、炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、病毒感染、神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病)或衰老性疾病藥物中的應(yīng)用。抗adrb3嵌合抗原受體修飾后的巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、nk細(xì)胞或粒細(xì)胞在作為或制備治療惡性腫瘤、自身免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、病毒感染、神經(jīng)退行性疾病或衰老性疾病的藥物中的應(yīng)用?？谷薬drb3單克隆抗體，該抗體選自：(1)由2015年9月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏號(hào)為cctccno：c2015146的雜交瘤細(xì)胞系5d1產(chǎn)生的單克隆抗體；保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。(2)由2016年12月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏號(hào)為cctccno：c2016202的雜交瘤細(xì)胞系5b8產(chǎn)生的單克隆抗體；保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。(3)由2015年9月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏號(hào)為cctccno：c2015147的雜交瘤細(xì)胞系4g7產(chǎn)生的單克隆抗體；保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。(4)由2016年12月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)，保藏號(hào)為cctccno：c2016203的雜交瘤細(xì)胞系5d9產(chǎn)生的單克隆抗體；保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。(5)具有由雜交瘤細(xì)胞系5d1、5b8、4g7或5d9產(chǎn)生的單克隆抗體的結(jié)合特性的單克隆抗體；(6)與能結(jié)合由雜交瘤細(xì)胞系5d1、5b8、4g7或5d9產(chǎn)生的單克隆抗體的表位結(jié)合的單克隆抗體；(7)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定中與由雜交瘤細(xì)胞系5d1、5b8、4g7或5d9產(chǎn)生的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)的單克隆抗體；(8)能特異性結(jié)合adrb3的兔單克隆抗體、鼠源性、嵌合性、全人源性抗體、單域抗體、單鏈抗體、fab抗體片段、合成抗體；(9)與下述adrb3抗原表位中的一個(gè)或幾個(gè)結(jié)合從而調(diào)控adrb3蛋白活性的抗adrb3抗體：s212，s239，s349，c110，c189，t65，t140，s191，y336，y346，k151，r152，c153，p343，p350，p368，p369，p371，p377，p381，p391，p394，h190，h288，n8，n26，t150，t108，t114，g41，g106，g146，g271，g295，g383，g402，c275，c363，y145，y145，y204，y214，y236，y346；包括但不限于上述表位；其中，s：絲氨酸，c：半胱氨酸，t：蘇氨酸，y：酪氨酸，k：賴氨酸，r：精氨酸，c：半胱氨酸，p：脯氨酸，h：組氨酸，n：天冬酰胺；(10)特異性結(jié)合adrb3的抗體，其包含：a)包含下列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)：i)含有與seqidno：1、4、7、10具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列的第一互補(bǔ)決定區(qū)；ii)含有與seqidno：2、5、8、11具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第二互補(bǔ)決定區(qū)；iii)含有與seqidno：3、6、9、12具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第三互補(bǔ)決定區(qū)；和b)包含下列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)：i)含有與seqidno：13、16、19、22具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第一互補(bǔ)決定區(qū)；ii)含有與seqidno：14、17、20、23具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第二互補(bǔ)決定區(qū)；和iii)含有與seqidno：15、18、21、24具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第三互補(bǔ)決定區(qū)；c)人源化抗體的重鏈可變區(qū)(variableregion,v區(qū))包含與seqidno：25具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列；和/或d)人源化抗體的輕鏈可變區(qū)包含與seqidno：26具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列。另外，具有adrb3激活作用的adrb3抗體、adrb3激動(dòng)劑或利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的人adrb3蛋白在制備促進(jìn)細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑中的應(yīng)用，以及在制備促進(jìn)白細(xì)胞生長(zhǎng)劑中的應(yīng)用，也都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。能夠產(chǎn)生與上述adrb3抗原表位中的一個(gè)或幾個(gè)結(jié)合從而調(diào)控adrb3蛋白活性的抗adrb3抗體的雜交瘤細(xì)胞株，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體優(yōu)選地，所述雜交瘤細(xì)胞株包括以下四株：一株雜交瘤細(xì)胞株5d1，于2015年9月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：c2015146。保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。一株雜交瘤細(xì)胞株5b8，于2016年12月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：c2016202。保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。一株雜交瘤細(xì)胞株4g7，于2015年9月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：c2015147。保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。一株雜交瘤細(xì)胞株5d9，于2016年12月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：c2016203。保藏單位地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。具體地，本發(fā)明通過(guò)大量的研究和探索，公開(kāi)了adrb3及抗adrb3多克隆抗體的以下作用和應(yīng)用：本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是新的免疫調(diào)節(jié)受體和腫瘤標(biāo)記物，公開(kāi)了adrb3的生理功能和在疾病病理機(jī)制中的作用，同時(shí)公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明中的抗體特異性針對(duì)人adrb3的氨基酸序列，該抗體能夠特異性結(jié)合adrb3并調(diào)節(jié)其生物學(xué)活性。該抗體調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞、造血干細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞、淋巴系祖細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的分化和功能，起到抗癌、抗炎癥、逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫耐受的作用。本抗體能誘導(dǎo)t淋巴細(xì)胞(t細(xì)胞)的分化成熟，恢復(fù)其凋亡能力，增強(qiáng)特異免疫功能。本抗體還能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，抑制其增殖，通過(guò)抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(adcc)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性作用(cdc)和直接作用(包括阻斷細(xì)胞周期、抑制核糖體合成、降低線粒體膜電位、誘導(dǎo)凋亡、抑制線粒體自噬、抑制磷酸戊糖途徑、抑制糖酵解、減少酮體合成和降低脂代謝等機(jī)制)來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明的抗體通過(guò)小鼠雜交瘤技術(shù)而獲得并經(jīng)過(guò)人源化改造。本發(fā)明公開(kāi)了這些抗體的抗原表位和生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。其中雜交瘤細(xì)胞株包括但不限于5d9和5b8，于2016年12月12日保藏于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為cctccno：c2016203和cctccno：c2016202，雜交瘤細(xì)胞能夠分泌adrb3單克隆抗體。本發(fā)明涉及的adrb3抗體“變體”的氨基酸序列含有一個(gè)或多個(gè)相對(duì)于所述序列而言的“保守”氨基酸改變，優(yōu)選的抗體構(gòu)架及恒定域?yàn)槿祟悩?gòu)架和人類恒定域。本發(fā)明公開(kāi)了該抗體的應(yīng)用及其檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)，抗人adrb3單克隆抗體可以用于免疫印跡、熒光原位雜交技術(shù)、免疫沉淀、免疫組化、酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)、免疫熒光、磁珠分選、免疫膠體金檢測(cè)和流式細(xì)胞術(shù)等免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，定量和定性檢測(cè)人血清、人組織細(xì)胞、人體分泌物和人細(xì)胞培養(yǎng)物中可溶性adrb3蛋白或adrb3蛋白片段。本發(fā)明的抗人adrb3單克隆抗體可用于激活或阻斷adrb3的作用。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是新的免疫編輯因子和腫瘤標(biāo)記物，adrb3調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的壽命和免疫應(yīng)答，在免疫抑制性的調(diào)節(jié)性t細(xì)胞(regulatorytcell,treg)、髓源性抑制細(xì)胞(myeloid-derivedsuppressorcells,mdsc)、腫瘤浸潤(rùn)性中性粒細(xì)胞(tumorinfiltratingneutrophils，tins)和很多類型的癌細(xì)胞中表達(dá)。adrb3存在膜性和可溶性兩種形式，檢測(cè)組織細(xì)胞和體液中adrb3的含量有助于預(yù)測(cè)治療效果、療法適用性和疾病診斷。機(jī)體免疫系統(tǒng)能夠改變腫瘤細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞和老化細(xì)胞等異常細(xì)胞的表型，降低其免疫原性和危險(xiǎn)性，缺乏免疫原性和危險(xiǎn)信號(hào)的細(xì)胞不能被免疫系統(tǒng)識(shí)別，逃避機(jī)體免疫攻擊，這一過(guò)程稱為免疫編輯。免疫編輯加重癌細(xì)胞的惡性程度，促進(jìn)癌細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。免疫編輯是雙向的過(guò)程，腫瘤細(xì)胞被編輯的同時(shí)，還會(huì)影響免疫系統(tǒng)。腫瘤的adrb3信號(hào)分子使免疫系統(tǒng)生成大量的中性粒細(xì)胞，這通常是炎癥反應(yīng)的一部分，但adrb3改變中性粒細(xì)胞行為，使中性粒細(xì)胞不去消滅腫瘤，反而保護(hù)腫瘤免受t細(xì)胞殺傷。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞和病毒誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞高表達(dá)adrb3，adrb3保護(hù)免疫細(xì)胞免于死亡，阻滯免疫識(shí)別所需的危險(xiǎn)信號(hào)的釋放，使腫瘤細(xì)胞和病毒不被免疫系統(tǒng)識(shí)別而避免被清除。adrb3抗體阻斷adrb3信號(hào)通路，“定點(diǎn)”清除表達(dá)誘導(dǎo)型adrb3的免疫細(xì)胞，恢復(fù)淋巴細(xì)胞的正常死亡和凋亡，使免疫系統(tǒng)能夠識(shí)別并清除病原體、癌細(xì)胞，維持人體的健康。adrb3在低分化的細(xì)胞中大量存在，特別是在幼稚型的免疫細(xì)胞和癌細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)。分化成熟的細(xì)胞中僅在胞漿和膜上有微量adrb3，細(xì)胞核中幾乎沒(méi)有。adrb3在腫瘤中過(guò)度表達(dá)并通過(guò)阻滯淋巴細(xì)胞分化來(lái)抑制t細(xì)胞對(duì)腫瘤的攻擊。adrb3阻滯免疫細(xì)胞和癌細(xì)胞的分化，促進(jìn)低分化的淋巴細(xì)胞增殖，防止淋巴細(xì)胞死亡或凋亡。adrb3是誘發(fā)癌癥和促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白。與ctla-4、pd-1等免疫檢查點(diǎn)蛋白不同，adrb3是誘導(dǎo)型蛋白，在正常細(xì)胞中很少存在，而在病理情況下存在于腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞，adrb3促進(jìn)形成腫瘤增殖的免疫微環(huán)境。pd-1或ctla-4基因敲除小鼠會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的自身免疫性疾病，adrb3基因敲除小鼠不會(huì)患癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化、老年癡呆和自身免疫病，壽命顯著延長(zhǎng)。作為抗癌藥，adrb3抗體優(yōu)于化療藥物(如阿霉素)和免疫檢查點(diǎn)抑制劑(immunecheckpointinhibitor，ici)?；熕幬镒饔迷谀[瘤細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的不同環(huán)節(jié)上，無(wú)選擇性地殺傷增殖能力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞，但對(duì)休眠期的癌細(xì)胞無(wú)效。ici抑制淋巴細(xì)胞凋亡，其殺傷腫瘤的能力不盡人意而且引起自身免疫病。采用化合物抑制劑或中和抗體阻斷adrb3信號(hào)通路可有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，能夠殺傷增殖期和休眠期的癌細(xì)胞，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和幼稚型淋巴細(xì)胞分化成熟。既能降低腫瘤的惡性程度，也能恢復(fù)免疫細(xì)胞的抗癌功能。由于正常淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞幾乎沒(méi)有adrb3，本抗體不會(huì)損傷正常的免疫系統(tǒng)和組織，是高效、廣譜、低毒、靶點(diǎn)特異的抗癌藥物。腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生并釋放adrb3，對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行免疫編輯，抑制t細(xì)胞、nk細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的功能，使腫瘤逃避免疫監(jiān)視。交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)通過(guò)adrb3調(diào)控免疫編輯，adrb3是維持神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵蛋白，疾病和衰老是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)自穩(wěn)調(diào)節(jié)紊亂而發(fā)生的異常生命活動(dòng)。adrb3抗體抑制adrb3活性以及該蛋白介導(dǎo)的免疫編輯，使免疫系統(tǒng)重新識(shí)別并清除腫瘤細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞和老化細(xì)胞，本抗體具有抗癌、抗炎、促進(jìn)再生、抗衰老的作用。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的淋巴細(xì)胞抑制分子，adrb3有3個(gè)免疫受體酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitionmotif,itim)，itim氨基酸序列如下：itim1：(143)lrygal(148)或(143)lrygtl(148)或(140)lryrav(146)；itim2：(202)ipyall(207)或(202)mpyvll(207)或(199)vpyall(204)；itim3：(212)sfylpl(217)。adrb3抑制淋巴細(xì)胞分化成熟和自我識(shí)別，使淋巴細(xì)胞不能清除老化和受損的細(xì)胞，對(duì)自身正常細(xì)胞產(chǎn)生免疫殺傷。t細(xì)胞活性受到adrb3的調(diào)控，病毒感染或腫瘤都會(huì)通過(guò)增強(qiáng)t細(xì)胞adrb3信號(hào)通路而抑制免疫應(yīng)答，使t細(xì)胞無(wú)法清除慢性感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。與淋巴細(xì)胞的固有免疫抑制分子如cd28家族蛋白不同，adrb3是疾病誘導(dǎo)性表達(dá)。正常情況下，淋巴細(xì)胞膜上有少量adrb3。在腫瘤、病毒感染、自身免疫病等病理狀態(tài)下，固有免疫細(xì)胞(如中性粒細(xì)胞)或腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞大量產(chǎn)生adrb3，從胞漿穿梭入核及核仁，影響淋巴細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)，調(diào)控基因表達(dá)，增強(qiáng)核仁功能，改變淋巴細(xì)胞表型，促進(jìn)抑制性淋巴細(xì)胞的增殖，抑制特異免疫而加速疾病進(jìn)展。adrb3對(duì)淋巴細(xì)胞的免疫抑制作用會(huì)反饋性增強(qiáng)固有免疫細(xì)胞的活性，特別是中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體處于炎癥狀態(tài)。腫瘤、病毒增加淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)型adrb3表達(dá)，阻止淋巴細(xì)胞凋亡，而死亡的淋巴細(xì)胞對(duì)于免疫系統(tǒng)來(lái)說(shuō)是危險(xiǎn)信號(hào)，死亡的免疫細(xì)胞使處于靜息狀態(tài)的抗原遞呈細(xì)胞(antigen-presentingcell,apc)轉(zhuǎn)變成激活態(tài)，進(jìn)而提呈抗原而激活t細(xì)胞，起到抗癌和清除病原體的作用。adrb3抗體殺死高表達(dá)誘導(dǎo)型adrb3的粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，釋放危險(xiǎn)信號(hào)，激活特異免疫系統(tǒng)，恢復(fù)淋巴細(xì)胞的抗癌功能。adrb3抗體特異性清除含有誘導(dǎo)型adrb3的“致病性”淋巴細(xì)胞，不損傷正常的淋巴細(xì)胞，恢復(fù)淋巴細(xì)胞的正常死亡和凋亡，使免疫系統(tǒng)正?；?，避免發(fā)生自身免疫。adrb3抗體治療機(jī)制保證了本抗體在臨床中的廣泛用途。本發(fā)明公開(kāi)了過(guò)度表達(dá)或者功能增強(qiáng)的adrb3引起癌癥、自身免疫病和衰老。過(guò)度活化的adrb3干擾天然免疫對(duì)特異免疫的調(diào)控，造成淋巴細(xì)胞“重編程”而去分化為無(wú)功能的幼稚細(xì)胞，淋巴細(xì)胞不能識(shí)別異己與自我組織，使腫瘤細(xì)胞逃逸免疫和引起自身免疫病。阻斷adrb3信號(hào)通路后，能恢復(fù)免疫正?；?，使t細(xì)胞清除癌細(xì)胞和老化細(xì)胞，避免自身免疫損傷。adrb3是聯(lián)系天然免疫與特異性免疫的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，adrb3增強(qiáng)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞引起的天然免疫反應(yīng)，刺激淋巴細(xì)胞增殖。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，攜帶鼠乳腺癌病毒的mmtv-pyvt小鼠剔除adrb3基因后，不會(huì)產(chǎn)生乳腺腫瘤。adrb3基因敲除小鼠壽命延長(zhǎng)，不發(fā)生自身免疫病和癌癥，外源性腫瘤細(xì)胞亦無(wú)法在其體內(nèi)生長(zhǎng)。adrb3基因敲除小鼠血清中的炎性因子如il-4、il-6水平明顯降低，粒細(xì)胞數(shù)量減少。本發(fā)明人研制了阻斷人adrb3的單克隆抗體并用于治療腫瘤和自身免疫病。adrb3抗體增強(qiáng)小鼠的特異性抗腫瘤反應(yīng)，減輕系統(tǒng)性炎癥。adrb3抗體治療4t1乳腺癌細(xì)胞荷瘤小鼠，抑制原位瘤的增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，減少中性粒細(xì)胞、mdsc和treg，激活補(bǔ)體、nk細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞的抗癌活性，降低中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值(nlr)，發(fā)揮抗癌和抗炎作用。adrb3抗體在體外刺激人淋巴細(xì)胞分化，誘導(dǎo)產(chǎn)生具有抗癌活性的cd8+t細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了一種新的調(diào)控固有免疫和特異免疫的機(jī)制，即交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)首先激活粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞中組成性表達(dá)的adrb3來(lái)活化固有免疫細(xì)胞，然后促進(jìn)淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)性表達(dá)adrb3來(lái)抑制淋巴細(xì)胞的活化。焦慮、抑郁等高水平的心理壓力通過(guò)adrb3來(lái)降低機(jī)體的免疫功能，增加患癌、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、老年癡呆等疾病的風(fēng)險(xiǎn)。adrb3異?；罨瘜⒃斐晒逃忻庖吆吞禺惷庖呦到y(tǒng)的紊亂，表現(xiàn)為以中性粒細(xì)胞為代表的髓系細(xì)胞過(guò)度激活，而淋巴細(xì)胞不能活化，中性粒細(xì)胞數(shù)量和占白細(xì)胞的百分比均升高，增高nlr，引起機(jī)體慢性系統(tǒng)性的炎癥。adrb3介導(dǎo)的炎癥是自身免疫病、腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茨海默病和衰老的共同病理機(jī)制。腫瘤的病理過(guò)程最為典型，早期原位癌階段主要是adrb3活化局部組織中的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，上調(diào)炎性因子水平，癌組織在局部浸潤(rùn)性生長(zhǎng)；如果adrb3的活性持續(xù)亢進(jìn)，粒細(xì)胞、脾臟、肝臟、腫瘤細(xì)胞分泌可溶性adrb3，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞表達(dá)adrb3。淋巴細(xì)胞中的adrb3改變表觀遺傳修飾，抑制淋巴細(xì)胞分化成熟，引起腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，固有免疫細(xì)胞adrb3的異常要早于特異免疫細(xì)胞的異常，固有免疫細(xì)胞抑制淋巴細(xì)胞的免疫識(shí)別功能。目前腫瘤免疫治療主要是增強(qiáng)淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異免疫功能，沒(méi)有理想的靶點(diǎn)來(lái)調(diào)控固有免疫細(xì)胞，導(dǎo)致抗癌效果差并易引起自身免疫病。adrb3抗體能夠解除中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞的抑制作用，恢復(fù)淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤的免疫識(shí)別。adrb3抗體升高淋巴細(xì)胞在白細(xì)胞中的百分比，降低nlr，起到抗炎、抗癌的作用，避免自身免疫病的發(fā)生。腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞高表達(dá)adrb3，促進(jìn)細(xì)胞膜和胞漿的adrb3穿梭入核，使淋巴細(xì)胞逃逸死亡。腫瘤免疫治療的關(guān)鍵是恢復(fù)淋巴細(xì)胞正常死亡或凋亡，死亡的淋巴細(xì)胞能發(fā)揮其最大的免疫功能?，F(xiàn)有的腫瘤免疫治療方法多是增加t細(xì)胞增殖，防止t細(xì)胞凋亡，早期可能有效，但往往復(fù)發(fā)。本發(fā)明提出新的腫瘤免疫治療策略，即誘導(dǎo)t細(xì)胞死亡，但要準(zhǔn)確控制t細(xì)胞死亡的數(shù)量。adrb3抗體從小劑量開(kāi)始應(yīng)用，一旦觀察到腫瘤縮小或中性粒細(xì)胞數(shù)量低于1，000/mm3，即可減量或停用，防止過(guò)量的adrb3抗體損傷正常的t細(xì)胞。增加淋巴細(xì)胞的adrb3表達(dá)量，能防止淋巴細(xì)胞死亡，減少危險(xiǎn)信號(hào)，起到誘導(dǎo)免疫耐受的作用，防止發(fā)生器官移植后的免疫排斥反應(yīng)。adrb3激動(dòng)劑和利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的人adrb3蛋白藥物可以作為免疫抑制劑，用于治療移植物抗宿主病、排斥反應(yīng)、過(guò)敏性疾病。采用adrb3重組蛋白預(yù)處理移植物，能夠預(yù)防和減輕排斥反應(yīng)。對(duì)于因宿主炎癥亢進(jìn)而導(dǎo)致的移植物排斥反應(yīng)，應(yīng)用adrb3抗體通過(guò)抗炎而起到減輕排斥反應(yīng)的作用。adrb3表達(dá)于t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk細(xì)胞、apc和腫瘤細(xì)胞膜，整合抑制性信號(hào)，調(diào)控淋巴細(xì)胞的活化。癌細(xì)胞和apc的表面和胞內(nèi)存在大量圓錐型的“adrb3分形”結(jié)構(gòu)，“adrb3分形”維持免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的黏附界面，使它們能夠牢牢結(jié)合。圓錐型的adrb3復(fù)合物始于細(xì)胞膜，貫穿胞漿，延伸到細(xì)胞核，形成一條通道。細(xì)胞外的物質(zhì)如神經(jīng)遞質(zhì)、病原體等利用該通道進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控細(xì)胞dna復(fù)制和基因表達(dá)，影響細(xì)胞的分化和增殖。adrb3抗體破壞免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的黏附，阻滯腫瘤細(xì)胞對(duì)apc的免疫編輯。adrb3調(diào)節(jié)免疫突觸的形成和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，募集其他的免疫信號(hào)分子(例如pd-1)并傳遞信號(hào)。adrb3信號(hào)通路向胞內(nèi)傳遞抑制性信號(hào)，對(duì)t細(xì)胞、b細(xì)胞的活化起負(fù)調(diào)節(jié)作用。adrb3分別在初始t細(xì)胞的初級(jí)反應(yīng)階段和活化階段、記憶性t細(xì)胞的再次反應(yīng)階段起到重要的負(fù)調(diào)控作用。高表達(dá)adrb3基因的效應(yīng)性t細(xì)胞具有抗凋亡能力而存活下來(lái)，發(fā)育為記憶性t細(xì)胞。adrb3促進(jìn)cd4+t細(xì)胞增殖，增強(qiáng)treg的活性，抑制cd8+t細(xì)胞的活化，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞不能清除癌細(xì)胞、病原體感染的細(xì)胞和老化細(xì)胞，引起惡性腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、自身免疫疾病、阿爾茨海默病和衰老。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)adrb3參與抗原加工處理及提呈過(guò)程，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫識(shí)別與免疫應(yīng)答。adrb3聚集在apc和淋巴細(xì)胞相互接觸的部位，有利于細(xì)胞間粘附復(fù)合物穩(wěn)定，促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞粘附到淋巴細(xì)胞。apc中的adrb3參與處理抗原，導(dǎo)致處理后的腫瘤抗原信息丟失而不能被淋巴細(xì)胞識(shí)別。adrb3通過(guò)以下機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)抗原處理過(guò)程：①.adrb3具有乙?；腹δ埽{(diào)控抗原信息的乙?；揎?，乙?；揎椇蟮哪[瘤抗原不能保留其抗原性，不能激活t細(xì)胞。②.adrb3促進(jìn)apc中含有抗原信息的內(nèi)吞泡自噬。adrb3促進(jìn)溶酶體成熟，含有抗原的內(nèi)吞泡與溶酶體融合，加速內(nèi)吞泡自噬性降解，清除腫瘤的抗原信息，抑制特異免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的免疫識(shí)別與應(yīng)答。癌癥病人的腫瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞中adrb3表達(dá)量均明顯增加，抑制t細(xì)胞活化所需的第二信號(hào)系統(tǒng)，t細(xì)胞變成免疫應(yīng)答無(wú)能，使腫瘤逃避免疫。腫瘤細(xì)胞能模仿apc而高表達(dá)adrb3，adrb3改變腫瘤細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)修飾，使腫瘤細(xì)胞具有與apc相似的基因表達(dá)譜而偽裝成“apc”。由惡性程度低的腫瘤細(xì)胞偽裝而成的“apc”，不具有抗原提呈功能。由惡性程度高的腫瘤細(xì)胞偽裝而成的“apc”，不僅具有抗原提呈功能，還能抑制t細(xì)胞攻擊癌細(xì)胞。除了抑制淋巴細(xì)胞的功能外，adrb3還能誘導(dǎo)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為淋巴細(xì)胞，干擾特異免疫系統(tǒng)的功能。癌癥患者的淋巴細(xì)胞大量表達(dá)adrb3，這些adrb3+的淋巴細(xì)胞可能由癌細(xì)胞分化而來(lái)，異型淋巴細(xì)胞更有可能是來(lái)源于癌細(xì)胞。adrb3定位在細(xì)胞膜、溶酶體、線粒體、核糖體、細(xì)胞核和核仁等不同細(xì)胞器，調(diào)控所在細(xì)胞器的功能。adrb3具備在胞漿合成后快速轉(zhuǎn)運(yùn)入核并且能在核漿之間來(lái)回穿梭的特性，在胞核及胞漿之間充當(dāng)運(yùn)輸載體及進(jìn)行信號(hào)傳遞，調(diào)控dna復(fù)制和基因表達(dá)。核內(nèi)的adrb3促進(jìn)g0期細(xì)胞進(jìn)入增殖期，癌細(xì)胞中的adrb3多位于細(xì)胞核，提示adrb3刺激癌細(xì)胞的惡性增殖。阻滯細(xì)胞膜和胞漿adrb3的入核能力，能夠抑制癌細(xì)胞的增殖。adrb3基因表達(dá)和蛋白定位在惡性程度不同的腫瘤細(xì)胞中存在明顯差異。在惡性程度低的癌細(xì)胞，adrb3表達(dá)量少，大部分定位在細(xì)胞核，細(xì)胞膜上較少。惡性程度高的癌細(xì)胞，adrb3大量表達(dá)，多分布在核仁、細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，即刺激細(xì)胞增殖，又有利于與免疫細(xì)胞接觸而發(fā)揮免疫抑制作用。在腫瘤患者中，adrb3通過(guò)以下途徑抑制淋巴細(xì)胞：①、apc吞噬腫瘤細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞來(lái)源的adrb3在apc中蓄積，誘導(dǎo)apc向淋巴細(xì)胞傳遞抑制性信號(hào)；②、腫瘤細(xì)胞膜上的adrb3直接接觸并抑制淋巴細(xì)胞；③、腫瘤細(xì)胞分泌可溶性adrb3或包含adrb3的外泌體，作為信號(hào)分子調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞。本發(fā)明中的adrb3抗體拮抗adrb3的免疫抑制功能，adrb3抗體與癌癥病人免疫無(wú)能的淋巴細(xì)胞一起培養(yǎng)，可以解除淋巴細(xì)胞的無(wú)能狀態(tài)，重新恢復(fù)淋巴細(xì)胞的正常功能，起到治療癌癥的作用。本發(fā)明公開(kāi)了一種新的調(diào)控細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制，即交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)激活細(xì)胞膜上的adrb3來(lái)刺激細(xì)胞增殖并抑制分化，adrb3在惡性腫瘤細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞、淋巴祖細(xì)胞、原始淋巴細(xì)胞、幼稚淋巴細(xì)胞和造血干細(xì)胞的增殖中起到關(guān)鍵作用。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力的“增殖標(biāo)志物”，adrb3越多，細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng)。目前常用的增殖標(biāo)志物是mcm、ki-67和pcna，此3種蛋白共同的缺點(diǎn)是不能在g0期細(xì)胞中表達(dá)，僅能在g1中期后表達(dá)，這些標(biāo)志物不能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的增殖能力，存在“診斷空隙”。adrb3的優(yōu)勢(shì)是在包括g1早期的整個(gè)增殖期和g0期都有表達(dá)，能更全面、準(zhǔn)確的反映細(xì)胞的增殖能力，是優(yōu)于mcm、ki-67和pcna的細(xì)胞增殖標(biāo)志物。作為評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力的標(biāo)志蛋白，adrb3用于基礎(chǔ)與臨床研究，篩選藥物，評(píng)價(jià)人類疾病的動(dòng)物模型，研究衰老、干細(xì)胞、應(yīng)激、腫瘤、再生、細(xì)胞周期、g0期的機(jī)制，是判斷病人預(yù)后，指導(dǎo)診斷、治療的有效工具。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是評(píng)價(jià)細(xì)胞分化能力的“分化標(biāo)志物”，adrb3越多，細(xì)胞的分化能力越差。對(duì)于癌細(xì)胞來(lái)說(shuō)，adrb3越多，分化程度越低，惡性程度越高。adrb3是研究誘導(dǎo)分化藥物的靶點(diǎn)蛋白，基于adrb3，利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)和化合物庫(kù)篩選苗頭化合物，用于研制抗癌、抗病毒、抗炎、抗阿爾茨海默病、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗心衰和抗衰老藥物。adrb3存在于初始t細(xì)胞，接受交感神經(jīng)直接調(diào)控，防止初始t細(xì)胞死亡。但導(dǎo)致一些無(wú)功能和對(duì)自身細(xì)胞有殺傷作用的初始t細(xì)胞存活，引起自身免疫性疾病。檢測(cè)t細(xì)胞adrb3含量，可以作為特異性免疫系統(tǒng)功能的重要指標(biāo)。t細(xì)胞中adrb3含量越多，其抗原識(shí)別功能越差，更易于損傷正常組織細(xì)胞，adrb3+t細(xì)胞是導(dǎo)致自身免疫的罪犯細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了一種新的調(diào)控t細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制，即交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)激活造血干細(xì)胞和外周免疫器官t細(xì)胞的adrb3來(lái)刺激t細(xì)胞增殖和分化。adrb3促進(jìn)g0期的造血干細(xì)胞和t細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期而發(fā)生有絲分裂。正常情況下，交感神經(jīng)-adrb3通路調(diào)控成人t細(xì)胞增殖和分化，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。病理情況下，過(guò)度活化的adrb3導(dǎo)致成熟t細(xì)胞去分化或轉(zhuǎn)分化而失去特異免疫功能，引起自身免疫、變態(tài)反應(yīng)等。青春期前的胸腺是t細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所，此后胸腺逐漸退化。成年人的胸腺功能低下，骨髓中造血干細(xì)胞或前t細(xì)胞不能在胸腺內(nèi)分化成為具有免疫活性的t細(xì)胞，脾臟和肝臟是成人t細(xì)胞的發(fā)育場(chǎng)所。本發(fā)明公開(kāi)了交感神經(jīng)-adrb3信號(hào)通路調(diào)控成人脾臟和肝臟中的t細(xì)胞增殖和分化。脾臟和肝臟特有nk細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的發(fā)育分化依賴于adrb3調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在adrb3正常情況下，脾不產(chǎn)生中性粒細(xì)胞?；钚援惓５腶drb3引起脾產(chǎn)生大量中性粒細(xì)胞，抑制脾臟中的巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的功能，巨噬細(xì)胞的抗原提呈能力降低，輔助性t淋巴細(xì)胞的數(shù)量減少，抑制性t淋巴細(xì)胞數(shù)量相對(duì)增高，不能清除衰老的血細(xì)胞、病原體和異物，導(dǎo)致腫瘤免疫抑制和人體衰老。阻滯adrb3，能夠恢復(fù)脾臟淋巴細(xì)胞的特異免疫功能，延緩衰老。adrb3調(diào)控肝臟造血免疫組織的發(fā)育分化，促進(jìn)肝臟產(chǎn)生粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、nk細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，促進(jìn)天然免疫細(xì)胞富集在肝臟。交感神經(jīng)-adrb3信號(hào)通路活性亢進(jìn)狀態(tài)下，會(huì)上調(diào)肝臟的造血功能，增加中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生，引起自身免疫病和癌癥。正常肝細(xì)胞中，大部分adrb3分布在胞漿，少部分位于細(xì)胞核。肝炎患者肝細(xì)胞漿adrb3含量增加，adrb3增加肝細(xì)胞核糖體功能，促進(jìn)肝臟合成c反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體、凝血因子，加重全身性炎癥反應(yīng)。adrb3刺激肝臟中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，高表達(dá)adrb3的粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和nk細(xì)胞在肝組織中的數(shù)量均明顯增多。肝癌和肝硬化患者中，肝細(xì)胞中adrb3含量增加，主要分布在細(xì)胞核，肝臟中adrb3+粒細(xì)胞數(shù)量增加。核中的adrb3會(huì)喚醒g0期的肝細(xì)胞，進(jìn)入增殖期，促進(jìn)癌變。肝臟中adrb3+粒細(xì)胞是形成轉(zhuǎn)移灶的環(huán)境細(xì)胞，adrb3抗體抑制乳腺癌細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移。adrb3抗體能夠恢復(fù)肝臟的造血和免疫功能，抑制肝臟炎癥，減少肝纖維化，用于治療肝炎和肝硬化。adrb3促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)造血干細(xì)胞分化為t細(xì)胞。adrb3調(diào)控t細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制如下：①、腎上腺素和去甲腎上腺素激活g0期t細(xì)胞膜上的adrb3，活化p62/mtor/akt信號(hào)通路，增加ki-67、cdk3、cyclind1等蛋白的合成，誘導(dǎo)成熟的t細(xì)胞發(fā)生“去分化”，進(jìn)入增殖期。②、t細(xì)胞膜上活化的adrb3內(nèi)陷入胞后，在胞漿中形成二聚體，暴露亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域，沿著微管被轉(zhuǎn)運(yùn)入核，結(jié)合到核dna。胞漿中的adrb3可以與c-myc形成異源二聚體，通過(guò)結(jié)合于啟動(dòng)子區(qū)的e盒結(jié)構(gòu)對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄激活調(diào)控。③、adrb3具有乙酰化酶的功能，增加核小體h3組蛋白乙?；揎?，改變細(xì)胞的表觀遺傳狀態(tài)，幫助解開(kāi)緊密壓縮的染色質(zhì)，有利于增殖相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄。細(xì)胞有絲分裂結(jié)束后，adrb3被泛素化降解，新生t細(xì)胞逐漸分化成熟。如果adrb3的降解受限，幼稚型adrb3brightt細(xì)胞(adrb3強(qiáng)陽(yáng)性的t細(xì)胞)不能分化成熟，機(jī)體將處于特異免疫功能缺陷狀態(tài)。adrb3抗體封閉淋巴系祖細(xì)胞和幼稚型t細(xì)胞膜上adrb3的配體結(jié)合域，競(jìng)爭(zhēng)性抑制兒茶酚胺對(duì)adrb3的活化，使淋巴細(xì)胞離開(kāi)增殖期，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞進(jìn)入g0期而發(fā)生分化，發(fā)育成為具有清除癌細(xì)胞、病原體和老化細(xì)胞功能的成熟t細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了淋巴細(xì)胞adrb3表達(dá)量是衡量特異免疫功能和衰老程度的指標(biāo)，淋巴細(xì)胞adrb3表達(dá)量越高，特異免疫功能越低下，機(jī)體的衰老程度越重，死亡風(fēng)險(xiǎn)越高。本發(fā)明公開(kāi)了檢測(cè)血液中的淋巴細(xì)胞adrb3表達(dá)量來(lái)篩查早期癌癥病人。正常人的成熟淋巴細(xì)胞不表達(dá)或少量表達(dá)adrb3，表達(dá)量少于中性粒細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞和粒細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞表達(dá)adrb3，抑制淋巴細(xì)胞的活化。如果淋巴細(xì)胞的adrb3表達(dá)量接近或超過(guò)中性粒細(xì)胞，并蓄積在細(xì)胞核和核仁中，該類細(xì)胞為adrb3bright淋巴細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞未分化或發(fā)生去分化，喪失抗癌功能。采用adrb3抗體，檢測(cè)外周血中adrb3高表達(dá)伴ki-67陰性(adrb3brightki-67-)淋巴細(xì)胞，可以作為體檢指標(biāo)，用來(lái)篩查早期癌癥病人。adrb3brightki-67-淋巴細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的10％以上，提示為腫瘤高危人群或早期癌癥患者。如果外周血50％以上的淋巴細(xì)胞是adrb3高表達(dá)伴ki-67陽(yáng)性(adrb3brightki-67+)，說(shuō)明幼稚型淋巴細(xì)胞不能分化成熟，特異免疫功能嚴(yán)重缺陷，提示癌癥進(jìn)入進(jìn)展期。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是腫瘤標(biāo)志物(tumormarker)，與正常細(xì)胞相比，癌細(xì)胞adrb3表達(dá)量顯著增加。adrb3表達(dá)量與病情嚴(yán)重程度、腫瘤大小或分期有相關(guān)性；adrb3濃度變化與治療效果相關(guān)，濃度降低說(shuō)明治療有效；疾病復(fù)發(fā)時(shí)adrb3水平明顯升高，檢測(cè)adrb3濃度可以預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)。除了檢測(cè)腫瘤組織中的adrb3表達(dá)量外，adrb3抗體還能檢測(cè)尿液、痰液、腹水、胸水、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液中的脫落細(xì)胞的adrb3表達(dá)量，適用于普通人群的癌癥篩查和癌癥病人的診斷。本發(fā)明公開(kāi)了檢測(cè)腫瘤組織中的adrb3融合基因和adrb3基因突變、缺失、插入、重復(fù)、染色體易位重排等，對(duì)于指導(dǎo)腫瘤病人的治療具有重要的參考價(jià)值。adrb3在造血干細(xì)胞、淋巴系祖細(xì)胞和淋巴細(xì)胞(b細(xì)胞、t細(xì)胞、nk細(xì)胞)、髓系祖細(xì)胞和髓系細(xì)胞(紅、粒、單核、巨核系細(xì)胞)、腫瘤細(xì)胞、破骨細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)量較高。特別是在原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associatedmacrophages,tam)、肥大細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞(dc)、異型淋巴細(xì)胞(abnormallymphocyte)、treg、漿細(xì)胞、原始淋巴細(xì)胞和幼稚淋巴細(xì)胞中均有adrb3高表達(dá)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是髓系細(xì)胞和幼稚型淋巴細(xì)胞的抗原標(biāo)志物，人體內(nèi)的adrb3主要在髓系細(xì)胞中表達(dá)，成熟淋巴細(xì)胞沒(méi)有或有少量adrb3，但幼稚型淋巴細(xì)胞adrb3表達(dá)升高。淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的adrb3過(guò)度激活，抑制免疫監(jiān)視和免疫防御，是多種疾病發(fā)生的基礎(chǔ)。adrb3抑制髓系祖細(xì)胞和淋巴系祖細(xì)胞的分化，削弱了對(duì)抗癌細(xì)胞、病毒和其他病原微生物的防御機(jī)制。癌細(xì)胞、病原微生物和老化細(xì)胞能夠激活中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的adrb3信號(hào)通路，刺激成熟的中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞發(fā)生去分化(dedifferentiation)，變成低分化的幼稚或原始細(xì)胞，抑制免疫系統(tǒng)的監(jiān)視、防御、調(diào)控作用。adrb3抗體阻滯adrb3的免疫抑制功能，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞和淋巴系祖細(xì)胞的分化，阻斷成熟的中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞去分化，恢復(fù)淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和補(bǔ)體系統(tǒng)的正常功能。細(xì)胞分化功能障礙是大多數(shù)疾病如腫瘤、心血管病、炎癥和衰老發(fā)生的根本原因。腫瘤的本質(zhì)是細(xì)胞分化功能障礙，但表現(xiàn)為惡性增殖，治療腫瘤的關(guān)鍵是恢復(fù)癌細(xì)胞的分化能力。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)adrb3是調(diào)控分化的關(guān)鍵蛋白，阻滯adrb3后，恢復(fù)腫瘤細(xì)胞的分化能力，分化為正?；蚪咏５募?xì)胞。淋巴細(xì)胞分化缺陷導(dǎo)致的功能低下是產(chǎn)生惡性腫瘤和自身免疫病的基礎(chǔ)。心肌細(xì)胞、神經(jīng)元等分化障礙會(huì)導(dǎo)致心功能衰竭和神經(jīng)退行性病變。重要臟器的分化功能缺陷是衰老產(chǎn)生的關(guān)鍵因素。本發(fā)明人提出關(guān)于衰老和疾病產(chǎn)生機(jī)制的“二次分化障礙打擊”假說(shuō)，疾病的發(fā)生是由于細(xì)胞分化缺陷而產(chǎn)生了無(wú)功能的細(xì)胞，這是第一次“分化障礙打擊”。免疫系統(tǒng)正常情況下，可以清除無(wú)功能的細(xì)胞而使機(jī)體不發(fā)病。但如果免疫細(xì)胞的分化出現(xiàn)障礙，引起機(jī)體免疫功能缺陷，免疫細(xì)胞不能清除由第一次“分化障礙打擊”所產(chǎn)生的腫瘤細(xì)胞、老化細(xì)胞和無(wú)功能細(xì)胞，將導(dǎo)致第二次“分化障礙打擊”而發(fā)病。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)心肌梗塞后，壞死心肌浸潤(rùn)大量adrb3高表達(dá)的炎細(xì)胞，阻礙心臟干細(xì)胞向成熟型心肌細(xì)胞的分化，而發(fā)生不完全分化，成為幼稚型心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，導(dǎo)致心肌重構(gòu)和心衰。adrb3基因敲除的小鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，制造心梗后心衰模型，與adrb3野生型小鼠比較，adrb3-/-小鼠的左室射血分?jǐn)?shù)(lvef)顯著升高，心肌重構(gòu)不明顯。與青壯年adrb3-/-小鼠(10～30周齡)相比，老年小鼠(70周齡)的lvef沒(méi)有明顯降低，部分70周齡的adrb3-/-小鼠lvef甚至高于10周齡小鼠。本發(fā)明人構(gòu)建了apoe和adrb3雙基因敲除小鼠，用高脂飼料喂養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)apoe和adrb3雙基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的數(shù)量明顯少于apoe敲除小鼠。雙敲小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力強(qiáng)于apoe敲除小鼠，壽命也明顯延長(zhǎng)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，人腫瘤組織中浸潤(rùn)大量adrb3高表達(dá)的粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，這些炎細(xì)胞通過(guò)直接接觸癌細(xì)胞和釋放adrb3的形式，誘導(dǎo)癌細(xì)胞大量表達(dá)adrb3，加重癌細(xì)胞的分化障礙，增加癌細(xì)胞的惡性程度，引起遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和耐藥。綜上所述，敲除adrb3基因或采用中和抗體阻滯adrb3，可以恢復(fù)組織細(xì)胞和免疫細(xì)胞的分化功能，避免二次“分化障礙打擊”，利用人體的免疫細(xì)胞來(lái)清除病原微生物、癌細(xì)胞和受損的組織細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3誘發(fā)細(xì)胞融合(cellfusion)，adrb3激動(dòng)劑和利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的人adrb3蛋白藥物可以作為促進(jìn)細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，用于體細(xì)胞雜交、動(dòng)植物遠(yuǎn)緣雜交育種、淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。具有亮氨酸拉鏈(leucinezipper)結(jié)構(gòu)域的adrb3能夠拉近獨(dú)立的生物膜，繼而促使膜合為一體，有利于不同種類細(xì)胞間的生物膜融合而促進(jìn)組織器官的形成。在線粒體等細(xì)胞器的形成、原核細(xì)胞向真核細(xì)胞、單細(xì)胞生物向多細(xì)胞生物進(jìn)化的過(guò)程中，adrb3起到了重要作用。adrb3促進(jìn)不同蛋白融合，如促進(jìn)與早幼粒細(xì)胞白血病相關(guān)的pml-rarα融合蛋白形成。adrb3基因與其他原癌基因的融合會(huì)促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。adrb3介導(dǎo)的細(xì)胞融合引起染色體不穩(wěn)定，細(xì)胞融合造成的中心體過(guò)多(3個(gè)及以上)會(huì)導(dǎo)致三或四極有絲分裂或分裂時(shí)間延長(zhǎng)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)adrb3增加中心體的數(shù)量(圖14b)，增加多倍體形成。adrb3介導(dǎo)的細(xì)胞融合有助于腫瘤的形成，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞或淋巴細(xì)胞通過(guò)高的adrb3融合能力，在腫瘤細(xì)胞融合中具有重要作用。adrb3誘導(dǎo)粒細(xì)胞與癌細(xì)胞融合，增加癌細(xì)胞的異質(zhì)性和表型不穩(wěn)定性，產(chǎn)生比親本更具惡性的細(xì)胞，加快腫瘤轉(zhuǎn)移，使癌細(xì)胞耐藥。在病毒(如人乳頭瘤病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、htlv-1、ebv)介導(dǎo)的細(xì)胞融合過(guò)程中，adrb3起到關(guān)鍵作用。adrb3抗體能夠阻滯病毒介導(dǎo)的細(xì)胞融合。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)活化的adrb3會(huì)使細(xì)胞發(fā)生去分化，改變基因表達(dá)譜和表觀遺傳修飾，轉(zhuǎn)變細(xì)胞表型。adrb3有亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域，具有結(jié)合dna和rna的能力，也能介導(dǎo)各種轉(zhuǎn)錄因子的二聚或多聚化。adrb3與其它轉(zhuǎn)錄因子形成寡聚體，結(jié)合到基因的啟動(dòng)子，激活或抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄。細(xì)胞膜上活化的adrb3內(nèi)陷進(jìn)入胞漿，形成同源或異源二聚體，具有乙?；D(zhuǎn)移酶功能的adrb3結(jié)合到3000余個(gè)基因(基因組約12％基因)的啟動(dòng)子，調(diào)控核小體組蛋白的乙?；癄顟B(tài)，促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，刺激腫瘤細(xì)胞、淋巴系祖細(xì)胞和髓系祖細(xì)胞的增殖而抑制分化成熟。本發(fā)明公開(kāi)了一類在細(xì)胞核中高表達(dá)adrb3分子的淋巴細(xì)胞，該型淋巴細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)髓系細(xì)胞的標(biāo)志蛋白--髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，mpo)，具有向髓系細(xì)胞分化的潛能。本發(fā)明人將該型細(xì)胞命名為mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞，該型淋巴細(xì)胞是淋巴系祖細(xì)胞或原始淋巴細(xì)胞。mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞的增殖和分化受到adrb3的調(diào)控，當(dāng)adrb3活性或表達(dá)量增加時(shí)，該型淋巴細(xì)胞將向髓系細(xì)胞分化，表現(xiàn)為mpo的表達(dá)增加，細(xì)胞核發(fā)生粒細(xì)胞樣改變，核型為腎形、分葉狀、不規(guī)則形。adrb3誘導(dǎo)mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞向髓系細(xì)胞分化而減少淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，引起t細(xì)胞耗竭。mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞具有免疫抑制功能，交感神經(jīng)系統(tǒng)通過(guò)adrb3調(diào)控該型細(xì)胞，維持固有免疫和適應(yīng)免疫的平衡。正常人體內(nèi)，mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞數(shù)量較少，但在癌癥、阿爾茨海默病、病毒性肝炎、自身免疫性疾病患者和老年人的外周血、脾臟、肝臟和骨髓中大量存在。mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞刺激癌細(xì)胞增殖，且這種活性具有廣譜性，對(duì)乳腺癌、胰腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、白血病、肉瘤等都有促進(jìn)增殖作用。mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞促進(jìn)肝炎病毒、艾滋病病毒等病毒的感染和復(fù)制。adrb3抗體抑制mpodim/-adrb3+淋巴細(xì)胞的功能，阻斷其向髓系細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，促進(jìn)其分化為成熟的淋巴細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3誘導(dǎo)外周血和骨髓中的cd4或cd8單陽(yáng)性t細(xì)胞去分化為cd4+cd8+雙陽(yáng)性(doublepositive，dp)t細(xì)胞，adrb3抑制dpt細(xì)胞凋亡并促進(jìn)dpt細(xì)胞增殖，增加其在血液中的含量。在老年人、病毒感染、腫瘤、自身免疫病患者中，外周血cd4+cd8+dpt細(xì)胞顯著增加。adrb3抗體阻滯dpt細(xì)胞增殖而減少其數(shù)量，適用于治療因dpt增加而導(dǎo)致的疾病和衰老。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3促進(jìn)cd8+t細(xì)胞跨系轉(zhuǎn)分化(trans-differentiation)為髓系細(xì)胞中的mdsc和中性粒細(xì)胞。adrb3一方面減少體內(nèi)cd8+t細(xì)胞數(shù)量，造成cd8+t細(xì)胞耗竭；另一方面增加treg、mdsc和中性粒細(xì)胞在血液、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)內(nèi)的比例和數(shù)量，引起全身性炎癥。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3增加異型淋巴細(xì)胞的增殖，異型淋巴細(xì)胞核發(fā)生粒細(xì)胞樣改變，表現(xiàn)為腎形、分葉狀、不規(guī)則形，該異型淋巴細(xì)胞的特征是高表達(dá)adrb3。adrb3+異型淋巴細(xì)胞是引起惡性腫瘤、病毒感染、自身免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、老年癡呆和衰老的原因之一。adrb3抗體減少adrb3+異型淋巴細(xì)胞數(shù)量，抑制其功能。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的b細(xì)胞表面分子，adrb3調(diào)控b細(xì)胞增殖、分化、凋亡與免疫應(yīng)答，adrb3表達(dá)在b細(xì)胞和漿細(xì)胞的胞質(zhì)和細(xì)胞膜。胞質(zhì)含大量adrb3的b細(xì)胞是一類新型b細(xì)胞，該b細(xì)胞亞群參與天然免疫反應(yīng)，具有促進(jìn)免疫應(yīng)答的作用，過(guò)度活化之后造成機(jī)體損害。本發(fā)明公開(kāi)了一種鑒定漿細(xì)胞的方法，即采用adrb3抗體做免疫熒光或免疫組化，如果adrb3大量蓄積在淋巴細(xì)胞的胞質(zhì)中，該類細(xì)胞即為漿細(xì)胞。adrb3影響b細(xì)胞和漿細(xì)胞活性，增加相關(guān)表面標(biāo)志如cd19的合成，促進(jìn)漿細(xì)胞合成自身抗體。adrb3抗體可抑制b細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白，減少自身抗體的合成，用于治療自身免疫性疾病。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一類模式識(shí)別受體(patternrecognitionreceptor，prr)，具有以下功能：①調(diào)理作用；②抑制補(bǔ)體活化；③吞噬和自噬作用；④啟動(dòng)免疫細(xì)胞活化和炎性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。adrb3與病原體相關(guān)分子模式的相互識(shí)別和作用是啟動(dòng)固有免疫應(yīng)答的關(guān)鍵。adrb3能夠識(shí)別細(xì)菌的脂多糖(lps)、脂蛋白(blp)、肽聚糖(pgn)、酵母菌的甘露聚糖等。adrb3調(diào)控其他的模式識(shí)別受體(如toll受體、清道夫受體、甘露糖受體和c類凝集素)的活性與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。adrb3調(diào)控由nk細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等介導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答。adrb3是炎癥前反應(yīng)的重要受體，通過(guò)調(diào)控模式識(shí)別受體來(lái)識(shí)別細(xì)菌、真菌及病毒成分，在病原體感染細(xì)胞過(guò)程中起著重要作用。adrb3使病原體能夠在細(xì)胞中存活，機(jī)制如下：1.adrb3促進(jìn)自噬，而自噬促進(jìn)胞內(nèi)的病毒、細(xì)菌或寄生蟲等病原體復(fù)制和釋放。2.adrb3減少活性氧的產(chǎn)生，而活性氧自由基能夠殺滅外來(lái)病原體。3.細(xì)胞膜adrb3介導(dǎo)細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等病原體的黏附、融合和進(jìn)入，adrb3是病毒-宿主細(xì)胞間膜融合的關(guān)鍵融合蛋白。病原體進(jìn)入宿主細(xì)胞后，在adrb3的幫助下建立一種安全屏障—液泡(vacuole)，能夠逃脫溶酶體的消化。adrb3抗體能清除細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等病原體。非特異性免疫(固有免疫)是一切免疫防護(hù)能力的基礎(chǔ)，能夠啟動(dòng)和參與特異性免疫(適應(yīng)性免疫)應(yīng)答。血液中可溶性adrb3的含量，可以作為非特異性免疫系統(tǒng)功能的重要指標(biāo)。當(dāng)前的免疫治療藥物大多是針對(duì)特異免疫細(xì)胞，忽視了數(shù)量巨大的非特異免疫細(xì)胞，導(dǎo)致單用免疫治療的有效率低下。adrb3調(diào)控以中性粒細(xì)胞為代表的非特異性免疫反應(yīng)，也會(huì)影響后續(xù)的淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫。本發(fā)明的adrb3抗體能同時(shí)調(diào)控非特異免疫和特異免疫細(xì)胞的功能，使免疫系統(tǒng)恢復(fù)正常，用于治療免疫系統(tǒng)紊亂導(dǎo)致的疾病。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞增殖，可以增強(qiáng)體內(nèi)的造血干細(xì)胞的再生能力，刺激骨髓加速造血。adrb3在干細(xì)胞表面表達(dá)，影響粘附因子的分布和數(shù)量。adrb3抗體改變骨髓中造血干細(xì)胞與胞外基質(zhì)的結(jié)合強(qiáng)度而使造血干細(xì)胞進(jìn)入到外周血，利用adrb3抗體可以分離收集造血干細(xì)胞，用于外周血造血干細(xì)胞移植。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是調(diào)節(jié)骨髓粒系造血的主要細(xì)胞因子，可作用于粒系造血祖細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、分化，并可增加粒系終末分化細(xì)胞即外周血中性粒細(xì)胞的數(shù)目與功能。adrb3刺激粒、單核-巨噬細(xì)胞成熟，促進(jìn)成熟細(xì)胞向外周血釋放，并能促進(jìn)巨噬細(xì)胞及噬酸性粒細(xì)胞的多種功能。adrb3激動(dòng)劑和利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的人adrb3蛋白藥物可以作為促進(jìn)白細(xì)胞生長(zhǎng)劑，用于預(yù)防和治療腫瘤放療或化療后引起的白細(xì)胞減少癥、治療骨髓造血機(jī)能障礙及骨髓增生異常綜合征、預(yù)防白細(xì)胞減少可能潛在的感染并發(fā)癥、以及使感染引起的中性粒細(xì)胞減少的恢復(fù)加快。適應(yīng)癥：1.骨髓移植時(shí)促進(jìn)中性粒細(xì)胞數(shù)的增加。2.預(yù)防抗腫瘤化療藥物引起的中性粒細(xì)胞減少癥及縮短中性粒細(xì)胞減少癥的持續(xù)期間；急性淋巴細(xì)胞白血病。3.骨髓增生異常綜合征的中性粒細(xì)胞減少癥。4.再生障礙性貧血的中性粒細(xì)胞減少癥。5.先天性及原發(fā)性中性粒細(xì)胞減少癥。6.免疫抑制治療(腎移植)繼發(fā)的中性粒細(xì)胞減少癥。7.肝衰竭。adrb3調(diào)節(jié)骨髓造血，促進(jìn)血紅細(xì)胞生長(zhǎng)。adrb3激動(dòng)劑和利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的人adrb3蛋白藥物可以作為促進(jìn)紅細(xì)胞生長(zhǎng)劑，用于治療貧血癥。adrb3激動(dòng)劑、具有adrb3激活作用的adrb3抗體和adrb3重組蛋白因子改善運(yùn)動(dòng)機(jī)體的攜氧能力，提高運(yùn)動(dòng)成績(jī)，修復(fù)受損組織，可以用于運(yùn)動(dòng)員的訓(xùn)練和受傷后的康復(fù)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的炎癥因子，以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮促炎效應(yīng)，adrb3信號(hào)通路調(diào)控全身性感染和自身免疫性疾病的病理過(guò)程。adrb3信號(hào)通路調(diào)控中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中p62，elastase，hk2，gapdh，cyclind1，p21，p16，p27，ras，cdk3，cdk4，rb，ki-67，mtor，rictor，c-myc,rheb，pi3k，akt，tubulin，actin，vegf，traf6，pd-l1，zap70，p53，interleukin6(il-6)，il-10，il-4，il-5，il-2，mpo，ifn-γ，gm-csf，c反應(yīng)蛋白，乙酰基轉(zhuǎn)移酶tip60，tgf-β和tnfα等蛋白分子。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)的生物標(biāo)志物，adrb3在mdsc中高表達(dá)，mdsc的生長(zhǎng)發(fā)育依賴adrb3。adrb3促進(jìn)mdsc增殖，adrb3抗體抑制mdsc功能，治療產(chǎn)生耐藥和復(fù)發(fā)的腫瘤病人。本發(fā)明公開(kāi)了ki-67和adrb3同時(shí)出現(xiàn)在惡性腫瘤病人的mdsc、淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中，ki-67和adrb3雙陽(yáng)性(ki-67+adrb3+)粒細(xì)胞數(shù)量與腫瘤患者預(yù)后不良正相關(guān)，該類型細(xì)胞是原始或幼稚型粒細(xì)胞，具有誘導(dǎo)t細(xì)胞逆分化為幼稚型t細(xì)胞的能力。adrb3和ki-67共定位在粒細(xì)胞胞漿中，adrb3增強(qiáng)粒細(xì)胞核糖體功能，促進(jìn)合成ki-67和其他細(xì)胞生長(zhǎng)因子。粒細(xì)胞釋放ki-67和生長(zhǎng)因子，刺激g0期的淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞進(jìn)入增殖期。ki-67+adrb3+粒細(xì)胞是病情加重的標(biāo)志性細(xì)胞，其數(shù)量的持續(xù)增加，高度提示患者發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。本發(fā)明公開(kāi)了一類新的中性粒細(xì)胞，這類細(xì)胞大量產(chǎn)生和分泌adrb3分子，命名為adrb3+粒細(xì)胞，該型細(xì)胞抑制機(jī)體的天然免疫，調(diào)控淋巴細(xì)胞的發(fā)育成熟。腫瘤病人、病毒或細(xì)菌感染者體內(nèi)adrb3+粒細(xì)胞含量和百分比明顯增加。腫瘤病人特別是慢性粒細(xì)胞白血病患者的脾臟是adrb3+粒細(xì)胞產(chǎn)生的活躍器官，而來(lái)源于脾的adrb3+粒細(xì)胞會(huì)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移?；熀蟮哪[瘤病人脾臟、骨髓和外周血中，白細(xì)胞中的adrb3+粒細(xì)胞比例明顯升高，adrb3+粒細(xì)胞促進(jìn)g0期的腫瘤細(xì)胞進(jìn)入增殖期，導(dǎo)致癌癥復(fù)發(fā)。脾動(dòng)脈置管灌注adrb3抗體有利于靶向殺傷adrb3+粒細(xì)胞，防止腫瘤轉(zhuǎn)移。adrb3+粒細(xì)胞黏附、攜帶腫瘤細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。adrb3延遲中性粒細(xì)胞的死亡，增加中性粒細(xì)胞在組織中的濃度。adrb3增加核糖體的功能，刺激中性粒細(xì)胞合成、釋放炎性因子和生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)新生血管生成，加強(qiáng)炎性反應(yīng)。adrb3保護(hù)線粒體功能，減少活性氧的產(chǎn)生，使被粒細(xì)胞或巨噬細(xì)胞吞噬的寄生蟲、細(xì)菌或病毒等能在細(xì)胞內(nèi)發(fā)育與增殖，此為病原體的一種免疫逃避機(jī)制。血液中adrb3+粒細(xì)胞通過(guò)黏附淋巴細(xì)胞或釋放adrb3入血等方式誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞高表達(dá)adrb3，引起淋巴細(xì)胞發(fā)生去分化，導(dǎo)致特異免疫缺陷。正常人的中性粒細(xì)胞表面足突少，adrb3含量明顯少于癌癥病人的粒細(xì)胞。癌癥病人的粒細(xì)胞足突增加，adrb3調(diào)控微管和微絲來(lái)促進(jìn)粒細(xì)胞的足突形成。adrb3促進(jìn)粒細(xì)胞的足突粘附、捕獲淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞喪失抗癌活性。腫瘤病人血液中有大量中性粒細(xì)胞的胞外誘捕網(wǎng)(nets)，用來(lái)粘附、捕獲淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。adrb3是nets主要組成成分，nets中的腫瘤細(xì)胞利用adrb3來(lái)抑制淋巴細(xì)胞，nets是腫瘤和淋巴細(xì)胞間的中介環(huán)境。adrb3抗體抑制nets的形成。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中，adrb3促進(jìn)粒細(xì)胞粘附到血管內(nèi)皮細(xì)胞，并移行進(jìn)入內(nèi)皮下，形成nets，用來(lái)粘附淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，分泌細(xì)胞因子il-6，擴(kuò)大免疫細(xì)胞在粥樣硬化灶的聚集，引起慢性炎癥反應(yīng)，形成脂紋脂斑。adrb3促進(jìn)粒細(xì)胞與斑塊中的泡沫細(xì)胞發(fā)生融合，泡沫細(xì)胞獲得了增殖和遷移能力，表現(xiàn)為斑塊沿血管壁延伸。adrb3激活中性粒細(xì)胞和泡沫細(xì)胞中的彈性蛋白酶(elastase)，釋放到血管壁組織中，彈性蛋白酶消化血管壁中層的彈性蛋白和膠原蛋白。血管彈性是維持血管正常生理功能的重要特性，血管的彈性主要由彈性蛋白纖維提供，adrb3促進(jìn)彈性蛋白的降解而降低血管彈性，使動(dòng)脈管壁增厚、變硬，管腔狹小，引起動(dòng)脈硬化、肺動(dòng)脈高壓、高血壓。肺、心臟等富有彈性的組織含有豐富的彈性蛋白，肺、心臟彈性蛋白酶的主要來(lái)源是中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，adrb3促進(jìn)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的彈性蛋白酶釋放，導(dǎo)致肺、心臟的彈性降低，破壞組織結(jié)構(gòu)，引起肺氣腫、支氣管擴(kuò)張、哮喘、肺纖維化、擴(kuò)張型心肌病、心室肥厚等。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體作為彈性蛋白酶抑制劑，能夠抑制粒細(xì)胞彈性蛋白酶的活性和釋放，用于治療彈性蛋白酶亢進(jìn)而導(dǎo)致的疾病，包括但不限于：胰腺炎、肺氣腫、肺動(dòng)脈高壓、哮喘、心肌病、心室肥厚、肝硬化、腦缺血、腦出血、腦外傷。adrb3引起中性粒細(xì)胞的活化、聚集、浸潤(rùn)，是炎癥反應(yīng)發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵步驟。在腦、肝、肺、腸、腎、心臟等多種器官缺血/再灌注損傷過(guò)程中，adrb3促進(jìn)中性粒細(xì)胞黏附在缺血區(qū)組織微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，阻塞毛細(xì)血管，形成無(wú)復(fù)流現(xiàn)象，減少組織的血液供應(yīng)。中性粒細(xì)胞在微血管內(nèi)聚集，同時(shí)釋放炎癥介質(zhì)與蛋白水解酶，炎癥介質(zhì)可吸引更多的中性粒細(xì)胞聚集，使炎癥反應(yīng)過(guò)程形成一個(gè)自我增生的惡性循環(huán)；蛋白水解酶降解幾乎所有的白細(xì)胞外基質(zhì)成分，襲擊完整的細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞脫落，增加微血管的通透性，血液與組織間的屏障由此遭受嚴(yán)重的破壞，導(dǎo)致肺水腫、腦水腫等，加重組織損傷，引起缺血性壞死。adrb3抗體減弱中性粒細(xì)胞的活性，縮小缺血再灌注后壞死組織的范圍，增強(qiáng)缺血區(qū)微血管功能的恢復(fù)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體治療腦、肝、肺、腸、腎、心臟缺血/再灌注損傷。組織中的中性粒細(xì)胞吞噬衰老細(xì)胞后，發(fā)生崩解、脫顆粒，釋放胞內(nèi)的adrb3。adrb3成為可溶性受體被g0期組織細(xì)胞內(nèi)吞，遷移入核仁，上調(diào)核仁功能，促進(jìn)核糖體大、小亞基的合成。adrb3增加合成各種g1期所必需的rna(如u3snrna)和蛋白質(zhì)(如細(xì)胞周期素、周期素激酶等)，激活g0期細(xì)胞進(jìn)入g1期。g0期是細(xì)胞發(fā)生分化的時(shí)期，adrb3促進(jìn)g0期細(xì)胞進(jìn)入增殖期，意味著細(xì)胞失去分化能力。組織中的adrb3濃度過(guò)高，持續(xù)刺激細(xì)胞增殖，抑制新生細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。粒細(xì)胞藉糖酵解獲得能量，adrb3是維持中性粒細(xì)胞糖酵解的關(guān)鍵蛋白。腫瘤細(xì)胞高表達(dá)adrb3，細(xì)胞的代謝模式被改變成以糖酵解為主。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體能夠抑制腫瘤細(xì)胞的糖酵解。浸潤(rùn)在腫瘤組織中的中性粒細(xì)胞糖酵解產(chǎn)生大量乳酸，通過(guò)adrb3激活單羧酸(mct)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白而外排乳酸，使腫瘤周圍環(huán)境中含有大量乳酸。adrb3結(jié)合slc16a3基因的啟動(dòng)子，增加mct4表達(dá)，促進(jìn)乳酸的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。高濃度的乳酸是腫瘤的能源，但乳酸抑制細(xì)胞毒性t細(xì)胞和nk細(xì)胞的活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸。腫瘤細(xì)胞外酸性的環(huán)境促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑，有利于癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。adrb抗體干擾乳酸外排，中和腫瘤細(xì)胞外的酸性微環(huán)境。在膿毒癥等炎癥狀態(tài)下，兒茶酚胺通過(guò)激動(dòng)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的adrb3而增加血液中的乳酸，導(dǎo)致患者預(yù)后不良。本發(fā)明公開(kāi)了adrb抗體抑制mdsc、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞外排乳酸，治療高乳酸血癥和乳酸酸中毒。adrb抗體抑制h+/k+-atp酶，阻斷胃酸分泌。用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎、幽門螺桿菌感染。老化細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)毒素、細(xì)菌、病毒等增加粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的adrb3基因表達(dá)，增加血液中adrb3+粒細(xì)胞、adrb3+淋巴細(xì)胞數(shù)量和可溶性adrb3的濃度。在膿毒癥病人，血管內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并釋放adrb3入血，而血液中的adrb3又能激活中性粒細(xì)胞，爆發(fā)性分泌細(xì)胞因子，引起失控的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征。在腫瘤病人，adrb3+淋巴細(xì)胞和可溶性adrb3促進(jìn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在老年人，adrb3限制組織再生，阻礙新生細(xì)胞的分化，新生的細(xì)胞不能發(fā)育為有功能的細(xì)胞，這種不完全的再生加速機(jī)體衰老或誘發(fā)腫瘤。生理狀態(tài)下，adrb3促進(jìn)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞清除衰老死亡的細(xì)胞，同時(shí)刺激組織器官中原本處于g0期的細(xì)胞進(jìn)入增殖期，通過(guò)有絲分裂而產(chǎn)生子代細(xì)胞，新生細(xì)胞的adrb3表達(dá)水平較低，重新進(jìn)入g0期并分化為有功能的細(xì)胞，用以補(bǔ)充死亡細(xì)胞，這個(gè)過(guò)程是“完全性再生”。新生細(xì)胞必須分化成熟，才能維持正常的組織器官功能，機(jī)體不會(huì)發(fā)生衰老。如果有絲分裂后新生的細(xì)胞內(nèi)adrb3活性亢進(jìn)，導(dǎo)致新生細(xì)胞不能進(jìn)入g0期，抑制細(xì)胞分化而不能發(fā)育成熟，這個(gè)過(guò)程是“不完全性再生”，是引起衰老和腫瘤的原因。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)老年人血液、腦脊液中可溶性adrb3含量和活性均較年輕人增高，過(guò)度活化的adrb3導(dǎo)致“不完全性再生”，不能修復(fù)老化的組織器官。adrb3抗體抑制不完全性再生，恢復(fù)完全性再生，具有抗衰老作用。血中adrb3濃度呈現(xiàn)了以日、月、年為周期的波動(dòng)，調(diào)控細(xì)胞的應(yīng)激、代謝、增殖或分化，有利于機(jī)體的再生。維持血中adrb3濃度的周期性波動(dòng)，是調(diào)控再生的關(guān)鍵。如果血液中的adrb3濃度波動(dòng)曲線消失，應(yīng)根據(jù)adrb3的濃度來(lái)予以調(diào)整。當(dāng)adrb3的產(chǎn)生和釋放過(guò)多時(shí)(如腫瘤或炎癥)，給予adrb3抗體來(lái)降低adrb3的活性，使其恢復(fù)到正常水平。當(dāng)adrb3濃度過(guò)低時(shí)，給予adrb3激動(dòng)劑來(lái)上調(diào)adrb3的活性。通過(guò)激活或過(guò)表達(dá)adrb3來(lái)促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂，啟動(dòng)組織的再生；通過(guò)阻滯adrb3來(lái)維持新生細(xì)胞的分化，使新生細(xì)胞轉(zhuǎn)變成有功能的成熟細(xì)胞，恢復(fù)組織器官的功能。adrb3抗體調(diào)控心臟、肝臟、骨髓、胰腺、大腦、外周神經(jīng)、腎臟、肺和肌肉等組織的再生。恢復(fù)adrb3功能低下的血液、腦脊液和組織中adrb3的濃度和活性，可以促使細(xì)胞增殖，起到抗衰老作用。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體用于促進(jìn)組織再生，治療由于再生功能障礙而導(dǎo)致的疾病，包括以下但不限于：白細(xì)胞減少癥、中性粒細(xì)胞減少癥、淋巴細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血、慢性肉芽腫病、白細(xì)胞粘附缺陷、b細(xì)胞缺陷性疾病、性聯(lián)低丙種球蛋白血癥、t細(xì)胞缺陷性疾病、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、補(bǔ)體缺陷病、燒傷、傷口不愈合、少肌癥、老年性肌肉萎縮癥、骨質(zhì)疏松、老年黃斑變性、老年耳聾和其他衰老性疾病等。炎癥是機(jī)體免疫反應(yīng)中至關(guān)重要的部分，慢性炎癥導(dǎo)致癌癥、阿爾茨海默病和其他癡呆癥、心血管疾病、骨關(guān)節(jié)炎、抑郁癥等疾病，超過(guò)90％的非傳染性老齡化疾病都與慢性炎癥有關(guān)。炎癥的最初階段是由中性粒細(xì)胞引起的，adrb3信號(hào)通路在中性粒細(xì)胞活化過(guò)程中起到了關(guān)鍵作用。敲除adrb3基因的小鼠能夠抵抗大劑量的內(nèi)毒素而延緩發(fā)生膿毒癥，減少膿毒癥導(dǎo)致的死亡，表明膿毒癥與adrb3信號(hào)通路活化有關(guān)。激活的adrb3是各種炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的“閘門”，通過(guò)“扳機(jī)樣”作用觸發(fā)炎癥介質(zhì)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。作為炎癥因子的adrb3能夠促進(jìn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞釋放mpo、elastase、il-1、il-6、vegf等炎性因子。而炎癥因子的增多反過(guò)來(lái)進(jìn)一步刺激adrb3的活化，起著放大炎癥的作用。adrb3促進(jìn)嗜酸性、嗜堿性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并釋放組織胺、白三烯、血小板活化因子等，引起平滑肌收縮，毛細(xì)血管擴(kuò)大和通透性增強(qiáng)，腺體分泌物增多，引起局部或全身過(guò)敏反應(yīng)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體具有穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜和阻止脫顆粒，抑制淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及白介素2產(chǎn)生，降低表皮郎格罕細(xì)胞數(shù)，抑制血小板聚集，增強(qiáng)紅細(xì)胞變形能力，抑制細(xì)胞的分裂和增殖作用。adrb3抗體用以治療過(guò)敏性疾病、變應(yīng)性接觸性皮炎。本發(fā)明公開(kāi)了可溶性adrb3是血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物，監(jiān)測(cè)血液或其他體液中可溶性adrb3的濃度，對(duì)于惡性腫瘤的早期診斷、預(yù)后判斷、治療反應(yīng)和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)有重要價(jià)值。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)血液、腦脊液、胸水、腹水等體液中存在adrb3，其包含細(xì)胞膜外所有的結(jié)構(gòu)域，具有與配體結(jié)合的能力，命名為可溶性adrb3(solubleadrb3,sb3)。腫瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生并釋放adrb3入血，增加血液中adrb3的含量。腫瘤患者血中的sb3含量高于正常人，腫瘤復(fù)發(fā)患者血液中的sb3高于治療緩解者，高水平sb3腫瘤患者的生存率低于低水平者。sb3可結(jié)合到nk細(xì)胞、t細(xì)胞和單核細(xì)胞上，抑制免疫，使腫瘤逃避免疫監(jiān)視。sb3有利于增加循環(huán)腫瘤細(xì)胞的活性，adrb3抗體能通過(guò)adcc效應(yīng)清除循環(huán)腫瘤細(xì)胞。除了治療用途外，抗人adrb3單克隆抗體還用于研制人adrb3elisa檢測(cè)試劑、可溶性adrb3酶聯(lián)檢測(cè)試劑、膠體金檢測(cè)試劑等。檢測(cè)血液、唾液、尿液、腦脊液、胸水和腹水等體液中的sb3的含量，可以用于膿毒癥、心血管病、阿爾茲海默病、腫瘤、自身免疫疾病的診斷和療效評(píng)價(jià)。血清中sb3可作為膿毒癥、心肌梗塞、自身免疫性疾病和惡性腫瘤等疾病的診斷指標(biāo)以及病情監(jiān)測(cè)標(biāo)志物。檢測(cè)血液和其他體液中sb3的含量可以預(yù)測(cè)壽命和5年內(nèi)的死亡率，sb3濃度越高，死亡風(fēng)險(xiǎn)越大。減少血液中的sb3的含量，可以延緩衰老。補(bǔ)體系統(tǒng)在對(duì)抗病原微生物感染中處于一線防御地位，補(bǔ)體的活化可以中和病毒，裂解細(xì)菌，調(diào)理吞噬細(xì)胞功能，有利于機(jī)體清除病原微生物。adrb3下調(diào)補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑和替代途徑，使細(xì)菌、病毒、腫瘤逃逸宿主的免疫反應(yīng)。adrb3減少補(bǔ)體c3、c5、c8、c9表達(dá)，阻礙膜攻擊復(fù)合物(membraneattackcomplex,mac)的形成，使腫瘤細(xì)胞逃避補(bǔ)體攻擊。通過(guò)組成性和誘導(dǎo)性表達(dá)adrb3，腫瘤和病毒感染細(xì)胞可限制mac組裝來(lái)保護(hù)自身避免補(bǔ)體造成的有害性破壞。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體能夠激活補(bǔ)體系統(tǒng)，升高補(bǔ)體c3、c5、c8、c9表達(dá)量，促進(jìn)mac的組裝，啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞溶解，清除病原微生物和溶解感染的細(xì)胞，用于治療惡性腫瘤，病毒感染，淋球菌感染等。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是炎癥標(biāo)志物，adrb3水平的變化反映局部和全身炎癥。可溶性adrb3(sb3)是細(xì)胞表面的adrb3經(jīng)蛋白裂解后脫落下來(lái)的可溶性細(xì)胞外成分，循環(huán)中sb3的水平和中性粒細(xì)胞的adrb3的變化是平行的，故檢測(cè)血清中的sb3可作為中性粒細(xì)胞功能監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。adrb3抗體起著限制炎癥的作用，用于治療不同病原微生物如真菌、細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、螺旋體、原蟲與寄生蟲感染引起的疾病。炎癥是腫瘤的危險(xiǎn)因素，adrb3引起的炎癥可以使感染或自身免疫性疾病進(jìn)展為腫瘤，腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步大量分泌adrb3和其他促炎因子，加重炎癥反應(yīng)，促進(jìn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，加速患者死亡。腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、treg和巨噬細(xì)胞等促進(jìn)腫瘤發(fā)展。腫瘤細(xì)胞分泌的adrb3，增加血液和腫瘤局部組織中的adrb3含量，趨化粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞向腫瘤組織遷移、浸潤(rùn)。炎癥和腫瘤細(xì)胞均可激活adrb3，而adrb3在維持慢性炎癥、促進(jìn)腫瘤進(jìn)展、抑制針對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視中起關(guān)鍵作用。adrb3是炎癥和腫瘤間發(fā)生聯(lián)系的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，使炎癥與腫瘤之間形成正反饋環(huán)路，導(dǎo)致炎癥和腫瘤相互促進(jìn)。adrb3抗體阻斷炎癥和腫瘤的惡性循環(huán)鏈，抑制炎性細(xì)胞向腫瘤部位的募集，減輕腫瘤微環(huán)境中的炎癥反應(yīng)，發(fā)揮抗炎和抗癌的雙重作用。腫瘤釋放adrb3入血來(lái)激活中性粒細(xì)胞，削弱t細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)，引起惡病質(zhì)。癌細(xì)胞中的adrb3誘導(dǎo)免疫抑制細(xì)胞如mdsc和treg增殖，抑制細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(ctl)和自然殺傷細(xì)胞(nk)的抗腫瘤免疫反應(yīng)，使癌細(xì)胞逃脫免疫殺傷，促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移。腫瘤中的adrb3招募正常的內(nèi)皮祖細(xì)胞到達(dá)腫瘤組織，促進(jìn)新生血管形成。adrb3抗體抑制腫瘤微環(huán)境中免疫抑制細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的adrb3的表達(dá)和活性，既能減輕腫瘤的炎性環(huán)境而起到增強(qiáng)腫瘤免疫的作用，也能直接抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，適用于治療惡性腫瘤和惡病質(zhì)。根據(jù)adrb3抗體的輕重鏈測(cè)序結(jié)果，本發(fā)明公開(kāi)了抗adrb3嵌合抗原受體修飾后的t細(xì)胞不僅能夠清除表達(dá)adrb3的腫瘤細(xì)胞，還能清除腫瘤微環(huán)境中的促癌炎性細(xì)胞，增加其他嵌合抗原受體t細(xì)胞免疫療法(car-t)的治療效果，用于car-t治療失敗的腫瘤病人。癌細(xì)胞、粒細(xì)胞、t細(xì)胞和巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)car-t細(xì)胞的去分化，使car-t細(xì)胞喪失抗癌活性。adrb3抗體能維持car-t細(xì)胞的分化狀態(tài)，增加car-t對(duì)癌細(xì)胞的殺傷能力。該嵌合抗原受體由小鼠抗人adrb3的單鏈抗體、cd8鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)、cd137(又名4-1bb)的胞內(nèi)信號(hào)區(qū)、cd3ζ的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)串聯(lián)構(gòu)成?？筧drb3car-t細(xì)胞能夠消滅腫瘤細(xì)胞和腫瘤內(nèi)環(huán)境中的促癌炎性細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、treg和巨噬細(xì)胞)，即使腫瘤細(xì)胞不表達(dá)adrb3，抗adrb3car-t細(xì)胞仍然能夠通過(guò)抑制腫瘤環(huán)境細(xì)胞而起到抗癌作用，是通用型car-t細(xì)胞，用于治療惡性腫瘤、自身免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、病毒感染、神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病和衰老性疾病。本發(fā)明公開(kāi)了抗adrb3嵌合抗原受體修飾后的巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、nk細(xì)胞和粒細(xì)胞，能夠清除腫瘤細(xì)胞和老化細(xì)胞，用于過(guò)繼免疫治療惡性腫瘤、自身免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、病毒感染、神經(jīng)退行性疾病和衰老性疾病。本發(fā)明公開(kāi)了基于adrb3的基因治療，利用crispr/cas9、talen和zfn技術(shù)來(lái)刪除、添加、激活或抑制adrb3基因。用于抗衰老和治療惡性腫瘤、自身免疫性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、病毒感染、阿爾茨海默病和衰老性疾病。基于adrb3靶點(diǎn)的基因治療的適應(yīng)癥與adrb3抗體的適應(yīng)癥相同。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的單核細(xì)胞表面分子，adrb3調(diào)控單核-巨噬細(xì)胞分化和增殖，促進(jìn)單核細(xì)胞向m1型巨噬細(xì)胞分化，特別是調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的活性。本發(fā)明公開(kāi)了一類新的巨噬細(xì)胞，這類細(xì)胞大量產(chǎn)生和分泌adrb3分子，命名為adrb3+巨噬細(xì)胞，該型細(xì)胞抑制機(jī)體的天然免疫。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的紅細(xì)胞表面分子。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的nk細(xì)胞表面分子。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是一種新的樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3基因是與細(xì)胞增殖相關(guān)的原癌基因(proto-oncogene)，adrb3在大多數(shù)癌癥中是一種關(guān)鍵的驅(qū)動(dòng)因子。在胰腺癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病等惡性腫瘤細(xì)胞中，adrb3異常高表達(dá)。adrb3基因主要通過(guò)擴(kuò)增和染色體易位重排方式激活。adrb3基因的融合、過(guò)表達(dá)和突變均會(huì)導(dǎo)致adrb3蛋白的失調(diào)，異常的adrb3蛋白將激活下游多條致癌信號(hào)途徑，包括pi3k/akt/mtor、ras/mapk、jak/stat、tgf-/smad、erbb/her、wnt/hedgehog/notch等。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，adrb3抗體阻滯腫瘤的轉(zhuǎn)移，可用于治療發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期癌癥患者。adrb3增加腫瘤細(xì)胞的遷移能力而促使其進(jìn)入血液，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞和中性粒細(xì)胞之間的相互作用來(lái)促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。循環(huán)腫瘤細(xì)胞大量表達(dá)adrb3，腫瘤細(xì)胞借助adrb3而與粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞發(fā)生黏附，被粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞攜帶至其他位置而發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤自身的侵襲能力，還與腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境(pre-metastaticniche)的形成密切相關(guān)。轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的構(gòu)建決定了侵襲至循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞能否在遠(yuǎn)方轉(zhuǎn)移灶部位附著、生存、增殖并最終形成轉(zhuǎn)移癌。血液中的粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞進(jìn)入組織后，會(huì)釋放adrb3因子，營(yíng)建適合腫瘤細(xì)胞生存的微環(huán)境。循環(huán)腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性adrb3蛋白能夠誘導(dǎo)骨髓前體細(xì)胞，動(dòng)員并植入遠(yuǎn)處特定的器官組織形成轉(zhuǎn)移前微環(huán)境，招募循環(huán)腫瘤細(xì)胞至特定的位點(diǎn)形成轉(zhuǎn)移灶。腫瘤細(xì)胞中adrb3的水平增高與包括轉(zhuǎn)移速度增加、復(fù)發(fā)和死亡率在內(nèi)的不良臨床結(jié)果相關(guān)。檢測(cè)腫瘤組織中adrb3的含量可以用于惡性腫瘤的診斷、預(yù)后和療效評(píng)價(jià)。血液中的可溶性adrb3濃度升高，提示腫瘤進(jìn)展加速或復(fù)發(fā)，患者預(yù)后不良。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是細(xì)胞核仁內(nèi)的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白，對(duì)于維持核仁的功能具有重要作用。adrb3聚集在g0期細(xì)胞的核仁中，促進(jìn)核糖體大、小亞基的合成，參與基因沉默、細(xì)胞衰老、細(xì)胞周期調(diào)控。adrb3促進(jìn)ki-67基因的表達(dá)和蛋白合成，激活休眠的g0細(xì)胞進(jìn)入增殖期。adrb3抗體抑制腫瘤細(xì)胞核仁的功能和結(jié)構(gòu)。adrb3位于g0、g1、s和g2期細(xì)胞的核仁中，促進(jìn)休眠期(g0)和增殖期間的轉(zhuǎn)換，促進(jìn)有絲分裂。adrb3調(diào)控g0期和增殖期細(xì)胞核仁的功能及結(jié)構(gòu)，但g0期和增殖期細(xì)胞核仁中的adrb3的構(gòu)型不同，暴露的抗原表位也不同，因此需用不同的adrb3抗體來(lái)檢測(cè)不同細(xì)胞周期核仁中的adrb3。本發(fā)明采用不同的adrb3多肽片段來(lái)制作adrb3抗體，adrb3蛋白的n端片段(第1-155氨基酸殘基)免疫產(chǎn)生的抗體能夠檢測(cè)到增殖期細(xì)胞核仁中的adrb3；adrb3蛋白的中間結(jié)構(gòu)域片段(第100-300氨基酸殘基)免疫產(chǎn)生的抗體能夠檢測(cè)到休眠期細(xì)胞核仁中的adrb3。在免疫組化、免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)等檢測(cè)中，抗原表位是adrb3的n端多肽的單克隆抗體適用于檢測(cè)增殖期細(xì)胞，抗原表位是adrb3的中間結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體適用于檢測(cè)g0期細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是g0期細(xì)胞的標(biāo)志物，只有表達(dá)adrb3的g0期細(xì)胞才能重新進(jìn)入細(xì)胞周期?；熕幬锊荒軞鹓0期癌細(xì)胞，g0期癌細(xì)胞是癌癥復(fù)發(fā)的根源。循環(huán)腫瘤細(xì)胞和播散的腫瘤細(xì)胞因?yàn)槿狈υ嫉纳L(zhǎng)微環(huán)境而被誘導(dǎo)成休眠狀態(tài)。adrb3抗體特異殺滅g0期癌細(xì)胞，防止g0期癌細(xì)胞進(jìn)入增殖期(例如g1期)，用于治療復(fù)發(fā)和耐藥的惡性腫瘤患者。adrb3抗體清除g0期循環(huán)腫瘤細(xì)胞，用于預(yù)防癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。adrb3在細(xì)胞核中的分布狀態(tài)與細(xì)胞周期的不同階段有密切關(guān)聯(lián)。g0期與增殖期細(xì)胞核仁中adrb3的分布不同，核仁中出現(xiàn)adrb3的大量蓄積是g0期細(xì)胞進(jìn)入增殖期的標(biāo)志性事件。adrb3蓄積在ki-67陰性細(xì)胞的核仁，預(yù)示該細(xì)胞將由g0期進(jìn)入g1期。本發(fā)明公開(kāi)了用adrb3抗體做免疫熒光實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)核仁中的adrb3亮斑，可以鑒定出具有增殖能力的g0期細(xì)胞(圖1，右上細(xì)胞是具有增殖能力的g0期細(xì)胞)，鑒定標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)、細(xì)胞核仁中的adrb3聚集成團(tuán)，形成2～6個(gè)亮斑，亮斑所在的部位dapi染色陰性，adrb3亮斑的外圍是異染色質(zhì)或高度壓縮的染色質(zhì)(dapi染色強(qiáng)陽(yáng)性)；(2)、細(xì)胞核中無(wú)ki-67表達(dá)。當(dāng)adrb3彌散分布在細(xì)胞核時(shí)，表明細(xì)胞已經(jīng)離開(kāi)g0期并進(jìn)入增殖期(細(xì)胞周期中的g1、s或g2期)，此時(shí)的adrb3作為核受體和轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控基因表達(dá)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3具有乙?；富钚裕{(diào)控核小體中組蛋白的乙?；?，特別是增加h3組蛋白中第9、14、18、27、56賴氨酸的乙酰化。乙酰基轉(zhuǎn)移酶tip60可被adrb3招募到染色體上，引起組蛋白h4k5、h4k12等賴氨酸位點(diǎn)的乙?；?。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體作為乙?；傅囊种苿?，用于治療與乙?；揎椨嘘P(guān)的疾病。核仁結(jié)構(gòu)和功能的完整性對(duì)于癌細(xì)胞的活力是至關(guān)重要的，adrb3維持g0期腫瘤細(xì)胞核仁的功能和結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)應(yīng)激能力，有利于腫瘤細(xì)胞度過(guò)不利的環(huán)境。在合適的環(huán)境中，adrb3刺激休眠的g0期細(xì)胞進(jìn)入g1期，使細(xì)胞發(fā)生去分化，加重腫瘤的惡性程度。adrb3抗體破壞核仁功能，減弱g0期腫瘤細(xì)胞的能量代謝，抑制g0期腫瘤細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，誘導(dǎo)g0期細(xì)胞發(fā)生老化、凋亡。除了存在于g0期細(xì)胞的核仁外，adrb3也少量存在于g1、s和g2期細(xì)胞的核仁中。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期時(shí)，核仁破裂，adrb3位于中心體的位置，促進(jìn)紡錘體的形成。由于adrb3廣泛分布于不同的細(xì)胞周期，對(duì)有絲分裂起到關(guān)鍵的調(diào)控作用。adrb3抗體也適用于殺傷增殖期癌細(xì)胞。核仁是多種病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄的場(chǎng)所。adrb3抗體抑制核仁功能，阻斷病毒復(fù)制，用于治療病毒感染性疾病。adrb3位于有絲分裂期細(xì)胞的紡錘體兩極或中心體，調(diào)控微管發(fā)生，增強(qiáng)動(dòng)粒功能，促進(jìn)姐妹染色體分離。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3是微管結(jié)合蛋白(microtubuleassociatedprotein)，促進(jìn)形成分裂期細(xì)胞中的紡錘體，adrb3抗體抑制腫瘤細(xì)胞的微管而起到抗癌作用。adrb3具有分子馬達(dá)(molecularmotor)的功能，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的物資如自噬體、脂褐素等的運(yùn)輸。adrb3抗體阻滯腫瘤細(xì)胞的物資運(yùn)輸，導(dǎo)致自噬體和脂褐素不能被清除而蓄積在細(xì)胞內(nèi)，加速腫瘤細(xì)胞老化。adrb3定位于腫瘤細(xì)胞線粒體外膜，維持線粒體膜電位的正常，促進(jìn)線粒體融合。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體削弱腫瘤細(xì)胞的糖酵解和氧化磷酸化，抑制atp產(chǎn)生。adrb3抗體破壞線粒體跨膜電位，促進(jìn)線粒體產(chǎn)生活性氧，增加脂褐素等過(guò)氧化物，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。adrb3抗體抑制腫瘤細(xì)胞溶酶體的成熟，阻礙受損線粒體和其他代謝廢物如脂褐素的清除。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3促進(jìn)線粒體自噬，促進(jìn)自噬體與溶酶體的膜融合而形成自噬溶酶體，加快自噬小體的清除。adrb3定位于自噬前體膜上，促進(jìn)自噬體膜的延長(zhǎng)而形成完整的自噬體。adrb3促進(jìn)自噬小體的雙層膜間隙形成氫離子池，驅(qū)動(dòng)v-atpase生產(chǎn)atp，這是g0期細(xì)胞的主要產(chǎn)能方式，使細(xì)胞不需氧氣，維持低代謝的休眠狀態(tài)。adrb3抗體或adrb3抑制劑如sr59230a，能夠阻斷自噬，抑制線粒體自噬體的清除，使自噬體、受損線粒體和脂褐素等代謝廢物蓄積在細(xì)胞內(nèi)，加速細(xì)胞老化或凋亡。除了阻斷自噬外，adrb3抗體還能增加衰老相關(guān)基因p16ink4/p53/p63表達(dá)，減少sirt1，促進(jìn)癌細(xì)胞老化。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)自噬小體的降解速度較快，不易檢測(cè)到自噬小體。adrb3抗體或adrb3抑制劑可以作為自噬誘導(dǎo)劑，延緩自噬小體的降解，用作自噬研究的工具藥。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體阻滯磷酸戊糖途徑，抑制癌細(xì)胞的dna復(fù)制。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體阻滯細(xì)胞中核糖體合成，降低腫瘤細(xì)胞合成蛋白的能力。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體阻滯癌細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，防止癌細(xì)胞對(duì)放、化療產(chǎn)生耐受。adrb3抗體削弱癌細(xì)胞的氧化應(yīng)激能力，使腫瘤細(xì)胞無(wú)法清除過(guò)氧化氫和活性氧。adrb3通過(guò)以下機(jī)制促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移：(1)、促進(jìn)p53蛋白降解，抑制凋亡。(2)、促進(jìn)線粒體自噬、糖酵解和氧化磷酸化，調(diào)控線粒體外膜上的電壓依賴性陰離子通道(vdac)，激活己糖激酶2(hk2)、gapdh和h+-atpase。(3)、增強(qiáng)g0期的核仁功能，促進(jìn)核糖體合成。(4)、激活溶酶體外膜上的h+-atpase和vdac，維持溶酶體內(nèi)水解酶的活性。(5)、上調(diào)cyclind1/cdk3/cdk4表達(dá)，增加rb磷酸化。(6)、促進(jìn)紡錘體形成，增加磷酸化cenp-a。(7)、調(diào)控微管的聚合與解聚，影響細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸。(8)、激活ampk、sirt1和mtor介導(dǎo)的應(yīng)激通路，增加癌細(xì)胞的應(yīng)激能力。(9)、促進(jìn)中性粒細(xì)胞和mdsc的增殖，增加調(diào)節(jié)性樹(shù)突狀細(xì)胞和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的活性。促進(jìn)粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞融合，抑制t細(xì)胞的抗癌功能。(10)、上調(diào)cd4+t細(xì)胞foxp3的表達(dá)，增加treg細(xì)胞。(11)、促進(jìn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞合成il-6、vegf和tgfβ等炎性因子。(12)、趨化內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等向腫瘤組織浸潤(rùn)，促進(jìn)新生血管的形成。(13)、促進(jìn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞粘附血管內(nèi)皮細(xì)胞，穿透內(nèi)皮而進(jìn)入組織間隙，形成轉(zhuǎn)移灶。(14)、上調(diào)p-糖蛋白的活性，使癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。(15)、激活磷酸戊糖途徑，提供腫瘤細(xì)胞增殖所需核苷酸。(16)、下調(diào)補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑和替代途徑，抑制補(bǔ)體對(duì)腫細(xì)胞的殺傷功能。(17)、與ras、myc、sis、fos、fas、abl、等癌基因形成融合基因，協(xié)同致癌。adrb3存在于免疫細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞)和腫瘤細(xì)胞中，兼具促炎促癌雙重功能。adrb3增加免疫細(xì)胞的促癌作用，上調(diào)癌細(xì)胞的促炎作用，使炎癥和腫瘤相互促進(jìn)，形成惡性循環(huán)。adrb3抗體靶向免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中共同的關(guān)鍵信號(hào)分子，既能干預(yù)腫瘤環(huán)境中的免疫抑制細(xì)胞，又能抑制腫瘤細(xì)胞，高效阻斷炎癥和腫瘤的進(jìn)展。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體是一種廣譜抗癌藥，癌細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或中性粒細(xì)胞有adrb3高度過(guò)表達(dá)(免疫組化adrb3陽(yáng)性)或基因擴(kuò)增(熒光原位雜交檢測(cè)證實(shí))的腫瘤應(yīng)用adrb3單抗臨床療效最好。治療惡性腫瘤包括以下但不局限于：惡性淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤)、急性白血病、慢性白血病、髓淋混合系白血病、惡性組織細(xì)胞病、多發(fā)性骨髓瘤、頭頸部鱗癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、口咽癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、結(jié)直腸癌、皮膚癌、濕疹樣癌(paget病)、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、前列腺癌、骨肉瘤、平滑肌肉瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、血管肉瘤、惡性胸腺瘤、副腫瘤綜合征以及惡病質(zhì)。adrb3單克隆抗體治療免疫檢查點(diǎn)抑制劑產(chǎn)生的免疫相關(guān)不良事件，包括以下但不局限于：免疫介導(dǎo)的肺炎、免疫介導(dǎo)的結(jié)腸炎、免疫介導(dǎo)的肝炎、免疫介導(dǎo)的垂體炎、腎衰和免疫介導(dǎo)的腎炎、免疫介導(dǎo)的甲狀腺功能亢進(jìn)和甲狀腺功能減退癥。本發(fā)明涉及的抗體可作為載體分別與細(xì)胞毒性藥物(甲氨蝶呤、阿霉素、長(zhǎng)春新堿等)、放射性同位素(i131，i125，in111等)或生物毒素(白喉毒素、蓖麻毒素等)交聯(lián)進(jìn)行惡性腫瘤的導(dǎo)向治療。本發(fā)明涉及的抗體也可以作為化療藥物的增敏劑，提高化療的療效，治療對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥的患者。本發(fā)明中的抗人adrb3單克隆抗體的劑型和制備方法沒(méi)有特別限制，可用本領(lǐng)域常規(guī)通用的制法制成注射劑、外用劑、吸入劑、口服常釋劑型、膠囊、顆粒劑、緩釋劑、噴霧劑、氣霧劑等各種劑型。adrb3活化血小板和中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致血液高凝、高炎性狀態(tài)。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體抑制血小板和中性粒細(xì)胞的活性，對(duì)抗血小板聚集，防止血栓形成，用于預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病，包括以下但不局限于：深部靜脈血栓、周圍血管栓塞、肺栓塞、腦栓塞、視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞、急性亞急性周圍動(dòng)脈血栓、中央視網(wǎng)膜動(dòng)靜脈栓塞、血透分流術(shù)中形成的凝血、手術(shù)過(guò)程中出現(xiàn)的血栓形成、心臟導(dǎo)管檢查、溶血性和創(chuàng)傷性休克及并發(fā)彌漫性血管內(nèi)凝血(dic)的敗血癥休克。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3單克隆抗體作為止血藥物，用于需減少流血或止血的各種醫(yī)療情況下，如：外科、內(nèi)科、婦產(chǎn)科、眼科、耳鼻喉科、口腔科等臨床科室的出血及出血性疾病。用于血友病、血小板減少癥、紫癜、鼻衄、齒齦出血等癥。動(dòng)脈粥樣硬化(as)與慢性炎癥密切相關(guān)，過(guò)度活躍的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞所引起的炎癥是導(dǎo)致as斑塊不穩(wěn)定的關(guān)鍵因素。adrb3促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和已形成斑塊的不穩(wěn)定。adrb3趨化巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附并進(jìn)入斑塊，導(dǎo)致斑塊發(fā)生炎癥而破裂，加重心肌缺血甚至壞死，臨床上表現(xiàn)為不穩(wěn)定型心絞痛和急性心肌梗死的發(fā)生。富含adrb3的巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞是引起急性冠脈綜合征(acs)的“罪犯”細(xì)胞。adrb3促進(jìn)apc遞呈抗原給動(dòng)脈壁中的t細(xì)胞，造成局部t細(xì)胞活化和炎性細(xì)胞因子的生產(chǎn)，通過(guò)慢性炎癥、誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成來(lái)促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化。adrb3是動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，外周血可溶性adrb3水平與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。adrb3通過(guò)以下機(jī)制引起acs:1、促進(jìn)炎性細(xì)胞粘附血管內(nèi)皮，損傷內(nèi)皮，有利于低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)沉積到內(nèi)皮下，形成斑塊。2、活化血小板、巨噬細(xì)胞、t細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致血液高凝、高炎性狀態(tài)。3、促進(jìn)斑塊內(nèi)血管新生。4、促進(jìn)粒細(xì)胞、t細(xì)胞浸潤(rùn)斑塊，導(dǎo)致斑塊炎癥。5、激活mmp，降解斑塊纖維帽。6、adrb3增加粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的ldlr、清道夫受體，刺激細(xì)胞吞噬ldl-c和乳糜微粒而變成泡沫細(xì)胞。7、adrb3激活巨噬細(xì)胞的磷酸戊糖途徑，產(chǎn)生大量戊糖與強(qiáng)還原劑napdh，前者用于合成核苷酸，促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖；后者則會(huì)參與膽固醇的合成，增加ldl-c濃度，有利于巨噬細(xì)胞吞噬ldl-c。8、溶質(zhì)載體(solutecarrier，slc)超家族是膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵蛋白，adrb3增加巨噬細(xì)胞的slc16a3表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取ldl-c。9、adrb3增加肝細(xì)胞核糖體功能，促進(jìn)肝臟合成c反應(yīng)蛋白、凝血因子、極低密度脂蛋白(vldl)，加重血管炎癥反應(yīng)。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體治療心腦血管疾病，包括以下但不局限于：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、急性冠脈綜合征、心肌梗塞、動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈支架內(nèi)再狹窄、主動(dòng)脈夾層、慢性肺源性心臟病、原發(fā)性高血壓、高脂血癥、心功能衰竭、心肌纖維化、心肌炎、病毒性心肌炎、原發(fā)性心肌病、擴(kuò)張型心肌病、肥厚性心肌病、縮窄型心肌病、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)濕性心臟瓣膜病變、感染性心內(nèi)膜炎、先天性心臟病、心律失常、心房顫動(dòng)、室性心動(dòng)過(guò)速、心室撲動(dòng)、心室顫動(dòng)、阿-斯綜合征、心臟及腎臟再灌注損傷、短暫性腦缺血發(fā)作(tia)、腦卒中、癲癇、癡呆、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、腦梗死、腦動(dòng)脈瘤、腦動(dòng)靜脈畸形。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)雷帕霉素增加血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中的adrb3表達(dá)量，導(dǎo)致雷帕霉素藥物洗脫支架術(shù)后再狹窄。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體治療冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后再狹窄和支架內(nèi)再狹窄。adrb3抗體作為涂層藥物，用于生產(chǎn)新型的藥物洗脫支架和洗脫球囊。本發(fā)明公開(kāi)了可溶性adrb3作為一種診斷急性冠脈綜合征和預(yù)測(cè)心血管病預(yù)后的新指標(biāo)?？扇苄詀drb3的測(cè)定可作為冠心病早期診斷的分子標(biāo)志，可溶性adrb3水平升高是冠心病的一項(xiàng)危險(xiǎn)因素，隨著血液中adrb3水平升高，acs發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯升高，心血管病預(yù)后變差。急性冠脈綜合征患者外周血中的可溶性adrb3水平高于穩(wěn)定型心絞痛患者，血液中可溶性adrb3水平是診斷acs的重要指標(biāo)，acs患者血液中的adrb3+粒細(xì)胞和adrb3+淋巴細(xì)胞數(shù)量均會(huì)增加。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體是一種廣譜抗炎藥和免疫抑制劑，能夠減輕全身炎癥反應(yīng)及組織損傷，用于治療炎癥性疾病、過(guò)敏性疾病和自身免疫性疾病，包括但不局限于：上呼吸道感染、支氣管炎、肺炎、肺氣腫、哮喘、糖皮質(zhì)激素抵抗型哮喘、嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、特發(fā)性嗜酸粒細(xì)胞增多綜合征、過(guò)敏性鼻炎、間質(zhì)性肺炎、肺間質(zhì)纖維化、慢性阻塞性肺病、原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、結(jié)締組織病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓、肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化和囊性纖維化、肺結(jié)節(jié)病、矽肺、肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征、呼吸衰竭、胸膜炎、結(jié)核病、內(nèi)毒素血癥、感染性休克、中毒性休克癥候群、敗血癥、膿毒癥、膿毒性休克、內(nèi)毒素性休克、過(guò)敏性休克、多器官功能障礙綜合征、彌散性血管內(nèi)凝血、燒傷、急性重型肝炎、急性肝衰竭、慢性肝炎、病毒性肝炎、肝硬化、肝性腦病、原發(fā)性硬化性膽管炎、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、膽囊炎、胰腺炎、慢性胃炎、消化性潰瘍、消化道應(yīng)激性潰瘍、應(yīng)激性消化道出血、糖尿病、濕疹、接觸性皮膚炎、神經(jīng)性皮炎、腦炎、腦膜炎、脊髓炎、格林-巴利綜合征、多發(fā)性硬化、青光眼、感染性多發(fā)性神經(jīng)根神經(jīng)炎、視神經(jīng)炎、視神經(jīng)乳頭炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎、交感性眼炎、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、視神經(jīng)脊髓炎、脫髓鞘疾病、結(jié)膜炎、角膜炎、鞏膜炎、干眼癥、白內(nèi)障、黃斑變性、老年性黃斑變性、破傷風(fēng)、尖銳濕疣、淋病、生殖器皰疹、梅毒、銀屑病、單純糠疹、玫瑰糠疹、白癜風(fēng)、雀斑、著色性干皮病、太田痣、黃褐斑、神經(jīng)性皮炎、帶狀皰疹、體股癬、手足癬、濕疹、過(guò)敏性皮炎、痤瘡、脂溢性皮炎、脫發(fā)、脂溢性脫發(fā)、精神性脫發(fā)、斑禿、神經(jīng)性脫發(fā)、早老性白發(fā)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬皮病、結(jié)節(jié)病、強(qiáng)直性脊柱炎、痢疾、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征、干燥綜合征、痛風(fēng)、混合性結(jié)締組織病、重癥肌無(wú)力、內(nèi)臟利什曼病、恰加斯病、阿米巴肝膿腫、小兒皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征、血管炎、系統(tǒng)性血管炎、原發(fā)性小血管炎、肉芽腫性血管炎、血栓閉塞性脈管炎、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎炎、系膜毛細(xì)血管性腎炎、狼瘡性腎炎、腎小球腎炎、腎小管萎縮以及間質(zhì)纖維化、腎盂腎炎、腎炎腎病綜合征、腎功能衰竭、多囊腎、尿路感染、盆腔炎、輸卵管炎、前列腺炎、多發(fā)性硬化癥、白塞病、天皰瘡、類天皰瘡、皮肌炎、蜂窩織炎、急性化膿性腦膜炎、瘧疾、阿爾茨海默病、路易體癡呆、帕金森病、肌萎縮側(cè)索硬化、多發(fā)性腦脊髓硬化癥、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎、川崎病、甲狀腺炎、橋本氏甲狀腺炎、原發(fā)性黏液性水腫、甲狀腺功能亢進(jìn)癥、移植物抗宿主病、同種異體移植排斥、肌病、肌肉退化、肌營(yíng)養(yǎng)不良、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、慢性肉芽腫病、淋巴結(jié)炎、再生障礙性貧血、自身免疫性溶血性貧血、過(guò)敏性紫癜、血小板減少性紫癜、骨髓纖維化、骨髓增生異常綜合征、白細(xì)胞粘附缺陷、b細(xì)胞缺陷性疾病、性聯(lián)低丙種球蛋白血癥、t細(xì)胞缺陷性疾病、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、補(bǔ)體缺陷病、低補(bǔ)體血癥、溶酶體貯積癥、黏多糖貯積癥、黏脂質(zhì)貯積癥、幽門螺旋桿菌感染、布氏桿菌病、梅毒、鉤端螺旋體病、布氏桿菌病、弓形蟲病、包蟲病、血吸蟲病、傷寒、黑熱病、絲蟲病。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體對(duì)淋菌的耐藥性有逆轉(zhuǎn)作用，用以治療耐藥性淋病。本發(fā)明公開(kāi)了可溶性adrb3作為一種預(yù)測(cè)上述炎癥性疾病預(yù)后的新指標(biāo)，隨著血液中adrb3水平升高，預(yù)后變差。adrb3促進(jìn)人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、埃博拉病毒、腺病毒、流感病毒、乳頭狀瘤病毒、單純皰疹病毒、eb病毒以及狂犬病毒的復(fù)制。adrb3抗體抑制病毒復(fù)制，促進(jìn)病毒的清除。hiv感染細(xì)胞后，誘導(dǎo)原本分布在胞漿的adrb3蓄積在膜上，趨化cd4+t細(xì)胞，并使t細(xì)胞粘附在adrb3富集區(qū)域。借助adrb3形成的突觸，hiv遷移到宿主細(xì)胞-cd4+t細(xì)胞中。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體是一種廣譜抗病毒藥，用于治療病毒感染性疾病，包括以下但不局限于：重癥急性呼吸綜合征、傳染性非典型肺炎、獲得性免疫缺陷綜合征、乙型和丙型病毒性肝炎、流行性感冒、麻疹、尋常疣、生殖器疣(尖銳濕疣)、人t細(xì)胞白血病病毒感染、單純皰疹病毒感染導(dǎo)致的新生兒皰疹、生殖器皰疹、病毒性腦膜炎、慢病毒腦炎和腦病、人類朊蛋白病、克雅病、kuru病、亞急性硬化性全腦炎、病毒性心肌炎、手足口病、eb病毒感染、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性出血熱、流行性出血熱、登革出血熱、埃博拉出血熱、帶狀皰疹、特發(fā)性血小板減少性紫癜以及狂犬病。adrb3抗體用于治療艾滋病患者抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(haart)導(dǎo)致的高乳酸血癥?；赼drb3單克隆抗體的抗病毒作用，本發(fā)明公開(kāi)了利用adrb3基因來(lái)制備預(yù)防性抗病毒疫苗，利用adrb3全長(zhǎng)蛋白和多肽片段來(lái)制備治療性抗病毒疫苗，誘導(dǎo)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，以達(dá)到清除或控制病毒的目的。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體活化抗原提呈細(xì)胞，激發(fā)t細(xì)胞免疫應(yīng)答，增強(qiáng)疫苗的免疫效果。在疫苗接種前后，給予adrb3抗體，能夠增加抗原提呈細(xì)胞數(shù)量，從而有效地捕獲、加工和提呈抗原給t細(xì)胞。本抗體作為免疫佐劑，增強(qiáng)抗原性微弱的物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，提高基因工程疫苗免疫原性，用于研制新型的乙型肝炎、流感病毒、hiv基因工程疫苗。本抗體還可以用來(lái)生產(chǎn)和研制抗毒血清，包括但不局限于：蛇、乙腦、破傷風(fēng)、狂犬病抗毒血清。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體抑制移植器官后免疫系統(tǒng)出現(xiàn)的各種排斥反應(yīng)，用來(lái)預(yù)防和治療器官移植后的排斥反應(yīng)。根據(jù)adrb3信號(hào)通路中的蛋白，本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體用于治療與p62，hk2，gapdh，vegf，cyclind1，cdk3，cdk4，rb，ki-67，mtor，rictor，akt，tubulin，traf6，pd-l1，p53，p63，il-2，il-6，il-10，tgfβ和tnfα信號(hào)通路相關(guān)的疾病。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體抑制原始和早、中幼粒細(xì)胞的增殖，促進(jìn)cd4+t細(xì)胞、treg和髓源性抑制細(xì)胞的凋亡，減少組織中的粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，減輕炎癥反應(yīng)所造成的組織損傷，這種組織損傷是衰老、器官功能衰竭和惡性腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體能提高機(jī)體對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的耐受性，有良好的退熱和緩解毒血癥的作用。用于治療嚴(yán)重創(chuàng)傷、膿毒癥性、內(nèi)毒素血癥、感染性休克、多器官功能障礙綜合征。adrb3抗體治療急性化膿性感染如膿腫、肺炎、闌尾炎、丹毒、菌血癥、內(nèi)臟穿孔、猩紅熱等?；赼drb3參與調(diào)控溶質(zhì)載體超家族和atp結(jié)合盒超家族基因表達(dá)，影響藥物和有毒物質(zhì)的吸收、分布和清除等過(guò)程。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體治療中毒如酸中毒、高乳酸血癥、尿毒癥、有機(jī)磷中毒、酒精中毒、巴比妥類中毒、重金屬(鉛、汞、砷、鉈等)中毒、細(xì)菌毒素(破傷風(fēng)毒素、白喉毒素、肉毒桿菌毒素等)中毒等?？扇苄詀drb3作為一種預(yù)測(cè)上述中毒性疾病預(yù)后的新指標(biāo)，血液中adrb3水平升高，預(yù)后變差。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體抑制mtor信號(hào)，特別是抑制mtorc1(mammaliantargetofrapamycincomplex1)的活性，用于治療衰老相關(guān)性疾病和抗衰老。下丘腦中的mtorc1蛋白是血壓控制的關(guān)鍵因子，mtorc1過(guò)度激活導(dǎo)致血壓升高，adrb3抗體抑制mtorc1而起到降血壓作用。突觸(synapse)是兩個(gè)神經(jīng)元之間或神經(jīng)元與效應(yīng)器細(xì)胞之間相互接觸、并借以傳遞信息的部位。突觸功能抑制和突觸喪失與認(rèn)知能力下降強(qiáng)相關(guān)。在阿爾茨海默氏癥的早期階段，adrb3抑制突觸間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，表現(xiàn)為近期記憶力減退。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默氏癥患者的腦脊髓液中，可溶性adrb3的濃度要高于正常水平，引起神經(jīng)的炎癥，導(dǎo)致患者記憶力退化。adrb3抗體能夠逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默氏癥中所見(jiàn)的記憶喪失。小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫細(xì)胞，清除中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損壞的神經(jīng)，斑塊及感染性物質(zhì)。adrb3在小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，正常活性的adrb3信號(hào)通路促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖，維持小膠質(zhì)細(xì)胞的功能，增加神經(jīng)生長(zhǎng)因子，促進(jìn)神經(jīng)組織再生。病理情況下，活躍的adrb3信號(hào)通路會(huì)過(guò)多激活小膠質(zhì)細(xì)胞，導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞去分化而喪失其功能，引起神經(jīng)毒性，削弱神經(jīng)元突觸可塑性，在神經(jīng)退化類疾病的發(fā)病機(jī)理中起到重要的作用。本發(fā)明公開(kāi)了抗人adrb3單克隆抗體能增加學(xué)習(xí)和記憶能力，促進(jìn)神經(jīng)再生，治療神經(jīng)疾病，包括但不局限于：阿爾茨海默病、帕金森病、多發(fā)性硬化癥、肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥、癲癇、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、格林-巴利綜合征、牛海綿狀腦病、克雅氏病、亨廷頓氏舞蹈癥、肝豆?fàn)詈俗冃?、穢語(yǔ)抽動(dòng)綜合征、脆性x染色體綜合征、lamberteaton肌無(wú)力綜合征、獲得性神經(jīng)肌強(qiáng)直、邊緣性腦炎、自身免疫性腦炎、抗nmda受體腦炎、視神經(jīng)脊髓炎、橋本腦病、狼瘡腦病、病毒性腦炎、錐體外系疾病、急性出血性白質(zhì)腦炎、彌漫性硬化、脫髓鞘疾病、小腦萎縮癥、原發(fā)性側(cè)索硬化、脊髓性肌萎縮癥、截癱、脊髓損傷、脊髓空洞癥、脊髓炎等。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體抑制神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，緩解壓力狀態(tài)下引起的焦慮或抑郁。adrb3抗體用于治療精神疾病，包括但不局限于：精神分裂癥、分裂情感性障礙、偏執(zhí)性精神病、癲癇所致精神障礙、雙相情感性精神障礙、抑郁癥、自閉癥、強(qiáng)迫癥、神經(jīng)性厭食、神經(jīng)性貪食、驚恐障礙、邊緣性人格障礙、感染性精神病、軀體疾病所致精神病、中毒性精神病(一氧化碳中毒、農(nóng)藥中毒)、老年性癡呆、酒精中毒性精神病、腦外傷性精神病、神經(jīng)癥、慢性疲勞綜合征等。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體用于治療酒精和毒品(如海洛因、甲基苯丙胺、嗎啡、大麻和可卡因等)導(dǎo)致的成癮。adrb3在骨重塑過(guò)程中起關(guān)鍵作用，adrb3在破骨細(xì)胞中表達(dá)，調(diào)控骨吸收。adrb3基因敲除可增加小鼠骨質(zhì)。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體能夠抑制破骨細(xì)胞，促進(jìn)骨形成，用于治療骨退行性變相關(guān)的疾病，所述骨退行性變包括骨質(zhì)疏松癥、骨性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、骨折延緩愈合或不愈合、股骨頭壞死、股骨頭骨骺滑脫、股骨頸異常、多發(fā)性骨骺發(fā)育不良、陳舊性骨折、化膿性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、痛風(fēng)、軟骨鈣質(zhì)沉著癥等。本發(fā)明中的不同雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的抗人adrb3單克隆抗體的功能是不同的，部分雜交瘤細(xì)胞株如5b8、5d1產(chǎn)生的抗體能阻滯adrb3，降低adrb3活性。還有部分雜交瘤細(xì)胞株如4g7、4f7等產(chǎn)生的抗體能激活adrb3，增加adrb3活性。具有激活adrb3作用的adrb3抗體和激動(dòng)劑如brl37344可以維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)，添加到培養(yǎng)基中用來(lái)培養(yǎng)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、造血干細(xì)胞。還可以用來(lái)生產(chǎn)和培養(yǎng)誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞。adrb3抗體可以用來(lái)包被細(xì)胞培養(yǎng)板，用于淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。本抗體可以用于制作免疫磁珠細(xì)胞分選試劑、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(elisa)試劑、熒光偶聯(lián)抗體、hrp偶聯(lián)抗體或其他標(biāo)簽蛋白偶聯(lián)抗體。除了細(xì)胞膜以外，adrb3蛋白還存在于胞漿和細(xì)胞核。腫瘤細(xì)胞內(nèi)的adrb3大部分位于細(xì)胞核，中性粒細(xì)胞內(nèi)的adrb3主要位于胞漿，不同定位的adrb3暴露的抗原表位不同，同樣的抗體與不同定位的adrb3的親和力不同。本發(fā)明公開(kāi)了采用adrb3蛋白的n端和中部片段多肽免疫動(dòng)物而產(chǎn)生的抗體易于與腫瘤細(xì)胞的adrb3的結(jié)合，該抗體可用于標(biāo)記腫瘤細(xì)胞。adrb3蛋白的c端多肽片段免疫產(chǎn)生的抗體易于結(jié)合粒細(xì)胞胞漿中的adrb3，該抗體可用于標(biāo)記粒細(xì)胞。本發(fā)明公開(kāi)了利用adrb3基因來(lái)制備預(yù)防性腫瘤疫苗，利用adrb3全長(zhǎng)蛋白和多肽片段來(lái)制備治療性腫瘤疫苗，誘導(dǎo)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，以達(dá)到清除或控制腫瘤的目的。本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體增加漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力。本發(fā)明公開(kāi)了制備adrb3單克隆抗體與其他腫瘤或病毒特異性抗原的重組融合蛋白，誘導(dǎo)抗腫瘤和抗病毒免疫應(yīng)答。其他腫瘤或病毒特異性抗原包括以不局限于：人前列腺特異性抗原(psa)、前列腺酸性磷酸酶(pap)、甲胎蛋白、癌胚抗原、突變的ras基因編碼蛋白、c-myc基因產(chǎn)物、糖蛋白抗原(ca)50、ca1523、ca7224、ca549、細(xì)胞角蛋白19、鱗狀細(xì)胞相關(guān)抗原(scc)、c反應(yīng)蛋白、pd-1、pd-l1、hiv蛋白、乙型和丙型肝炎病毒蛋白等。本發(fā)明公開(kāi)了利用adrb3單克隆抗體，結(jié)合血漿分離、血液透析、腹膜透析等技術(shù)來(lái)減少血液、腹水或其他體液中過(guò)度活化的adrb3，治療炎癥、膿毒癥、腫瘤、心衰和惡病質(zhì)。減少老年人血液中的adrb3，可以延緩衰老。利用adrb3抗體來(lái)吸附患者血液、胸水、腹水或其他體液中的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、mdsc、treg和m2型單核細(xì)胞，進(jìn)行免疫吸附治療，治療適應(yīng)癥等同于adrb3單克隆抗體的適應(yīng)癥?；谡；钚缘腶drb3促進(jìn)再生的生理功能，在adrb3活性低下的情況下，通過(guò)適當(dāng)增加血液、腦脊液、心臟、腦、外周神經(jīng)、脊髓、肝臟、胰腺、腎臟、肌肉等組織中的adrb3含量和活性的方式來(lái)促進(jìn)組織再生，用于治療衰老相關(guān)性疾病和外傷導(dǎo)致的損傷如截癱。但在adrb3活性亢進(jìn)的情況下，應(yīng)采用降低adrb3活性的抗體來(lái)促進(jìn)再生。生殖道炎癥與不孕不育相關(guān)，精漿adrb3檢測(cè)是男性生殖道炎癥的特異性指標(biāo)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)老年adrb3基因敲除小鼠生育能力強(qiáng)于正常老年小鼠，給予adrb3抗體的母鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)量多于正常母鼠。adrb3抗體減少雄鼠精漿彈性硬蛋白酶水平，提示adrb3抗體抑制生殖道炎癥。chip-chip的結(jié)果提示adrb3調(diào)控大量與卵子、精子活力有關(guān)的基因如izumo1，tssk3，tssk6，tsks等表達(dá)。adrb3抗體能夠增強(qiáng)卵子、精子活力，可用于治療不孕不育。基于adrb3增加彈性蛋白酶活性，本發(fā)明公開(kāi)了adrb3抗體用于制備護(hù)膚類化妝品，具有延緩皮膚衰老、恢復(fù)皮膚彈性、減少皺紋、減少色素沉著的功效。本發(fā)明涉及到的adrb3抗體還有兔單克隆抗體、鼠源性、嵌合性、全人源性抗體、單域抗體(singledomainantibody)、單鏈抗體(scfv)、雙特異性抗體、fab抗體片段、合成抗體(synbody)等，這些抗體的共同點(diǎn)是能特異性結(jié)合adrb3。生產(chǎn)抗體所用的細(xì)胞包括cho、sp2/0、bhk-21、vero細(xì)胞等。本發(fā)明公開(kāi)了與本抗體相關(guān)的adrb3表位，包括但不限于以下抗原表位：s212，s239，s349，c110，c189，t65，t140，s191，y336，y346，k151，r152，c153，p343，p350，p368，p369，p371，p377，p381，p391，p394，h190，h288，n8，n26，t150，t108，t114，g41，g106，g146，g271，g295，g383，g402，c275，c363，y145，y204，y214，y236，y346。本發(fā)明中的抗體結(jié)合但不限于上述表位而起到調(diào)控adrb3功能的作用。(s：絲氨酸，c：半胱氨酸，t：蘇氨酸，y：酪氨酸，k：賴氨酸，r：精氨酸，c：半胱氨酸，p：脯氨酸，h：組氨酸，n：天冬酰胺)。本發(fā)明公開(kāi)了制作adrb3抗體所需要的多肽片段，包括但不限于以下多肽：人adrb3全長(zhǎng)蛋白(1-408氨基酸殘基)；adrb3蛋白的n端片段(1-155氨基酸殘基)；adrb3蛋白的c端片段(156-408氨基酸殘基)；adrb3蛋白中的亮氨酸拉鏈片段(296-317aa)；核定位序列(nls)(351-369aa)；e1(adrb3第1-36氨基酸殘基)；e2(adrb3第101-111氨基酸殘基)；i2(adrb3第134-155氨基酸殘基)；e4(adrb3第315-326氨基酸殘基)；i4(adrb3第348-408氨基酸殘基)；itim1(143lrygal148或143lrygtl148或140lryrav146)；itim2(202ipyall207或202mpyvll207或199vpyall204)；itim3(212sfylpl217)；344liycrs349等?？谷薬drb3單克隆抗體，其輕鏈和重鏈的氨基酸序列：一種特異性結(jié)合adrb3的抗體，其包含：a)包含下列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：i)含有與seqidno：1、4、7、10具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列的第一cdr；ii)含有與seqidno：2、5、8、11具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第二cdr；iii)含有與seqidno：3、6、9、12具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第三cdr；和b)包含下列的輕鏈cdr：i)含有與seqidno：13、16、19、22具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第一cdr；ii)含有與seqidno：14、17、20、23具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第二cdr；和iii)含有與seqidno：15、18、21、24具有至少80％的序列同一性的氨基酸序列的第三cdr。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)可的，本文中所公開(kāi)的cdr可包括變體，例如將本文中所公開(kāi)的cdr回復(fù)突變?yōu)椴煌目蚣軈^(qū)。通常，個(gè)體變體cdr與本文所述序列的氨基酸同一性為至少70％或80％，更典型地具有優(yōu)選至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和幾乎100％的漸增的同一性。c)人源化抗體的重鏈可變區(qū)(variableregion,v區(qū))包含與seqidno:25具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列；和/或d)人源化抗體的輕鏈可變區(qū)包含與seqidno:26具有至少70％的序列同一性的氨基酸序列。表1序列表與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明明確了adrb3是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵受體，adrb3介導(dǎo)多種信號(hào)通路，介導(dǎo)的信號(hào)通路調(diào)控中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等的增殖和分化。正常情況下，adrb3維持機(jī)體的非特異免疫和特異免疫能力，清除外源病原微生物和老化的機(jī)體組織而起到保護(hù)機(jī)體和抗衰老的作用。病理情況下，該信號(hào)通路的過(guò)度活化將導(dǎo)致系統(tǒng)慢性炎癥，破壞免疫穩(wěn)態(tài)。針對(duì)adrb3的單克隆抗體能夠特異結(jié)合并調(diào)控(阻滯或激動(dòng))adrb3的活性，可用于治療炎癥、惡性腫瘤、病毒感染、心腦血管疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化)、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病(如阿爾茨海默病)、自身免疫性疾病、衰老性疾病、膿毒癥、哮喘、內(nèi)毒素血癥、感染性休克、多器官功能障礙綜合征、急性化膿性感染、再生功能障礙導(dǎo)致的疾病、淋球菌感染、貧血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、過(guò)敏性疾病、惡病質(zhì)疾病、中毒性疾病、器官移植免疫排斥、惡病質(zhì)疾病、肺動(dòng)脈高壓、急性冠脈綜合征、骨退行性變、肥厚型心肌病、mdsc相關(guān)性疾病和精神疾病等多種疾病，具有重要的醫(yī)藥價(jià)值和應(yīng)用前景。附圖說(shuō)明圖1：adrb3(b3ar)蛋白在g0期(ki-67陰性)人乳腺癌mcf7細(xì)胞的核仁中高表達(dá)；在增殖期細(xì)胞(ki-67陽(yáng)性)的細(xì)胞核中也有adrb3，但很少位于核仁。圖2：adrb3蛋白在g0期(nucleolin陰性)mcf7細(xì)胞的核仁中高表達(dá)。圖3：adrb3蛋白在mcf7細(xì)胞的核仁中(fibrillarin陽(yáng)性)高表達(dá)。圖4：adrb3蛋白蓄積在g0期mcf7細(xì)胞(h3k9ac陰性)的核仁。圖5：在brdu陰性(非s期)的mcf7細(xì)胞核中，有大量adrb3蛋白。圖6：a.adrb3蓄積在mcf7細(xì)胞核和核仁中；b.adrb3在融合細(xì)胞的多個(gè)細(xì)胞核中。圖7：adrb3在g0期(ki-67陰性)人肺癌a549細(xì)胞的核仁中高表達(dá)，在增殖期細(xì)胞(ki-67陽(yáng)性)核中的表達(dá)量較低。圖8：adrb3在g0期(nucleolin陰性)人胰腺癌cfpac1細(xì)胞的核仁中高表達(dá)，在增殖期細(xì)胞(nucleolin陽(yáng)性)的核仁中表達(dá)量較低。圖9：adrb3在人黑色素瘤a375細(xì)胞的核仁中(fibrillarin陽(yáng)性)高表達(dá)。圖10：adrb3定位在人胰腺癌panc1細(xì)胞線粒體外膜。圖11：adrb3定位在mcf7細(xì)胞紡錘體兩極的中心體。圖12：adrb3定位在a549細(xì)胞紡錘體兩極和赤道。圖13：a.adrb3定位在人肝癌hepg2細(xì)胞的微管上；b.adrb3定位在人胰腺癌panc1細(xì)胞的微管、細(xì)胞核和線粒體上。圖14：a.adrb3定位在人膠質(zhì)瘤a172細(xì)胞紡錘體兩極；b.adrb3定位在mcf7多倍體細(xì)胞的中心體位置。圖15：adrb3定位在mcf7細(xì)胞的溶酶體上。圖16：a.adrb3增加g0期細(xì)胞膜上的蛋白發(fā)生酪氨酸磷酸化，可能會(huì)促進(jìn)her2/egfr/藥泵等膜蛋白的酪氨酸磷酸化而活化膜蛋白；b.adrb3大量蓄積在g2末期mcf7細(xì)胞核中，此時(shí)dna復(fù)制完成，已經(jīng)形成染色體，核仁和核膜消失。圖17：a.adrb3在g2末期mcf7細(xì)胞的中心體，促進(jìn)微管發(fā)生中心的形成；b.adrb3在mcf7細(xì)胞的液泡外膜，促進(jìn)液泡的形成。圖18：乳腺癌組織和癌旁組織中adrb3表達(dá)示意圖；adrb3在病理分級(jí)3級(jí)的乳腺癌組織中高表達(dá)；每一豎列為一個(gè)患者所取標(biāo)本，上方兩個(gè)樣品為癌組織，下方兩個(gè)是癌旁組織。圖19：142例乳腺癌患者kaplan-meier生存曲線，縱坐標(biāo)是累計(jì)生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)；癌組織adrb3陰性患者(negative)的生存率明顯高于陽(yáng)性者(positive)，p＝0.025。圖20：肺癌組織和癌旁組織中adrb3表達(dá)示意圖；右1和右2個(gè)是一個(gè)肺鱗癌病人(g15)的癌旁和癌組織；右3和右4是一個(gè)肺腺癌病人(f15)的癌旁和癌組織。圖21：112例肺癌患者kaplan-meier生存曲線，縱坐標(biāo)是累計(jì)生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)；癌組織adrb3弱陽(yáng)性患者的生存率明顯高于強(qiáng)陽(yáng)性患者，p＝0.038。1代表弱陽(yáng)，2代表強(qiáng)陽(yáng)。圖22：胰腺癌組織和癌旁組織中adrb3表達(dá)示意圖。圖23：129例胰腺癌患者kaplan-meier生存曲線，縱坐標(biāo)是累計(jì)生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)；癌組織adrb3陰性患者(0)的生存率明顯高于陽(yáng)性者(1)，p＝0.019。圖24：90例結(jié)腸癌組織和癌旁組織中adrb3的表達(dá)示意圖，左圖為癌組織。圖25：90例結(jié)腸癌組織和癌旁組織中adrb3的表達(dá)情況，癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸組織(p＝0.0001)。圖26：左圖為50歲以上的肝癌患者癌組織中的adrb3表達(dá)量顯著高于癌旁組織，p＝0.04；右圖為162例肝細(xì)胞肝癌患者kaplan-meier生存曲線，縱坐標(biāo)是累計(jì)生存率，橫坐標(biāo)是生存時(shí)間(月)；癌組織adrb3陰性患者(0)的生存率明顯高于陽(yáng)性者(1)，p＝0.038。圖27：a.正常人骨髓涂片adrb3和mpo染色，adrb3在中性粒細(xì)胞(mpo陽(yáng)性)高表達(dá)；b.中性粒細(xì)胞內(nèi)adrb3呈圓錐形結(jié)構(gòu)嵌入細(xì)胞核；c.圓錐型的adrb3復(fù)合物始于細(xì)胞膜，貫穿胞漿，延伸到細(xì)胞核，形成一條通道。圖28：注射格拉諾賽特(重組人粒細(xì)胞集落刺激因子)后的正常人骨髓涂片adrb3和mpo染色；淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)性表達(dá)adrb3。圖29：同一個(gè)急性b淋巴細(xì)胞白血病患者治療前和治療后緩解(cr)骨髓涂片的adrb3和ki-67染色，上圖為治療前。同治療前相比，治療后緩解的粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞中的adrb3表達(dá)降低。圖30：a.急性b淋巴細(xì)胞白血病治療后復(fù)發(fā)患者骨髓涂片的adrb3和mpo染色；adrb3在粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞中高表達(dá)，提示adrb3誘導(dǎo)b淋巴細(xì)胞癌變；b.adrb3聚集在粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞相互接觸的部位，有利于細(xì)胞間粘附復(fù)合物穩(wěn)定，促進(jìn)形成抑制性免疫突觸；c.淋巴細(xì)胞胞漿和細(xì)胞核的adrb3形成錐形結(jié)構(gòu)。圖31：急性b淋巴細(xì)胞白血病治療后復(fù)發(fā)患者骨髓涂片的adrb3和ki-67染色；粒細(xì)胞中高表達(dá)adrb3和ki-67，這種粒細(xì)胞是mdsc，加重病情進(jìn)展。圖32：急性單核細(xì)胞白血病(m5)患者治療后緩解的骨髓涂片adrb3和mpo染色。圖33：急性髓細(xì)胞性白血病患者治療后緩解的骨髓涂片adrb3和ki-67染色；adrb3在增殖期粒細(xì)胞(ki-67陽(yáng)性)中高表達(dá)。圖34：a.免疫小鼠所采用的不同adrb3多肽；b.westernblot檢測(cè)抗體的特異性。圖35：抗體輕鏈的核酸和蛋白序列。圖36：抗體重鏈的核酸和蛋白序列。圖37：adrb3基因敲除小鼠和正常小鼠腹腔注射lps30mg/kg，各組小鼠的生存曲線；adrb3-/-小鼠膿毒癥死亡率降低。圖38：adrb3抗體在體外和體內(nèi)均能殺傷mcf7細(xì)胞；a.adrb3單克隆抗體減少mcf7乳腺癌細(xì)胞活力；b.adrb3抗體抑制裸鼠mcf7乳腺癌細(xì)胞移植瘤增殖，縱坐標(biāo)是移植瘤體積(立方毫米)，橫坐標(biāo)是接種細(xì)胞后的天數(shù)，b3ab為抗體組；c.adrb3抗體增加mcf7移植瘤裸鼠的脾臟指數(shù)；d.adrb3抗體減少裸鼠mcf7移植瘤cyclind1、磷酸化rb、cdk3和il-6的表達(dá)，降低cdk3活力。圖39：不同骨髓雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的adrb3抗體處理后，sw1990胰腺癌細(xì)胞的活性減少率；抗體采用的濃度是250ng/ml；橫坐標(biāo)是雜交瘤細(xì)胞株編號(hào)。圖40：不同骨髓雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的adrb3抗體處理后，cfpac1細(xì)胞的活性減少率；抗體采用的濃度是250ng/ml；橫坐標(biāo)是雜交瘤細(xì)胞株編號(hào)。圖41：adrb3抗體減小裸鼠cfpac1細(xì)胞移植瘤體積。圖42：接種到裸鼠的人cfpac1胰腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)曲線，ab為抗體處理組；adrb3單克隆抗體抑制cfpac1細(xì)胞移植瘤增殖。圖43：裸鼠cfpac1胰腺癌細(xì)胞移植瘤重量柱形圖；adrb3單克隆抗體減輕cfpac1細(xì)胞移植瘤的重量。圖44：cfpac1移植瘤裸鼠體重柱形圖；adrb3抗體不影響cfpac1移植瘤裸鼠的體重。圖45：裸鼠aspc1胰腺癌細(xì)胞移植瘤；adrb3抗體減小aspc1細(xì)胞移植瘤的體積。圖46：接種到裸鼠的人aspc1胰腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)曲線，ab為adrb3抗體處理組；adrb3單克隆抗體抑制aspc1細(xì)胞移植瘤增殖。圖47：裸鼠aspc1胰腺癌細(xì)胞移植瘤重量柱形圖；adrb3單克隆抗體減輕aspc1細(xì)胞移植瘤的重量。圖48：aspc1胰腺癌細(xì)胞移植瘤裸鼠體重柱形圖；adrb3單克隆抗體不影響aspc1移植瘤裸鼠的體重。圖49：adrb3單克隆抗體治療sw1990移植瘤裸鼠；a.接種到裸鼠的人sw1990胰腺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)曲線，adrb3單克隆抗體抑制sw1990細(xì)胞移植瘤增殖；b.adrb3單克隆抗體增加sw1990細(xì)胞凋亡率；c.adrb3抗體減少sw1990荷瘤小鼠中性粒細(xì)胞和nlr，與對(duì)照組相比，*p<0.05。圖50：接種到裸鼠的人a375黑色素瘤細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)曲線；adrb3單克隆抗體抑制a375細(xì)胞移植瘤增殖；*p＝0.032,#p＝0.005；ab為adrb3抗體處理組。圖51：adrb3單克隆抗體治療a375移植瘤裸鼠；a.a375移植瘤裸鼠外周血中的msdc流式細(xì)胞檢測(cè)；b.adrb3抗體減少a375移植瘤裸鼠外周血中的msdc數(shù)量；c.荷瘤小鼠血清e(cuò)lisa檢測(cè)；adrb3抗體增加il-10，減少il-6、vegf和mpo濃度，與對(duì)照組比，*p<0.05。圖52：a.接種到裸鼠的人a549肺癌細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)曲線；adrb3單克隆抗體抑制a549細(xì)胞移植瘤增殖，與對(duì)照組相比，*p<0.05；b.adrb3抗體抑制小鼠4t1乳腺癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移。圖53：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人肺癌h1299細(xì)胞活力。圖54：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人肝癌hepg2細(xì)胞活力。圖55：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人結(jié)腸癌hct116細(xì)胞活力。圖56：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人早幼粒白血病hl-60細(xì)胞活力。圖57：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人膠質(zhì)瘤u251細(xì)胞活力。圖58：adrb3特異性嵌合抗原受體修飾后的t淋巴細(xì)胞能夠殺傷sw1990細(xì)胞(左圖中的a1是sw1990)和h1299細(xì)胞(右圖c3)。圖59：adrb3基因敲除小鼠外周血中的白細(xì)胞總量、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞均降低；wbc:白細(xì)胞，ne#：中性粒細(xì)胞，ly#：淋巴細(xì)胞，mo#：?jiǎn)魏思?xì)胞。圖60：adrb3基因敲除小鼠淋巴細(xì)胞百分比增加，中性粒細(xì)胞百分比降低，nlr降低；ly％：淋巴細(xì)胞百分比，ne％：中性粒細(xì)胞百分比，mo％：?jiǎn)魏思?xì)胞百分比。圖61：adrb3基因敲除小鼠的肌肉量增加。圖62：adrb3基因敲除小鼠的骨密度和骨礦含量均增加。圖63：a.adrb3基因敲除小鼠血清細(xì)胞因子檢測(cè)，relativefluorescenceunits:相對(duì)熒光單位；與對(duì)照組比，*p<0.05；b.adrb3-/-小鼠血清e(cuò)lisa檢測(cè)；adrb3-/-小鼠血清il-10增加，il-6、vegf和mpo減少。圖64：adrb3基因敲除小鼠脾臟cd4+t細(xì)胞、treg細(xì)胞流式檢測(cè)。圖65：adrb3基因敲除小鼠心肌cyclind1免疫組化；fvb小鼠是正常對(duì)照。圖66：adrb3基因敲除小鼠的心臟b超檢查；敲除adrb3后，心功能良好；fvb小鼠是正常對(duì)照。圖67：4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞不能在adrb3基因敲除小鼠的皮下生長(zhǎng)；fvb小鼠是正常對(duì)照。圖68：adrb3抗體減少cdk4、nucleolin、her2和p-rb(ser780)，增加p16表達(dá)。圖69：adrb3抗體減少mtor,p-mtor(ser2481),hk2和p62；rapa為雷帕霉素，cq為氯喹。圖70：5d1抗體減少adrb3,p-rb(ser780)和gapdh；4g7增加adrb3，增加p-rb(ser780)；兩種抗體都能降低gapdh和cdk4；sr為adrb3抑制劑sr59230a。圖71：5d1抗體減少pd-l1、cdk3和gapdh的表達(dá)。圖72：用sirna抑制p62后，減少adrb3和rab7的表達(dá)；雷帕霉素增加adrb3表達(dá)；沉默p62后，adrb3不能上調(diào)mtor、rictor、sirt1和adrb3的表達(dá)。圖73：adrb3抗體減少裸鼠mcf7移植瘤中的mtor、rictor、p-akt(ser473)、p-4ebp1(t37/46)、hk2、p62、rab7、sirt1、adrb3、vdac、rheb的表達(dá)，增加p53表達(dá)。圖74：adrb3抗體減少裸鼠mcf7移植瘤中的hk2、p62、p-mtor(s2481)、rictor、il-6；a.對(duì)照組，b.抗體組。圖75：adrb3激動(dòng)后，增加下游信號(hào)通路中的mtor、rictor、4ebp1、cenpa、p62、drp1、akt和ampk等蛋白的磷酸化。圖76：adrb3抗體抑制mcf7細(xì)胞線粒體自噬小體的清除。圖77：a.adrb3抗體降低線粒體膜電位，表現(xiàn)為jc1染色為綠色；b.adrb3抗體增加mcf7細(xì)胞內(nèi)活性氧。圖78：a.adrb3抗體增加細(xì)胞內(nèi)脂褐素；b.adrb3抗體增加mcf7細(xì)胞內(nèi)的5-cfda含量。圖79：a.adrb3抗體增加mcf7細(xì)胞內(nèi)的羅丹明123含量；b.adrb3抗體增加細(xì)胞內(nèi)sa-β-gal(衰老相關(guān)β半乳糖苷酶)。圖80：adrb3抗體減少裸鼠mcf7細(xì)胞移植瘤組織攝取18f-fdg；(a)18f-fdgpet掃描圖；(b)重建圖像上靶組織(t)與鄰近正常組織(非靶組織n)的灰度比值柱形圖；(c)對(duì)照組:移植瘤出現(xiàn)放射性濃聚影，腫瘤fdg攝取與肝臟相似，沒(méi)有中心壞死，白色箭頭所示為移植瘤；(d)adrb3抗體組：移植瘤中間出現(xiàn)放射性稀疏缺損，腫瘤攝入fdg比肝臟少，出現(xiàn)中心液化壞死；(e)adrb3抗體減少腫瘤組織atp產(chǎn)量；(f)adrb3抗體降低腫瘤組織hk活性。圖81：adrb3抗體組mcf7細(xì)胞移植瘤組織透射電鏡圖，adrb3抗體導(dǎo)致線粒體嵴減少和體積膨脹。圖82：adrb3抗體組裸鼠mcf7細(xì)胞移植瘤細(xì)胞中，線粒體自噬體蓄積在胞漿中，沒(méi)有被清除，黑色箭頭所示為線粒體自噬體，白色箭頭所示是脂滴。圖83：adrb3被抑制后，腺病毒無(wú)法感染a549肺癌細(xì)胞，adrb3抗體通過(guò)抑制mtor第2448位點(diǎn)的絲氨酸磷酸化而起到抑制腺病毒感染的作用；a.上排圖為腺病毒感染的細(xì)胞，p-mtor(ser2448)明顯增加并蓄積在細(xì)胞膜下，下排圖為用adrb3抗體預(yù)處理的細(xì)胞，不發(fā)生腺病毒感染；b.adrb3抗體抑制p-mtor(ser2448)，減少mtor下游底物4ebp1的磷酸化。圖84：adrb3和腺病毒都定位于核仁，adrb3是病毒復(fù)制所需的關(guān)鍵蛋白。圖85：乙型肝炎患者肝細(xì)胞胞漿adrb3增加，adrb3抗體抑制hbv感染hepg2細(xì)胞。圖86：肺癌胸水細(xì)胞涂片mpo、adrb3免疫熒光；a.肺癌患者胸水中存在大量可溶性adrb3(solubleb3,sb3)，提示粒細(xì)胞通過(guò)脫顆粒方式釋放sb3到血液和組織間隙；b.粒細(xì)胞胞漿中有大量adrb3；c/d.胸水中高表達(dá)adrb3的粒細(xì)胞(mpo+)易于粘附肺癌細(xì)胞；e.胸水中脫落肺癌細(xì)胞高表達(dá)adrb3。圖87：chip-chip實(shí)驗(yàn)芯片掃描圖。圖88：a.攜帶綠色熒光蛋白(gfp)adrb3可以殺死胰腺癌sw1990細(xì)胞；b.adrb3質(zhì)粒圖。圖89：a.攜帶flag標(biāo)簽蛋白的adrb3不能進(jìn)入mcf7細(xì)胞核；b.adrb3定位在mcf7細(xì)胞的微管、細(xì)胞核和線粒體上。圖90：adrb3/apoe雙敲除和apoe敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊檢測(cè)；a.adrb3和apoe雙敲除小鼠的主動(dòng)脈明顯比apoe-/-小鼠增粗；b.主動(dòng)脈油紅o染色；c.血清炎性因子elisa檢測(cè)。圖91：免疫熒光檢測(cè)正常人外周血涂片細(xì)胞中adrb3的表達(dá)；a.adrb3在正常人的中性粒細(xì)胞中表達(dá)，淋巴細(xì)胞有微量表達(dá)；b.adrb3在幼稚或原始型t淋巴細(xì)胞(胞質(zhì)含有大量cd4或cd8的淋巴細(xì)胞)中大量表達(dá)；c.g2晚期和有絲分裂早期的細(xì)胞中高表達(dá)adrb3，此時(shí)期的細(xì)胞核膜已經(jīng)破裂，染色體復(fù)制完成，但尚未形成紡錘體。圖92：a.乳腺癌病人外周血涂片adrb3免疫熒光，粒細(xì)胞和異型淋巴細(xì)胞有大量adrb3，右上方是異型淋巴細(xì)胞，adrb3大量表達(dá)，細(xì)胞核發(fā)生粒細(xì)胞樣改變；b.乳腺癌病人的粒細(xì)胞出現(xiàn)大量足突，adrb3附著在足突上。圖93：乳腺癌病人外周血涂片adrb3免疫熒光；上方為淋巴細(xì)胞，高表達(dá)adrb3，微量表達(dá)mpo；下方為粒細(xì)胞，adrb3大量蓄積在粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的接觸位置，起到了黏附因子樣作用，促進(jìn)形成免疫突觸。粒細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞向髓系細(xì)胞分化。圖94：乳腺癌病人外周血涂片adrb3免疫熒光；a.乳腺癌患者血液中大量形成中性粒細(xì)胞胞外網(wǎng)絡(luò)(net)，淋巴細(xì)胞(mpo陰性)黏附在net中；b.黃色方框中的淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為mpodimadrb3bright，可能是淋巴系祖細(xì)胞或原始型淋巴細(xì)胞。圖95：乳腺癌患者血液中的淋巴細(xì)胞(黃色方框內(nèi))高表達(dá)adrb3和ki-67，處于增殖期，發(fā)生去分化，是幼稚或原始型淋巴細(xì)胞；說(shuō)明患者淋巴細(xì)胞功能減退，發(fā)生特異免疫缺陷。圖96：乳腺癌患者部分淋巴細(xì)胞高表達(dá)adrb3，少量表達(dá)ki-67和mpo，是幼稚或原始型淋巴細(xì)胞。圖97：乳腺癌患者血液中有大量dna碎片，adrb3附著在dna碎片上。圖98：正常人外周血涂片細(xì)胞中adrb3的免疫熒光檢測(cè)——原始漿細(xì)胞的細(xì)胞核大于t細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)有大量adrb3；圖99：正常人外周血涂片細(xì)胞中adrb3的免疫熒光檢測(cè)——成熟漿細(xì)胞的特征為胞漿沒(méi)有cd4或cd8，但含有大量adrb3；圖100：正常人外周血涂片細(xì)胞中adrb3的免疫熒光檢測(cè)——cd19+b細(xì)胞膜上表達(dá)adrb3。圖101：adrb3抗體促進(jìn)補(bǔ)體激活；a.adrb3抗體增加補(bǔ)體c8和c5r1；lps為內(nèi)毒素，作為誘導(dǎo)補(bǔ)體的陽(yáng)性對(duì)照；b.免疫熒光檢測(cè)c8和b3ar。具體實(shí)施方式下面結(jié)合說(shuō)明書附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作出進(jìn)一步地詳細(xì)闡述，所述實(shí)施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中所使用的試驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，為可從商業(yè)途徑得到的試劑和材料。實(shí)施例1免疫熒光檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中adrb3的定位1、實(shí)驗(yàn)方法乳腺癌mcf7細(xì)胞、肺癌a549細(xì)胞、黑色素瘤a375、胰腺癌cfpac1細(xì)胞、肝癌hepg2細(xì)胞、膠質(zhì)瘤a172細(xì)胞以105/孔接種于6孔板，內(nèi)置無(wú)菌蓋玻片，孵育至細(xì)胞貼片后，4％多聚甲醛固定10min，pbs洗3遍。0.1％tritonx-100通透10分鐘，3％bsa封閉1h，滴加ki-67/adrb3/nucleolin/fibrillarin/h3k9ac/brdu/α-tubulin/flag等的抗體(1∶100)，線粒體染料采用mitotracker，溶酶體染料采用lysotracker，細(xì)胞固定前給予brdu，lipofectin3000轉(zhuǎn)染pcdna3-flag-b3質(zhì)粒到細(xì)胞。濕盒密閉，4℃冰箱孵育過(guò)夜。pbs漂洗，5min×3，滴加fitc標(biāo)記的二抗(anti-rabbit,1∶800)和pe標(biāo)記的二抗(anti-mouse,1∶800)，室溫孵育1h，dapi0.5μg/ml，3min，pbs漂洗5min×3，50％甘油/pbs封片，激光共聚焦顯微鏡下觀察，隨機(jī)觀察5～7個(gè)視野并拍片，fluorchem8900軟件測(cè)量細(xì)胞平均紅色熒光強(qiáng)度和平均綠色熒光強(qiáng)度。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如附圖1～17所示，可得出如下結(jié)果：(1)通過(guò)ki67/nucleolin/brdu染色，發(fā)現(xiàn)g0期細(xì)胞中存在大量的核仁，但g0期核仁的組成蛋白不同于g1期細(xì)胞，不能用g1期核仁的蛋白標(biāo)志物來(lái)標(biāo)記g0期細(xì)胞的核仁。adrb3在g0期(ki-67和nucleolin為陰性)人乳腺癌mcf7細(xì)胞的核仁中高表達(dá)。圖1中，右上細(xì)胞是具有增殖能力的g0期細(xì)胞。(2)adrb3在g0期(ki-67陰性)人肺癌a549細(xì)胞的核仁中高表達(dá)。(3)adrb3在g0期(nucleolin陰性)人胰腺癌cfpac1細(xì)胞的核仁中高表達(dá)。(4)adrb3在人黑色素瘤a375細(xì)胞的核仁中(fibrillarin陽(yáng)性)高表達(dá)。(5)adrb3定位在人胰腺癌panc1細(xì)胞線粒體外膜。(6)adrb3定位在a549細(xì)胞紡錘體兩極的中心體和紡錘體赤道。adrb3在融合細(xì)胞的多個(gè)細(xì)胞核中。(7)adrb3定位在人肝癌hepg2細(xì)胞的微管上。(8)adrb3定位在人膠質(zhì)瘤a172細(xì)胞紡錘體兩極的中心體。adrb3定位在多倍體細(xì)胞的中心體位置。(9)adrb3定位在mcf7細(xì)胞的溶酶體上。adrb3增加g0期細(xì)胞膜上的蛋白發(fā)生酪氨酸磷酸化，促進(jìn)her2/egfr/藥泵等膜蛋白的酪氨酸磷酸化而活化膜蛋白。(10)adrb3定位在g2末期mcf7細(xì)胞的中心體，促進(jìn)微管發(fā)生中心的形成。(11)adrb3在mcf7細(xì)胞的液泡外膜，促進(jìn)液泡的形成。atp6v0d1是液泡型atp酶d亞基，位于液泡膜。adrb3與atp6v0d1共定位，說(shuō)明adrb3位于液泡膜。實(shí)施例2組織芯片免疫組化方法檢測(cè)腫瘤組織中adrb3的表達(dá)情況1、本研究采用11種不同組織來(lái)源的腫瘤組織芯片，共1479例病人：(1)42例非小細(xì)胞肺癌組織；(2)150例有生存期資料的肺腺癌；(3)150例生存期肺鱗癌；(4)180例生存期肝癌；(5)170例生存期乳腺癌和82例無(wú)生存期乳腺癌；(6)170例生存期胰腺癌；(7)62例甲狀腺乳頭狀癌；(8)90例生存期結(jié)腸癌；(9)90例生存期腎癌；(10)93例生存期食管癌；(11)90例生存期胃癌；(12)90例生存期直腸癌；(13)20例白血病。2、實(shí)驗(yàn)步驟：(1)石蠟切片：厚度4μm；(2)烤片：65℃，3h；(3)脫蠟至水：二甲苯10min×3缸，100％-100％-95％-95％-90％-80％-70％酒精各5min，水化5-10min；(4)抗原修復(fù)：ph8.0tris-edta修復(fù)液高壓修復(fù)，從排氣閥開(kāi)始排氣算起3min，自然冷卻；(5)3％過(guò)氧化氫孵育10min；(6)pbs浸洗5min×3次；(7)10％山羊血清封閉10min；(8)配制一抗(1：100)；(9)棄血清加一抗，4℃過(guò)夜；(10)孵育完后，pbs浸洗5min×3次；(11)加二抗，室溫孵育30min；(12)pbs浸洗5min×3次；(13)dab顯色(a液與b液比例為1：50)，在顯微鏡下觀察，表達(dá)適當(dāng)，背景清晰，即可終止；(14)蘇木素復(fù)染1min，溫水返藍(lán)15min；(15)過(guò)梯度酒精脫水：70％-80％-90％-95％-95％-100％-100％，各3秒；(16)二甲苯透明5min×2缸；(17)中性樹(shù)膠封片。3、染色強(qiáng)度判定：每個(gè)組織點(diǎn)隨機(jī)觀察6～8個(gè)高倍視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)超過(guò)5％時(shí)即確定為染色陽(yáng)性病例。弱陽(yáng)性為淡黃色(+或1)、中陽(yáng)性為棕黃色(++或2)、強(qiáng)陽(yáng)性為棕褐色(+++或3)。染色陽(yáng)性率判定：每個(gè)組織點(diǎn)隨機(jī)觀察6～8個(gè)高倍視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)超過(guò)5％時(shí)即確定為染色陽(yáng)性病例。弱陽(yáng)性為淡黃色(+或1)、中陽(yáng)性為棕黃色(++或2)、強(qiáng)陽(yáng)性為棕褐色(+++或3)。染色陽(yáng)性率判定：選取3個(gè)染色強(qiáng)度不同的視野在高倍鏡下進(jìn)行判讀，每個(gè)視野中隨機(jī)記100個(gè)細(xì)胞，記100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞占的百分率x1％，同樣原理看另外2個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞占的百分率后x2％、x3％，最終該組織點(diǎn)染色陽(yáng)性率取x1％、x2％及x3％的平均數(shù)。對(duì)組織芯片中各點(diǎn)評(píng)分，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積兩者積分之和來(lái)判斷。首先將染色強(qiáng)度評(píng)分：0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比評(píng)分：0分為陰性，<25％為1分，25％～50％為2分，>50％為3分。兩種積分相加為該點(diǎn)得分。kaplan-meier法對(duì)癌組織中adrb3陰性和陽(yáng)性的患者作生存分析，獲得兩組生存曲線。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)采用logrank法，比較各組生存曲線分布是否相同。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果如附圖18～26和表2～4所示。由表2可知，乳腺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常乳腺組織(p＜0.01)。由表3可知，肺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常肺組織(p＜0.01)。由表4可知，胰腺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常胰腺組織(p＜0.01)。表2：adrb3在228例乳腺癌組織和89例癌旁組織的表達(dá)情況表3：adrb3在150例肺癌患者癌組織和癌旁組織的表達(dá)情況b3ar例數(shù)-++++++癌15086345345.3％42.0％30.0％22.7％總陽(yáng)性率94.7％癌旁150139101092.7％6.7％0.7％0.0％總陽(yáng)性率7.3％表4：165例胰腺癌組織和癌旁組織的adrb3表達(dá)情況b3ar例數(shù)-++++++癌165268451415.8％50.9％30.9％2.4％總陽(yáng)性率84.2％癌旁165115464069.7％27.9％2.4％0.0％總陽(yáng)性率30.3％由圖18～26和表2～4所示可得出如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)adrb3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核中，少數(shù)位于胞漿和胞膜。adrb3在乳腺癌組織中的陽(yáng)性率為90.9％(210/228)，其中57.3％是中、強(qiáng)陽(yáng)性。癌旁乳腺組織中，adrb3的陽(yáng)性率為31.5％(28/89)，中陽(yáng)性占3.6％(1/28)，無(wú)強(qiáng)陽(yáng)性。乳腺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常乳腺組織(p＜0.01)。adrb3表達(dá)量與乳腺癌的惡性程度呈正相關(guān)，隨細(xì)胞惡性程度增加，adrb3逐漸上升。在病理分級(jí)i級(jí)乳腺癌組織中的陽(yáng)性率為73.7％(28/38)，iii級(jí)乳腺癌組織中的陽(yáng)性率為97.6％(40/41)，adrb3在病理分級(jí)iii級(jí)的乳腺癌組織中高表達(dá)，明顯高于i級(jí)的乳腺癌組織(p＜0.01)。adrb3表達(dá)量與乳腺癌的分期(ajcc第六版臨床分期)相關(guān)，病程越晚的腫瘤，adrb3的表達(dá)越強(qiáng)。1期乳腺癌組織中，adrb3陽(yáng)性率為65.0％(13/20)。3期乳腺癌組織中，陽(yáng)性率為100％(67/67)。adrb3減少乳腺癌患者的生存率，乳腺癌患者adrb3陽(yáng)性表達(dá)者無(wú)病生存期和總生存期均明顯短于陰性者。142例乳腺癌患者kaplan-meier生存曲線分析，癌組織adrb3陰性患者的生存率明顯高于陽(yáng)性者，p＝0.025。兩組的平均生存時(shí)間(meansurvival)分別是154個(gè)月和126個(gè)月。從生存率曲線圖中可見(jiàn)，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，adrb3陽(yáng)性患者生存率逐漸下降，接近170個(gè)月時(shí)，生存率約為60％。而adrb3陰性患者的生存率下降較陽(yáng)性者緩慢，在170月時(shí)，生存率仍在90％以上。風(fēng)險(xiǎn)量曲線圖的趨勢(shì)也十分明顯，即隨時(shí)間的延長(zhǎng)，adrb3陽(yáng)性患者在生存上所經(jīng)歷的死亡風(fēng)險(xiǎn)愈來(lái)愈大，到170個(gè)月時(shí)，大約是起初(0個(gè)月)的5倍。而adrb3陰性患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)較陽(yáng)性者小，在170月時(shí)，死亡風(fēng)險(xiǎn)尚未到起初的1倍。癌組織adrb3與ki67的相關(guān)系數(shù)為0.296(p＝0.02)，有顯著性的線性正相關(guān)關(guān)系。(2)肺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常肺組織(p＜0.01)。adrb3表達(dá)越多，生存期越短。kaplan-meier生存分析，肺癌組織adrb3弱陽(yáng)性患者的生存率明顯高于強(qiáng)陽(yáng)性患者，p＝0.038。adrb3弱陽(yáng)性患者的中位生存時(shí)間為81個(gè)月，強(qiáng)陽(yáng)性患者的中位生存時(shí)間為50個(gè)月。癌組織adrb3水平和肺癌的快速惡化及較差預(yù)后直接相關(guān)。adrb3抗體減少adrb3在癌癥中的表達(dá)，可以治療肺癌轉(zhuǎn)移的患者。(3)胰腺癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于癌旁組織(p＜0.01)，癌組織adrb3陰性患者(0)的生存率明顯高于陽(yáng)性者(1)，p＝0.019。陰性患者的平均生存時(shí)間是43.6個(gè)月，陽(yáng)性患者是29.4個(gè)月。(4)結(jié)腸癌組織中的adrb3表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸組織(p＝0.0001)。(5)肝細(xì)胞肝癌組織中的adrb3表達(dá)量與年齡和病理分級(jí)正相關(guān)，年齡越大、惡性程度越高，adrb3蛋白越多。50歲以上的肝癌患者癌組織中的adrb3表達(dá)量顯著高于癌旁組織，p＝0.04。162例肝細(xì)胞肝癌患者kaplan-meier生存分析結(jié)果示：癌組織adrb3陰性患者的生存率明顯高于陽(yáng)性者，p＝0.038。adrb3陰性患者的中位生存時(shí)間是37個(gè)月，陽(yáng)性者的中位生存時(shí)間是25個(gè)月。(6)在急性淋巴細(xì)胞白血病復(fù)發(fā)患者中，骨髓粒細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)含大量密集的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，adrb3和ki-67附著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，adrb3和ki-67含量明顯增加，顯著高于治療緩解者。(7)腎癌、甲狀腺癌、直腸癌、食管癌與胃癌的癌組織中的adrb3表達(dá)均高于癌旁組織。實(shí)施例3免疫熒光檢測(cè)不同類型白血病患者骨髓涂片細(xì)胞中adrb3的表達(dá)1、實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1。2、結(jié)果如附圖27～33所示：(1)髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,mpo)是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，adrb3在正常人的中性粒細(xì)胞中表達(dá)，在淋巴細(xì)胞中不表達(dá)。中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)的adrb3形成錐形結(jié)構(gòu)直達(dá)細(xì)胞核，adrb3形成的通道有助于胞外的物資(如病毒)進(jìn)入細(xì)胞核，阻滯adrb3，會(huì)抑制病毒進(jìn)入細(xì)胞核。在b淋巴細(xì)胞白血病人中，adrb3在白血病細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均有表達(dá)，提示adrb3誘導(dǎo)b淋巴細(xì)胞癌變。白血病細(xì)胞中的adrb3也形成直達(dá)細(xì)胞核的通道(2)注射格拉諾賽特(注射用重組人粒細(xì)胞集落刺激因子)后的正常人骨髓涂片adrb3和mpo染色。粒細(xì)胞集落刺激因子刺激粒細(xì)胞增殖，粒細(xì)胞大都處于增殖期，adrb3在增殖期的不成熟粒細(xì)胞中高表達(dá)，提示adrb3刺激粒細(xì)胞增殖而抑制其分化成熟。在粒細(xì)胞集落刺激因子的作用下，淋巴細(xì)胞(mpo陰性)表達(dá)adrb3，提示adrb3是誘導(dǎo)性表達(dá)，adrb3具有調(diào)控淋巴細(xì)胞增殖和分化的作用。(3)急性b淋巴細(xì)胞白血病治療后復(fù)發(fā)患者骨髓涂片的adrb3和mpo染色。在白血病治療后復(fù)發(fā)患者的粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞中，adrb3均高表達(dá)，含有大量adrb3的粒細(xì)胞是導(dǎo)致b淋巴細(xì)胞白血病復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素，adrb3+粒細(xì)胞會(huì)促進(jìn)g0期的白血病細(xì)胞進(jìn)入增殖期，導(dǎo)致復(fù)發(fā)。同治療前相比，急性b淋巴細(xì)胞白血病患者治療后的粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞中的adrb3表達(dá)降低。adrb3聚集在粒細(xì)胞(抗原提呈細(xì)胞)和淋巴細(xì)胞相互接觸的部位，有利于細(xì)胞間粘附復(fù)合物穩(wěn)定，促進(jìn)形成抑制性免疫突觸。adrb3誘導(dǎo)粒細(xì)胞與白血病細(xì)胞融合，改變癌細(xì)胞的表型，增加癌細(xì)胞的惡性程度，使癌細(xì)胞耐藥。淋巴細(xì)胞內(nèi)adrb3呈錐形結(jié)構(gòu)直達(dá)細(xì)胞核，adrb3影響淋巴細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)修飾和基因表達(dá)譜，促進(jìn)增殖。(4)急性b淋巴細(xì)胞白血病治療后復(fù)發(fā)患者骨髓涂片的adrb3和ki-67染色。粒細(xì)胞中高表達(dá)adrb3和ki-67，兩個(gè)蛋白共定位在胞漿中，提示粒細(xì)胞核糖體功能旺盛，合成大量細(xì)胞生長(zhǎng)因子。通過(guò)釋放生長(zhǎng)因子，刺激g0期的淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞進(jìn)入增殖期。mdsc是adrb3和ki-67雙陽(yáng)性的粒細(xì)胞，能夠抑制t細(xì)胞、nk細(xì)胞等免疫細(xì)胞清除白血病細(xì)胞和其他腫瘤細(xì)胞。白血病治療后復(fù)發(fā)的患者骨髓和外周血中，adrb3+ki-67+粒細(xì)胞明顯增加，提示該類粒細(xì)胞是導(dǎo)致白血病復(fù)發(fā)的關(guān)鍵。(5)急性單核細(xì)胞白血病(m5)患者治療緩解后骨髓涂片的粒細(xì)胞和白血病細(xì)胞均表達(dá)adrb3。(6)adrb3在急性髓細(xì)胞性白血病患者的增殖期粒細(xì)胞(ki-67陽(yáng)性)中高表達(dá)。實(shí)施例4雜交瘤細(xì)胞株的制備、adrb3抗體的純化、抗體測(cè)序和人源化1、用人adrb3蛋白片段(包括全長(zhǎng))免疫小鼠，采用的部分抗原表位如圖34a所示，包括但不限于以下抗原表位：人adrb3全長(zhǎng)蛋白(1-408氨基酸殘基)、adrb3蛋白的n端片段(1-155氨基酸殘基)、adrb3蛋白的c端片段(156-408氨基酸殘基)、adrb3蛋白中的亮氨酸拉鏈片段(296-317aa)、核定位序列(nls)(351-369aa)、e1(adrb3第1-36氨基酸殘基)、e2(adrb3第101-111氨基酸殘基)、i2(adrb3第134-155氨基酸殘基)、e4(adrb3第315-326氨基酸殘基)、i4(adrb3第348-408氨基酸殘基)等。加入弗氏完全佐劑給balb/c小鼠皮下注射，初次免疫后21天，從尾靜脈加強(qiáng)免疫。4天后制備脾細(xì)胞懸液與骨髓瘤細(xì)胞sp2/0進(jìn)行細(xì)胞融合，hat選擇雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤克隆化，最終每個(gè)adrb3蛋白片段都獲得了若干個(gè)雜交瘤細(xì)胞株，共篩選出30余個(gè)能產(chǎn)生adrb3抗體的雜交瘤細(xì)胞株。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)、蛋白免疫印跡(圖34b)和免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)抗體的特異性、親和性。trizol裂解雜交瘤細(xì)胞后，提rna，做抗體的輕重鏈測(cè)序。構(gòu)建人源化抗體的輕鏈質(zhì)粒(核酸和蛋白序列如圖35所示，但不限于圖35)和重鏈質(zhì)粒(核酸和蛋白序列如圖36所示，但不限于圖36)。使用bpfectintransfectionreagent，h:l＝1:1,轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒比為3:1，轉(zhuǎn)染hek293，在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)，大量生產(chǎn)抗體。小鼠腹水收集抗體：10～11周齡balb/c小鼠，腹腔注射完全免疫佐劑，0.1ml/只，6天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5*106，細(xì)胞接種后8天開(kāi)始抽腹水，隔天抽一次。3000rmp，10min，腹水上清-80℃保存。硫酸銨濃縮后，使用proteing親和層析柱純化，按照抗體純化標(biāo)準(zhǔn)做法來(lái)進(jìn)行純化洗脫，sds-page進(jìn)行純度鑒定。定量采用uv定量。實(shí)施例5內(nèi)毒素致死實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)方法lps按30mg/kg腹腔注射小鼠(正常fvb小鼠和adrb3基因敲除小鼠各10只)。注射用水溶解lps，配成1mg/ml。小鼠稱重(g)，重量*0.03，得出注射用量(ml)，觀察小鼠的死亡并記錄死亡時(shí)間，繪制各組小鼠的生存曲線。he染色觀察肝、肺組織炎性壞死和粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況。腹腔分泌物細(xì)胞涂片做免疫熒光，檢測(cè)中性粒細(xì)胞。免疫組化檢測(cè)肝、肺組織il-6、mpo、elastase蛋白的表達(dá)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果注射內(nèi)毒素后，小鼠活力明顯減弱，體溫降低，部分小鼠眼睛流出膿液，出現(xiàn)膿毒癥表現(xiàn)。注射lps后的16小時(shí)內(nèi)，10只fvb小鼠全部死亡，2只adrb3-/-小鼠死亡，8只adrb3-/-小鼠存活。與正常小鼠相比，adrb3-/-小鼠膿毒癥死亡率明顯降低(圖37)，肝、肺組織發(fā)生炎性壞死的面積明顯減輕。兩組小鼠的腹部均出現(xiàn)大量膿液，小鼠發(fā)生腹膜炎伴膿毒癥。在adrb3基因敲除后的腹膜炎小鼠體內(nèi)，被招募至腹膜病灶處的中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯減少。adrb3-/-小鼠肝、肺組織中的il-6、elastase蛋白的表達(dá)均明顯降低，說(shuō)明肝、肺組織的炎癥反應(yīng)和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)被抑制。實(shí)施例6mtt實(shí)驗(yàn)檢測(cè)adrb3單克隆抗體抗癌效果1、實(shí)驗(yàn)步驟：(1)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的rpmil640培養(yǎng)基配成5000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200μl，37℃，5％co2培養(yǎng)24h。(2)實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度adrb3單克隆抗體的培養(yǎng)基，對(duì)照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)3～5平行孔，37℃，5％co2培養(yǎng)4～5d。(3)棄去上清液，每孔加入200μl新鮮配制的含0.5mg/mlmtt的無(wú)血清培養(yǎng)基。37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，并加入200μldmso，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定光密度值。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖38a～40和圖53～57所示：adrb3單克隆抗體劑量依賴性降低人mcf7乳腺癌細(xì)胞、sw1990和cfpac1胰腺癌細(xì)胞、a549肺癌細(xì)胞、h1299肺癌細(xì)胞、hepg2肝癌細(xì)胞、hct116結(jié)腸癌細(xì)胞、hl-60早幼粒白血病細(xì)胞、u251膠質(zhì)瘤細(xì)胞活力。與對(duì)照組比，*p<0.05,#p<0.01。實(shí)施例7adrb3單克隆抗體抑制裸鼠移植瘤增殖1、實(shí)驗(yàn)方法5周齡雌性裸鼠，在靠近乳腺的位置，皮下注射人腫瘤細(xì)胞或小鼠4t1乳腺癌細(xì)胞，每只注射5*106細(xì)胞。人腫瘤細(xì)胞包括mcf7、cfpac1、aspc1、sw1990、a375、a549細(xì)胞。8～10天后，移植瘤約100mm3，隨機(jī)分為抗體組和對(duì)照組，每組8只。抗體組腹腔注射adrb3抗體，每隔3天，劑量范圍1～10mg/kg，測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)寬高。對(duì)照組腹腔注射小鼠igg。當(dāng)對(duì)照組腫瘤體積達(dá)到動(dòng)物倫理委員會(huì)所允許的最大體積時(shí)，眼眶取血，脫頸椎處死裸鼠，剝離移植瘤和脾臟，稱瘤重、脾臟重量和體重。計(jì)算脾臟指數(shù)＝脾臟重量(mg)/小鼠體重(g)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖38，圖41～52所示：(1)adrb3單克隆抗體抑制裸鼠mcf7乳腺癌細(xì)胞移植瘤增殖，與對(duì)照組比，*p<0.05,#p<0.01。adrb3抗體組的小鼠脾臟明顯大于對(duì)照組動(dòng)物，adrb3抗體增加脾臟指數(shù)，具有幫助免疫器官發(fā)育成熟的功能。移植瘤he染色表明adrb3抗體減少移植瘤中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。脾臟組織he染色，對(duì)照組脾臟內(nèi)結(jié)構(gòu)分界不清，看不到白髓和紅髓明顯的分界線，其中可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞。adrb3抗體增大脾小體和生發(fā)中心，減少脾臟中的中性粒細(xì)胞數(shù)量。免疫組化示，adrb3抗體減少移植瘤中腫瘤細(xì)胞和浸潤(rùn)性中性粒細(xì)胞adrb3、p62、cyclind1、mpo、neutrophilelastase、p-rb(s780)、cdk3和il-6的表達(dá)，降低cdk3的活力。(2)adrb3抗體減小裸鼠cfpac1胰腺癌細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)，與對(duì)照組比，*p<0.05。adrb3抗體減輕cfpac1細(xì)胞移植瘤的重量，不影響cfpac1移植瘤裸鼠的體重，adrb3抗體增加脾臟指數(shù)。he染色表明adrb3抗體減少移植瘤中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組化示，adrb3抗體減少移植瘤中腫瘤細(xì)胞和浸潤(rùn)性中性粒細(xì)胞adrb3、cyclind1、neutrophilelastase、p-rb(s780)、p-mtor(s2481)、rictor、hk2、cdk3和il-6的表達(dá)。(3)adrb3抗體減小裸鼠aspc1胰腺癌細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)，與對(duì)照組比，*p<0.05。adrb3抗體減輕aspc1細(xì)胞移植瘤的重量，不影響aspc1移植瘤裸鼠的體重。(4)adrb3抗體抑制sw1990胰腺癌細(xì)胞移植瘤增殖，增加sw1990細(xì)胞凋亡率，與對(duì)照組比，*p<0.05。adrb3抗體減少荷瘤小鼠中性粒細(xì)胞數(shù)量和中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比率(nlr)，與對(duì)照組相比，*p<0.05。adrb3抗體增加脾臟指數(shù)。(5)adrb3抗體抑制a375黑色素瘤細(xì)胞移植瘤增殖。與對(duì)照組比，*p＝0.032,#p＝0.005。adrb3抗體減少a375移植瘤裸鼠外周血msdc數(shù)量。he染色和免疫組化示，對(duì)照組a375移植瘤中有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而且中性粒細(xì)胞中高表達(dá)pd-l1，adrb3抗體減少a375移植瘤中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組化示，adrb3抗體抑制a375移植瘤細(xì)胞和浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞adrb3、il-6、mpo、neutrophilelastase、pd-l1、p-rb(ser780)、p-mtor(ser2481)、rictor、hk2和cdk4的表達(dá)。抗體治療后，移植瘤浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞無(wú)pd-l1表達(dá)。elisa檢測(cè)血清中的炎癥因子，adrb3抗體增加小鼠血清中il-10濃度，減少il-6、vegf和mpo濃度。adrb3抗體通過(guò)特異性抑制adrb3的表達(dá)和活性，從而抑制中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，改變腫瘤微環(huán)境，起到抗癌作用。(6)adrb3抗體增加脾臟指數(shù)，抑制人肺癌a549細(xì)胞移植瘤增殖,與對(duì)照組相比，*p<0.05。he染色表明adrb3抗體減少移植瘤中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組化示，adrb3抗體減少移植瘤細(xì)胞和浸潤(rùn)性中性粒細(xì)胞adrb3、cyclind1、neutrophilelastase、p-rb(ser780)、p-mtor(ser2481)、rictor、hk2、cdk3和il-6的表達(dá)。(7)adrb3抗體減少小鼠4t1乳腺癌細(xì)胞移植瘤的增殖，抑制4t1細(xì)胞肝臟轉(zhuǎn)移，對(duì)照組8只小鼠全部發(fā)生嚴(yán)重的肝轉(zhuǎn)移，抗體組的肝臟轉(zhuǎn)移灶明顯少于對(duì)照組。adrb3促進(jìn)4t1細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移，阻滯adrb3能抑制肝臟轉(zhuǎn)移。adrb3抗體增加脾臟指數(shù)，減少血液中性粒細(xì)胞的數(shù)量，增加淋巴細(xì)胞占wbc的比率，降低nlr。nlr是全身炎癥反應(yīng)的指標(biāo)，nlr增高是腫瘤患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。adrb3抗體降低nlr，表明本抗體能抑制炎癥，改善患者預(yù)后。實(shí)施例8adrb3特異性嵌合抗原受體修飾后的t淋巴細(xì)胞能夠殺傷sw1990細(xì)胞(a1)和h1299細(xì)胞(c3)1、實(shí)驗(yàn)方法adrb3嵌合抗原受體由抗人adrb3的單鏈抗體、cd8鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)、cd137(又名4-1bb)的胞內(nèi)信號(hào)區(qū)、cd3ζ的胞內(nèi)信號(hào)結(jié)構(gòu)串聯(lián)構(gòu)成。根據(jù)adrb3單克隆抗體的測(cè)序結(jié)果，構(gòu)建嵌合抗原受體慢病毒表達(dá)載體，包裝慢病毒。分離原代t細(xì)胞，并使用上述慢病毒構(gòu)建重組car-t細(xì)胞。將靶細(xì)胞sw1990細(xì)胞(a1)和h1299細(xì)胞(c3)按50000個(gè)/孔的濃度接種至96孔板中過(guò)夜培養(yǎng)；然后按照?qǐng)D示效靶比(e/t)加入car-t細(xì)胞，共培養(yǎng)6小時(shí)，離心后取上清，使用ldh試劑盒檢測(cè)。以未加car-t的靶細(xì)胞孔經(jīng)裂解后作為maximallysis，未經(jīng)裂解的孔作為minimallysis。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果h1299細(xì)胞的半數(shù)有效e/t是2:1，sw1990細(xì)胞的半數(shù)有效e/t是2.5:1(圖58)。adrb3嵌合抗原受體修飾后的t淋巴細(xì)胞能夠殺死adrb3陽(yáng)性腫瘤，用于治療肺癌和胰腺癌?？筧drb3car-t細(xì)胞針對(duì)腫瘤細(xì)胞和腫瘤內(nèi)環(huán)境中的炎性細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、treg和巨噬細(xì)胞)，即使腫瘤細(xì)胞中不表達(dá)adrb3，本car-t細(xì)胞仍然能夠通過(guò)抑制腫瘤環(huán)境細(xì)胞而起到抗癌作用，是通用型car-t細(xì)胞，適用于所有惡性腫瘤和炎性疾病的治療。實(shí)施例9adrb3基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)方法16周齡的adrb3基因敲除小鼠和正常fvb小鼠各15只，雄性，取外周血做血常規(guī)、血生化。小鼠th17細(xì)胞因子抗體芯片(qam-th17-1，arrayglasschip)檢測(cè)血清細(xì)胞因子，激光掃描儀axongenepix掃描信號(hào)。檢測(cè)骨密度、脂肪和肌肉含量。10、30、70周齡adrb3基因敲除小鼠各8只，心臟b3超檢測(cè)心功能。外周血細(xì)胞和脾細(xì)胞做流式檢測(cè)不同亞型t細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的數(shù)量及比例。免疫組化檢測(cè)心臟cdk3、cyclind1、p-mtor(ser2448)、p-mtor(ser2481)、p-4ebp1(t37/46)。水迷宮實(shí)驗(yàn)研究小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。12周齡adrb3基因敲除小鼠和正常fvb小鼠各10只，均為雌性，皮下接種106小鼠乳腺癌細(xì)胞4t1，形成移植瘤后，每隔3天，測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)寬高。攜帶鼠乳腺腫瘤病毒的mmtv-pyvt小鼠敲除adrb3基因后，觀察雌性小鼠乳腺腫瘤的發(fā)生情況。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖59～67所示：敲除小鼠的adrb3基因，檢測(cè)外源腫瘤細(xì)胞的成瘤情況，發(fā)現(xiàn)小鼠機(jī)體的免疫系統(tǒng)得到改善，能夠摧毀癌細(xì)胞。4t1乳腺癌細(xì)胞在正常fvb小鼠體內(nèi)成瘤，但不能在adrb3-/-鼠中成瘤。老年adrb3-/-鼠自發(fā)性腫瘤的發(fā)病率明顯減少。mmtv-pyvt小鼠剔除adrb3基因后，雌性小鼠乳腺腫瘤發(fā)生率明顯減少。adrb3基因敲除小鼠壽命延長(zhǎng)，不發(fā)生自身免疫病和癌癥。(1)adrb3-/-小鼠外周血中性粒細(xì)胞明顯降低，淋巴細(xì)胞百分比降低，nlr降低，紅細(xì)胞平均體積偏低。adrb3增加中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的數(shù)量，不影響淋巴細(xì)胞的數(shù)量，由于增加中性粒細(xì)胞數(shù)量而下調(diào)nlr，上調(diào)白細(xì)胞總量。adrb3增加中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的百分比，減少淋巴細(xì)胞的百分比。(2)adrb3-/-小鼠肌肉量增加。adrb3敲除小鼠骨密度和骨礦含量均增加。(3)adrb3-/-小鼠血清中炎癥細(xì)胞因子如il-2、il-4、il-5、il-6、il-17f、il-21、il-22、tgf-β、mip-3α等降低，il-10增加。elisa檢測(cè)血清中炎癥因子，adrb3-/-小鼠血清il-10濃度升高，il-6、vegf和mpo濃度降低。(4)adrb3-/-小鼠脾臟cd4+t細(xì)胞和treg細(xì)胞均明顯降低。(5)adrb3-/-小鼠心臟b超檢查。老年adrb3-/-小鼠心功能強(qiáng)于對(duì)adrb3野生型老年小鼠，adrb3-/-小鼠心功能沒(méi)有隨著年齡的增加而出現(xiàn)明顯降低。與對(duì)照組相比，adrb3-/-小鼠心肌cdk3、cyclind1表達(dá)增加，mtorc2/4ebp1通路被激活，心肌細(xì)胞的核糖體增加。(6)腫瘤細(xì)胞和粒細(xì)胞產(chǎn)生并釋放adrb3入血來(lái)抑制t淋巴細(xì)胞，摧毀機(jī)體特異免疫，促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)。敲除adrb3所產(chǎn)生的抗癌療效，是由于增強(qiáng)了免疫系統(tǒng)的抗癌活性。adrb3-/-小鼠中性粒細(xì)胞和treg細(xì)胞均減少、cd8+t細(xì)胞增加，增強(qiáng)了機(jī)體免疫監(jiān)視、防御功能。(7)adrb3-/-小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力強(qiáng)于adrb3野生型小鼠。實(shí)施例10不同濃度的adrb3抗體處理mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞1、實(shí)驗(yàn)方法不同濃度的adrb3抗體處理mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞，對(duì)照組用小鼠igg。24h后裂解細(xì)胞，提取總蛋白。bca法測(cè)定蛋白濃度，取10ug蛋白，10％sdspage分離后將蛋白轉(zhuǎn)至pvdf膜上，4％脫脂牛奶封閉1h，孵育一抗，4℃過(guò)夜，二抗孵育1h，ecl顯色，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。fluorchem8900軟件分析蛋白質(zhì)條帶的灰度值，計(jì)算目的條帶與內(nèi)參條帶(gapdh或actin)的比值。裸鼠移植瘤組織做免疫組化檢測(cè)adrb3信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白mtor、rictor、p-akt(s473)、p-4ebp1(t37/46)、hk2、p62、rab7、sirt1、adrb3、vdac、rheb表達(dá)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖68～75所示：(1)adrb3抗體減少mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞cdk4，nucleolin，her2和prb的表達(dá)；增加p16表達(dá)。(2)adrb3抗體劑量依賴性減少mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞rheb,mtor,p-mtor(s2481),hk2和p62。(3)adrb3抗體(5d1)減少mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞adrb3,p-rb(s780)和gapdh。4g7增加adrb3，增加p-rb(s780)。兩種抗體都能降低gapdh和cdk4。(4)adrb3抗體減少mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞pd-l1、cdk3的表達(dá)。(5)設(shè)計(jì)sirna沉默p62后，減少mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞adrb3和rab7的表達(dá)。雷帕霉素增加adrb3表達(dá)。沉默p62表達(dá)后，adrb3不能上調(diào)mtor、rictor、sirt1和adrb3的表達(dá)。(6)adrb3抗體減少裸鼠mcf-7移植瘤中的mtor、rictor、p-akt(s473)、p-4ebp1(t37/46)、hk2、p62、rab7、sirt1、adrb3、vdac、rheb，增加p53。(6)adrb3抗體減少裸鼠mcf-7移植瘤中的hk2、p62、p-mtor(s2481)、rictor、il-6。(8)adrb3激動(dòng)后，增加mcf-7/a549/sw1990細(xì)胞下游信號(hào)通路中的mtor、rictor、4ebp1、cenpa、p62、drp1、akt和ampk等蛋白的磷酸化。實(shí)施例11線粒體自噬檢測(cè)1、實(shí)驗(yàn)方法終濃度20ng/ml的adrb3抗體處理mcf-7細(xì)胞，2h或8h后固定細(xì)胞，mitotracker染線粒體，免疫熒光檢測(cè)lc3ii表達(dá)，激光共聚焦顯微鏡觀察。jc-1(10ug/ml)染色15min，活細(xì)胞狀態(tài)下在共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)光波長(zhǎng)510nm和580nm。ros染料h2dcfda10um，染色15min，共聚焦顯微鏡下觀察。488nm波長(zhǎng)熒光，觀察細(xì)胞內(nèi)脂褐素。p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-gp)底物5-cfda-am，10um標(biāo)記細(xì)胞，激發(fā)光波長(zhǎng)510nm，共聚焦顯微鏡觀察。羅丹明123(rhodamine123)細(xì)胞染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。β-半乳糖苷酶原位染色，檢測(cè)mcf7細(xì)胞中β-半乳糖苷酶的表達(dá)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖76～79所示：隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，adrb3抗體組中的lc3ii表達(dá)明顯增加。adrb3抗體抑制線粒體自噬小體的清除而使自噬體蓄積在細(xì)胞中，adrb3促進(jìn)自噬體的清除，保障線粒體自噬過(guò)程的順利進(jìn)行。adrb3抗體降低線粒體膜電位，表現(xiàn)為jc1染色為綠色。adrb3抗體增加細(xì)胞內(nèi)活性氧、脂褐素和β-半乳糖苷酶。adrb3抗體阻斷自噬，使自噬體、受損線粒體和脂褐素等代謝廢物蓄積在細(xì)胞內(nèi)從而降低細(xì)胞活性，加速細(xì)胞老化或凋亡。5-cfda染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)出大量絲狀突觸，也說(shuō)明細(xì)胞老化。adrb3抗體增加mcf-7細(xì)胞內(nèi)的5-cfda和羅丹明123的含量，說(shuō)明adrb3抗體逆轉(zhuǎn)mcf-7細(xì)胞多藥耐藥。實(shí)施例12adrb3抗體減少腫瘤組織的糖代謝1、實(shí)驗(yàn)方法adrb3抗體處理5周后，mcf-7荷瘤鼠尾靜脈注射18f-fdg，每只1毫居(mci)，50分鐘后，3％異氟烷與氧氣(1l/min)混合氣體麻醉，仰臥位，進(jìn)行pet/ct掃描，動(dòng)態(tài)采集圖像，迭代法重建18f-fdg腫瘤代謝顯像的圖像，fluorchem8900軟件分析重建圖像上靶組織(t)與鄰近正常組織(非靶組織n)的灰度值，計(jì)算t/n值。移植瘤組織放入冰預(yù)冷的ripa裂解液，高速勻漿，用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)組織中atp含量和己糖激酶(hk)活性。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(如圖80)：對(duì)照組移植瘤部位可見(jiàn)放射性濃聚，adrb3抗體組移植瘤部位放射性較對(duì)照組減少約60％(0.78±0.44vs1.96±0.94，p<0.01)。adrb3抗體減少腫瘤組織atp產(chǎn)量。adrb3抗體降低腫瘤組織hk活性。實(shí)施例13透射電鏡觀察移植瘤細(xì)胞線粒體和自噬小體1、實(shí)驗(yàn)方法移植瘤放入2.5％戊二醛中固定，并切成約1mm3組織塊，用于制作電鏡樣品。經(jīng)過(guò)脫水、滲透、包埋處理的樣品在reichert超薄切片機(jī)中切片，獲得70nm的切片，該切片經(jīng)檸檬酸鉛溶液和醋酸雙氧鈾50％乙醇飽和溶液各染色15min，fei(czechrepublic)透射電鏡觀察。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果adrb3抗體組mcf-7細(xì)胞移植瘤細(xì)胞中出現(xiàn)大量缺陷型線粒體，表現(xiàn)為線粒體嵴減少、消失和體積膨脹(圖81)。抗體組移植瘤細(xì)胞線粒體自噬體蓄積在胞漿中，加速細(xì)胞的老化。阻滯線粒體外膜的adrb3，會(huì)破壞線粒體膜電位，損傷線粒體結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致胞漿出現(xiàn)大量缺陷型線粒體。如果細(xì)胞的自噬正常，缺陷線粒體將被自噬性清除。adrb3的阻滯破壞自噬小體與溶酶體的融合，導(dǎo)致自噬體不能被清除。黑色箭頭所示為線粒體自噬體，白色箭頭所示是脂滴(圖82)。實(shí)施例14adrb3抗體抑制腺病毒和乙肝病毒(hbv)感染細(xì)胞1、實(shí)驗(yàn)方法a549細(xì)胞爬片，給予adrb3抗體預(yù)處理30min，接種攜帶gfp的腺病毒106pfu/ml，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24小時(shí)，對(duì)照組用小鼠igg。免疫熒光檢測(cè)磷酸化mtor(s2448)的表達(dá)。方法同實(shí)施例1。收集慢性乙型肝炎患者肝組織標(biāo)本，免疫組化檢測(cè)adrb3表達(dá)，方法同實(shí)施例2。hepg2細(xì)胞爬片，給予adrb3抗體預(yù)處理30min，接種hbv1ml，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24小時(shí)，對(duì)照組用小鼠igg。4％多聚甲醛固定，加兔抗-hbc(1∶100)檢測(cè)hbcag，置4c過(guò)夜，次日加羊抗兔igg，37℃作用1小時(shí)，洗滌后加入pap(1∶50)，37℃孵育1小時(shí)，洗滌3次后dab顯色，鏡檢。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)adrb3被抑制后，腺病毒無(wú)法感染a549肺癌細(xì)胞。adrb3抗體通過(guò)抑制mtor第2448位點(diǎn)的絲氨酸磷酸化而起到抑制腺病毒感染的作用(圖83)，2448位點(diǎn)的絲氨酸磷酸化會(huì)激活mtor，促進(jìn)細(xì)胞自噬，而自噬促進(jìn)腺病毒的復(fù)制和釋放。adrb3抗體抑制mtor活化而起到阻滯自噬的作用，從而抑制腺病毒復(fù)制和釋放。adrb3抗體阻滯adrb3后，可以增加c8表達(dá)，c8能夠溶解病毒，防止病毒感染。(2)adrb3和腺病毒都定位于a549肺癌細(xì)胞核仁，adrb3可能是病毒復(fù)制所需的關(guān)鍵蛋白(圖84)。腺病毒通過(guò)激活核仁中的adrb3，導(dǎo)致細(xì)胞癌變。(3)乙型肝炎患者肝細(xì)胞胞漿adrb3高于正常人，細(xì)胞核內(nèi)幾乎沒(méi)有adrb3的表達(dá)，胞質(zhì)中的adrb3增強(qiáng)核糖體功能，有助于合成hbv復(fù)制所需的蛋白，胞質(zhì)adrb3與細(xì)胞核adrb3的比值明顯升高，比值越高表明病毒復(fù)制約活躍，該比值可以作為檢測(cè)乙肝病毒復(fù)制的指標(biāo)。胞質(zhì)中的adrb3介導(dǎo)hbv進(jìn)入hepg2細(xì)胞并促進(jìn)hbv復(fù)制。adrb3抗體抑制hbv感染hepg2細(xì)胞(圖85)，說(shuō)明本抗體具有治療乙型肝炎的潛力。實(shí)施例15肺癌胸水細(xì)胞涂片免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞中的mpo/adrb3表達(dá)情況1、實(shí)驗(yàn)方法收集20例確診肺癌病人的胸水，吸取容器底部液體約5ml于離心管內(nèi)，2000rpm，10min，棄上清，保留0.5ml的剩余液體和沉淀，用細(xì)玻璃棒將沉淀和液體混勻，用吸管吸出混勻的液體并將其滴在玻片上，每片1～2滴，推片法制成均勻的涂片，置入95％酒精固定15min，取出干燥待用。0.1％tritonx-100通透10min，bsa封閉1h，滴加mpo/adrb3抗體(1∶100)，濕盒密閉，4℃過(guò)夜。滴加fitc和pe標(biāo)記的二抗，室溫1h，dapi0.5ug/ml，3min，50％甘油/pbs封片，激光共聚焦顯微鏡下觀察，隨機(jī)觀察5～7個(gè)視野并拍片，fluorchem8900軟件測(cè)量細(xì)胞平均紅色熒光強(qiáng)度和平均綠色熒光強(qiáng)度。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(如圖86)：(1)肺癌患者胸水中存在大量可溶性adrb3(solubleb3,sb3)。提示癌細(xì)胞和粒細(xì)胞通過(guò)脫顆粒方式釋放sb3到血液和組織間隙。(2)胸水中的粒細(xì)胞胞漿中有大量adrb3，富含adrb3的粒細(xì)胞易于粘附肺癌細(xì)胞，通過(guò)直接接觸來(lái)刺激癌細(xì)胞的增殖。(3)胸水中的脫落肺癌細(xì)胞高表達(dá)adrb3。實(shí)施例16染色質(zhì)免疫共沉淀-芯片實(shí)驗(yàn)(chip-chip)1、實(shí)驗(yàn)方法50ng/ml的adrb3抗體處理24h，對(duì)照對(duì)照組用小鼠igg。10cm培養(yǎng)皿中(mcf7細(xì)胞)加入270ul37％的甲醛，輕輕混勻，室溫10分鐘。加入1ml1.25m的苷氨酸，室溫5分鐘，中和甲醛。將皿中的混合液吸掉，用預(yù)冷的pbs/edta洗細(xì)胞兩遍，加入1ml含有proteaseinhibitorcocktail的pbs，用細(xì)胞刮將皿底的細(xì)胞刮下，收集到1.5ml離心管中。2000×g離心5分鐘，棄上清。收集到的樣品送公司檢測(cè)，免疫沉淀采用的抗體是adrb3抗體和h3k9ac抗體。在adrb3不同活性狀態(tài)下，分析adrb3在全基因組的結(jié)合位點(diǎn)和啟動(dòng)子中h3k9乙?；?。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(如圖87)利用adrb3抗體所做的chip-chip篩選得到與轉(zhuǎn)錄因子adrb3特異結(jié)合的啟動(dòng)子序列(3000余個(gè)基因的啟動(dòng)子)，包括但不限于以下基因：fabp5(fattyacid-bindingprotein,epidermal。adrb3結(jié)合在8號(hào)染色體的82191426～82191897堿基),fabp4，fabp3，ptpra(receptor-typetyrosine-proteinphosphatasealpha)，ptprcap(proteintyrosinephosphatasereceptortypec-associatedprotein)，ptpn7，ptprz1(receptor-typetyrosine-proteinphosphatasezetaisoform)，ptprd(receptor-typetyrosine-proteinphosphatasedeltaisoform)，ptprr，lilrb2，lilrb4，lilra4，lilra3，lilrp2，fes(tyrosine-proteinkinasefes/fps)，tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligandreceptor,stat5b，tcl1(t-cellleukemia/lymphomaprotein1a)，cd8a(t-cellsurfaceglycoproteincd8alphachain)，c8g(編碼補(bǔ)體c8γ，adrb3結(jié)合在9號(hào)染色體的139838398到139838876堿基)，c5ar1(補(bǔ)體c5a受體，adrb3結(jié)合在19號(hào)染色體的47812870到47813391堿基)，akt1(adrb3結(jié)合在14號(hào)染色體的105260668到105261174堿基)，ldhal6b(編碼乳酸脫氫酶a樣蛋白6b，adrb3結(jié)合在15號(hào)染色體的59497805到59498262堿基)，slc16a3(該基因編碼單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，調(diào)控乳酸的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。adrb3結(jié)合在17號(hào)染色體的80185203到80186585堿基)，rrp9(adrb3結(jié)合在3號(hào)染色體的51975065到51975538堿基，該基因編碼u3smallnucleolarrna-interactingprotein2)，dkc1(adrb3結(jié)合在x染色體的153989742到153990209堿基，該基因與端粒的穩(wěn)定性相關(guān))，izumo1(izumosperm-eggfusionprotein1，adrb3結(jié)合在19號(hào)染色體的49250722到49251290堿基)，tsks(testis-specificserinekinasesubstrate，adrb3結(jié)合在19號(hào)染色體的50266261到50266930堿基)，tssk6(testis-specificserine/threonine-proteinkinase6)，amyloidbetaa4proteinisoformd，eda2r，edar，pde10a，pde12，pde1c，pde4a，pde4b，pde4c，pde6，pde7，pde9多藥耐藥相關(guān)蛋白1(mrp1)，pspn，brain-derivedneurotrophicfactor，ngdn，insulin-likegrowthfactorii，x連鎖凋亡抑制蛋白(x-linkedinhibitorofapoptosisprotein,xiap)，vesicletransportproteinsft2a，poly[adp-ribose]polymerase1，gpbp1，myl3，gja9-mycbp，inhbc，seh1l，tnpo2，nup50，nusap1，gar1，dkc1，gtpbp4，nop56，nexn，acvr1，tnnt2，kcnq1，kcnh2，actl6a，atp6v0b，pax6，dcx，tsks，regulatoroftelomereelongationhelicase1，pcsk1，pcsk4，ldlrad1，scarf1，s1pr3，smg6，dkc1，nop10，bad，bcl2，casp12，cflar，lamb3，itga2，itga7，mmp2，mmp9，ryr3，syntaxin-1b，pacrg，transcriptionfactordp-2，transcriptionfactormafb，transcriptionfactore2f8，transcriptionfactore2-alphaisoforme47，hepatocytenuclearfactor1，mitofusin-1，fgfr2，fgf16，fgf21，hey1，hey2，tle3，txnip，riz1，ift140，nphp3，gata1，gatad1，bdnf，pdgf，cdy1，cdy2，app(amyloidbetaprecursorprotein)，pnmt，comt，zmiz2，dnmt1，setdb2，suv39h1，ceacam1，ceacam16，kazn，ceacam21，ceacam5，eno1，fgf1，fgf4，grem1，tmc6，tmem43，stk36，irf1(interferonregulatoryfactor1)，whsc1，irf3，irf7，irf9，cardiotrophin-likecytokinefactor1，tumorprotein63(adrb3結(jié)合在3號(hào)染色體的189349333到189349707堿基)，tprg1，fkbp5，prr5(adrb3結(jié)合在22號(hào)染色體的45063166到45063715堿基)，setd1b，p16，myb-relatedproteinb(adrb3結(jié)合在第20號(hào)染色體的42294360到42294625堿基)，rpl18a，optineurin，bonemorphogeneticproteinreceptortype-1b，prostacyclinreceptor(ptgir)，pentraxin-4,ctbp1，fes，zap70，igsf11，irf7，klrc1，tardbp，mrpl19，mrpl2，mrpl41，mrps17，mrps26，rpl14，rpl18a，rpl19，rps6kl1，atypicalchemokinereceptor3，ccl3l1，ccr5，eef1d，dnmt1，pde4b，foxp3(adrb3結(jié)合在x染色體的49121975到49122469堿基)，dcanp1，dcst1，dcst2，leukemiainhibitoryfactor，il17rb，traf6，p62，hexokinase-2(adrb3結(jié)合在第2號(hào)染色體的75059882到75060125堿基)，tcirg1，hk1，camkk2，gapdh，g1/s-specificcyclin-d3(adrb3結(jié)合在第6號(hào)染色體的42016706到42017624堿基)，cyclind1，cyclin-dependentkinase3(cdk3，adrb3結(jié)合在第17號(hào)染色體的73995762到73996227堿基)，cdk4，cdk15，cdk18，cyclin-dependentkinase2-associatedprotein1，rb，ki-67，mtor，rictor，akt，tubulin、src(proto-oncogenetyrosine-proteinkinasesrc)，pd-l1，p53，interleukin1(il-1)，interleukin6(il-6)，il25，il27，il17rb，il16，lef1，adrb3，tgfb1i1，tab2，ltbp2，ras,arhgap21,tgf-β和tnfα。h3k9ac抗體的chip-chip的結(jié)果表明：adrb3所結(jié)合的cdk3啟動(dòng)子區(qū)域(第17號(hào)染色體的73995762到73996227堿基)內(nèi)的h3組蛋白的k9被乙?；揎?。說(shuō)明adrb3是乙酰化酶，把乙?；D(zhuǎn)移到h3k9。adrb3通過(guò)調(diào)控靶基因啟動(dòng)子內(nèi)的h3k9乙?；剑瑏?lái)影響靶基因的轉(zhuǎn)錄。adrb3能結(jié)合神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的啟動(dòng)子上，表明adrb3調(diào)控神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，提示adrb3抗體可以治療阿爾茨海默氏癥、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病。實(shí)施例17adrb3抗體促進(jìn)panc-1胰腺癌細(xì)胞凋亡1、實(shí)驗(yàn)方法培養(yǎng)panc-1，給予50ng/ml的adrb3抗體處理12h，對(duì)照組用小鼠igg。annexinv/pi雙染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與對(duì)照組比，adrb3抗體增加panc-1細(xì)胞凋亡率(45.3±7.3％vs9.7±3.4％，p<0.01)。乳腺癌mda231和肺癌h1299細(xì)胞得到類似結(jié)果，均表現(xiàn)為adrb3抗體促進(jìn)細(xì)胞凋亡。實(shí)施例18攜帶綠色熒光蛋白(gfp)adrb3質(zhì)粒殺傷胰腺癌sw1990細(xì)胞1、實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建penter–adrb3-gfp載體質(zhì)粒，pcdna3/flag-adrb3質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染胰腺癌sw1990細(xì)胞和mcf7細(xì)胞，24h后，共聚焦顯微鏡下觀察。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：凡是有g(shù)fp表達(dá)的細(xì)胞都發(fā)生凋亡，表現(xiàn)為核固縮、細(xì)胞碎裂，但細(xì)胞核內(nèi)沒(méi)有g(shù)fp(圖88)。說(shuō)明攜帶gfp的外源性adrb3不能進(jìn)入細(xì)胞核，蓄積在核膜上，影響細(xì)胞核內(nèi)外物質(zhì)的交換，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡。攜帶flag標(biāo)簽蛋白的adrb3也不能進(jìn)入細(xì)胞核，但不影響細(xì)胞活性。adrb3定位在mcf7細(xì)胞的微管、細(xì)胞核和線粒體上(圖89)。實(shí)施例19研究adrb3缺失的apoe-/-小鼠(b3-/-apoe-/-)高膽固醇(hcd)和低膽固醇喂養(yǎng)(lcd)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響1、實(shí)驗(yàn)方法研究adrb3缺失的apoe-/-小鼠(b3-/-apoe-/-)高膽固醇(hcd)和低膽固醇喂養(yǎng)(lcd)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響，對(duì)照選擇hcd喂養(yǎng)的b3+/+apoe-/-小鼠。試驗(yàn)小鼠分為：1、b3+/+apoe-/-小鼠高膽固醇(hcd)喂養(yǎng)組；2、b3-/-apoe-/-小鼠hcd組；3、b3-/-apoe-/-小鼠低膽固醇喂養(yǎng)(lcd)組；4、b3+/+apoe-/-小鼠hcd喂養(yǎng)聯(lián)合adrb3抗體治療組。選用8周齡雄性鼠，各10只，高脂(甘油三酯20％、膽固醇1.25％)和普通飼料飼養(yǎng)。adrb3抗體10mg/kg，每6天腹腔注射給藥1次，高脂喂養(yǎng)12周后取主動(dòng)脈，油紅o染色。比較4組小鼠動(dòng)脈斑塊數(shù)量和大小，he染色檢測(cè)斑塊內(nèi)炎細(xì)胞，免疫組化檢測(cè)斑塊內(nèi)炎性因子的表達(dá)，elisa檢測(cè)血清中的炎癥因子il-6、vegf、il-10、mpo。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(如圖90)高脂飼料飼喂3個(gè)月后，apoe-/-小鼠極度老化，出現(xiàn)駝背、掉毛、皮下肥胖、運(yùn)動(dòng)功能喪失等，b3-/-apoe-/-小鼠的老化特征不明顯。hcd組的b3-/-apoe-/-小鼠和b3+/+apoe-/-小鼠adrb3抗體治療組主動(dòng)脈部位的斑塊數(shù)量和面積都明顯少于b3+/+apoe-/-小鼠，動(dòng)脈斑塊的面積減少了80％～90％。adrb3缺失的apoe-/-小鼠斑塊質(zhì)地硬，為穩(wěn)定斑塊。b3-/-apoe-/-小鼠中，雖然hcd組的血脂濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于lcd組，但兩組間主動(dòng)脈部位的斑塊數(shù)量和面積無(wú)差異。與hcd組的b3+/+apoe-/-小鼠相比，hcd組的b3-/-apoe-/-小鼠和b3+/+apoe-/-小鼠adrb3抗體治療組主動(dòng)脈部位的斑塊纖維帽增厚、cd4+t細(xì)胞和粒細(xì)胞浸潤(rùn)減少、斑塊內(nèi)泡沫細(xì)胞mpo、neutrophilelastase、il-6、adrb3、mif降低。b3-/-apoe-/-小鼠血清中il-10濃度升高，而il-6、vegf和mpo濃度降低。結(jié)論：(1)adrb3促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，是引起急性冠脈綜合征的因素之一；(2)adrb3促進(jìn)衰老。實(shí)施例20adrb3單克隆抗體降低自發(fā)性高血壓大鼠的血壓1、實(shí)驗(yàn)方法選收縮壓高于140mmhg的14周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(shr)隨機(jī)分為2組，各組8只，每6天腹腔注射給藥，連續(xù)用藥6周。分組如下：①抗體組：adrb3抗體10mg/kg；②空白對(duì)照組：腹腔注射小鼠igg。使用rbp-1b大鼠血壓測(cè)定儀，在大鼠清醒狀態(tài)下尾袖法間接測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓和心率，用藥前和用藥后每周均測(cè)尾動(dòng)脈收縮壓、心率及稱重，計(jì)算降壓幅度＝(治療前收縮壓-治療后收縮壓)/治療前收縮壓。大鼠給藥6周后處死，開(kāi)胸，迅速剪取心臟，將心臟放入4℃kh液，擠壓出心腔內(nèi)的殘余血液，分離升主動(dòng)脈，行主動(dòng)脈逆行插管后懸掛于langendorff灌流裝置上，用95％o2和5％co2充分氧合的kh液37℃恒溫逆行灌流，經(jīng)左心房將導(dǎo)管球囊插入左心室，導(dǎo)管連壓力換能器，向球囊內(nèi)注水使其內(nèi)壓升至40mmhg并保持恒定，預(yù)灌20min，待各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定后采用pclab生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄各項(xiàng)心功能指標(biāo)：左室內(nèi)壓(lvp)、左室最大收縮壓(lvsp)、左室舒張末期壓(lvedp)、左室發(fā)展壓(lvdp)、左室收縮壓上升最大速率(+dp/dtmax)、左室舒張壓下降最大速率(-dp/dtmax)、心率(hr)，收集并記錄冠脈流量(cf)。停灌后取下心臟，用濾紙拭干，剪去大動(dòng)脈，稱重，計(jì)算心重/體重(hw/bw)；剪去右心室游離壁和心房，左心室(包括室間隔)稱重，左心室肥厚程度用左心室重與體重比(lvw/bw)表示。采用spss19進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果adrb3抗體治療組血壓均降到正常血壓范圍內(nèi)(表5)，較治療前和對(duì)照組明顯下降(p<0.01)。adrb3抗體組降壓差值和降壓幅度與對(duì)照組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(p<0.01)。adrb3抗體對(duì)心功能的影響，見(jiàn)表6，抗體治療組lvedp明顯低于對(duì)照組(p<0.05)，hr較對(duì)照組明顯減少(p<0.05)，提示心功能改善。各組大鼠心重/體重、左室重/體重的變化，見(jiàn)表7，抗體組hw/bw、lvw/bw均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。adrb3抗體有效降低shr血壓至正常范圍，改善shr心功能，阻斷高血壓所致的左心室肥厚。表5自發(fā)性高血壓大鼠治療前后收縮壓的變化(mmhg)注：與治療前比較，*p<0.01；與對(duì)照組比較，#p<0.01。表6自發(fā)性高血壓大鼠心功能注：與對(duì)照組比較，*p<0.05；lvp、lvsp、lvedp、lvdp單位是mmhg；cf單位是ml/min。表7自發(fā)性高血壓大鼠心重/體重、左室重/體重組別hw/bw(mg/g)lvw/bw(mg/g)對(duì)照組5.6±0.22.5±0.3抗體組4.1±0.3*1.5±0.2*注：與對(duì)照組比較，*p<0.05。實(shí)施例21免疫熒光檢測(cè)正常人和乳腺癌患者外周血涂片細(xì)胞中adrb3的表達(dá)1、實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)adrb3在正常人的中性粒細(xì)胞和淋巴系祖細(xì)胞中表達(dá)(圖91a)。在成熟cd4+和cd8+t細(xì)胞中有少量表達(dá)，在幼稚或原始型t淋巴細(xì)胞(胞質(zhì)含有大量cd4的淋巴細(xì)胞)中大量表達(dá)(圖91b)。有絲分裂早期的細(xì)胞中高表達(dá)adrb3(圖91c)。淋巴細(xì)胞中的adrb3表達(dá)量少于粒細(xì)胞。在乳腺癌患者的外周血中，出現(xiàn)大量異型淋巴細(xì)胞，細(xì)胞核發(fā)生粒細(xì)胞樣改變，表現(xiàn)為腎形、分葉狀、不規(guī)則形，在核型發(fā)生粒細(xì)胞樣改變的淋巴細(xì)胞中，adrb3大量表達(dá)(圖92a)。癌癥病人的粒細(xì)胞出現(xiàn)大量足突，adrb3在足突中大量存在。正常人的粒細(xì)胞表面足突少，adrb3含量明顯少于癌癥病人的粒細(xì)胞(圖92b)。(2)乳腺癌患者的中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞大量表達(dá)adrb3和ki-67，腫瘤細(xì)胞和粒細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞表達(dá)adrb3，抑制淋巴細(xì)胞的活化。部分淋巴細(xì)胞中的adrb3表達(dá)量超過(guò)粒細(xì)胞。高表達(dá)adrb3和ki-67的淋巴細(xì)胞能夠少量表達(dá)髓系細(xì)胞的標(biāo)志蛋白-mpo(圖93)，提示該類型細(xì)胞向髓系細(xì)胞分化，表明乳腺癌患者的淋巴細(xì)胞發(fā)生去分化，變成幼稚或原始型淋巴細(xì)胞。adrb3抑制t細(xì)胞的分化。(3)乳腺癌患者血液中有大量中性粒細(xì)胞胞外網(wǎng)絡(luò)(net)，淋巴細(xì)胞粘附在net中，adrb3是net的主要成分(圖94)。提示淋巴細(xì)胞會(huì)接收到來(lái)自附近微環(huán)境(niche)中粒細(xì)胞的信號(hào)，癌細(xì)胞和粒細(xì)胞adrb3形成net,包繞淋巴細(xì)胞，調(diào)控淋巴細(xì)胞的分化和增殖。net制造出抑制性的免疫環(huán)境，抑制淋巴細(xì)胞的抗癌功能。(4)乳腺癌患者的粒細(xì)胞通過(guò)adrb3與淋巴細(xì)胞發(fā)生黏附(圖93)。正常人的外周血較少發(fā)生粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的黏附，癌癥病人的粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的黏附更牢靠和頻繁，與癌癥病人的粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞表面的adrb3黏附因子樣活性增高有密切關(guān)系。被粒細(xì)胞粘附的淋巴細(xì)胞表達(dá)mpo，表明粒細(xì)胞的adrb3誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞去分化，使其退化成淋巴系祖細(xì)胞或髓系細(xì)胞。(5)癌癥病人的淋巴細(xì)胞ki-67表達(dá)量與adrb3表達(dá)量正相關(guān)，在adrb3陽(yáng)性的淋巴細(xì)胞中，有ki-67表達(dá)(圖95)。粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞接觸后，如果淋巴細(xì)胞有ki-67表達(dá)，該細(xì)胞的adrb3含量將多于粒細(xì)胞。提示粒細(xì)胞或癌細(xì)胞增加淋巴細(xì)胞中的adrb3表達(dá)，adrb3誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞去分化，變成具有增殖能力的原始細(xì)胞或祖細(xì)胞。乳腺癌患者部分淋巴細(xì)胞高表達(dá)adrb3，少量表達(dá)ki-67和mpo，是幼稚型淋巴細(xì)胞(圖96)。(6)乳腺癌患者血液中有大量dna碎片，adrb3附著在dna碎片上(圖97)，dna碎片為癌細(xì)胞復(fù)制提供核酸原料。血液中dna/adrb3復(fù)合物含量越多，癌細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng)，更易于發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。(7)adrb3在原始漿細(xì)胞的胞漿中高表達(dá)，原始漿細(xì)胞的特征是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含大量密集的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量adrb3(圖98)，原始漿細(xì)胞核大于t細(xì)胞。成熟漿細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有大量adrb3(圖99)，成熟漿細(xì)胞的特征為胞漿沒(méi)有cd4或cd8，但含有大量adrb3。cd19+b細(xì)胞膜上表達(dá)adrb3(圖100)。adrb3能夠促進(jìn)漿細(xì)胞合成抗體。實(shí)施例22adrb3抗體誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞(pbmc)向細(xì)胞毒性t細(xì)胞分化1、實(shí)驗(yàn)方法正常人、胰腺癌、肝癌、肺癌和白血病患者各5名，抽外周血3～5ml，ficoll密度梯度離心法分離pbmc，5％胎牛血清的dmem培養(yǎng)，用不同濃度的adrb3抗體誘導(dǎo)培養(yǎng)，對(duì)照組不用adrb3抗體。分別于誘導(dǎo)培養(yǎng)0、2、4、6、8、10天時(shí)，留取細(xì)胞，流式細(xì)胞儀定量分析cd4+、cd8+t細(xì)胞和treg細(xì)胞。裂解誘導(dǎo)后的細(xì)胞，離心后取細(xì)胞上清，用mtt法驗(yàn)證誘導(dǎo)分化細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效果。選用sw1990、mcf-7等貼壁腫瘤細(xì)胞作為靶細(xì)胞，接種在96孔培養(yǎng)板中。實(shí)驗(yàn)組用含不同濃度的細(xì)胞裂解上清，對(duì)照組含等體積溶劑的培養(yǎng)基，37℃，5％co2培養(yǎng)5d。每孔加入200ul新鮮配制的含0.5mg/mlmtt的無(wú)血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4h。將每孔的液體吸盡，加入200uldmso，震蕩10min，酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定光密度值。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在0.5～100ug/ml劑量范圍內(nèi)，adrb3抗體促進(jìn)pbmc誘導(dǎo)分化為cd8+t細(xì)胞，同時(shí)降低treg細(xì)胞比例。同等濃度的抗體作用6～8天時(shí)，誘導(dǎo)后細(xì)胞中的抗癌細(xì)胞因子效力較高，最高劑量的細(xì)胞裂解液能夠殺傷約80％靶細(xì)胞。adrb3抗體誘導(dǎo)免疫無(wú)能的淋巴細(xì)胞成為有功能的細(xì)胞，發(fā)揮抗癌作用。實(shí)施例23adrb3抗體促進(jìn)補(bǔ)體激活1、實(shí)驗(yàn)方法不同濃度的adrb3抗體處理mcf-7，a549，sw1990細(xì)胞。內(nèi)毒素(lps)作為陽(yáng)性對(duì)照。2天后，收集細(xì)胞蛋白，westernblot檢測(cè)補(bǔ)體c3，c8和c5受體(c5r)。免疫熒光檢測(cè)c8和b3ar。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：adrb3抗體劑量依賴性增加c3，c8和c5r表達(dá)(圖101a)。adrb3抗體處理后，細(xì)胞膜上出現(xiàn)大量c8，而b3ar消失，細(xì)胞核固縮，發(fā)生凋亡(圖101b)。c8是膜攻擊復(fù)合物(membraneattackcomplex，mac)形成不可或缺的重要物質(zhì)，adrb3抗體促進(jìn)mac的組裝并插入細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生破裂、死亡。總結(jié)：綜上結(jié)果，adrb3是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵受體，adrb3介導(dǎo)的信號(hào)通路調(diào)控中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增殖和分化。正常情況下，adrb3維持機(jī)體的非特異免疫和特異免疫能力，清除外源病原微生物和老化的機(jī)體組織而起到保護(hù)機(jī)體和抗衰老的作用。病理情況下，該信號(hào)通路的過(guò)度活化將導(dǎo)致系統(tǒng)慢性炎癥，破壞免疫穩(wěn)態(tài)。針對(duì)adrb3的單克隆抗體能夠特異結(jié)合并調(diào)控(阻滯或激動(dòng))adrb3的活性，用于治療炎癥、病毒感染、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、神經(jīng)退行變、自身免疫病、惡性腫瘤和衰老性疾病。sequencelisting<110>鄭猛，林曙光<120>抗人adrb3單克隆抗體及其在疾病診斷和治療中的應(yīng)用<130>2017<160>26<170>patentinversion3.3<210>1<211>8<212>prt<213>cdr1<400>1glyphethrphesersertyrgly15<210>2<211>8<212>prt<213>cdr2<400>2ileserproglyglysertyrthr15<210>3<211>7<212>prt<213>cdr3<400>3alaargargaspleuasptyr15<210>4<211>8<212>prt<213>cdr1<400>4glytyrthrphethrsertyrtrp15<210>5<211>8<212>prt<213>cdr2<400>5iletyrproglyasnseraspthr15<210>6<211>13<212>prt<213>cdr3<400>6thrarggluasptyrasptyrasptrptyrpheaspval1510<210>7<211>8<212>prt<213>cdr1<400>7glytyrserphethrglytyrtyr15<210>8<211>8<212>prt<213>cdr2<400>8ileasnproserthrglyglythr15<210>9<211>14<212>prt<213>cdr3<400>9alaargvalleutyrasptyrgluglyserglyphealatyr1510<210>10<211>8<212>prt<213>cdr1<400>10glytyrserphethrglytyrthr15<210>11<211>8<212>prt<213>cdr2<400>11ileasnproserthrglyaspthr15<210>12<211>14<212>prt<213>cdr3<400>12alaargvalleutyrasptyrgluglyproglyphealatyr1510<210>13<211>11<212>prt<213>cdr1<400>13glnserleuleutyrseraspglylysthrtyr1510<210>14<211>3<212>prt<213>cdr2<400>14glnvalser1<210>15<211>9<212>prt<213>cdr3<400>15leuglnglythrtyrpheprohisthr15<210>16<211>10<212>prt<213>cdr1<400>16gluservalglutyrtyrglythrserleu1510<210>17<211>3<212>prt<213>cdr2<400>17glyalaser1<210>18<211>8<212>prt<213>cdr3<400>18glnglnserarglysvalargthr15<210>19<211>11<212>prt<213>cdr1<400>19lysserleuleuhisserasnglyasnthrtyr1510<210>20<211>3<212>prt<213>cdr2<400>20argmetser1<210>21<211>9<212>prt<213>cdr3<400>21metglnhisleuglutyrprophethr15<210>22<211>13<212>prt<213>cdr1<400>22lysserleuleutyrhisserasnglyleuasnthrtyr1510<210>23<211>4<212>prt<213>cdr2<400>23argalaserthr1<210>24<211>10<212>prt<213>cdr3<400>24metglnhisleuglutyrprophealathr1510<210>25<211>96<212>prt<213>人源化抗體重鏈v區(qū)<400>25gluvalglnleuglnglnserglysergluleuvallysproglyala151015servallysilesercyslysalaserglytyrserphethrglytyr202530tyrmetasntrpvallysglnserproglulysserleuglutrpile354045glygluileasnproserthrglyglythrthrtyrasnglnlysphe505560lysalalysalathrleuthrvalasplysserserserthralatyr65707580metglnleulysserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys859095<210>26<211>98<212>prt<213>人源化抗體輕鏈v區(qū)<400>26aspilevalmetthrglnalaalaproservalprovalthrprogly151015gluservalserilesercysargserserlysserleuleuhisser202530asnglyasnthrtyrleutyrtrppheleuglnargproglyglnser354045proglnleuleuiletyrargmetserasnleualaserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglythralaphethrleuargile65707580serargvalglualagluaspvalglyvaltyrtyrcysmetglnhis859095leuglu當(dāng)前第1頁(yè)12