本發(fā)明涉及體外診斷領域，特別是涉及一種血紅蛋白濃度測定用溶血劑。

背景技術：

血紅蛋白（hb）測定是臨床上一項常規(guī)檢查項目，通常通過血液檢查的手段來進行測定，血紅蛋白含量能更好地反映貧血程度，是診斷相關疾病的重要依據(jù)。

血紅蛋白含量常采用比色的原理進行測定，處理后的血液樣本加入溶血劑，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白。血紅蛋白可以與溶血劑中的相關成分結合，形成一種穩(wěn)定的血紅蛋白復合物，在一定的波長下進行比色，溶液吸光度的變化與血紅蛋白含量成正比，進而對血紅蛋白進行定量測定。早期對于血紅蛋白的檢測通常采用氰化高鐵血紅蛋白法（hicn），其致命的弱點是氰化物試劑有劇毒，污染環(huán)境，易造成公害，如今該方法已經(jīng)基本停止使用。現(xiàn)在血紅蛋白溶血劑是采用陽離子表面活性劑或陰離子表面活性劑，破壞紅細胞釋放血紅蛋白，并與血紅蛋白形成穩(wěn)定復合物進而比色檢測。這種檢測手段要借助于全自動血細胞分析儀來完成。目前市場上血細胞分析儀品牌繁雜，血紅蛋白溶血劑大多是專機專用，消耗量大，且價格昂貴，給廣大醫(yī)療機構帶來成本上的困擾。因此開發(fā)一種配方簡易，成本較低，適用多種機型，能夠代替原裝試劑上機使用的血紅蛋白溶血劑，降低對國外進口產(chǎn)品的依賴性，是十分必要的。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術問題是提供一種血紅蛋白濃度測定用溶血劑，為無氰溶血劑。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的一個技術方案是：提供一種血紅蛋白濃度測定用溶血劑，包括緩沖劑、陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和增溶劑，所述溶血劑的含量是根據(jù)不同血細胞分析儀調整某一組分的含量以適用。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述溶血劑的含量是先確定緩沖劑、陰離子表面活性劑和增溶劑的含量，再根據(jù)采用的血細胞分析儀調整非離子表面活性劑的含量。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述緩沖劑為硼酸-硼砂緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、tris-hcl緩沖劑、good’s緩沖劑中的一種或幾種。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述緩沖劑為磷酸鹽緩沖劑，所述磷酸鹽緩沖劑的濃度為10mm。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述陰離子表面活性劑為烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸鹽中的一種；所述陰離子表面活性劑的用量為4~8g/l。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述陰離子表面活性劑為十二烷基硫酸鈉。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述非離子表面活性劑為聚氧乙烯醚類；所述非離子表面活性劑的用量根據(jù)血細胞分析儀確定。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述非離子表面活性劑為聚乙二醇辛基苯基醚。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述增溶劑為異丙醇、甲醇、乙醇、乙二醇中的一種或多種；所述增溶劑的用量為5~20ml/l。

在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述溶血劑的組成為：磷酸二氫鉀0.1~2g/l、十二水合磷酸氫二鈉0.1~5g/l、十二烷基硫酸鈉4~8g/l、異丙醇5~20ml/l、聚乙二醇辛基苯基醚1-10g/l。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的血紅蛋白濃度測定用溶血劑，是針對利用比色法檢測血紅蛋白濃度的血細胞分析儀，通過對血紅蛋白溶血劑固定基礎配方，僅通過調整一種成分的含量，使得該溶血劑可以適用于不同的血細胞分析儀，簡化體外診斷試劑開發(fā)步驟，降低研發(fā)成本，有實際意義。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：

圖1是本發(fā)明實施例一試劑與bc-5800血細胞分析儀匹配試劑測定的血紅蛋白濃度的相關圖；

圖2是本發(fā)明實施例二試劑與bc-6800血細胞分析儀匹配試劑測定的血紅蛋白濃度的相關圖；

圖3是實施例三試劑與kx-21血細胞分析儀匹配試劑測定的血紅蛋白濃度的相關圖。

具體實施方式

下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

本發(fā)明提供一種血紅蛋白濃度測定用溶血劑，包括緩沖劑、陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和增溶劑。所述溶血劑主要用于溶解紅細胞，并與血紅蛋白特異性結合，形成穩(wěn)定的血紅蛋白復合物，在540nm左右有最大吸收峰，根據(jù)吸光度的變化測量血紅蛋白含量。

其中所述緩沖劑為硼酸-硼砂緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、tris-hcl緩沖劑、good’s緩沖劑中的一種或幾種，優(yōu)選磷酸鹽緩沖劑，所述磷酸鹽緩沖劑的濃度為10mm。所述緩沖劑用于調節(jié)溶血劑的ph。

所述陰離子表面活性劑既有破裂細胞和溶解紅細胞的作用，又可以與血紅蛋白結合形成穩(wěn)定的復合物，選自烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸鹽中的一種，具體為十二烷基硫酸鈉。所述陰離子表面活性劑的用量為4~8g/l。

所述非離子表面活性劑既可以參與紅細胞的溶解，又可以加速血紅蛋白復合物的形成，增加十二烷基硫酸鈉溶解能力，防止其在低溫下析出，增強血紅蛋白復合物的穩(wěn)定性。所述非離子表面活性劑為聚氧乙烯醚類，具體為聚乙二醇辛基苯基醚tritonx-100。所述非離子表面活性劑的用量在不同血細胞分析儀上使用有所不同。

所述增溶劑可以增加陰離子表面活性劑或非離子表面活性劑的溶解度，優(yōu)選但不限于異丙醇，還可以是甲醇、乙醇、乙二醇等，其使用量為5~20ml/l。

本發(fā)明實施例中所用試劑均為分析純試劑。

本發(fā)明血紅蛋白溶血劑的組成成分為：磷酸二氫鉀0.1~2g/l、十二水合磷酸氫二鈉0.1~5g/l、十二烷基硫酸鈉4~8g/l、異丙醇5~20ml/l、tritonx-1001-10g/l。

本發(fā)明首先確定磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉、十二烷基硫酸鈉和異丙醇的含量，其次通過調節(jié)tritonx-100的含量使得該溶血劑能夠適用于不同的血細胞分析儀，使用本發(fā)明的溶血劑在血細胞分析儀上檢測血液樣品中血紅蛋白含量，并與原裝試劑血紅蛋白檢測結果的相關性來評價本發(fā)明的溶血劑對不同機型的適用情況。以邁瑞bc-5800、bc-6800、希森美康kx-21機型為例進行試驗，但不限于這三種機型。

按照下表配方準確稱取各組分，依次溶解后用純化水定容，用0.22μm微孔濾膜過濾，即得到本發(fā)明所述血紅蛋白溶血劑基液a、b。將基液a、b按不同的比例混合，即通過調節(jié)tritonx-100的含量，確定適用于不同血細胞分析儀的溶血劑配方。

實施例一：

量取a液290ml和b液710ml，混合均勻，用于邁瑞bc-5800血細胞分析儀上，檢測10組血樣，每組血樣檢測3次，記錄血紅蛋白檢測結果，并與原裝試劑檢測結果進行比較，實驗結果如圖1所示。

實施例二：

量取a液230ml和b液770ml，混合均勻，用于邁瑞bc-6800血細胞分析儀上，檢測10組血樣，每組血樣檢測3次，記錄血紅蛋白檢測結果，并與原裝試劑檢測結果進行比較，實驗結果如圖2所示。

實施例三：

量取a液320ml和b液680ml，混合均勻，用于希森美康kx-21血細胞分析儀上，檢測10組血樣，每組血樣檢測3次，記錄血紅蛋白檢測結果，并與原裝試劑檢測結果進行比較，實驗結果如圖3所示。

由圖1可見，當tritonx-100含量為7.1g/l時，本發(fā)明血紅蛋白溶血劑測量結果與bc-5800原裝溶血劑測量結果基本一致，其相關系數(shù)為0.998，說明按照本發(fā)明開發(fā)的血紅蛋白溶血劑完全可以代替bc-5800原裝血紅蛋白溶血劑使用。

由圖2、圖3可見，當tritonx-100含量分別為7.7g/l、6.8g/l時，本發(fā)明血紅蛋白溶血劑測量結果分別與bc-6800、kx-21原裝血紅蛋白溶血劑測量結果基本一致，其相關系數(shù)為0.997、0.997，說明按照本發(fā)明開發(fā)的血紅蛋白溶血劑完全可以代替bc-6800、kx-21原裝血紅蛋白溶血劑使用。

由圖1、圖2、圖3可見，說明tritonx-100含量為6~8g/l時，按照本發(fā)明開發(fā)方法所配制血紅蛋白溶血劑，完全可以代替原裝試劑在bc-5800、bc-6800、kx-21等全自動血細胞分析儀上進行血紅蛋白濃度檢測。綜上，本發(fā)明所提供的一種用于血紅蛋白溶血劑開發(fā)的方法操作簡單，易于實現(xiàn)，且按照其所配制的試劑成本較低，能滿足市場上多數(shù)血細胞分析儀檢測血紅蛋白濃度的需求。

本發(fā)明通過對血紅蛋白溶血劑基礎配方中的一種有效成分含量的調節(jié)，使得該溶血劑能夠適用于不同的血細胞分析儀，可以滿足不同儀器檢測血紅蛋白的需要。

以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其它相關的技術領域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內。