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技術(shù)領(lǐng)域：
】本發(fā)明涉及凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑及其制造方法。
背景技術(shù)：
：在凝血酶原時(shí)間的測(cè)定中，例如，使用含使重組組織因子締合于由磷脂酰膽堿和磷脂酰絲氨酸構(gòu)成的脂質(zhì)體的含有組織因子的脂質(zhì)體的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑等(參照例如，國(guó)際公開(kāi)第98/48283號(hào))。一方面，近年，從凝固檢查的標(biāo)準(zhǔn)化的觀點(diǎn)來(lái)看，提倡對(duì)于在凝血酶原時(shí)間的評(píng)價(jià)中使用的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑定適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間及適當(dāng)?shù)膰?guó)際感受性指標(biāo)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：【發(fā)明要解決的技術(shù)課題】但是，在使用以往的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑測(cè)定正常血漿的凝固時(shí)間時(shí)，期望滿足適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間及適當(dāng)?shù)膰?guó)際感受性指標(biāo)的雙方。本發(fā)明提供在正常血漿的凝固的測(cè)定時(shí)可確保適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間和適當(dāng)?shù)膰?guó)際感受性指標(biāo)的新的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑及其制造方法?！窘鉀Q課題的技術(shù)方案】本發(fā)明之一的側(cè)面包括凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，其特征在于，含有含具有磷脂層的第1脂質(zhì)體和有與第1脂質(zhì)體不同的組成的磷脂層的第2脂質(zhì)體和組織因子的脂質(zhì)體組合物，組織因子與第1脂質(zhì)體及第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層締合，第1脂質(zhì)體是含磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物的脂質(zhì)體，第2脂質(zhì)體是含選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂的脂質(zhì)體。本發(fā)明的別的側(cè)面包括凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的制造方法，其包括(a)使用磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物而形成具有磷脂層的第1脂質(zhì)體的工序、(b)使用選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂而使有與第1脂質(zhì)體不同的組成的磷脂層的第2脂質(zhì)體形成的工序、及(c)使工序(a)中得到的第1脂質(zhì)體及工序(b)中得到的第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層與組織因子締合的工序?！景l(fā)明效果】由本發(fā)明可提供在正常血漿的凝固的測(cè)定時(shí)可確保適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間和適當(dāng)?shù)膰?guó)際感受性指標(biāo)的新的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑及其制造方法?！靖綀D說(shuō)明】【圖1】是說(shuō)明試劑盒的構(gòu)成的圖。【圖2】是顯示使用實(shí)施例2及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和三甘油酯的濃度的關(guān)系的坐標(biāo)圖?！緢D3】是顯示使用實(shí)施例2及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和膽紅素f的濃度的關(guān)系的坐標(biāo)圖?！緦?shí)施方式】【1.凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑】本實(shí)施方式涉及的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑(以下，被稱(chēng)為“試劑”)含有含具有磷脂層的第1脂質(zhì)體和有與第1脂質(zhì)體不同的組成的磷脂層的第2脂質(zhì)體和組織因子的脂質(zhì)體組合物。組織因子與第1脂質(zhì)體及第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層締合。第1脂質(zhì)體是含磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物的脂質(zhì)體。另外，第2脂質(zhì)體是含選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂的脂質(zhì)體。再者，在本說(shuō)明書(shū)中，磷脂酰膽堿化合物是指任選有取代基的磷脂酰膽堿。磷脂酰乙醇胺化合物是指任選有取代基的磷脂酰乙醇胺。磷脂酰絲氨酸化合物是指任選有取代基的磷脂酰絲氨酸。作為任選有取代基的磷脂酰膽堿的取代基，例如，可舉出碳原子數(shù)8～20、優(yōu)選為14～18的?；龋惶貏e限定。作為任選有取代基的磷脂酰乙醇胺的取代基，例如，可舉出碳原子數(shù)8～20、優(yōu)選為14～18的?；龋惶貏e限定。作為任選有取代基的磷脂酰絲氨酸的取代基，例如，可舉出碳原子數(shù)8～20、優(yōu)選為14～18的?；龋惶貏e限定。作為碳原子數(shù)8～20的?；?，例如，可舉出月桂?；⑷舛罐Ⅴ；?、棕櫚?；?、硬脂?；?、油酰基等，但不特別限定。作為磷脂酰膽堿化合物，例如，可舉出磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿等的酰基的碳原子數(shù)8～20、優(yōu)選為14～18的二?；字Ｄ憠A等，但不特別限定。在這些磷脂酰膽堿化合物之中，優(yōu)選酰基的碳原子數(shù)為8～20的二?；字Ｄ憠A，更優(yōu)選二油酰磷脂酰膽堿。作為磷脂酰乙醇胺化合物，例如，可舉出磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺等的?；奶荚訑?shù)8～20、優(yōu)選為14～18的二?；字Ｒ掖及返龋惶貏e限定。在這些磷脂酰乙醇胺化合物之中，優(yōu)選酰基的碳原子數(shù)為8～20的二?；字Ｒ掖及罚鼉?yōu)選二油酰磷脂酰乙醇胺。作為磷脂酰絲氨酸化合物，例如，可舉出磷脂酰絲氨酸、二月桂酰磷脂酰絲氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰絲氨酸、二油酰磷脂酰絲氨酸等的?；奶荚訑?shù)8～20、優(yōu)選為14～18的二?；字＝z氨酸等，但不特別限定。在這些磷脂酰絲氨酸化合物之中，優(yōu)選?；奶荚訑?shù)為8～20的二酰基磷脂酰絲氨酸，更優(yōu)選二油酰磷脂酰絲氨酸。在第1脂質(zhì)體中，作為磷脂酰膽堿化合物的質(zhì)量相對(duì)于磷脂酰乙醇胺化合物的質(zhì)量的比例的[磷脂酰膽堿化合物/磷脂酰乙醇胺化合物]，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)，優(yōu)選為2.0以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為不足3.0、更優(yōu)選為2.9以下。第1脂質(zhì)體的粒徑，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，通常，優(yōu)選為400～600nm。再者，在本說(shuō)明書(shū)中，“粒徑”的值是通過(guò)以粒徑測(cè)定模式使用粒徑測(cè)定裝置〔spectris(株)制、商品名：zetasizernanozsp〕，由動(dòng)態(tài)光散射法，于25℃測(cè)定而求出的值。在本實(shí)施方式涉及的試劑中，第2脂質(zhì)體有含選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂作為磷脂的磷脂層。第2脂質(zhì)體可為實(shí)質(zhì)上含磷脂酰膽堿化合物單獨(dú)或磷脂酰乙醇胺化合物單獨(dú)作為磷脂的脂質(zhì)體，也可為實(shí)質(zhì)上含磷脂酰膽堿化合物和磷脂酰乙醇胺化合物作為磷脂的脂質(zhì)體。在第2脂質(zhì)體中使用的磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物與在第1脂質(zhì)體中使用的磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物同樣。當(dāng)?shù)?脂質(zhì)體是實(shí)質(zhì)上含磷脂酰膽堿化合物單獨(dú)作為磷脂的脂質(zhì)體時(shí)，第2脂質(zhì)體中的磷脂酰膽堿化合物的量，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為20mg/ml以上、更優(yōu)選為40mg/ml以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為100mg/ml以下。當(dāng)?shù)?脂質(zhì)體是實(shí)質(zhì)上含磷脂酰乙醇胺化合物單獨(dú)作為磷脂的脂質(zhì)體時(shí)，第2脂質(zhì)體中的磷脂酰乙醇胺化合物的量，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為20mg/ml以上、更優(yōu)選為40mg/ml以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為100mg/ml以下。當(dāng)?shù)?脂質(zhì)體是實(shí)質(zhì)上含磷脂酰膽堿化合物和磷脂酰乙醇胺化合物作為磷脂的脂質(zhì)體時(shí)，第2脂質(zhì)體中的磷脂的合計(jì)量，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為20mg/ml以上、更優(yōu)選為40mg/ml以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為100mg/ml以下。在本實(shí)施方式涉及的試劑中，組織因子與第1脂質(zhì)體及第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層締合。第1脂質(zhì)體的磷脂層及第2脂質(zhì)體的磷脂層通常被認(rèn)為是脂質(zhì)雙層。組織因子通常被認(rèn)為在貫通磷脂層的狀態(tài)下與磷脂層締合。在本實(shí)施方式涉及的試劑中，包含以下的實(shí)施方式：·含組織因子締合于第1脂質(zhì)體的磷脂層，組織因子未締合于第2脂質(zhì)體的磷脂層的脂質(zhì)體組合物的試劑、·含組織因子未締合于第1脂質(zhì)體的磷脂層，組織因子締合于第2脂質(zhì)體的磷脂層的脂質(zhì)體組合物的試劑、·含組織因子締合于第1脂質(zhì)體的磷脂層及第2脂質(zhì)體的磷脂層的雙方的脂質(zhì)體組合物的試劑。組織因子是促凝血酶原激酶(也被稱(chēng)為“凝血因子的第iii因子”)。作為組織因子，可舉出天然來(lái)源的組織因子及重組組織因子。在本實(shí)施方式涉及的試劑中，優(yōu)選重組組織因子。這是因?yàn)樵系幕I備容易，穩(wěn)定地供給及批間的性能的差小，測(cè)定結(jié)果的再現(xiàn)性?xún)?yōu)良。作為天然來(lái)源的組織因子，例如，可由慣用的方法，使用自各種動(dòng)物種的腦、胎盤(pán)等單離的組織因子等。作為動(dòng)物種，例如，可舉出人、兔、牛、猴等，但不特別限定，在這些動(dòng)物種之中，從更確切地測(cè)定人的血液凝固時(shí)間的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選人。重組組織因子，例如，可通過(guò)在保持編碼期望的動(dòng)物種的組織因子的cdna的基因重組生物內(nèi)表達(dá)等得到。另外，重組組織因子也可為市售的重組組織因子。在重組組織因子之中，從更確切地測(cè)定人的血液凝固時(shí)間的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選重組人組織因子。作為編碼組織因子的cdna，可舉出編碼人組織因子的cdna(genbank登錄編號(hào)：nm_001993)、編碼牛組織因子的cdna(genbank登錄編號(hào)：nm_173878)等，但不特別限定。基因重組生物，例如，通過(guò)向宿主導(dǎo)入保持編碼組織因子的cdna的載體等得到。作為載體，例如，可舉出桿狀病毒載體abv及bevs等，但不特別限定。載體可根據(jù)宿主適宜選擇。作為宿主，例如，蠶蟲(chóng)體；例如，可舉出sf9、sf21等的昆蟲(chóng)細(xì)胞等，但不特別限定。向宿主導(dǎo)入載體可由對(duì)應(yīng)于載體的種類(lèi)的方法進(jìn)行。當(dāng)載體是病毒載體時(shí)，向宿主導(dǎo)入病毒載體可通過(guò)向宿主感染從病毒載體得到的重組病毒來(lái)進(jìn)行。表達(dá)的重組組織因子，例如，可通過(guò)進(jìn)行以下的操作等從基因重組生物取得。首先，破碎基因重組生物而得到破碎液。將得到的破碎液供于離心分離而得到含重組組織因子的級(jí)分。接下來(lái)，可使得到的級(jí)分增溶而得到含重組組織因子的溶液。本實(shí)施方式涉及的試劑中所含的磷脂每1mg的組織因子的量，通常，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為1.6μg以上、更優(yōu)選為5.0μg以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為16.7μg以下，更優(yōu)選為12.0μg以下。本實(shí)施方式涉及的試劑中的鈣離子的量只要是對(duì)于使第vii因子活化，使凝固反應(yīng)進(jìn)行適宜的量即可。本實(shí)施方式涉及的試劑中的鈣離子的量，通常，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為8mm以上、更優(yōu)選為15mm以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為45mm以下，更優(yōu)選為30mm以下。本實(shí)施方式涉及的試劑從穩(wěn)定保持所述試劑中所含的組織因子、鈣離子的觀點(diǎn)來(lái)看，可還含緩沖液。作為緩沖液，例如，可舉出4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸〔hepes〕緩沖液、tris緩沖液等，但不特別限定。緩沖液的ph只要是對(duì)于穩(wěn)定保持本實(shí)施方式涉及的試劑中所含的組織因子、鈣離子適宜的ph即可。緩沖液的ph，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間的同時(shí)提高穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為7以上、更優(yōu)選為7.5，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間的同時(shí)提高穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為8.5以下。本實(shí)施方式涉及的試劑可還含助劑。作為助劑，例如，可舉出防腐劑、抗氧化劑、賦形劑等，但不特別限定。作為防腐劑，例如，可舉出疊氮化鈉等，但不特別限定。作為抗氧化劑，例如，可舉出丁基羥基苯甲醚等，但不特別限定。作為賦形劑，例如，可舉出丙氨酸、蔗糖、甘露糖醇等，但不特別限定。本實(shí)施方式涉及的試劑可為冷凍干燥物，也可為冷凍干燥物溶解在溶劑中的溶液。本實(shí)施方式涉及的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的第2脂質(zhì)體的含量，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為20～70質(zhì)量％、更優(yōu)選為30～50質(zhì)量％。本實(shí)施方式涉及的試劑含第1脂質(zhì)體和由第1脂質(zhì)體中所含的選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂構(gòu)成的第2脂質(zhì)體作為脂質(zhì)體。從而，由本實(shí)施方式涉及的試劑在正常血漿的凝固的測(cè)定時(shí)可確保適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間、具體而言10.0～13.0秒鐘及適當(dāng)?shù)膰?guó)際感受性指標(biāo)、具體而言1.0±0.2的兩方。另外，本實(shí)施方式涉及的試劑有在凝固時(shí)間的測(cè)定時(shí)難以受到共存物質(zhì)的影響的益處?！?.凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的制造方法】本實(shí)施方式涉及的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的制造方法(以下也稱(chēng)為“試劑的制造方法”)包括凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的制造方法，其包括(a)使用磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物而形成具有磷脂層的第1脂質(zhì)體的工序、(b)使用選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂而使有與第1脂質(zhì)體不同的組成的磷脂層的第2脂質(zhì)體形成的工序、及(c)使工序(a)中得到的第1脂質(zhì)體及工序(b)中得到的第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層與組織因子締合的工序。在工序(a)中，使用磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物形成具有磷脂層的第1脂質(zhì)體。在工序(a)中，首先，將磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物添加到氯仿中而使溶解，得到磷脂的氯仿溶液。磷脂的氯仿溶液中的[磷脂酰膽堿化合物/磷脂酰乙醇胺化合物](質(zhì)量比)，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為2.0以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為不足3.0、更優(yōu)選為2.9以下。接下來(lái)，通過(guò)從得到的磷脂的氯仿溶液蒸發(fā)氯仿，使磷脂的薄膜形成。使得到的磷脂的薄膜在hepes緩沖液a〔組成：150mm氯化鈉及25mmhepes(ph7.35)〕中膨潤(rùn)，使有磷脂雙層的第1脂質(zhì)體形成。氯仿的蒸發(fā)，例如，可通過(guò)使用蒸發(fā)器等進(jìn)行。接下來(lái)，將含得到的第1脂質(zhì)體的混合物，例如，由攪拌器等攪拌。攪拌速度，從對(duì)混合物的成分進(jìn)行充分混合的觀點(diǎn)來(lái)看，通常是400rpm以上、更優(yōu)選為450rpm以上，從抑制脂質(zhì)體的破碎的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為650rpm以下，更優(yōu)選為600rpm以下。攪拌時(shí)間只要是對(duì)于達(dá)成脂質(zhì)體的膨潤(rùn)充分的時(shí)間即可。攪拌時(shí)間通常優(yōu)選為45分鐘以上、更優(yōu)選為60分鐘以上，優(yōu)選為120分鐘以下，更優(yōu)選為90分鐘以下。其后，對(duì)于混合物照射超聲波，得到分散液。由此，得到有含磷脂酰膽堿化合物、磷脂酰乙醇胺化合物和磷脂酰絲氨酸化合物的磷脂雙層的第1脂質(zhì)體的分散液。再者，也可根據(jù)需要，對(duì)于分散液，使用有對(duì)于得到期望的粒徑的第1脂質(zhì)體適宜的孔徑的膜，實(shí)施擠出機(jī)處理使第1脂質(zhì)體的粒徑均一化。超聲波的頻率只要是可對(duì)于混合物的液體成分，使第1脂質(zhì)體充分地分散的頻率即可。超聲波的頻率通常是37～40khz。超聲波的照射時(shí)間只要是可對(duì)于混合物的液體成分，使第1脂質(zhì)體充分地分散的時(shí)間即可。超聲波的照射時(shí)間通常是5～20分鐘。在工序(b)中，作為磷脂，使用選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂形成具有與上述第1脂質(zhì)體不同的組成的磷脂層的第2脂質(zhì)體。在工序(b)中，首先，將選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂添加到氯仿中而使溶解，得到磷脂的氯仿溶液。工序(b)中磷脂的薄膜的形成后第2脂質(zhì)體的形成的操作與工序(a)中的磷脂的薄膜的形成后第1脂質(zhì)體的形成的操作同樣。由此，得到有含選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂的磷脂雙層的第2脂質(zhì)體的分散液。在工序(c)中，使工序(a)中得到的第1脂質(zhì)體及工序(b)中得到的第2脂質(zhì)體的至少一方的磷脂層與組織因子締合。在工序(c)中，首先，將第1脂質(zhì)體的分散液及/或第2脂質(zhì)體的分散液與含有組織因子的溶液混合，得到脂質(zhì)體和組織因子的混合液。再者，在工序(c)中，也可使組織因子溶液接觸于工序(a)中得到的第1脂質(zhì)體的分散液和工序(b)中得到的第2脂質(zhì)體的分散液的混合物。或者，在工序(c)中，也可使組織因子溶液接觸于工序(a)中得到的第1脂質(zhì)體的分散液或工序(b)中得到的第2脂質(zhì)體的分散液之后，使得到的產(chǎn)物和未使與組織因子溶液接觸的脂質(zhì)體的分散液接觸。作為在含有組織因子的溶液中使用的溶劑，例如，可舉出tris鹽酸緩沖液a〔組成：150mm氯化鈉、10質(zhì)量％甘油及20mmtris鹽酸緩沖液(ph8.0)〕等，但不特別限定。含有組織因子的溶液中的組織因子的量可根據(jù)期望的試劑的種類(lèi)適宜決定。含有組織因子的溶液中的組織因子的量通常從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為0.1μg/ml以上、更優(yōu)選為0.3μg/ml以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為1.0μg/ml以下，更優(yōu)選為0.7μg/ml以下。當(dāng)使組織因子與第1脂質(zhì)體的磷脂層締合時(shí)，第1脂質(zhì)體的分散液每1ml的組織因子溶液的容量只要是相對(duì)于每1mg第1脂質(zhì)體的組織因子的量成1.6～16.7μg的容量即可。當(dāng)使組織因子與第1脂質(zhì)體的磷脂層及第2脂質(zhì)體的磷脂層的兩方締合時(shí)，第1脂質(zhì)體的分散液每1ml的組織因子溶液的容量只要是相對(duì)于每1mg第1脂質(zhì)體的組織因子的量成1.6～16.7μg的容量即可。其后，在工序(c)中，將脂質(zhì)體和組織因子的混合液，例如，由攪拌器等，攪拌。由此，得到組織因子與第1脂質(zhì)體的磷脂層及第2脂質(zhì)體的磷脂層的至少一方締合的脂質(zhì)體組合物。攪拌速度，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為850rpm以上、更優(yōu)選為900rpm以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為1050rpm以下，更優(yōu)選為1000rpm以下。攪拌時(shí)間只要是脂質(zhì)體和組織因子充分地締合的時(shí)間即可。攪拌時(shí)間通常優(yōu)選為100小時(shí)以上、更優(yōu)選為140小時(shí)以上，優(yōu)選為300小時(shí)以下，更優(yōu)選為200小時(shí)以下。在工序(c)中得到的脂質(zhì)體組合物中，進(jìn)一步添加鈣溶液，攪拌得到的混合物。由此，得到前述的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。另外，在工序(c)中得到的脂質(zhì)體組合物中，也可根據(jù)需要，還添加穩(wěn)定化劑等。得到的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑可適宜冷凍干燥。作為鈣溶液，例如，可舉出氯化鈣水溶液等，但不特別限定。鈣溶液中的鈣離子的濃度從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，通常優(yōu)選為37.5mm以上、更優(yōu)選為50mm以上，從確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為75mm以下，更優(yōu)選為62.5mm以下。相對(duì)于脂質(zhì)體組合物的鈣溶液的添加量只要是試劑中的鈣離子的量成優(yōu)選8mm以上、更優(yōu)選15mm以上，成優(yōu)選45mm以下，更優(yōu)選30mm以下的量即可。在本實(shí)施方式涉及的試劑中，從穩(wěn)定保持所述試劑中所含的組織因子、鈣離子的觀點(diǎn)來(lái)看，可還混合緩沖液?！?.試劑盒】前述的試劑可作為封入容器中的試劑盒提供。本實(shí)施方式涉及的試劑盒的一例示于圖1。圖1所示的試劑盒10含放入試劑21的容器22、附帶文書(shū)31和箱41。試劑21含第1脂質(zhì)體101和第2脂質(zhì)體102。在第1脂質(zhì)體101的磷脂層200中，在組織因子210貫通的狀態(tài)下締合。在本實(shí)施方式中，第1脂質(zhì)體101的磷脂層200由二油酰磷脂酰乙醇胺201、二油酰磷脂酰膽堿202和二油酰磷脂酰絲氨酸203構(gòu)成。在本實(shí)施方式中，第2脂質(zhì)體102由二油酰磷脂酰膽堿202構(gòu)成的磷脂層構(gòu)成。再者，在圖1所示的實(shí)施方式中，也可為在第2脂質(zhì)體102的磷脂層中組織因子210不締合，但組織因子210在第2脂質(zhì)體102的磷脂層結(jié)合。在試劑盒10中，例如，也可含稀釋用的水系溶劑、對(duì)照血漿等。水系溶劑可從在血液凝固能的臨床檢查中通常使用的水系溶劑適宜選擇。作為水系溶劑，例如，可舉出水、生理鹽水等，但不特別限定。作為對(duì)照血漿，例如，可舉出正常血漿等，但不特別限定。附帶文書(shū)31含使用試劑盒10進(jìn)行凝血酶原時(shí)間的測(cè)定的操作順序等的記載。箱41收容放入試劑21的容器22和附帶文書(shū)31。【實(shí)施例】在下文中，“脂質(zhì)體a”表示前述的第1脂質(zhì)體。另外，“脂質(zhì)體b”表示前述的第2脂質(zhì)體。再者，在以下的實(shí)施例等中，各略語(yǔ)的含意如下所述。<略語(yǔ)>dope：二油酰磷脂酰乙醇胺dopc：二油酰磷脂酰膽堿dops：二油酰磷脂酰絲氨酸pe：磷脂酰乙醇胺化合物pc：磷脂酰膽堿化合物ps：磷脂酰絲氨酸化合物hepes：4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸〔4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonicacid〕isi：國(guó)際感受性指標(biāo)(internationalsensitivityindex)【實(shí)施例1及比較例1】(1)脂質(zhì)體a1的調(diào)制將25mg/ml磷脂-氯仿溶液a〔dope510mg、dopc1020mg及含有dops510mg的〕添加到茄型瓶中。接下來(lái)，一邊使放入磷脂-氯仿溶液a的茄型瓶在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中旋轉(zhuǎn)，一邊使氯仿蒸發(fā)。由此，在茄型瓶的內(nèi)壁面形成磷脂的薄膜。使用hepes緩沖液a〔組成：150mm氯化鈉及25mmhepes(ph7.35)〕850ml使磷脂的薄膜膨潤(rùn)，得到含脂質(zhì)體的混合物。接下來(lái)，使用攪拌器將混合物以500rpm攪拌60分鐘。其后，使用水浴型超聲波裝置〔銳利(株)制、商品名：ut-306h〕，對(duì)于混合物照射15分鐘37khz的超聲波而得到含有脂質(zhì)體a1的液。得到的脂質(zhì)體a1中的dope、dopc及dops各自的濃度是0.6mg/ml(dope濃度)、1.2mg/ml(dopc濃度)及0.6mg/ml(dops濃度)。(2)脂質(zhì)體b1的調(diào)制除了代替使用dope510mg、dopc1020mg、dops510mg而使用dopc1280mg及使用hepes緩沖液a800ml使磷脂的薄膜膨潤(rùn)之外，進(jìn)行與(1)同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b的液。脂質(zhì)體b中的dopc濃度是1.6mg/ml。(3)凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的調(diào)制將(1)的含有脂質(zhì)體a1的液775ml、(2)的含有脂質(zhì)體b1的液775ml、50μg/ml組織因子溶液310ml和hepes緩沖液b〔組成：22mm氯化鈣、1mm氯化鎂、1質(zhì)量％蔗糖、0.1質(zhì)量％疊氮化鈉及25mmhepes(ph7.5)〕1240ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以950rpm攪拌8天，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物3l和hepes緩沖液c〔組成：0.75mm丙氨酸、0.075mm蔗糖、2.5mm氯化鎂、60mm氯化鈣及25mmhepes(ph7.5)〕12l混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例1的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b1的含量是40質(zhì)量％。另外，將(1)的含有脂質(zhì)體a1的液775ml、hepes緩沖液a775ml、50μg/ml組織因子溶液310ml和hepes緩沖液b1240ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以950rpm攪拌8天，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物3l和hepes緩沖液c12l混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到比較例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。(4)凝固時(shí)間的測(cè)定及isi的算出將(3)的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的3批各自再溶解于純化水4ml，得到試劑溶液。在凝固測(cè)定裝置〔sysmex(株)制、商品名：cs-2000i〕內(nèi)，將待測(cè)樣品50μl于37℃溫育1～2分鐘。接下來(lái)，將試劑溶液100μl添加到凝固測(cè)定裝置內(nèi)的待測(cè)樣品中之后，對(duì)于得到的測(cè)定試樣，使用凝固測(cè)定裝置測(cè)定在波長(zhǎng)660nm處的透射光量的變化。再者，作為待測(cè)樣品，使用對(duì)照血漿〔precisionbiologicinc.(precisionbiologicinc.)制、商品名：cryocheckpoolednormalplasma〕及校準(zhǔn)品〔technoclone制、商品名：akcalibrant〕。使用校準(zhǔn)品的凝固時(shí)間的測(cè)定值，根據(jù)式(i)求出isi。式(i)：isi＝[使用標(biāo)準(zhǔn)試劑之時(shí)的isi]×[標(biāo)繪(使用評(píng)價(jià)對(duì)象的試劑之時(shí)的校準(zhǔn)品的凝固時(shí)間的對(duì)數(shù))和(使用標(biāo)準(zhǔn)試劑之時(shí)的校準(zhǔn)品的凝固時(shí)間的對(duì)數(shù))而得到的直線的斜率]研究使用實(shí)施例1及比較例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間及isi的結(jié)果示于表1。【表1】凝固時(shí)間(sec)isi實(shí)施例110.71.01比較例18.41.34從表1所示的結(jié)果知，使用實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的對(duì)照血漿的凝固時(shí)間是適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間的范圍(10.0～13.0)。與此相比，從表1所示的結(jié)果知，使用比較例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的對(duì)照血漿的凝固時(shí)間是從適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間的范圍(10.0～13.0)脫離的范圍的時(shí)間。實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的脂質(zhì)體a的磷脂的組成與比較例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑中脂質(zhì)體的磷脂的組成相同。但是，在實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑中，含磷脂的組成不同的2種脂質(zhì)體。與此相比，在比較例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑中，含1種脂質(zhì)體。從而，從這些結(jié)果知，即使單獨(dú)使用有與實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的脂質(zhì)體a相同的磷脂的組成的脂質(zhì)體，也無(wú)法確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間。另外，從表1所示的結(jié)果知，使用實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的isi是適當(dāng)?shù)膇si的范圍(1.0±0.2)。與此相比，從表1所示的結(jié)果知，使用比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的isi是1.34，從適當(dāng)?shù)膇si的范圍大大脫離。從而知，比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑無(wú)適宜于實(shí)用的性質(zhì)。從這些結(jié)果知，實(shí)施例1的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑可確保適當(dāng)?shù)姆秶哪虝r(shí)間及適當(dāng)?shù)膇si。【實(shí)施例2及比較例2】(1)脂質(zhì)體a2的調(diào)制將含dope15mg、dopc30mg和dops15mg的磷脂-氯仿溶液a放入玻璃制容器。接下來(lái)，一邊使放入磷脂-氯仿溶液a的玻璃制容器在旋轉(zhuǎn)器〔asone(株)制、商品名：mixrotorvmr-5r〕中旋轉(zhuǎn)，一邊使氯仿蒸發(fā)。由此，在玻璃制容器的內(nèi)壁面形成磷脂的薄膜。使用hepes緩沖液a25ml使磷脂的薄膜膨潤(rùn)，得到含脂質(zhì)體a2的混合物。接下來(lái)，使用攪拌器將混合物以500rpm攪拌60分鐘。其后，使用水浴型超聲波裝置〔銳利(株)制、商品名：ut-306h〕，對(duì)于混合物照射15分鐘超聲波而得到含有脂質(zhì)體a2的液。得到的脂質(zhì)體a2中的dope、dopc及dops各自的濃度是0.6mg/ml(dope濃度)、1.2mg/ml(dopc濃度)及0.6mg/ml(dops濃度)。(2)脂質(zhì)體b2的調(diào)制除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc40mg之外，進(jìn)行與(1)同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b2的液。脂質(zhì)體b2中的dopc濃度是1.6mg/ml。(3)凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的調(diào)制將(1)的含有脂質(zhì)體a2的液20ml、(2)的含有脂質(zhì)體b2的液20ml、50μg/ml組織因子溶液8ml和hepes緩沖液b32ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以650rpm攪拌，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。得到得到的脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物80ml和hepes緩沖液c320ml混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例2的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b2的含量是40質(zhì)量％。另外，將(1)的含有脂質(zhì)體a2的液20ml和50μg/ml組織因子溶液8ml添加到hepes緩沖液b32ml中。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以650rpm攪拌，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。得到得到的脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物60ml、hepes緩沖液a20ml和hepes緩沖液c320ml混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。(4)三甘油酯對(duì)凝固時(shí)間的影響除了使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，使用含三甘油酯的待測(cè)樣品或不含三甘油酯的待測(cè)樣品之外，進(jìn)行與實(shí)施例1及比較例1的(4)同樣的操作，測(cè)定凝固時(shí)間。接下來(lái)，求出相對(duì)于不含三甘油酯的待測(cè)樣品的凝固時(shí)間的含三甘油酯的待測(cè)樣品的凝固時(shí)間的變化率。再者，含三甘油酯的待測(cè)樣品如下所述調(diào)制。首先，將正常血漿〔sysmex(株)制、商品名：coagtrolix〕和含有三甘油酯的液〔日本制藥(株)制、商品名：intrafat注20％〕混合至正常血漿/三甘油酯(體積比)成9.5/0.5，得到樣品a。另外，將正常血漿和生理鹽水混合至正常血漿/生理鹽水(體積比)成9.5/0.5，得到樣品b。接下來(lái)，將樣品a和樣品b混合至樣品a/樣品b(體積比)成1/9，得到三甘油酯濃度100mg/dl的待測(cè)樣品。另外，將樣品a和樣品b混合至樣品a/樣品b(體積比)成1/4，得到三甘油酯濃度200mg/dl的待測(cè)樣品。再者，將樣品b作為不含三甘油酯的待測(cè)樣品(三甘油酯濃度0mg/dl的待測(cè)樣品)。研究使用實(shí)施例2及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和三甘油酯濃度的關(guān)系的結(jié)果示于圖2。圖中，白色圓點(diǎn)表示使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和三甘油酯濃度的關(guān)系、黑色圓點(diǎn)表示使用比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和三甘油酯濃度的關(guān)系。從圖2所示的結(jié)果得知，使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率比使用比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率小。從而，從這些結(jié)果知，含脂質(zhì)體a和由脂質(zhì)體a中所含的pc構(gòu)成的脂質(zhì)體b作為脂質(zhì)體的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑難以受血漿中所含的共存物質(zhì)的三甘油酯的影響。(5)膽紅素f濃度對(duì)凝固時(shí)間的影響除了使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，使用含膽紅素f的待測(cè)樣品之外，進(jìn)行與實(shí)施例1及比較例1的(4)同樣的操作，測(cè)定凝固時(shí)間。接下來(lái)，求出相對(duì)于不含膽紅素f的待測(cè)樣品的凝固時(shí)間的含膽紅素f的待測(cè)樣品的凝固時(shí)間的變化率。再者，含膽紅素f的待測(cè)樣品如下所述調(diào)制。首先，將正常血漿〔sysmex(株)制、商品名：coagtrolix〕和含有膽紅素f的液〔sysmex(株)制、商品名：干涉check_a_plus〕混合至正常血漿/膽紅素f(體積比)成8/2，得到樣品a。另外，將正常血漿和生理鹽水混合至正常血漿/生理鹽水(體積比)成8/2，得到樣品b。接下來(lái)，將樣品a和樣品b混合至樣品a/樣品b(體積比)成表2所示的體積比，得到含膽紅素f的待測(cè)樣品。將樣品b作為不含膽紅素f的待測(cè)樣品(膽紅素f濃度0mg/ml的待測(cè)樣品)。【表2】膽紅素f濃度(mg/ml)014.829.644.459.274.0樣品a/樣品b(體積比)0/102/84/66/48/210/0研究使用實(shí)施例2及比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和膽紅素f濃度的關(guān)系的結(jié)果示于圖3。圖中，白色圓點(diǎn)表示使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和膽紅素f濃度的關(guān)系、黑色圓點(diǎn)表示使用比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率和膽紅素f濃度的關(guān)系。從圖3所示的結(jié)果得知，使用實(shí)施例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率比使用比較例2的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間的變化率小。從而，從這些結(jié)果知，含脂質(zhì)體a和由脂質(zhì)體a中所含的pc構(gòu)成的脂質(zhì)體b作為脂質(zhì)體的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑難以受血漿中所含的共存物質(zhì)的膽紅素f的影響?！緦?shí)施例3～7及比較例3】(1)脂質(zhì)體a3及a4的調(diào)制將含dope15mg、dopc30mg和dops15mg的磷脂-氯仿溶液a放入玻璃制容器。接下來(lái)，一邊使放入磷脂-氯仿溶液a的玻璃制容器在旋轉(zhuǎn)器〔asone(株)制、商品名：mixrotorvmr-5r〕中旋轉(zhuǎn)，一邊使氯仿蒸發(fā)。由此，在玻璃制容器的內(nèi)壁面形成磷脂的薄膜。使用hepes緩沖液a25ml使磷脂的薄膜膨潤(rùn)，得到含脂質(zhì)體a3的混合物。接下來(lái)，使用攪拌器將混合物以500rpm攪拌60分鐘。其后，使用水浴型超聲波裝置〔銳利(株)制、商品名：ut-306h〕，對(duì)于混合物照射15分鐘超聲波而得到含有脂質(zhì)體a3的液。得到的脂質(zhì)體a3中的dope、dopc及dops各自的濃度是0.6mg/ml(dope濃度)、1.2mg/ml(dopc濃度)及0.6mg/ml(dops濃度)。另外，除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dope15mg、dopc70mg及dops15mg之外，進(jìn)行與脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體a4的液。脂質(zhì)體a4中的dope、dopc及dops各自的濃度是0.6mg/ml(dope濃度)、2.8mg/ml(dopc濃度)及0.6mg/ml(dops濃度)。(2)脂質(zhì)體b3～b7的調(diào)制除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc20mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b3的液。脂質(zhì)體b3中的dopc濃度是0.8mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc40mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b4的液。脂質(zhì)體b4中的dopc濃度是1.6mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc60mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b5的液。脂質(zhì)體b5中的dopc濃度是2.4mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc80mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b6的液。脂質(zhì)體b6中的dopc濃度是3.2mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc100mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a3的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b7的液。脂質(zhì)體b7中的dopc濃度是4.0mg/ml。(3)凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的調(diào)制將含有脂質(zhì)體a1的液20ml、50μg/ml組織因子溶液8ml和hepes緩沖液b32ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以650rpm攪拌，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物60ml、含有脂質(zhì)體b3的液20ml和hepes緩沖液c320ml混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到實(shí)施例3的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例3的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b3的含量是25質(zhì)量％。除了代替使用含有脂質(zhì)體b3的液而使用含有脂質(zhì)體b4的液(實(shí)施例4)、含有脂質(zhì)體b5的液(實(shí)施例5)、含有脂質(zhì)體b6的液(實(shí)施例6)或含有脂質(zhì)體b7的液(實(shí)施例7)之外，進(jìn)行與實(shí)施例3同樣的操作，得到實(shí)施例4～7的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例4的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b4的含量是40質(zhì)量％。實(shí)施例5的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b5的含量是50質(zhì)量％。實(shí)施例6的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b6的含量是57質(zhì)量％。實(shí)施例7的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b7的含量是63質(zhì)量％。將含有脂質(zhì)體a2的液20ml、50μg/ml組織因子溶液8ml、hepes緩沖液a20ml和hepes緩沖液b32ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以650rpm攪拌，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。得到得到的脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物80ml和hepes緩沖液c320ml混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到比較例3的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。(4)凝固時(shí)間的測(cè)定及isi的算出除了使用實(shí)施例3～7及比較例3的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之外，進(jìn)行與實(shí)施例1及比較例1的(4)同樣的操作，進(jìn)行凝固時(shí)間的測(cè)定及isi的算出。研究使用實(shí)施例3～7及比較例3的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間及isi的結(jié)果示于表3?！颈?】凝固時(shí)間(sec)isi實(shí)施例310.71.07實(shí)施例410.71.061實(shí)施例510.71.064實(shí)施例6111.058實(shí)施例7111.072比較例315.60.904從表3所示的結(jié)果得知，使用包括含dopc作為磷脂的脂質(zhì)體b的實(shí)施例3～7的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間及isi，不管脂質(zhì)體b中的dopc的含量如何，均是適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及isi。但是得知，不包括含dopc作為磷脂的脂質(zhì)體b，脂質(zhì)體a中的dopc的含量多的比較例3的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的isi從適當(dāng)?shù)膇si的范圍脫離。從而，從這些結(jié)果得知，如果由含脂質(zhì)體a和由脂質(zhì)體a中所含的pc構(gòu)成的脂質(zhì)體b作為脂質(zhì)體的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，可確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及isi?！緦?shí)施例8～10及比較例4】(1)脂質(zhì)體a5的調(diào)制將含dope15mg、dopc30mg和dops15mg的磷脂-氯仿溶液a放入玻璃制容器。接下來(lái)，一邊使放入磷脂-氯仿溶液a的玻璃制容器在旋轉(zhuǎn)器〔asone(株)制、商品名：mixrotorvmr-5r〕中旋轉(zhuǎn)，一邊使氯仿蒸發(fā)。由此，在玻璃制容器的內(nèi)壁面形成磷脂的薄膜。使用hepes緩沖液a25ml使磷脂的薄膜膨潤(rùn)，得到含脂質(zhì)體a5的混合物。接下來(lái)，使用攪拌器將混合物以500rpm攪拌60分鐘。其后，使用水浴型超聲波裝置〔銳利(株)制、商品名：ut-306h〕，對(duì)于混合物照射15分鐘超聲波而得到含有脂質(zhì)體a5的液。得到的脂質(zhì)體a5中的dope、dopc及dops各自的濃度是0.6mg/ml(dope濃度)、1.2mg/ml(dopc濃度)及0.6mg/ml(dops濃度)。(2)脂質(zhì)體b8～b11的調(diào)制除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dope40mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a5的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b8的液。脂質(zhì)體b8中的dope濃度是1.6mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dope20mg及dopc20mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a5的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b9的液。脂質(zhì)體b9中的dope及dopc各自的濃度是0.8mg/ml及0.8mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dopc40mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a5的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b10的液。脂質(zhì)體b10中的dopc濃度是1.6mg/ml。除了代替使用dope15mg、dopc30mg及dops15mg而使用dops40mg之外，進(jìn)行與(1)的脂質(zhì)體a5的調(diào)制同樣的操作，得到含有脂質(zhì)體b11的液。脂質(zhì)體b11中的dops濃度是1.6mg/ml。(3)凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的調(diào)制將(1)的含有脂質(zhì)體a5的液20ml、(2)的含有脂質(zhì)體b8的液20ml、50μg/ml組織因子溶液8ml和hepes緩沖液b32ml混合。通過(guò)一邊將得到的混合物于37℃加溫，一邊以950rpm攪拌8天，使脂質(zhì)體和組織因子再構(gòu)成，得到脂質(zhì)體組合物。將得到的脂質(zhì)體組合物80ml和hepes緩沖液c320ml混合。向瓶分注各2ml得到的混合物。使瓶中的混合物冷凍干燥，得到實(shí)施例8的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例8的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b8的含量是40質(zhì)量％。除了代替使用含有脂質(zhì)體b8的液而使用含有脂質(zhì)體b9的液(實(shí)施例9)、含有脂質(zhì)體b10的液(實(shí)施例10)或含有脂質(zhì)體b11的液(比較例4)之外，進(jìn)行與實(shí)施例8同樣的操作，得到實(shí)施例9～10及比較例4的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑。實(shí)施例9的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b9的含量是40質(zhì)量％。實(shí)施例10的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b10的含量是40質(zhì)量％。比較例4的試劑中的、相對(duì)于總脂質(zhì)體的含量的脂質(zhì)體b11的含量是40質(zhì)量％。(4)凝固時(shí)間的測(cè)定及isi的算出除了使用實(shí)施例8～10及比較例4的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之外，進(jìn)行與實(shí)施例1及比較例1的(4)同樣的操作，進(jìn)行凝固時(shí)間的測(cè)定及isi的算出。研究使用實(shí)施例8～10及比較例4的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑之時(shí)的凝固時(shí)間及isi的結(jié)果示于表4?！颈?】凝固時(shí)間(sec)isi實(shí)施例812.91.096實(shí)施例911.11.042實(shí)施例10111.058比較例49.21.376從表4所示的結(jié)果得知，構(gòu)成脂質(zhì)體b的磷脂是dope單獨(dú)(實(shí)施例8)、dopc和dope的混合物(實(shí)施例9)或dopc單獨(dú)(實(shí)施例10)的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑的凝固時(shí)間及isi均是適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及isi。從而，從這些結(jié)果得知，如果由含脂質(zhì)體a和由脂質(zhì)體a中所含的選自pe及pc的至少1種磷脂構(gòu)成的脂質(zhì)體b作為脂質(zhì)體的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，可確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及isi。如以上說(shuō)明，如果由本實(shí)施方式涉及的凝血酶原時(shí)間測(cè)定用試劑，含第1脂質(zhì)體和由第1脂質(zhì)體中所含的選自磷脂酰膽堿化合物及磷脂酰乙醇胺化合物的至少1種磷脂構(gòu)成的第2脂質(zhì)體作為脂質(zhì)體，由此提示在正常血漿的凝固時(shí)間的測(cè)定時(shí)可確保適當(dāng)?shù)哪虝r(shí)間及isi，而且難以受共存物質(zhì)的影響?！痉?hào)的說(shuō)明】10：試劑盒21：試劑22：容器31：附帶文書(shū)41：箱101：第1脂質(zhì)體102：第2脂質(zhì)體200：磷脂201：二油酰磷脂酰乙醇胺202：二油酰磷脂酰膽堿203：二油酰磷脂酰絲氨酸210：組織因子當(dāng)前第1頁(yè)12