本發(fā)明屬于分子診斷領(lǐng)域，涉及一種用于炎癥性腸病診斷的分子標(biāo)志物及其應(yīng)用，具體涉及炎癥性腸病中的分子標(biāo)志物-Erbin基因，及其調(diào)控的下游自噬通路的抑制劑氯喹在制備炎癥性腸病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

炎癥性腸病(inflammatorybowel disease,IBD)主要包括克羅恩病(Crohn’s disease，簡稱CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，簡稱UC)，是一種慢性、非特異性腸道炎癥性疾病，是結(jié)直腸癌重要的癌前病變。影響IBD發(fā)生發(fā)展的主要因素包括腸道免疫系統(tǒng)的功能失調(diào)、腸道微生物感染、腸道微生態(tài)紊亂以及宿主的遺傳背景等。但是IBD的發(fā)病機制及關(guān)鍵分子還遠(yuǎn)未闡明。發(fā)現(xiàn)IBD關(guān)鍵分子對于IBD的診斷和治療都是至關(guān)重要的。Erbin(又叫erbb，erbb2interactingprotein簡稱erbb2ip)最早作為ErbB2相互作用蛋白被發(fā)現(xiàn)，但是其功能目前并不太明確。從其表達特點看，Erbin在腦、心臟、腎臟、肌肉及胃等組織中較為豐富,因而它可能在維持這些器官細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整、調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化、發(fā)育過程中器官形態(tài)的發(fā)生及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等方面起著重要的作用。Erbin的這些功能可以從與它相互作用的蛋白體現(xiàn)。Erbin可能作為很多信號通路的整合蛋白，發(fā)揮著重要的作用。有研究證實Erbin可以通過其PDZ結(jié)構(gòu)域特異性地結(jié)合Nod2。而Nod2與IBD的關(guān)系已經(jīng)得到確認(rèn)，近期的基因組關(guān)聯(lián)分析也證實Nod2及其家族成員在IBD中的作用。并且，Erbin可抑制Nod2依賴的NF-κB的炎癥信號通路的激活及細(xì)胞因子的分泌等。Oehlers等在研究Nod信號通路與炎癥的關(guān)系的時候發(fā)現(xiàn)，腸道沙門氏菌Salmonellaenterica感染斑馬魚后，Erbin在斑馬魚成魚腸道白細(xì)胞中的表達量很高。綜合我們自己的研究和相關(guān)文獻，我們認(rèn)為Erbin與IBD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但其作用及其機制有待進一步確定。關(guān)于Erbin作為診斷炎癥性腸病的分子標(biāo)志物和自噬抑制劑作為一種抑制炎癥性腸病藥物的用途目前尚未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中治療炎癥性腸病藥物的不足，及臨床上炎癥性腸病診斷標(biāo)志物的局限，通過對Erbin及其下游自噬通路的深入研究，在確定Erbin抑制炎癥性腸病發(fā)生的創(chuàng)新性發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，提供一種炎癥性腸病臨床檢測標(biāo)志物Erbin及其應(yīng)用。

技術(shù)方案：Erbin在作為炎癥性腸病臨床檢測標(biāo)志物中的應(yīng)用。

Erbin在制備炎癥性腸病臨床檢測標(biāo)志物中的應(yīng)用。

Erbin在篩選制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。

Erbin所調(diào)控的下游自噬通路的抑制劑氯喹在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。

一種含有所述氯喹的具有治療炎癥性腸病及炎癥性腸病相關(guān)結(jié)直腸癌的藥物制劑。該藥物制劑為含有自噬抑制劑的口服制劑、注射劑或外用制劑。所述的口服制劑為腸溶性片劑、膠囊劑、丸劑或顆粒劑。

Erbin的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。氯喹Hydroxychloroquine sulfate分子式C₁₈H₂₆ClN₃O·H₂SO₄。

本發(fā)明所述的實驗中通過腹腔注射給藥的方式將自噬抑制劑氯喹(供應(yīng)商Sigma)腹腔注入小鼠體內(nèi)。

本發(fā)明首先采用DSS誘導(dǎo)的方式，誘導(dǎo)C57小鼠模擬人潰瘍性結(jié)腸炎模型。在小鼠腸炎模型中，我們觀察到Erbin的表達顯著低于對照未處理組。我們又基于Il-10^-/-小鼠模擬人自發(fā)慢性腸炎模型。在該小鼠模型中，我們也觀察到Erbin的表達明顯低于對照Il-10^+/+。以上結(jié)果提示Erbin在潰瘍性結(jié)腸炎中起著重要的作用。

另外，用Erbin全身性敲除的小鼠(Erbin^-/-)和同窩Erbin^+/+，通過DSS誘導(dǎo)的方式構(gòu)建其潰瘍性結(jié)腸炎模型。我們發(fā)現(xiàn)Erbin^-/-小鼠的結(jié)直腸炎癥水平明顯高于對照組。提示Erbin的缺失會促進腸炎的發(fā)生。我們同時檢測了該模型中的自噬相關(guān)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)Erbin能負(fù)調(diào)控自噬的標(biāo)志蛋白LC3B的表達水平，正向調(diào)控自噬通路中ATG16L1的表達，而對ATG7和ATG2A的表達沒有影響。因此我們推測自噬抑制劑，這一抑制自噬小體和溶酶體結(jié)合的藥物氯喹，極可能抑制潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生及緩解其發(fā)展，也能夠成為治療IBD相關(guān)結(jié)直腸癌的有效藥物。

本發(fā)明應(yīng)用DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎動物模型模擬人炎癥性腸病模型，用野生型小鼠Erbin^+/+和Erbin^-/-小鼠作為工具；通過腹腔注射自噬抑制劑氯喹。實驗結(jié)果表明注射氯喹的小鼠，DSS誘導(dǎo)的Erbin^+/+和Erbin^-/-小鼠腸粘膜損傷顯著下降，雖然相比之下，Erbin^-/-小鼠腸損傷還是明顯嚴(yán)重于Erbin^+/+小鼠，但與未注射氯喹的小鼠相比，腸粘膜屏障完整性升高，炎性細(xì)胞浸潤顯著減少，炎癥性腸病的癥狀得到顯著緩解，表明自噬抑制劑氯喹可提高腸粘膜完整性，發(fā)揮很好的抑制IBD的功效，因此對炎癥性腸病預(yù)防及治療都有一定的作用。

有益效果：本發(fā)明通過構(gòu)建大量模擬人IBD的動物模型，發(fā)現(xiàn)Erbin在IBD發(fā)生發(fā)展中的重要作用。Erbin的下降伴隨著腸粘膜屏障損傷以及粘膜上皮細(xì)胞大量脫落，炎性細(xì)胞浸潤顯著增加，腸道炎癥顯著加劇。此時自噬小體持續(xù)產(chǎn)生，我們觀察到炎癥較為嚴(yán)重的Erbin缺失組小鼠的自噬標(biāo)志物L(fēng)C3B的表達量高于對照。在體外細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的實驗中，我們用腫瘤壞死因子TNFα刺激CT26結(jié)直腸癌細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)隨著刺激時間的增加，細(xì)胞中自噬的標(biāo)志物L(fēng)C3B的表達持續(xù)增加，Erbin缺失組增加的幅度最為明顯。同時，我們觀察到在Erbin缺失組自噬小體增加的過程中伴隨有大量的細(xì)胞死亡。我們推測Erbin是通過促進細(xì)胞自噬性死亡來加速炎癥的發(fā)生。因此，我們推測如果抑制自噬通路，很可能會抑制腸炎的發(fā)生及發(fā)展。于是使用抑制自噬溶酶體和自噬小體結(jié)合的藥物氯喹來阻斷自噬通路，我們進一步進行動物體內(nèi)實驗。在DSS誘導(dǎo)Erbin^-/-小鼠腸炎的同時給小鼠腹腔注射氯喹，對比氯喹作用的前后，發(fā)現(xiàn)這種自噬抑制劑能有效緩解Erbin^-/-小鼠的腸道損傷，于是我們推測氯喹作為Erbin調(diào)控自噬的抑制劑，可以用于緩解Erbin缺失造成的腸炎進程。最終我們確認(rèn)Erbin可作為炎癥性腸病的臨床檢測標(biāo)志物，同時它所調(diào)控的下游自噬通路的抑制劑氯喹可作為制備防治炎癥性腸病的藥物。

附圖說明

圖1是Erbin在DSS誘導(dǎo)的C57小鼠IBD模型的結(jié)直腸中表達情況示意圖。

圖2是Erbin在自發(fā)性慢性腸炎小鼠Il-10^-/-結(jié)直腸中的表達情況示意圖。

圖3是Erbin在患有潰瘍性結(jié)腸炎(UC)病人腸上皮中的表達示意圖。

圖4是Erbin^-/-及其對照Erbin^+/+小鼠在DSS誘導(dǎo)前后結(jié)直腸大體觀、HE圖及其對應(yīng)的炎癥評分示意圖。

圖5是Erbin^-/-及其對照Erbin^+/+小鼠在DSS誘導(dǎo)前后結(jié)直腸組織蛋白中自噬的標(biāo)志物L(fēng)C3B及其自噬通路中ATG16L1，ATG7，ATG2A蛋白的表達示意圖。

圖6是基于結(jié)直腸癌細(xì)胞CT26構(gòu)建的Erbin穩(wěn)定敲低的細(xì)胞株(Erbin/ShRNA)及其對照，經(jīng)過8小時，16小時，24小時，28小時的加藥(TNFα)，模擬體內(nèi)實驗刺激炎癥的發(fā)生，檢測LC3B的轉(zhuǎn)錄水平表達及其相應(yīng)的細(xì)胞生存率柱狀圖。每個時間點的細(xì)胞分為三組，對照組加PBS，對照組加TNFα，Erbin穩(wěn)定低表達組加TNFα。

圖7是Erbin的缺失會加重腸炎，氯喹會緩解這一現(xiàn)象示意圖。實驗分為兩組：通過DSS誘導(dǎo)Erbin^+/+和Erbin^-/-小鼠5天，構(gòu)建其潰瘍性結(jié)腸炎模型；另一組為DSS誘導(dǎo)Erbin^-/-小鼠5天的同時腹腔注射60mg/kg氯喹。在第5天同時解剖小鼠，取結(jié)直腸做HE。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實施例1：Erbin作為炎癥性腸病診斷標(biāo)志物的實驗

1、構(gòu)建IBD動物模型

葡聚糖硫酸鈉(DSS)化學(xué)誘導(dǎo)小鼠IBD模型分別給20只8周齡的C57小鼠以及Erbin^+/+和Erbin^-/-小鼠喂食濃度為5％，分子量為36000-40000的DSS溶液，自由飲用7天構(gòu)建模擬人潰瘍性結(jié)腸炎的小鼠模型；同樣喂食20只Erbin全身缺失的小鼠(Erbin^-/-)和20只Erbin^+/+小鼠予以正常飲食飲水，7天后處死小鼠，取結(jié)直腸。

2、Il-10^-/-自發(fā)性慢性腸炎小鼠模型

Il-10^-/-小鼠在SPF飼養(yǎng)環(huán)境下生長6個月會自發(fā)腸炎，表現(xiàn)為便血，脫肛，在HE片中我們觀察到有大量的炎細(xì)胞的浸潤，腸上皮有大量的增生及修復(fù)。與人慢性腸炎的狀態(tài)相似，作為模擬人類疾病的模型使用。

3、蛋白的提取及其免疫印跡(Western Blot)

取腸組織,加入蛋白裂解液制備蛋白樣品，測定樣品蛋白質(zhì)的濃度。將蛋白在6％聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)上進行電泳，將蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移至聚偏乙烯(PVDF)膜上；5％脫脂奶粉TBST溶液，用于封閉和稀釋一抗Erbin(后續(xù)檢測LC3B，ATG2A，ATG6L1，ATG7)(Erbin買自公司Bethyl，其余自噬相關(guān)抗體均買自CST公司)，封閉1h后，一抗4℃過夜；用BST溶液洗膜。熒光二抗室溫避光孵育l h，TBST溶液洗膜。加入化學(xué)發(fā)光試劑孵育后在暗室曝光顯影。

結(jié)果圖1和圖2顯示潰瘍性結(jié)腸炎動物模型中Erbin的蛋白表達較對照未處理組低。我們在DSS喂食7天后誘導(dǎo)成功的小鼠模型中取結(jié)直腸，提取蛋白，檢測Erbin的表達。同時我們在6個月已出現(xiàn)有便血脫肛表型的Il-10^-/-自發(fā)慢性腸炎模型小鼠結(jié)直腸蛋白中也檢測Erbin的表達。均提示Erbin在誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎和在慢性腸炎的腸組織中表達都較低。

4、免疫組化

石蠟組織切片3次逐級脫蠟，封閉內(nèi)源性過氧化物酶，梯度乙醇至水；抗原修復(fù)。PBS緩沖液沖洗，滴加Erbin的一抗。濕盒內(nèi)室溫孵育1.5h。PBS緩沖液沖洗3次，滴加二抗，濕盒內(nèi)室溫孵育30min。PBS沖洗3次，DAB顯色，顯微鏡下觀察，自來水沖洗終止顯色。蘇木精對比染色，1％鹽酸乙醇風(fēng)化，氨水返藍(lán)。脫水、透明、中性樹膠封片。

結(jié)果圖3顯示在臨床潰瘍性結(jié)腸炎病人的組織中，Erbin的表達明顯低于正常組。

5、HE染色及炎癥監(jiān)測指標(biāo)

將制作好的石蠟切片經(jīng)過二甲苯3次各5分鐘和由高到低濃度的酒精各1分鐘，再浸入水中水化5-10分鐘。切片浸入蘇木精中3分鐘，流水沖去浮色，再至于溫水中1分鐘返藍(lán)。切片浸入伊紅20-30秒，經(jīng)過95％，100％的酒精脫色，用中性樹膠封片。待樹脂干后可長期保存，顯微鏡下拍片。

評價小鼠一般情況以及個體質(zhì)量變化。主要觀察小鼠毛色是否光滑、精神是否活躍,大便是否成形，有無腹瀉便血,每天記錄個體質(zhì)量變化。參照Oka等制定的標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測疾病活動指數(shù)(disease activity index，DAI)評分的變化，處死后進行結(jié)腸炎癥評分。發(fā)現(xiàn)死亡小鼠立即解剖明確是否因炎癥過重死亡。小鼠DAI評分，其中包括綜合糞便性狀、隱血和體質(zhì)量變化。評價各組結(jié)腸黏膜損傷組織病理學(xué)變化。參照McCarthy等組織學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)(大致正常為0分，輕度炎癥浸潤為1分，明顯的炎癥浸潤，伴隱窩炎或隱窩膿腫為2分，明顯的炎癥浸潤，伴杯狀細(xì)胞丟失為3分，明顯的炎癥浸潤，伴黏膜糜爛為4分)，導(dǎo)致死亡的小鼠各項評分均取最高值。統(tǒng)計學(xué)處理：結(jié)果以mean±SD表示，統(tǒng)計方法采用SPSS 11.5軟件進行分析Erbin^-/-潰瘍性結(jié)腸炎組與對照組，組間兩兩比較，采用t檢驗分析，p<0.05為差異具有顯著性。

圖4的結(jié)果顯示3.5個月左右的未處理組Erbin的缺失與對照野生型小鼠的結(jié)直腸鏡下觀差別不明顯，而通過DSS誘導(dǎo)為急性潰瘍性結(jié)腸炎之后，Erbin缺失的小鼠腸炎明顯嚴(yán)重于對照組的腸炎。表現(xiàn)為炎癥范圍的擴大，炎癥程度的加深，隱窩損傷的較為嚴(yán)重。

以上結(jié)果提示Erbin可以抑制炎癥性腸病的發(fā)生發(fā)展。

圖5的結(jié)果顯示不管是在腸炎組還是在未處理組，Erbin和自噬標(biāo)志物L(fēng)C3B呈現(xiàn)負(fù)調(diào)控關(guān)系。整體LC3B在腸炎組整體若于對照未處理組。提示Erbin促進腸炎的作用是通過抑制自噬通路來完成的。

Erbin會抑制細(xì)胞自噬性死亡

6、細(xì)胞培養(yǎng)

基于小鼠CT26結(jié)直腸癌細(xì)胞，我們向上海吉凱公司購買了慢病毒，構(gòu)建了Erbin穩(wěn)定低表達的細(xì)胞系(Erbin/ShRNA)。在含10％FBS的1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中生長，至對數(shù)生長期用于試驗；細(xì)胞生長至融合度大于80％時，進行傳代：PBS緩沖液洗2遍，胰酶體積約覆蓋細(xì)胞表面，37℃培養(yǎng)箱作用1min，顯微鏡明場下觀察，可見細(xì)胞收縮邊緣清晰時，棄去消化液，加入完全培養(yǎng)基終止消化，用移液器吹打瓶壁上的細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，接種到新的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)。

7、總RNA的提取，RT-PCR

細(xì)胞的RNA直接收取細(xì)胞后按照Trizol法抽提總RNA。將小鼠結(jié)腸取出后置于冰PBS中清洗數(shù)次，按照Trizol法提取總RNA。測定濃度后取1μg總RNA進行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA產(chǎn)物稀釋10倍用于RT-PCR的模板。

我們基于以上提好的總RNA，利用羅氏的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)，cDNA備用檢測自噬標(biāo)志物L(fēng)C3B的mRNA水平；通過ABI公司的實時定量PCR儀(型號：Setp-one)檢測。

我們用一對細(xì)胞(Erbin-Control，Erbin/ShRNA)，Erbin-Control細(xì)胞中加入PBS(稀釋TNFα藥物的溶液)，Erbin-Control細(xì)胞中加入TNFα藥物，Erbin/ShRNA細(xì)胞中加入TNFα藥物。分別觀察加藥后8小時，16小時，24小時，28小時后，檢測LC3B的轉(zhuǎn)錄水平的表達情況。

具體操作：將CT26-Control和Erbin/ShRNA細(xì)胞消化、計數(shù)、鋪板(3.5cm皿)。待細(xì)胞長至90％時開始第一次加藥，棄原培養(yǎng)基，加入1mL 1640空培養(yǎng)基，加入1μLTNF-α(儲存濃度100μg/mL，作用終濃度100ng/mL)，CT26-Control對照皿加入1μL PBS緩沖液。收集細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)基上清收集至4mL EP管中，用少量PBS緩沖液洗滌培養(yǎng)皿并與上清合并。用胰酶消化貼壁細(xì)胞并與之前上清合并。2000rpm，5min，離心，棄上清，并用PBS緩沖液再洗滌一次，2000rpm，5min，棄上清。

如圖6結(jié)果中的上圖顯示，采用RT-PCR的定量分析結(jié)果顯示，LC3B的表達隨著時間的增長遞增，TNFα加入細(xì)胞模擬體內(nèi)實驗的炎癥反應(yīng)，在該藥物的刺激下，我們觀察到自噬小體的增加幅度明顯增高，而Erbin的缺失會放大這一效應(yīng)，表明Erbin的缺失所引起的炎癥反應(yīng)會更快的促進自噬小體的生成。

8、細(xì)胞存活率實驗

細(xì)胞計數(shù)分盤，加藥如上。在測死亡率時每組收集的細(xì)胞中加PI：用含5μg/mL Propidium Iodide(簡稱PI，碧云天，ST511)的PBS緩沖液1mL懸細(xì)胞沉淀，室溫、避光反映10分鐘。測細(xì)胞死亡率:使用流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter，型號FC500)檢測細(xì)胞死亡率。原理：碘化丙啶(PI)不能穿透細(xì)胞膜，對于具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞不能染色。而對于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性喪失，碘化丙啶(PI)可以染色壞死細(xì)胞。

圖6結(jié)果中的下圖顯示隨著加TNF-α?xí)r間的增長，在前兩個時間點8小時和16小時，三組細(xì)胞的死亡率幾乎沒有差異。在24小時，Erbin/ShRNA加TNF-α組細(xì)胞的死亡率開始高于另外兩組，在28小時，Erbin/ShRNA加TNF-α組細(xì)胞的死亡率顯著高于另外兩組，Control加PBS和Control加TNF-α兩組的細(xì)胞死亡幾乎沒有差異。這提示在炎癥的時候，Erbin缺失會促進自噬性死亡的發(fā)生。我們進一步猜想自噬性死亡會不會進一步加速炎癥。

動物體內(nèi)實驗自噬抑制劑氯喹

抑制腸炎

實驗分組：

選用6-8周、Erbin^+/+和Erbin^-/-小鼠分成三組：3只Erbin^+/+小鼠喂食濃度為5％，分子量為36000-40000的DSS溶液；3只Erbin^-/-小鼠喂食DSS溶液；3只Erbin^-/-小鼠喂食DSS的同時腹腔注射氯喹(Sigma)60mg/kg，誘導(dǎo)5天。HE染色。

圖7結(jié)果顯示HE染色結(jié)果顯示Erbin的缺失會加重腸炎，但當(dāng)同時注射氯喹后，我們發(fā)現(xiàn)這種自噬抑制劑會減輕上皮損傷。在未加入氯喹組，Erbin^-/-小鼠的結(jié)直腸炎癥程度最深，表現(xiàn)為上皮幾乎全部消失，大量炎癥因子的浸潤。DSS誘導(dǎo)腸炎的同時腹腔注射氯喹會使得Erbin^-/-小鼠的炎癥減緩，上皮中隱窩仍可見。

實驗過程中，未見有明顯不良反應(yīng)，有望開發(fā)成新一代安全有效，防治炎癥性腸病及炎癥性腸病相關(guān)結(jié)腸癌的新藥。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理和構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。

SEQUENCE LISTING

<110> 李建明

<120> 一種炎癥性腸病臨床檢測標(biāo)志物及其應(yīng)用

<130>

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1419

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Thr Thr Lys Arg Ser Leu Phe Val Arg Leu Val Pro Cys Arg Cys

1 5 10 15

Leu Arg Gly Glu Glu Glu Thr Val Thr Thr Leu Asp Tyr Ser His Cys

20 25 30

Ser Leu Glu Gln Val Pro Lys Glu Ile Phe Thr Phe Glu Lys Thr Leu

35 40 45

Glu Glu Leu Tyr Leu Asp Ala Asn Gln Ile Glu Glu Leu Pro Lys Gln

50 55 60

Leu Phe Asn Cys Gln Ser Leu His Lys Leu Ser Leu Pro Asp Asn Asp

65 70 75 80

Leu Thr Thr Leu Pro Ala Ser Ile Ala Asn Leu Ile Asn Leu Arg Glu

85 90 95

Leu Asp Val Ser Lys Asn Gly Ile Gln Glu Phe Pro Glu Asn Ile Lys

100 105 110

Asn Cys Lys Val Leu Thr Ile Val Glu Ala Ser Val Asn Pro Ile Ser

115 120 125

Lys Leu Pro Asp Gly Phe Ser Gln Leu Leu Asn Leu Thr Gln Leu Tyr

130 135 140

Leu Asn Asp Ala Phe Leu Glu Phe Leu Pro Ala Asn Phe Gly Arg Leu

145 150 155 160

Thr Lys Leu Gln Ile Leu Glu Leu Arg Glu Asn Gln Leu Lys Met Leu

165 170 175

Pro Lys Thr Met Asn Arg Leu Thr Gln Leu Glu Arg Leu Asp Leu Gly

180 185 190

Ser Asn Glu Phe Thr Glu Val Pro Glu Val Leu Glu Gln Leu Ser Gly

195 200 205

Leu Lys Glu Phe Trp Met Asp Ala Asn Arg Leu Thr Phe Ile Pro Gly

210 215 220

Phe Ile Gly Ser Leu Lys Gln Leu Thr Tyr Leu Asp Val Ser Lys Asn

225 230 235 240

Asn Ile Glu Met Val Glu Glu Gly Ile Ser Thr Cys Glu Asn Leu Gln

245 250 255

Asp Leu Leu Leu Ser Ser Asn Ser Leu Gln Gln Leu Pro Glu Thr Ile

260 265 270

Gly Ser Leu Lys Asn Ile Thr Thr Leu Lys Ile Asp Glu Asn Gln Leu

275 280 285

Met Tyr Leu Pro Asp Ser Ile Gly Gly Leu Ile Ser Val Glu Glu Leu

290 295 300

Asp Cys Ser Phe Asn Glu Val Glu Val Leu Pro Ser Ser Ile Gly Gln

305 310 315 320

Leu Thr Asn Leu Arg Thr Phe Ala Ala Asp His Asn Tyr Leu Gln Gln

325 330 335

Leu Pro Pro Glu Ile Gly Ser Trp Lys Asn Ile Thr Val Leu Phe Leu

340 345 350

His Ser Asn Lys Leu Glu Thr Leu Pro Glu Glu Met Gly Asp Met Gln

355 360 365

Lys Leu Lys Val Ile Asn Leu Ser Asp Asn Arg Leu Lys Asn Leu Pro

370 375 380

Phe Ser Phe Thr Lys Leu Gln Gln Leu Thr Ala Met Trp Leu Ser Asp

385 390 395 400

Asn Gln Ser Lys Pro Leu Ile Pro Leu Gln Lys Glu Thr Asp Ser Glu

405 410 415

Thr Gln Lys Met Val Leu Thr Asn Tyr Met Phe Pro Gln Gln Pro Arg

420 425 430

Thr Glu Asp Val Met Phe Ile Ser Asp Asn Glu Ser Phe Asn Pro Ser

435 440 445

Leu Trp Glu Glu Gln Arg Lys Gln Arg Ala Gln Val Ala Phe Glu Cys

450 455 460

Asp Glu Asp Lys Asp Glu Arg Glu Ala Pro Pro Arg Glu Gly Asn Leu

465 470 475 480

Lys Arg Tyr Pro Thr Pro Tyr Pro Asp Glu Leu Lys Asn Met Val Lys

485 490 495

Thr Val Gln Thr Ile Val His Arg Leu Lys Asp Glu Glu Thr Asn Glu

500 505 510

Asp Ser Gly Arg Asp Leu Lys Pro His Glu Asp Gln Gln Asp Ile Asn

515 520 525

Lys Asp Val Gly Val Lys Thr Ser Glu Ser Thr Thr Thr Val Lys Ser

530 535 540

Lys Val Asp Glu Arg Glu Lys Tyr Met Ile Gly Asn Ser Val Gln Lys

545 550 555 560

Ile Ser Glu Pro Glu Ala Glu Ile Ser Pro Gly Ser Leu Pro Val Thr

565 570 575

Ala Asn Met Lys Ala Ser Glu Asn Leu Lys His Ile Val Asn His Asp

580 585 590

Asp Val Phe Glu Glu Ser Glu Glu Leu Ser Ser Asp Glu Glu Met Lys

595 600 605

Met Ala Glu Met Arg Pro Pro Leu Ile Glu Thr Ser Ile Asn Gln Pro

610 615 620

Lys Val Val Ala Leu Ser Asn Asn Lys Lys Asp Asp Thr Lys Glu Thr

625 630 635 640

Asp Ser Leu Ser Asp Glu Val Thr His Asn Ser Asn Gln Asn Asn Ser

645 650 655

Asn Cys Ser Ser Pro Ser Arg Met Ser Asp Ser Val Ser Leu Asn Thr

660 665 670

Asp Ser Ser Gln Asp Thr Ser Leu Cys Ser Pro Val Lys Gln Thr His

675 680 685

Ile Asp Ile Asn Ser Lys Ile Arg Gln Glu Asp Glu Asn Phe Asn Ser

690 695 700

Leu Leu Gln Asn Gly Asp Ile Leu Asn Ser Ser Thr Glu Glu Lys Phe

705 710 715 720

Lys Ala His Asp Lys Lys Asp Phe Asn Leu Pro Glu Tyr Asp Leu Asn

725 730 735

Val Glu Glu Arg Leu Val Leu Ile Glu Lys Ser Val Asp Ser Thr Ala

740 745 750

Thr Ala Asp Asp Thr His Lys Leu Asp His Ile Asn Met Asn Leu Asn

755 760 765

Lys Leu Ile Thr Asn Asp Thr Phe Gln Pro Glu Ile Met Glu Arg Ser

770 775 780

Lys Thr Gln Asp Ile Val Leu Gly Thr Ser Phe Leu Ser Ile Asn Ser

785 790 795 800

Lys Glu Glu Thr Glu His Leu Glu Asn Gly Asn Lys Tyr Pro Asn Leu

805 810 815

Glu Ser Val Asn Lys Val Asn Gly His Ser Glu Glu Thr Ser Gln Ser

820 825 830

Pro Asn Arg Thr Glu Pro His Asp Ser Asp Cys Ser Val Asp Leu Gly

835 840 845

Ile Ser Lys Ser Thr Glu Asp Leu Ser Pro Gln Lys Ser Gly Pro Val

850 855 860

Gly Ser Val Val Lys Ser His Ser Ile Thr Asn Met Glu Ile Gly Gly

865 870 875 880

Leu Lys Ile Tyr Asp Ile Leu Ser Asp Asn Gly Pro Gln Gln Pro Ser

885 890 895

Thr Thr Val Lys Ile Thr Ser Ala Val Asp Gly Lys Asn Ile Val Arg

900 905 910

Ser Lys Ser Ala Thr Leu Leu Tyr Asp Gln Pro Leu Gln Val Phe Thr

915 920 925

Gly Ser Ser Ser Ser Ser Asp Leu Ile Ser Gly Thr Lys Ala Ile Phe

930 935 940

Lys Phe Asp Ser Asn His Asn Pro Glu Glu Pro Asn Ile Ile Arg Gly

945 950 955 960

Pro Thr Ser Gly Pro Gln Ser Ala Pro Gln Ile Tyr Gly Pro Pro Gln

965 970 975

Tyr Asn Ile Gln Tyr Ser Ser Ser Ala Ala Val Lys Asp Thr Leu Trp

980 985 990

His Ser Lys Gln Asn Pro Gln Ile Asp His Ala Ser Phe Pro Pro Gln

995 1000 1005

Leu Leu Pro Arg Ser Glu Ser Thr Glu Asn Gln Ser Tyr Ala Lys

1010 1015 1020

His Ser Ala Asn Met Asn Phe Ser Asn His Asn Asn Val Arg Ala

1025 1030 1035

Asn Thr Ala Tyr His Leu His Gln Arg Leu Gly Pro Ala Arg His

1040 1045 1050

Gly Glu Met Trp Ala Ile Ser Pro Asn Asp Arg Leu Ile Pro Ala

1055 1060 1065

Val Thr Arg Ser Thr Ile Gln Arg Gln Ser Ser Val Ser Ser Thr

1070 1075 1080

Ala Ser Val Asn Leu Gly Asp Pro Gly Ser Thr Arg Arg Ala Gln

1085 1090 1095

Ile Pro Glu Gly Asp Tyr Leu Ser Tyr Arg Glu Phe His Ser Ala

1100 1105 1110

Gly Arg Thr Pro Pro Met Met Pro Gly Ser Gln Arg Pro Leu Ser

1115 1120 1125

Ala Arg Thr Tyr Ser Ile Asp Gly Pro Asn Ala Ser Arg Pro Gln

1130 1135 1140

Ser Ala Arg Pro Ser Ile Asn Glu Ile Pro Glu Arg Thr Met Ser

1145 1150 1155

Val Ser Asp Phe Asn Tyr Ser Arg Thr Ser Pro Ser Lys Arg Pro

1160 1165 1170

Asn Ala Arg Val Gly Ser Glu His Ser Leu Leu Asp Pro Pro Gly

1175 1180 1185

Lys Ser Lys Val Pro Arg Asp Trp Arg Glu Gln Val Leu Arg His

1190 1195 1200

Ile Glu Ala Lys Lys Leu Glu Lys Ser Met Leu Ser Arg Ser Phe

1205 1210 1215

Asn Ser Asn Phe Thr Thr Val Ser Ser Phe His Cys Gly Ser Ser

1220 1225 1230

Arg Asp Leu His Gly Ser Gln Gly Ser Leu Ala Leu Ser Val Ala

1235 1240 1245

Asp Arg Arg Gly Ser Gly Gly His Ile Phe Arg Met Pro Leu Ser

1250 1255 1260

Asn Gly Gln Met Gly Gln Pro Leu Arg Pro Gln Ala Asn Tyr Ser

1265 1270 1275

Gln Ile His His Pro Pro Gln Ala Ser Val Ala Arg His Pro Ser

1280 1285 1290

Arg Glu Gln Leu Ile Asp Tyr Leu Met Leu Lys Val Ala His Gln

1295 1300 1305

Pro Pro Tyr Thr Gln Pro His Cys Ser Pro Arg Gln Gly His Glu

1310 1315 1320

Leu Ala Lys Gln Glu Ile Arg Val Arg Val Glu Lys Asp Pro Glu

1325 1330 1335

Leu Gly Phe Ser Ile Ser Gly Gly Val Gly Gly Arg Gly Asn Pro

1340 1345 1350

Phe Arg Pro Asp Asp Asp Gly Ile Phe Val Thr Arg Val Gln Pro

1355 1360 1365

Glu Gly Pro Ala Ser Lys Leu Leu Gln Pro Gly Asp Lys Ile Ile

1370 1375 1380

Gln Ala Asn Gly Tyr Ser Phe Ile Asn Ile Glu His Gly Gln Ala

1385 1390 1395

Val Ser Leu Leu Lys Thr Phe Gln Asn Thr Val Glu Leu Ile Ile

1400 1405 1410

Val Arg Glu Val Ser Ser

1415

<210> 2

<211> 8647

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

ggacggagct ggatcctgct tctcgccaag gcaggaagtg agtttcgcac tgcaattccg 60

ggcggtgtca cgagtgaaaa gttttgtttt tttttttttc ggcggagatc ctcgttgggg 120

ctgggaaact cctgcaaaac tcgagaccag gaagccagcc cgcaccccaa cccccaccaa 180

agccacctac tcttcttctg tgggaggcca gtccacatcc gctctcaccc gagagagata 240

ttcagctgga tccaaagtga ctgatgaagg gaaggaaatc atgtcaagcg aagccttgaa 300

aaagctgccc tgagacggtg tcccgccgaa agaatgttgg ctcaattaag aaacatcagg 360

gagataaatt caacccagtg tgtctaaaaa tgactacaaa acgaagtttg tttgtgcggt 420

tggtaccatg tcgctgtcta cgaggggaag aggagactgt cactactctt gattattctc 480

attgcagctt agaacaagtt ccgaaagaga tttttacttt tgaaaaaacc ttggaggaac 540

tctatttaga tgctaatcag attgaagagc ttccaaagca actttttaac tgtcagtctt 600

tacacaaact gagtttgcca gacaatgatt taacaacgtt accagcatcc attgcaaacc 660

ttattaatct cagggaactg gatgtcagca agaatggaat acaggagttt ccagaaaata 720

taaaaaattg taaagttttg acaattgtgg aggccagtgt aaaccctatt tccaagctcc 780

ctgatggatt ttctcagctg ttaaacctaa cccagttgta tctgaatgat gcttttcttg 840

agttcttgcc agcaaatttt ggcagattaa ctaaactcca aatattagag cttagagaaa 900

accagttaaa aatgttgcct aaaactatga atagactgac ccagctggaa agactggatt 960

tgggaagtaa cgaattcacg gaagtgcctg aagtacttga gcaactaagt ggattgaaag 1020

agttttggat ggatgctaat agactgactt ttattccagg gtttattggt agtttgaaac 1080

agctcacata tttggatgtt tctaaaaata atattgaaat ggttgaagaa ggaatttcaa 1140

catgtgaaaa ccttcaagac ctcctattat caagcaattc acttcagcag cttcctgaga 1200

ctattggttc gttgaagaat ataacaacgc ttaaaataga tgaaaaccag ttaatgtatc 1260

tgccagactc tataggaggg ttaatatcag tagaagaact ggattgtagt ttcaatgaag 1320

ttgaagcttt gccttcatct attgggcagc ttactaactt aagaactttt gctgctgatc 1380

ataattactt acagcagttg cccccagaga ttggaagctg gaaaaatata actgtgctgt 1440

ttctccattc caataaactt gagacacttc cagaggaaat gggtgatatg caaaaattaa 1500

aagtcattaa tttaagtgat aatagattaa agaatttacc ctttagcttt acaaagctac 1560

agcaattgac agctatgtgg ctctcagata atcagtccaa acccctgata cctcttcaaa 1620

aagaaactga ttcagagacc cagaaaatgg tgcttaccaa ctacatgttc cctcaacagc 1680

caaggactga ggatgttatg tttatatcag ataatgaaag ttttaaccct tcattgtggg 1740

aggaacagag gaaacagcgg gctcaagttg catttgaatg tgatgaagac aaagatgaaa 1800

gggaggcacc tcccagggag ggaaatttaa aaagatatcc aacaccatac ccagatgagc 1860

ttaagaatat ggtcaaaact gttcaaacca ttgtacatag attaaaagat gaagagacca 1920

atgaagactc aggaagagat ttgaaaccac atgaagatca acaagatata aataaagatg 1980

tgggtgtgaa gacctcagaa agtactacta cagtaaaaag caaagttgat gaaagagaaa 2040

aatatatgat aggaaactct gtacagaaga tcagtgaacc tgaagctgag attagtcctg 2100

ggagtttacc agtgactgca aatatgaaag cctctgagaa cttgaagcat attgttaacc 2160

atgatgatgt ttttgaggaa tctgaagaac tttcttctga tgaagagatg aaaatggcgg 2220

agatgcgacc accattaatt gaaacctcta ttaaccagcc aaaagtcgta gcacttagta 2280

ataacaaaaa agatgataca aaggaaacag attctttatc agatgaagtt acacacaata 2340

gcaatcagaa taacagcaat tgttcttctc catctcggat gtctgattca gtttctctta 2400

atactgatag tagtcaagac acctcactct gctctccagt gaaacaaact catattgata 2460

ttaattccaa aatcaggcaa gaagatgaaa attttaacag ccttttacaa aatggagata 2520

ttttaaacag ttcaacagag gaaaagttca aagctcatga taaaaaagat tttaacttac 2580

ctgaatatga tttgaatgtt gaagagcgat tagttctaat tgagaaaagt gttgactcaa 2640

cagccacagc tgatgacact cacaaattag atcatatcaa tatgaatctt aataaactta 2700

taactaatga tacatttcaa ccagagatca tggaaagatc aaaaacacag gatattgtgc 2760

ttggaacaag ctttttaagc attaattcta aagaggaaac tgagcacttg gaaaatggaa 2820

acaagtatcc taatttggaa tccgtaaata aggtaaatgg acattctgag gaaacttccc 2880

agtctcctaa taggactgaa ccacatgaca gtgattgttc tgttgactta ggtatttcca 2940

aaagcactga agatctctcc cctcagaaaa gtggtccagt tggatctgtt gtgaaatctc 3000

atagcataac taatatggag attggagggc taaaaatcta tgatattctt agtgataatg 3060

gacctcagca gccaagtaca accgttaaaa tcacatctgc tgttgatgga aaaaatatag 3120

tcaggagcaa gtctgccaca ctgttgtatg atcaaccatt gcaggtattt actggttctt 3180

cctcatcttc tgatttaata tcaggaacaa aggcaatttt caagtttgat tcaaatcata 3240

atcccgaaga gccaaatata ataagaggcc ccacaagtgg cccacaatct gcacctcaaa 3300

tatatggtcc tccacagtat aatatccaat acagtagcag tgctgcagtc aaagacactt 3360

tgtggcactc caaacaaaat ccccaaatag accatgccag ttttcctcct cagctccttc 3420

ctagatcaga gagcacagaa aatcaaagtt atgctaaaca ttctgccaat atgaatttct 3480

ctaatcataa caatgttcga gctaatactg cataccattt acatcagaga cttggcccag 3540

caagacatgg ggaaatgtgg gccatctcac caaacgaccg acttattcct gcagtaactc 3600

gaagtacaat ccagcgacaa agtagtgtgt cctccacagc ctctgtaaat cttggtgatc 3660

caggctctac aaggcgggct cagattcctg aaggagatta tttatcatac agagagttcc 3720

actcagcggg aagaactcct ccaatgatgc caggatcaca gagacccctt tctgcacgaa 3780

catacagcat agatggtcca aatgcatcaa gacctcagag tgctcgaccc tctattaatg 3840

aaataccaga gagaactatg tcagttagtg atttcaatta ttcacggact agtccttcaa 3900

aaagaccaaa tgcaagggtt ggttctgagc attctttatt agatcctcca ggaaaaagta 3960

aagttcctcg tgactggaga gaacaagtac ttcgacatat tgaagccaaa aagttagaaa 4020

agaagcatcc ccagacatcc agttcaggag atccttgtca agatggtata ttcatttcag 4080

gacagcagaa ctactcatca gccacactta gtcacaaaga tgttcctcca gacagcttga 4140

tgaaaatgcc tttgagtaat ggacagatgg gccagcctct caggcctcag gcaaattata 4200

gtcaaataca tcacccccct caggcatctg tggcaaggca tccctctaga gaacaactaa 4260

ttgattactt gatgctgaaa gtggcccacc agcctccata tacacagccc cattgttctc 4320

ctagacaagg ccatgaactg gcaaaacaag agattcgagt gagggttgaa aaggatccag 4380

aacttggatt tagcatatca ggtggtgtcg ggggtagagg aaacccattc agacctgatg 4440

atgatggtat atttgtaaca agggtacaac ctgaaggacc agcatcaaaa ttactgcagc 4500

caggtgataa aattattcag gctaatggct acagttttat aaatattgaa catggacaag 4560

cagtgtcctt gctaaaaact ttccagaata cagttgaact catcattgta cgagaagttt 4620

cctcataagc actgtggaca aaaaaagcgg ggaagacagc aagatttatt ggaagatact 4680

tacaggggaa attaatattt tgactatttt tatatataaa gaagaactca aaaaattatg 4740

ttcaaatttg tacattaatg aaataatgga acttgtggtt agagggaaag aaccactgta 4800

cagaatataa aggagactgt tgaattcata ccatataaaa cttgttaggt ttttaaacat 4860

agcaatcaag gctacaaaaa caaacctgtg ttgtttttgt atagattgta ggtttatttt 4920

tggatttcat atacatgact gaactgtgtg caaggcaata gttagccttg attttagccc 4980

agagacagat ggcagagcta tctctctcat agcttttatg cccttatttt tattcaactg 5040

gtattaatgt ttttctcctg aaactacttt ttttgatgtg ggcaagagat ttgaagtgtt 5100

ggcttttgct atgtgcatat tgaattgaag agtgagtagg tgaaggtggt gctggtgggt 5160

tcactttcca aggccagact aaaacagtta ttttctataa aaatctggaa gcaaagaatg 5220

gggatgggga gagctacgtg gtagtatgtt tttattagga gaataatgca ataaaatatg 5280

taatgtcttt tttataaagc aaaaaagaca ataattgcat ttatgagctc ggcaggatct 5340

gttcttgtca tagccattga ctatacattt gctactggtg attcagtttt taatttttta 5400

gtcacaggaa atttttaact ctactgtaga tgcatgtcca tgcattttct gtgttatgga 5460

aatccactga tttttttttt tttttcaaat ggtggtactt gcaatctgtt ttataattag 5520

tgctccattt aaatctaatt tataattttt attttaagca gcaaatgaaa caaaaatggc 5580

cagttttaag attgtgttgc ctgtaacaca aaatgttacg aaggtttagg aaagcctctt 5640

tgatttttgt ttggccttgc attgccttgg taaagtaaaa ggaaacagta cacttggagc 5700

taggaaacca aagcaagctt tgtgaaactg gcacagtgat agagaattgc tgtggagagt 5760

tatagagcaa agggatgggt ccttgaggcc tgccagtgtg taaaggtgtt caaataaagg 5820

gctgtttcta caggtaacat taaatgtgaa ctcaacactt ccagagtctt taaagggttt 5880

ctatgtgtat cagtgtaata gtgttttacc accaactgcc tttctttgtt cctagttact 5940

gtaacaaata tttgatgata gaggtttatt aattttgttt atccagacca ttaattttat 6000

ttgtttttgt tctatgtaat caaataaaat ttgagtaaca tgtaatggta aggattaatg 6060

catggttatt tggaccagaa aaaagtgcca tagaagacca ataactgttt agttgaggct 6120

agtctggaac ctttcattag agcaatattt ggttattgca cttcattttt atttactaag 6180

aaatgcaatt tgggaatttt taatctgtta tgctttgttt atcaaccttg attttaatta 6240

agacttttat aagactagct taaaacacca accaacatta tttttgcaaa agtgagttgg 6300

actcactttc cattcttgct agtcagagta agtaggcagc acttttaaaa atatgtgaac 6360

tcaaatattg cacttctttc aagatgttat caattggtta ttgtactgta tagttttaat 6420

aattttgatt gaaacccttt aacaactctt tgtaaatttt aactcatttt agttgatttt 6480

cagtactatt tacataggaa ttgattttta tggatatagt agaagaaatg tgctgtattt 6540

tgataaaatt cacttattgt atgtgtgttg taatctaaaa aaaaaaagaa tgacaaacag 6600

cttctttaag acaagtctcg gtgttccctt tattcttagt ttgtttttaa atattaattt 6660

tggcattcta aaatagctaa catttctttt attgatttca gattttcaca ggcacattct 6720

acttttaatc agaaatatat ttaataagta taattgtgaa gttttcaact actttacctt 6780

gaaccacata taccaattat aattttggaa aaggaattaa gcctcacgga acaatggatc 6840

ttcagcaaac cttaacttca ttgtctgcac attacattga agtattataa atgcaacaga 6900

tgttatatgc actggcattt tatcctactc tagttagtta aaattttata gtattcttgc 6960

aacacataaa gttgcgtaag aaactttacc aagaggagta ttatagccaa gttttctttg 7020

aaagtattgg aaaactaaaa ttaaatgaca aggactttga attagaattt tgctgtaata 7080

aagtttcaaa atttgaataa aataattaaa ttttttgagg aagtggagaa gacattttta 7140

gtttatatat tgttgagtaa attgtagtta aggcctatac ccataactaa ctttagtaag 7200

tattatatag caattcatca aaaccacaac tgtcttttag tgattttgtc tttaagagta 7260

atttcttact ctaaccagta aaaaaataat actgatcaga gtaatttata cggcatacaa 7320

tagttgatac aatctaaaga tttatgctaa ttaaggaatt atcacttcat ctgaatcaat 7380

gaaattctaa aattccctac atatttattt tgtaaatatt cttctgacct ctttggactg 7440

gatatgaaga tatatatata tacacttaat tcttttaaac acaaaacttg ccataagcag 7500

aaccaaactt ttaagtatta atttgctgca cttaaaaaat cccattagca gctatgtaat 7560

atttttatca accaacattt attcattcca aatttttgta tatatctaga tgaagtaaca 7620

catagaggat agataacaaa ctaatgatgt ttaaactggt ttatttacaa aattcggggt 7680

tagagaaatt ctcatgaaaa atatacaatt tttttttagc attaaaaccc tgtatatcta 7740

ggtgtggaag aagtgtagtt tatctcaaat tattattatt tacttctaaa gggaggcatt 7800

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ttttcactca gtctgttgca ttcttacagc cttctgtttt aatgttcagt gaataggttt 7920

cttatgaaat ggacattgaa ataaaaatta tgattcaaga gcattaattg atgaacaagt 7980

gaacaagatg cctctttaaa aaaaaaaaag aaaaagtaat ctagacaggc agccaactca 8040

gacctttggg tattcctttg tttctaaata aggaccttca gaaaaagttg accatattct 8100

acctaaagct gctaattctt tacagaattc ataagcccag gggatagtaa gtagtcattt 8160

agttttggaa agttcttaag agaatgctat cttctacagt ctcatgaagc agtttttcaa 8220

gattagaatc tgtggtcagc tataacgtac agtcctaata tccaaccacc tgagaagctc 8280

atcctaagct gagaaagcct aaaatgttag agaatgttta gagaaaacac ctgaaatttt 8340

ttttaagaga acaacctagg ttttattgta gagaacaatc aaaatactcc tgaacctttc 8400

tatagaatct ttaggagaga ggctgacaaa aagaatcctt ctgttacaac tttcttttct 8460

aatgtaacaa ccagggacaa tggtgatctg tcacgcatct gcccatctag cttctcaatc 8520

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aaaacaa 8647