本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腫瘤特異性移植抗原蛋白TSTA3在制備食管鱗癌診斷試劑中的用途。

背景技術(shù)：

食管癌是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，我國是食管癌發(fā)病率及死亡率最高的國家，每年新發(fā)病例47.8萬，死亡病例37.5萬，發(fā)病率及死亡率分別居各類惡性腫瘤的第三位及第四位。我國食管癌發(fā)病主要集中在幾個高發(fā)區(qū)，其中河南、山西、河北交界的太行山區(qū)發(fā)病率最高。與西方國家不同，我國食管癌的組織學類型90%為鱗狀細胞癌，大多數(shù)患者確診時已處于中晚期，病情發(fā)展快，預后差，5年生存率僅10%左右。目前食管癌治療仍以手術(shù)結(jié)合放化療為主，但對不能早期發(fā)現(xiàn)的患者常無根治性手術(shù)機會，同時對復發(fā)轉(zhuǎn)移患者綜合治療的總體療效仍不盡人意。與其它腫瘤類型相比，食管鱗癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)的早期診斷標志物及靶向治療的靶點甚為局限，缺乏可供參考的國際標準。因此，深入探索食管癌的發(fā)生發(fā)展機理，對于臨床發(fā)現(xiàn)早期診斷的分子標志和制定有效的臨床干預措施顯得至關(guān)重要。

惡性腫瘤的一個普遍特征是細胞的糖基化修飾發(fā)生了顯著的變化。糖基化常參與蛋白質(zhì)肽鏈的折疊、聚合、成熟和運輸,對細胞和蛋白質(zhì)功能調(diào)節(jié)方面起著重要作用。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，蛋白質(zhì)的糖基化修飾會隨著疾病進程發(fā)生改變，從而影響腫瘤細胞的粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程。腫瘤細胞表面異常的糖蛋白還常作為腫瘤的標志物存在。因此，尋找食管癌癌變過程中糖基化的異常改變特征對于腫瘤的早期診斷、進程監(jiān)測、預后評估以及治療靶點的尋找均能提供重要的信息。

異常巖藻糖基化與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)：巖藻糖基化是糖蛋白、糖脂寡糖修飾中最常見的修飾方式，GDP-L-巖藻糖是巖藻糖基化的唯一供體，其合成有補救合成和從頭合成兩種途徑（圖1）：前者由游離的L-巖藻糖通過L-巖藻糖激酶和GDP-L-巖藻糖焦磷酸化酶兩個步驟催化合成；后者是將GDP-D甘露糖通過三步酶促反應轉(zhuǎn)變?yōu)镚DP-L-巖藻糖，分別包含GDP甘露糖-4,6-脫水酶(GMDS)和GDP-4-酮-6-脫氧甘露糖-3,5異構(gòu)酶-4-還原酶(TSTA3)。其中，從頭合成途徑合成了人體內(nèi)90%的GDP-L-巖藻糖，成為GDP-L-巖藻糖生物合成的主要來源。細胞中巖藻糖基化還需要GDP巖藻糖轉(zhuǎn)運體的參與及巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(FUT)催化。

異常巖藻糖基化與腫瘤的關(guān)系己經(jīng)成為惡性腫瘤診斷與治療的研究熱點。文獻報道的巖藻糖基化異常與腫瘤關(guān)系密切的主要機制有：①巖藻糖基可參與構(gòu)成某些重要粘附分子的糖鏈結(jié)構(gòu)，與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。如直接參與Lewis 抗原決定簇的構(gòu)成，Lewis 抗原是選凝蛋白的結(jié)合配體，其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用已得到公認；整合素和E-cadherin分子中核心巖藻糖基化的減少及缺如導致其功能的喪失，通過影響細胞-細胞以及細胞-細胞外間質(zhì)的相互作用引起侵襲遷移能力的變化。②通過表皮生長因子受體(EGFR)巖藻糖基化影響腫瘤的發(fā)生。EGFR具有潛在N糖基化位點，其中一半以上存在巖藻糖基化修飾，N糖基化抑制劑明顯降低EGF與EGFR的結(jié)合，核心巖藻糖基化的EGFR與EGF的親和力更高。③巖藻糖基化異常與腫瘤免疫逃逸相關(guān)。Moriwaki等發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌細胞中GMDS突變，導致細胞巖藻糖基化水平下降，從而逃避自然殺傷（NK）細胞介導的免疫監(jiān)視，抵抗腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(TRAIL)誘導的細胞凋亡；人白血病細胞K562中表面sLex的存在促進NK細胞的殺傷活性。目前已有多種異常巖藻糖基化指標應用于臨床實踐，如：細胞表面巖藻糖基化Le^Y寡糖是一腫瘤相關(guān)抗原，在許多上皮來源的乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及腸癌中是高表達，目前，針對該抗原的單克隆抗體（IGN-311和 hu3s193）已經(jīng)作為上皮源性腫瘤免疫治療的潛在藥物，并進入了 II 期臨床試驗；核心巖藻糖基化的甲胎蛋白（AFP-L3）相比AFP對于肝癌更具有特異性的診斷價值；巖藻糖基化的觸珠蛋白（HPT）水平在卵巢癌、肺癌、乳腺癌以及胰腺癌等惡性腫瘤中升高，成為多種腫瘤的分子標志物。

TSTA3基因又稱FX、P35B，其編碼蛋白是GDP-L-巖藻糖從頭合成的關(guān)鍵限速酶，而GDP-L-巖藻糖是巖藻糖基化的唯一供體（圖1）。該基因在腫瘤中研究報道較少。結(jié)直腸癌、肝細胞癌、乳腺癌等腫瘤中存在TSTA3基因的高表達，與原位結(jié)直腸腫瘤細胞系sw480相比，轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞系sw620中高表達TSTA3，其與細胞SLea的表達成正相關(guān)，并可增強腫瘤-內(nèi)皮細胞粘附；TSTA3基因敲除小鼠體內(nèi)巖藻糖基化的缺失可導致腸道炎癥，進而引起腺上皮異型增生和腺癌的發(fā)生，該過程涉及Notch通路的失活及下游Hes1的下調(diào)；TSTA3在乳腺癌組織中的高表達與TNM分期及不良預后密切相關(guān)，可以作為獨立的預后因子，乳腺癌中TSTA3的敲除可引起CXCR4、CXCL12、MMP9等基因的顯著下調(diào)，與癌細胞侵襲能力下降相關(guān)；而在Hu 等419例人群中的對照研究發(fā)現(xiàn)TSTA3在早期肺腺癌患者的外周血及癌組織中均存在表達量的增高，可能是非小細胞肺癌的早期診斷標志物。

TSTA3基因在食管鱗癌中可能發(fā)揮關(guān)鍵性的癌基因作用。前期對14和90例ESCC腫瘤及配對正常組織(Ⅰ期51例，Ⅲ期53例)分別進行了全基因組和全外顯子組測序，在基于單核苷酸變異(SNVs)及小片段插入/缺失(Indels)的分析中發(fā)現(xiàn)，巖藻糖/甘露糖代謝通路在Ⅰ期病例中的突變頻率顯著高于Ⅲ期，提示該通路的變異可能參與了食管癌的早期發(fā)生，其中TSTA3基因編碼該通路的限速酶，突變頻率為2%，均為錯義突變；同時，基于拷貝數(shù)變異(CNAs)的分析發(fā)現(xiàn)，Ⅰ期病例中TSTA3基因所在8q24區(qū)域在ESCC中存在顯著且重復的拷貝數(shù)擴增。該部分ESCC相關(guān)組學測序結(jié)果發(fā)表于Cell子刊 Am J Hum Genet（被評選為“Best of AJHG 2014 to 2015”）及GigaScience雜志上。

在此基礎(chǔ)上，對TSTA3基因的功能進行了初步研究。在KYSE510及KYSE150兩株食管鱗癌細胞中敲低TSTA3基因?qū)Π┘毎脑鲋碂o影響，但可以顯著抑制癌細胞的侵襲及遷移能力；相反，TSTA3基因的過表達在不影響癌細胞增殖的同時可以顯著增強細胞的侵襲遷移能力(p <0.05)。

綜上，TSTA3與食管鱗癌密切相關(guān)：基于食管鱗癌與配對癌旁組織全基因組及外顯子組測序發(fā)現(xiàn)TSTA3是候選的食管鱗癌相關(guān)基因，且其編碼的蛋白為巖藻糖/甘露糖代謝通路的限速酶，突變頻率為2%，均為錯義突變；基因組學測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)巖藻糖/甘露糖代謝通路在Ⅰ期病例中的突變頻率顯著高于Ⅲ期，提示該通路的變異可能參與了食管癌的早期發(fā)生，同時，基于拷貝數(shù)變異(CNAs)的分析發(fā)現(xiàn)，8q24區(qū)域在ESCC中存在顯著且重復的拷貝數(shù)擴增，該區(qū)域覆蓋了TSTA3基因 。提示TSTA3基因與食管癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。但是TSTA3與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系尚未見報道，與食管鱗癌患者預后的關(guān)系也未見報道。本發(fā)明為確定TSTA3表達水平與食管鱗癌患者臨床預后的關(guān)系，探討其作為分子標志物預測食管鱗癌患者預后的應用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，提供了一種腫瘤特異性移植抗原蛋白TSTA3在制備食管鱗癌診斷試劑中的用途，所述的這種用途解決了現(xiàn)有技術(shù)中食管鱗癌患者診斷和預后信息的分子靶標非常少，評判標準不一的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種腫瘤特異性移植抗原蛋白TSTA3在制備診斷和/或預后評價食管鱗癌患者試劑中的用途。

本發(fā)明通過TSTA3蛋白表達情況進行免疫評判，然后通過TSTA3蛋白的表達量確定與患者診斷和預后的關(guān)系，用于輔助食管鱗癌患者的診斷和預后評價。

本發(fā)明和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過免疫學指標TSTA3蛋白表達量輔助食管鱗癌患者的診斷和對預后進行評價，為解決食管鱗癌患者診斷和預后評價手段缺乏的現(xiàn)狀提供一種準確、快速的預測方法。

附圖說明

圖1為GDP-L-巖藻糖合成途徑及TSTA3蛋白的限速酶作用圖；

圖2為TSTA3在ESCC腫瘤組織及癌旁正常組織（104例原發(fā)癌和60例配對癌旁組織）中的蛋白表達水平圖，圖中，A: TSTA3在ESCC組織和癌旁正常組織的免疫組織芯片圖（×40,100）；B:TSTA3在ESCC腫瘤組織及癌旁正常組織（104例原發(fā)癌和60例癌旁組織）中的蛋白表達水平差異散點圖；C: TSTA3在60例ESCC腫瘤組織及配對癌旁正常組織中的蛋白表達水平差異散點圖；

圖3為ROC曲線篩選ESCC腫瘤組織中TSTA3表達閾值圖；

圖4為根據(jù)圖3閾值劃分TSTA3高表達和低表達在ESCC腫瘤中所占比例圖；

圖5為TSTA3高表達和低表達狀態(tài)在ESCC總?cè)巳海ˋ）、無飲酒史(B)、不同性別(C)、不同位置(D)ESCC患者中對預后的預測作用圖；

圖6為TSTA3高表達和低表達狀態(tài)在不同年齡(A)、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)(B)、不同浸潤深度(C)ESCC患者中對預后的預測作用圖。

具體實施方式

下面通過具體實施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明進一步闡述，但并不限制本發(fā)明。

本發(fā)明實施例中所用的104個食管鱗癌（ESCC）組織均來自于山西省腫瘤醫(yī)院（STH太原，中國），第一次進行手術(shù)切除治療，術(shù)前未經(jīng)過新輔助療法、化療或放療。104塊原發(fā)食管癌組織及其中60塊配對的正常食管上皮組織標本經(jīng)蠟塊包埋，制作成組織芯片用于后續(xù)的免疫組化染色分析。ESCC的臨床分級參照美國癌癥聯(lián)合委員會及國際抗癌聯(lián)盟指定的2010年第7版TNM分級標準。本實驗已通過了山西醫(yī)科大學及參與醫(yī)院。所有標本的采集均通過了患者本人及家屬同意并簽署了知情同意書。

通過免疫組化染色法來評估癌組織及癌旁組織中TSTA3蛋白的表達量。具體的標本對應的臨床病例資料如腫瘤大小、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分級見表1。

表1： ESCC患者臨床病理資料

所采用的統(tǒng)計學分析方法為：ESCC及癌旁正常組織中TSTA3表達水平比較采用秩和檢驗。利用受試者工作特征曲線 （receiver operating characteristic curve， ROC曲線）尋找TSTA3蛋白高表達及低表達的最佳分界值。TSTA3的表達與臨床病例因素的相關(guān)性分析用四格表卡方檢驗。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank 檢驗分析TSTA3表達狀態(tài)與不同臨床病理因素患者預后生存相關(guān)性。Cox比例風險回歸模型進行單因素及多因素生存分析，分析TSTA3表達在ESCC患者預后預測中的作用。所有統(tǒng)計及相應繪圖采用SPSS18.0軟件進行?？偵鏁r間按手術(shù)始至死亡日或最終隨訪日計算。P 值小于0.05被視為有統(tǒng)計學意義。

本發(fā)明的實施例中所用到的試劑、主要實驗儀器與耗材為：中性樹脂、4%福爾馬林、Tween20：Biotopped科技有限公司；石蠟：上海華永石蠟有限公司；二甲苯：天津市富宇精細化工有限公司；無水乙醇：天津市大茂化學試劑廠；pH6.0枸櫞酸鈉（檸檬酸鹽修復液）、DAB顯色試劑盒：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；快捷型酶標羊抗原鼠/兔IgG聚合物：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；3%雙氧水：德州安捷高科消毒制品有限公司；蘇木素染液：北京索萊寶科技有限公司；組織芯片陣列蠟塊制備儀：北京克洛伊科技有限公司；切片機：徠卡，德國；全自動數(shù)字病理掃描設備：美國，Aperio公司；顯微鏡：徠卡，德國；冰箱：海爾，中國；水平搖床：其林貝爾，中國；微量移液器：eppendorf，德國；電熱恒溫鼓風干燥箱：上海智城分析儀器制造有限公司，；載玻片、蓋玻片：江蘇世泰實驗器材有限公司；濕盒、染色架：海門市康泰實驗器材廠。

實驗所用配制試劑為：PBS磷酸鹽緩沖液：NaCl（上海生工生物工程有限公司） 1.6g，Na₂HPO₄ .7H₂O（上海生工生物工程有限公司） 10.9g，Na₂HPO₄（上海生工生物工程有限公司） 5.78g，NaH₂PO₄（上海生工生物工程有限公司） 5.29，溶于2000ml三蒸水混勻。1xPBST：TWEEN：PBS=1：1000配置。

實施例1：一種通過食管鱗癌免疫學指標腫瘤特異性移植抗原蛋白TSTA3表達量輔助食管鱗癌患者的診斷和對預后進行評價的方法，免疫組化染色步驟根據(jù)劉增輝主編《病理染色技術(shù) 》（人民衛(wèi)生出版社出版）進行。組織芯片用1：400的TSTA3抗體（抗兔單克隆抗體，ab190002，Abcam）在4℃孵育14小時，然后用DAB檢測試劑盒（邁新，福州，中國）處理。經(jīng)蘇木精藍染封片后拍攝×100放大圖像。利用全自動數(shù)字病理掃描設備( Aperio, America)及圖像分析軟件分析腫瘤組織及正常上皮組織細胞胞漿中染色強度反應出TSTA3蛋白的表達情況。

具體包括如下步驟：

（1）將手術(shù)切除的104例原發(fā)癌和60例配對癌旁組織標本進行石蠟包埋，制成蠟塊，具體制備蠟塊的方法為：將手術(shù)切除的組織用10％中性福爾馬林杯固定，脫水包埋，石蠟切片成2μm，貼于載玻片上，65℃烤片3-5小時使標本固定于玻片上，冷卻保存；

（2）脫蠟：組織切片于鼓風干燥箱中烤片10min使標本石蠟融化，隨后分別浸入二甲苯3次，每次10min；再分別浸入無水酒精2min，無水酒精2min，80%酒精2min，70%酒精2min；

（3）內(nèi)源性過氧化物酶的消除：將脫蠟和水化后的切片移至避光處理的3%H₂O₂中20min，以消除組織細胞中存在的過氧化物酶，減少非特異性染色；

（3）洗片：三蒸水洗片5min，浸入PBS 3次，每次3min；

（4）抗原暴露及抗原修復：組織切片浸入PH6.0的枸櫞酸鹽緩沖液(6.46g枸櫞酸鈉溶于1800ml三蒸水)高壓熱修復120℃ 2min，自然冷卻至15-30℃；1xPBST處理2min*3次；

（5）抗體孵育：加TSTA3一抗（兔抗TSTA3，1：100），要求一抗工作液全部覆蓋組織，且不能留有氣泡，4℃濕盒孵育過夜，第二天取出放置室溫，復溫1小時1×PBST洗10min*3（水浴入37℃箱待用）；加二抗（羊抗兔，1：500），全部覆蓋組織，且不能留有氣泡，37℃孵育20min；PBST洗5min*3次；

（6）DAB顯色：用移液器取1ml DAB底物液置于1.5ml的避光EP管中，在避光條件下滴加一滴DAB液于EP管，充分混勻。吸取適量顯色工作液，迅速準確滴于組織切片上，具體方法同一抗，借助顯微鏡觀察染色強度，及時控制時間，鏡下觀察3-5min細胞質(zhì)變淡黃色后，自來水終止顯色反應；

（7）蘇木素復染：將組織切片移至金屬染色架上，置于蘇木素染液體缸中復染1分鐘，然后將組織切片置于自來水中終止染色。取出后移至盛有70%鹽酸乙醇的液體缸中進行分色（分化）5秒。最后將組織切片取出移至盛有氨水的液體缸中進行返藍（蘭化）。顯微鏡下觀察復染強度。若復染強度低，繼續(xù)使用70%鹽酸乙醇及氨水分化及蘭化。

（8）脫水：載玻片分別浸入70%酒精5min，90%酒精5min，無水酒精10min，無水酒精10min，二甲苯10min，二甲苯10min，二甲苯10min；

（9）中性樹脂封片：取出組織切片后，放于通風良好處，充分揮發(fā)組織切片殘留的二甲苯。用中性樹脂滴于組織中心，緩慢平鋪蓋玻片，使組織完全被中性樹脂封閉，且不留氣泡，待切片完全干燥后鏡下觀察并保存。

（10）使用Aperio公司的病理掃描系統(tǒng)ScanScope? AT通過對免疫組織化學染色后的組織樣本中細胞漿（TSTA3分布于細胞漿中）染色深淺的掃描識別自動計算出H值，即代表TSTA3蛋白的表達水平。

（11）統(tǒng)計學分析：ESCC及癌旁正常組織中TSTA3表達水平比較采用秩和檢驗。利用受試者工作特征曲線 （receiver operating characteristic curve， ROC曲線）尋找TSTA3蛋白高表達及低表達的最佳分界閾值，將所有樣本根據(jù)其TSTA3表達H值按閾值分組，高于閾值的為高表達組，低于閾值的為低表達組。TSTA3的表達與臨床病例因素的相關(guān)性分析用四格表卡方檢驗。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank 檢驗分析TSTA3與不同臨床病理因素患者預后生存相關(guān)性。Cox比例風險回歸模型進行單因素及多因素生存分析，分析TSTA3表達在ESCC患者預后預測中的作用。所有統(tǒng)計及相應繪圖采用SPSS18.0軟件進行。總生存時間按手術(shù)始至死亡日或最終隨訪日計算。P 值小于0.05被視為有統(tǒng)計學意義。

實驗結(jié)果：

利用免疫組化方法觀察了在104例原發(fā)食管鱗癌和60例配對癌旁組織中TSTA3蛋白表達水平。結(jié)果顯示，TSTA3表達在ESCC及正常組織的細胞胞漿中（圖2A），TSTA3在癌組織中表達明顯高于非癌組織。檢測到癌組織中的H值在66.3158到 297.3680之間，中位數(shù)為92.67。癌旁組織中的H值在67 到251.9230之間，中位數(shù)為64.88。TSTA3蛋白水平在ESCC癌組織中明顯高于正常食管鱗狀上皮組織(P=0.00014，t=3.900，圖2B)，在配對的癌組織及癌旁組織中這一差異同樣明顯(P=0.0002，t =3.916，圖2C)。

根據(jù)ROC曲線關(guān)系(AUC=0.703, P=0.00037, 95% 可信區(qū)間:0.600-0.818; 圖3)，以約登指數(shù)（Youden index）=（敏感度+特異度-1）最大時所對應的點為最佳診斷界值（分界閾值）。選取H值195.2735作為分界閾值，將所有的癌組織樣本分為兩組：TSTA3_low (H值≤195.2735 )和TSTA3_high (H值 >195.2735 )。秩和檢驗結(jié)果顯示在癌組織及癌旁正常組織中高低兩組的分配存在明顯差異，ESCC癌組織中TSTA3顯著高表達(P =0.0018, χ2=9.766；圖4)。

表2為TSTA3的表達情況及其與ESCC患者臨床病理資料二者相關(guān)性，從表2可以看出，TSTA3蛋白表達水平與患者年齡(P =0.017, χ2 =5.983)、飲酒史(P =0.007, χ2=9.817)、臨床分期(P =0.010, χ2 =6.996)以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P =0.043, χ2=4.876)有明顯相關(guān)性，在年齡較大患者、臨床晚期（III+IV）患者、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，TSTA3高表達比例大，表明TSTA3高表達的腫瘤惡性程度更高、更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。TSTA3蛋白表達水平與與性別、組織學分化、吸煙史及食管癌的發(fā)生部位無關(guān)。雖然沒有統(tǒng)計學意義，但TSTA3蛋白表達水平與ESCC浸潤深度可能有關(guān)(P =0.055, χ2=4.131，T1+T2 vs.T3；)，表明TSTA3高表達的腫瘤更容易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移(表2)。

表2：TSTA3的表達情況及其與ESCC患者臨床病理資料二者相關(guān)性

從隨訪數(shù)據(jù)可以得出TSTA3低表達患者總生存時間為34個月到55個月，平均45個月。TSTA3高表達患者總生存時間為26個月到41個月，平均33個月。圖5和圖6的Kaplan–Meier分析顯示在所有ESCC患者中高表達TSTA3的患者總生存時間顯著劣于低表達患者，預后差(P=0.048, 圖5A)，這一趨勢在病灶位于食管下段的患者中(P =0.038, 圖5D)，無飲酒史的患者中(P =0.048, 圖5B)同樣存在。在男性患者中這一趨勢更為明顯(P =0.017, 圖5C)。此外，在年齡大于60歲的患者中，高表達TSTA3的患者總生存時間劣于低表達患者(P=0.059, 圖6A)，在淋巴結(jié)陽性患者中，高表達TSTA3的患者總生存時間劣于低表達患者(P=0.064, 圖6B)，在浸潤深度為T3患者中，高表達TSTA3的患者總生存時間劣于高表達患者(P=0.068, 圖6C)，雖然無顯著統(tǒng)計學意義，但是具有明顯的趨勢。表明高表達TSTA3可能是ESCC患者預后差的一個標志。

表3為利用單因素及多因素分析方法評估了TSTA3蛋白表達水平對患者生存時間的預測價值。利用單因素分析方法分別分析年齡、性別、腫瘤位置、病理學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、浸潤深度、臨床分期、TSTA3表達水平等因素與患者生存時間的關(guān)系（表3），并沒有發(fā)現(xiàn)生存時間與TSTA3的表達水平有明顯聯(lián)系，TSTA3高表達的比例風險無統(tǒng)計學意義，但具有明顯趨勢(HR=1.967; Cl=0.987-3.923; P =0.055)。進一步做Cox比例風險回歸模型的多因素分析，將上述所有臨床相關(guān)因素同時納入分析綜合考慮，TSTA3的表達量對預后生存時間有明確的預測價值，結(jié)果見表2。高表達TSTA3的患者死亡風險是低表達組的2.755倍(95% 可信區(qū)間= 1.241-6.113，P =0.013)。表明TSTA3可以作為ESCC患者預后的一個獨立預測因子。

表3：Cox比例風險回歸模型的多因素分析

綜上，104例ESCC的免疫組織化學結(jié)果顯示，①ESCC腫瘤樣本中TSTA3表達量顯著高于配對正常組織(183.9±54.6 vs 152.8±48.1，P =0.0002)；②非配對ESCC腫瘤樣本中TSTA3表達量亦顯著高于正常組織(187.0± 58.8vs 152.1±48.3，P =0.00014）；③TSTA3高表達組患者的生存時間顯著短于低表達組 (33.0±5.5 vs 45.0±5.4，P =0.048）；④TSTA3基因表達與飲酒史(P =0.007)、浸潤深度(P =0.055，T1+T2 VS T3)、臨床分期(P =0.010)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P =0.043)相關(guān)；⑤多因素分析提示TSTA3是ESCC預后的一個獨立預測因素。據(jù)此，TSTA3基因可能在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。

本發(fā)明通過免疫組化試驗，對TSTA3表達情況與ESCC患者臨床病理參數(shù)關(guān)系進行研究，評估了TSTA3對ESCC預后的預測價值。觀察到TSTA3的表達在腫瘤組織中要明顯高于正常對照組織。TSTA3的高表達水平和患者癌癥的臨床分期,淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移以及浸潤的深度有關(guān)。TSTA3高表達的患者生存時間較短、預后較差。更重要的是，TSTA3高表達可以作為ESCC患者較差預后的獨立預測因子。

由于大多數(shù)經(jīng)歷巖藻糖基化的糖蛋白是分泌蛋白或細胞表面的膜蛋白，而從原發(fā)腫瘤部位脫落或釋放到血液中的癌細胞經(jīng)常在其表面過表達巖藻糖化的聚糖，因此腫瘤細胞表面異常的巖藻糖蛋白常作為腫瘤的標志物存在。如細胞表面巖藻糖基化Le Y寡糖是一腫瘤相關(guān)抗原，在許多上皮來源的乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及腸癌中是高表達，目前，針對該抗原的單克隆抗體(IGN-311和 hu3s193)已經(jīng)作為上皮源性腫瘤免疫治療的潛在藥物；核心巖藻糖基化的甲胎蛋白(AFP-L3)相比AFP對于肝癌更具有特異性的診斷價值；巖藻糖基化的觸珠蛋白(HPT)水平在卵巢癌、肺癌、乳腺癌以及胰腺癌等惡性腫瘤中升高，成為多種腫瘤的分子標志物。本發(fā)明中TSTA3在ESCC中高表達及與預后的關(guān)系提示在ESCC發(fā)生發(fā)展中存在顯著的巖藻糖基化異常，對該基因在ESCC中的深入研究尤其是靶向巖藻糖蛋白有望揭示食管癌新的癌變機理，為鑒定ESCC新的早診標志物及設計新的抗腫瘤治療方案提供理論基礎(chǔ)。

綜上所述，本發(fā)明是一種通過免疫學指標TSTA3蛋白表達量輔助食管鱗癌患者的診斷和對預后進行評價的用途，即根據(jù)食管鱗癌患者腫瘤組織中TSTA3蛋白表達的高低直接確定患者的診斷和預后信息。

以上所述僅是本發(fā)明的實施方式的舉例，應當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進，這些改進也應視為本發(fā)明的保護范圍。