本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法。

背景技術(shù)：

近年來(lái)，隨著農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展，獸藥、農(nóng)藥和添加劑的濫用造成畜產(chǎn)品有害物質(zhì)殘留嚴(yán)重超標(biāo)，不僅給消費(fèi)者身體健康帶來(lái)潛在危害，還影響畜牧業(yè)發(fā)展，獸藥殘留的檢測(cè)技術(shù)也越來(lái)越受到關(guān)注。其中，喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性，對(duì)大多數(shù)動(dòng)物有明顯的致畸作用，對(duì)人也有潛在的三致性，即致畸形，致突變，致癌，因此喹乙醇在美國(guó)和歐盟都被禁止用作飼料添加劑，但很多養(yǎng)殖者仍再使用，行業(yè)潛規(guī)則伏擊每一個(gè)人，要喚醒行業(yè)人的良知，就必須內(nèi)部揭發(fā)，外部監(jiān)管，把那些危害生命的行業(yè)秘密一一暴露于陽(yáng)光底下，讓那些傷天害理的行為無(wú)處逃遁，目前，國(guó)內(nèi)外多采用液相、液質(zhì)聯(lián)用等技術(shù)來(lái)檢測(cè)獸藥殘留，但是這些技術(shù)存在操作復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)成本較高等不足，而且不適宜在線檢測(cè)。因此，在獸藥檢測(cè)方面需要開(kāi)發(fā)研究前處理簡(jiǎn)單、成本低廉并且對(duì)有毒害物質(zhì)可實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的方法，為此，我們提出一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中技術(shù)存在操作復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)成本較高等不足，而且不適宜在線檢測(cè)等缺點(diǎn)，而提出的一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法，該快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法包括如下步驟：

s1：備料：選取材料：選取全價(jià)飼料和市場(chǎng)上的豬肉，做備用；選取試劑：依次選取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品、乙腈、甲醇、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸銨和乙酸乙酯，做備用；選取儀器：分別選取微型高速萬(wàn)能試樣粉碎機(jī)、t-1000和t-10000型電子天平各一臺(tái)、高速組織搗碎機(jī)、調(diào)速式高速分散器、旋渦混合器、臺(tái)式高速離心機(jī)、高效液相色譜和氮吹儀作為實(shí)驗(yàn)儀器；

s2：制備喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別用t-10000型電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取步驟s1中選取的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品0mg、5mg、10mg、15mg和20mg，用甲醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，然后依次制成濃度為每毫升0ug、5ug、10ug、15ug和20ug的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以備后用；

s3：檢測(cè)飼料喹乙醇含量：取六只50ml的離心管，在六只離心管上做好1～6號(hào)標(biāo)號(hào)，將步驟s1中選取的飼料用微型高速萬(wàn)能式樣粉碎機(jī)粉碎，然后用t-1000型電子天平分別稱(chēng)取五份粉碎后的飼料2g，將稱(chēng)取后的飼料分別加入到1～5號(hào)離心管中，6號(hào)離心管中不添加飼料，在1～5號(hào)離心管中分別加入10ml濃度為5ppm、10ppm、15ppm、20ppm和0ppm喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在6號(hào)離心管加入10ml濃度為10ppm喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別向1～6號(hào)離心管中加入50％甲醇-水溶液作為提取劑，將1～6號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩10min，再放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液過(guò)0.45um微孔濾膜，同時(shí)做平行試驗(yàn)，上機(jī)；

s4：檢測(cè)豬肉喹乙醇含量：取一定量的豬肉，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)粉碎，放置待用，取八只50ml的離心管，在八只離心管上依次做好a～h號(hào)標(biāo)號(hào)，用t-1000型電子天平稱(chēng)取2g豬肉樣品于a～c號(hào)離心管中，向a～d號(hào)管中分別加入102.18ug/ml喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液4ml、6ml、0l、4ml，再向a～d號(hào)離心管中分別加入甲醇2ml、0ml、6ml、2ml，然后向a～d號(hào)離心管中分別加入飽和硫酸銨2ml，將a～d號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min，向各管中加入1mol/l的磷酸二氫鉀2ml,再向各管中加入10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)，將a～d號(hào)離心管繼續(xù)振蕩8min，然后放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心5min，吸出有機(jī)相于e、f、g、h四只離心管中，用10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)重新提取，將a-d號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min,再將a-d號(hào)離心管放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心5min，合并有機(jī)相于e、f、g、h管中，向e、f、g、h管中各加入2ml0.2mol/l的氫氧化鈉，將e～h號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min，靜置10min，60攝氏度水浴上通過(guò)氮吹儀氮?dú)獯蹈?，再分別向e～h號(hào)離心管中加入5ml甲醇，將e～h號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩15min，再將e～h號(hào)離心管放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心8min，取上清液過(guò)0.45um微孔濾膜，上機(jī)。

本發(fā)明提供的一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法，本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果完全能夠滿(mǎn)足對(duì)肉類(lèi)等畜牧產(chǎn)品的獸藥殘留檢測(cè)，該方法前處理簡(jiǎn)單、成本低廉且可對(duì)獸藥等物質(zhì)實(shí)現(xiàn)快速檢。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明操作步驟流程圖；

圖2為本發(fā)明飼料樣品中喹乙醇回收率結(jié)果圖；

圖3為本發(fā)明豬肉樣品中喹乙醇回收率結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例一

一種快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法，其特征在于：該快速檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法包括如下步驟：

s1：備料：選取材料：選取全價(jià)飼料和市場(chǎng)上的豬肉，做備用；選取試劑：依次選取喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品、乙腈、甲醇、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸銨和乙酸乙酯，做備用；選取儀器：分別選取微型高速萬(wàn)能試樣粉碎機(jī)、t-1000和t-10000型電子天平各一臺(tái)、高速組織搗碎機(jī)、調(diào)速式高速分散器、旋渦混合器、臺(tái)式高速離心機(jī)、高效液相色譜和氮吹儀作為實(shí)驗(yàn)儀器；

s2：制備喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別用t-10000型電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取步驟s1中選取的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品0mg、5mg、10mg、15mg和20mg，用甲醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，然后依次制成濃度為每毫升0ug、5ug、10ug、15ug和20ug的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以備后用；

s3：檢測(cè)飼料喹乙醇含量：取六只50ml的離心管，在六只離心管上做好1～6號(hào)標(biāo)號(hào)，將步驟s1中選取的飼料用微型高速萬(wàn)能式樣粉碎機(jī)粉碎，然后用t-1000型電子天平分別稱(chēng)取五份粉碎后的飼料2g，將稱(chēng)取后的飼料分別加入到1～5號(hào)離心管中，6號(hào)離心管中不添加飼料，在1～5號(hào)離心管中分別加入10ml濃度為5ppm、10ppm、15ppm、20ppm和0ppm喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在6號(hào)離心管加入10ml濃度為10ppm喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別向1～6號(hào)離心管中加入50％甲醇-水溶液作為提取劑，將1～6號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩10min，再放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液過(guò)0.45um微孔濾膜，同時(shí)做平行試驗(yàn)，上機(jī)；

s4：檢測(cè)豬肉喹乙醇含量：取一定量的豬肉，經(jīng)高速組織搗碎機(jī)粉碎，放置待用，取八只50ml的離心管，在八只離心管上依次做好a～h號(hào)標(biāo)號(hào)，用t-1000型電子天平稱(chēng)取2g豬肉樣品于a～c號(hào)離心管中，向a～d號(hào)管中分別加入102.18ug/ml喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液4ml、6ml、0l、4ml，再向a～d號(hào)離心管中分別加入甲醇2ml、0ml、6ml、2ml，然后向a～d號(hào)離心管中分別加入飽和硫酸銨2ml，將a～d號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min，向各管中加入1mol/l的磷酸二氫鉀2ml,再向各管中加入10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)，將a～d號(hào)離心管繼續(xù)振蕩8min，然后放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心5min，吸出有機(jī)相于e、f、g、h四只離心管中，用10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)重新提取，將a-d號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min,再將a-d號(hào)離心管放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心5min，合并有機(jī)相于e、f、g、h管中，向e、f、g、h管中各加入2ml0.2mol/l的氫氧化鈉，將e～h號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩8min，靜置10min，60攝氏度水浴上通過(guò)氮吹儀氮?dú)獯蹈?，再分別向e～h號(hào)離心管中加入5ml甲醇，將e～h號(hào)離心管分別放在旋渦混合器上振蕩15min，再將e～h號(hào)離心管放入臺(tái)式高速離心機(jī)中以4000轉(zhuǎn)/min離心8min，取上清液過(guò)0.45um微孔濾膜，上機(jī)。

根據(jù)高效液相色譜儀得出的結(jié)論：通過(guò)對(duì)喹乙醇濃度為5ppm飼料樣品在各波長(zhǎng)的出峰圖譜比較，在可見(jiàn)光區(qū)，無(wú)明顯雜峰干擾，在375nm波長(zhǎng)處響應(yīng)值較高，所以選擇375nm的波長(zhǎng)圖譜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，通過(guò)加入5～20ppm的標(biāo)樣，在色譜儀上進(jìn)行分析，在10min左右開(kāi)始出峰，飼料樣品中喹乙醇的回收率從75.20％逐漸上升至89.6％，通過(guò)與10ppm喹乙醇回收率的陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)比較，可以看到飼料組分對(duì)回收率有一定的影響，而陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)在10min～12min時(shí)段未有峰出現(xiàn)；由于豬肉成分比較復(fù)雜，采用375nm左右的波長(zhǎng)檢測(cè)，避免雜峰干擾，豬肉中未測(cè)出喹乙醇含量，而對(duì)照回收實(shí)驗(yàn)可得，可能該樣品豬肉準(zhǔn)守農(nóng)業(yè)部規(guī)定，在宰殺前35天已經(jīng)開(kāi)始停藥，因?yàn)樨i攝入喹乙醇后，經(jīng)過(guò)消化道代謝，80％左右的喹乙醇已分解或轉(zhuǎn)化為代謝體，經(jīng)過(guò)對(duì)比可以看出本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果完全能夠滿(mǎn)足對(duì)肉類(lèi)等畜牧產(chǎn)品的獸藥殘留檢測(cè)，該方法前處理簡(jiǎn)單、成本低廉且可對(duì)獸藥等物質(zhì)實(shí)現(xiàn)快速檢。