本發(fā)明涉及水產學領域，特別涉及一種利用脊椎骨研究鯊魚類不同生活史階段攝食生態(tài)的方法。

背景技術：

鯊魚隸屬于軟骨魚綱、鯊形總目，廣泛分布于印度洋、太平洋和大西洋，是金槍魚漁業(yè)主要的兼捕對象；在多數(shù)海洋生態(tài)系統(tǒng)的食物鏈中，鯊魚是海洋生態(tài)系統(tǒng)中的頂級捕食者，是對生態(tài)系統(tǒng)的功能和穩(wěn)定性起關鍵作用的“關鍵種”，因此開展鯊魚的攝食生態(tài)研究是海洋生態(tài)系統(tǒng)動力學研究的基礎，而且攝食生態(tài)研究是掌握鯊魚生活史過程的重要內容，能為漁業(yè)管理組織進行鯊魚資源養(yǎng)護和管理提供重要的參考價值。

穩(wěn)定同位素技術是近年來被廣泛應用于水域食物網研究的一項新技術，生物組織中的碳、氮穩(wěn)定同位素能提供長時間的攝食信息及食物網中物質和能量傳遞信息，揭示魚類在長期生活史過程中的食物組成和來源；目前鯊魚穩(wěn)定同位素生態(tài)研究最常用的組織樣品是肌肉，被用來揭示當前或取樣時期的攝食特征，但并不能反映整個生活史階段的食性轉換以及營養(yǎng)級變動，而鯊魚的脊椎骨因具有穩(wěn)定儲存生長信息、代謝速率慢等特點，能反映不同生活史階段鯊魚的食性和營養(yǎng)級變動。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種利用脊椎骨研究鯊魚類不同生活史階段攝食生態(tài)的方法。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案如下：

一種利用脊椎骨研究鯊魚類不同生活史階段攝食生態(tài)的方法，包括鯊魚類生活史過程中脊椎骨椎體斷面提取和碳氮穩(wěn)定同位素比值測定；

鯊魚類生活史過程中脊椎骨椎體斷面提取的步驟如下：

(1)取1節(jié)脊椎，包含3-5塊脊椎骨，冷凍保存；

(2)清洗：將脊椎置于沸水中浸泡5-10min，用手術刀從脊椎中取下一塊脊椎骨，浸泡于次氯酸鈉溶液中，除去表面多余的結締組織，隨后置于流動水中沖洗5min，除去表面的次氯酸鈉溶液，自然風干；

(3)測量：采用電子游標卡尺測量經(2)處理過的脊椎骨直徑；

(4)微取樣：用小型臺虎鉗固定住脊椎骨，將稱量紙折疊成圓筒狀固定在脊椎骨正下方，利用微型臺鉆的1.5mm鉆頭由脊椎骨最外側向椎骨中心位置按照2mm距離鉆孔獲取脊椎骨粉末；

重復以上步驟，直至脊椎骨核心部分直徑約為2mm，最后一次鉆取脊椎骨斷面粉末，依據脊椎骨大小的不同可得到若干個脊椎骨不同斷面的樣品粉末；

碳氮穩(wěn)定同位素比值測定的步驟如下：

(1.1)標樣選?。悍謩e選取國際原子能機構的usgs24(-16.049‰v-pdb)和usgs26(53.7‰v-n2)標準品作為碳和氮穩(wěn)定同位素的校準；

(2.2)碳氮穩(wěn)定同位素的測定：在元素分析-穩(wěn)定同位素比質譜儀上對不同斷面的樣品進行碳氮穩(wěn)定同位素的測定；

(3.3)根據碳氮穩(wěn)定同位素值確定鯊魚類不同生活史階段的攝食生態(tài)，營養(yǎng)級每增加一級碳穩(wěn)定同位素升高0.5‰-1.5‰，氮穩(wěn)定同位素升高3‰-4‰。

在本發(fā)明的一個實施例中，步驟(1)中的脊椎選自第一背鰭處。

在本發(fā)明的一個實施例中，步驟(2)中的次氯酸鈉溶液為有效氯5.2％以上的次氯酸鈉溶液，浸泡的時間約2-3min。

在本發(fā)明的一個實施例中，步驟(4)中微型臺鉆的1.5mm鉆頭每次使用都要用無水酒精消毒，以免造成取樣時交叉感染。

在本發(fā)明的一個實施例中，在步驟(2.2)中碳氮穩(wěn)定同位素的測定步驟為：

烘干：將不同斷面的脊椎骨粉末放入-55℃冷凍干燥機中冷凍干燥，保證樣品的絕對干燥；

稱量：樣品粉末過100目篩，用百萬分之一電子天平稱量粉末3-4mg；

包埋：稱取的樣品粉末在錫舟中包埋，記錄包埋后重量。

通過上述技術方案，本發(fā)明的有益效果是：

本方法通過分析不同生長階段脊椎骨的碳氮穩(wěn)定同位素比值來分析鯊魚類的攝食生態(tài)，闡明鯊魚類在個體發(fā)育過程中的營養(yǎng)結構變化、食性轉換以及個體大小與營養(yǎng)級之間的關聯(lián)性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術中的技術方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明脊椎骨鉆孔結構示意圖。

具體實施方式

為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面進一步闡述本發(fā)明。

本發(fā)明公開了一種利用脊椎骨研究鯊魚類不同生活史階段攝食生態(tài)的方法，包括鯊魚類生活史過程中脊椎骨椎體斷面提取和碳氮穩(wěn)定同位素比值測定。

鯊魚類生活史過程中脊椎骨椎體斷面提取的步驟如下：

(1)提取：取第一背鰭處的1節(jié)脊椎，包含3-5塊脊椎骨，冷凍保存，此處的脊椎骨較其他區(qū)域的脊椎骨體積更大，以保證微取樣時有足夠的樣品量來完成穩(wěn)定同位素測定。

(2)清洗：將脊椎置于沸水中浸泡5-10min，用手術刀從脊椎中取下一塊脊椎骨，浸泡于有效氯5.2％以上的次氯酸鈉溶液中約2-3min，除去表面多余的結締組織，隨后置于流動水中沖洗5min，除去表面的次氯酸鈉溶液，自然風干；此處次氯酸鈉溶液的濃度和浸泡時間均是經過創(chuàng)造性勞動得到的，當?shù)陀谏鲜鰸舛群徒輹r間時，脊椎骨表面多余的結締組織則不能完全去除，當高于上述濃度和浸泡時間時，脊椎骨本身容易受到腐蝕；上述兩種情況均會影響碳氮穩(wěn)定同位素比值測定的結果。

(3)測量：采用電子游標卡尺測量經(2)處理過的脊椎骨直徑。

(4)微取樣：用小型臺虎鉗固定住脊椎骨，將稱量紙折疊成圓筒狀固定在脊椎骨正下方，利用微型臺鉆的1.5mm鉆頭由脊椎骨最外側向椎骨中心位置按照2mm距離鉆孔獲取脊椎骨粉末；微型臺鉆的1.5mm鉆頭每次使用都要用無水酒精消毒，以免造成取樣時交叉感染；

重復以上步驟，直至脊椎骨核心部分直徑約為2mm，最后一次鉆取脊椎骨斷面粉末，依據脊椎骨大小的不同可得到若干個脊椎骨不同斷面的樣品粉末(參見圖1所示)。

碳氮穩(wěn)定同位素比值測定的步驟如下：

(1.1)標樣選取：分別選取國際原子能機構的usgs24(-16.049‰v-pdb)和usgs26(53.7‰v-n2)標準品作為碳和氮穩(wěn)定同位素的校準。

(2.2)碳氮穩(wěn)定同位素的測定：在元素分析-穩(wěn)定同位素比質譜儀上對不同斷面的樣品進行碳氮穩(wěn)定同位素的測定；測定步驟為：

烘干：將不同斷面的脊椎骨粉末放入-55℃冷凍干燥機中冷凍干燥，保證樣品的絕對干燥；

稱量：樣品粉末過100目篩，用百萬分之一電子天平稱量粉末3-4mg；

包埋：稱取的樣品粉末在錫舟中包埋，記錄包埋后重量。

(3.3)根據碳氮穩(wěn)定同位素值確定鯊魚類不同生活史階段的攝食生態(tài)，營養(yǎng)級每增加一級碳穩(wěn)定同位素升高0.5‰-1.5‰，氮穩(wěn)定同位素升高3‰-4‰。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。