本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種玉米赤霉烯酮毒素的檢測方法。

背景技術(shù)：

玉米赤霉烯酮(zearaleuoue，zen)，又名f-2毒素，主要是由禾谷鐮刀菌(fusariumgramiuearum)和黃色鐮刀菌(f.culmorum)產(chǎn)生的一種非甾體真菌毒素。zen具有較強(qiáng)生殖毒性和致畸作用。玉米赤霉烯酮首先從赤霉病玉米中分離，廣泛存在于霉變的玉米、高粱、小麥、燕麥、大麥等谷物以及奶制品中，是世界上污染范圍最廣的一種鐮刀菌毒素。玉米赤霉烯酮污染飼料和食品后，不僅使農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)受到嚴(yán)重影響，而且還會帶來嚴(yán)重的食品安全問題，威脅人體健康。由于玉米赤霉烯酮對人體和動物產(chǎn)生的危害，目前己有很多國家制訂了食品中米赤霉烯酮的限量標(biāo)準(zhǔn)。澳大利亞規(guī)定谷物中玉米赤霉烯酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不能超過50μg/kg，我國規(guī)定原糧和成品糧包括禾谷、豆類等中玉米赤霉烯酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不能超過60μg/kg，飼料中玉米赤霉烯酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得超過500μg/kg。

植物油作為一種日常食用的糧油副食品已經(jīng)進(jìn)入千家萬戶。目前對于植物油中玉米赤霉烯酮毒素含量的檢測還沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)，而食用油中玉米赤霉烯酮毒素已成為影響我國食品安全的重要因素，能否快速、準(zhǔn)確地檢測玉米油中玉米赤霉烯酮毒素含量也成為我國食用油出口檢驗檢疫的主要內(nèi)容。因此，建立快速、高效、低成本的玉米赤霉烯酮毒素的檢測方法是目前迫在眉睫的事情。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對本領(lǐng)域存在的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法。

本發(fā)明的另一目的在于提出所述方法的應(yīng)用。

實現(xiàn)本發(fā)明上述目的的技術(shù)方案為：

一種快速檢測植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，將植物油與甲醇溶液混勻，反應(yīng)后離心或者沉降分離，取上清液，利用玉米赤霉烯酮毒素試紙條進(jìn)行檢測。

玉米赤霉烯酮易溶于乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有機(jī)溶劑，發(fā)明人對有機(jī)溶劑進(jìn)行了比較分析，其中甲醇應(yīng)用于植物油的提取效率為最優(yōu)。

其中，所述甲醇溶液的質(zhì)量濃度為60～100％，植物油與甲醇溶液的質(zhì)量體積比為1g：8～10ml。

優(yōu)選地，所述甲醇溶液的質(zhì)量濃度為70％，用分析純或色譜純級的甲醇配制而成。

更優(yōu)選地，植物油與甲醇溶液的質(zhì)量體積比為1g：9ml

其中，將植物油與甲醇溶液混合，在室溫下渦旋混合1～2min，再以8000～15000rpm轉(zhuǎn)速離心分離4～8min，取上清液。

更優(yōu)選地，將植物油與甲醇溶液混合，在室溫下渦旋混合2min，再以10000rpm轉(zhuǎn)速離心分離5min，取上清液。

其中，取100μl上清液與1ml稀釋緩沖液混合，混合20s后用玉米赤霉烯酮毒素試紙條進(jìn)行檢測；所述稀釋緩沖液為玉米赤霉烯酮毒素試紙條配套的稀釋緩沖液。

玉米赤霉烯酮毒素試紙條是市售產(chǎn)品，例如可購自中檢環(huán)貿(mào)公司，其產(chǎn)品配套有稀釋緩沖液。

本發(fā)明所述的方法在植物油中玉米赤霉烯酮毒素的檢測中的應(yīng)用，所述植物油為玉米油、小麥胚芽油、大豆油、大米胚芽油中的一種、或其混合物。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明提出的檢測方法，利用玉米赤霉烯酮易溶于乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有機(jī)溶劑的理化性質(zhì)，發(fā)明了一種更為簡便的檢測植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，有利于推動油以及植物油業(yè)的發(fā)展。經(jīng)試驗證明，本發(fā)明的方法能夠快速檢測植物油中玉米赤霉烯酮毒素，且效率高、耗時少、成本低、回收率高(<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，符合實驗室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)，另外，此方法也極大簡便了油及其相關(guān)產(chǎn)品中玉米赤霉烯酮毒素的檢測，具有極高的推廣和應(yīng)用價值。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。

下述實施例中的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品是sigma公司(美國)的產(chǎn)品。分析級甲醇是北化公司(中國)的產(chǎn)品。色譜級的甲醇和乙腈是fisher公司(美國)的產(chǎn)品。

如無特別說明，實施例中的手段均為本領(lǐng)域所公知的技術(shù)手段。

其中，加標(biāo)植物油樣品的制備方法如下：

用移液器準(zhǔn)確量取1g已充分混勻的植物油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，分別加入0.1ml2000ng/ml，1500ng/ml，1000ng/ml玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液，室溫渦旋2min后待測。

實施例1：

分別利用試紙條和免疫親和柱檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。具體步驟如下：

1、利用試紙條檢測玉米油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量

用移液器準(zhǔn)確量取1g已充分混勻的玉米油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，加入9ml70％分析級甲醇(用分析級甲醇配的溶液)，室溫渦旋2min后，10000rpm離心5min，靜置取上清100μl至2ml離心管內(nèi)，加入1ml稀釋緩沖液，上下顛倒20s混勻后，用試紙條進(jìn)行毒素含量檢測。玉米油樣品重復(fù)3次，取平均值。

2、利用免疫親和柱檢測玉米油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量

用移液器準(zhǔn)確量取4g已充分混勻的玉米油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，加入21ml84％色譜級乙腈，室溫渦旋2min后，10000rpm離心5min，靜置取上清3ml至50ml離心管內(nèi)，加入25mlpbs緩沖液，上下顛倒20s混勻后，用免疫親和柱進(jìn)行毒素含量檢測。采用高效液相色譜法(hplc)對樣品液進(jìn)行高效液相色譜分析，以外標(biāo)法定量進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。玉米油樣品重復(fù)3次，取平均值。

高效液相色譜法條件：色譜柱：agilenttc-c18，4.6×250mm，5μm；流動相：乙腈/水(60/40，v/v)；熒光檢測器：安捷倫g1321；檢測波長：274nm和440nm；流速：1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量：50μl。收集與玉米赤霉烯酮毒素標(biāo)準(zhǔn)品保留時間(保留時間約前后0.05min)一致的峰的洗脫液，得到原始玉米油樣品中的玉米赤霉烯酮毒素含量。

檢測結(jié)果如表1所示。其中，毒素含量(ng/ml)為分別利用試紙條和免疫親和柱檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素含量的檢測值；平均含量(ng/ml)為毒素含量的平均值；回收率(％)為利用試紙條檢測植物油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量平均值(ng/ml)/利用免疫親和柱檢測植物油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量平均值(ng/ml)*100％。

表1植物油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量檢測

實施例2

分別利用試紙條和免疫親和柱檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。與實施例1不同的參數(shù)為：

用移液器準(zhǔn)確量取1g已充分混勻的玉米油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，分別加入1ml、2ml、5ml70％分析級甲醇，利用試紙條檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每個樣品做三次平行。

檢測結(jié)果表明，玉米油樣品與70％分析級甲醇，1：1，2：1，5：1(質(zhì)量體積比g：ml)的回收率平均分別為35.01％，48.20％，61.26％。

用移液器準(zhǔn)確量取1g已充分混勻的玉米油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，分別加入5ml70％分析級甲醇和乙腈，利用試紙條檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每個樣品做三次平行。

檢測結(jié)果表明，玉米油樣品與70％分析級甲醇和乙腈的回收率平均分別為61.26％和38.51％。

實施例3

分別利用試紙條和免疫親和柱檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。與實施例1不同的參數(shù)為：

用移液器準(zhǔn)確量取1g已充分混勻的玉米油樣品，置于50ml離心管內(nèi)，分別加入9ml100％，9ml85％分析級甲醇溶液(用分析級甲醇配制)，利用試紙條檢測植物油樣品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每個樣品做三次平行。

檢測結(jié)果表明，玉米油樣品與100％、85％甲醇的回收率平均分別為72.14％，68.23％。

實施例4利用試紙條檢測加標(biāo)植物油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量

取1g加標(biāo)玉米油樣品，加入9ml70％分析級甲醇，室溫渦旋2min后，10000rpm離心5min，靜置取上清100μl至2ml離心管內(nèi)，加入1ml稀釋緩沖液，上下顛倒20s混勻后，用試紙條進(jìn)行毒素含量檢測。加標(biāo)玉米油樣品重復(fù)3次，取平均值。

檢測結(jié)果如表2所示。其中，實際含量(ng/ml)為玉米油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量的實際平均檢測值；理論含量(ng/ml)為玉米油樣品中分別加入0，1000ng/ml，1500ng/ml，2000ng/ml玉米赤霉烯酮毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的理論含量；回收率(％)為實際含量/理論含量*100％。

當(dāng)加標(biāo)濃度為0時，玉米赤霉烯酮毒素含量為183.02ng/ml(即為原始玉米油樣品中的玉米赤霉烯酮毒素平均含量)；當(dāng)加標(biāo)濃度為1000ng/ml時，玉米赤霉烯酮毒素含量為273.02ng/ml，理論含量為283.02ng/ml(100.00ng/ml+183.02ng/ml)，回收率為96.47％(273.02ng/ml/283.02ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為1500ng/ml時，玉米赤霉烯酮毒素含量為316.49ng/ml，理論含量為333.02ng/ml(150.00ng/ml+183.02ng/ml)，回收率為95.04％(316.49ng/ml/333.02ng/ml)。當(dāng)加標(biāo)濃度為2000ng/ml時，玉米赤霉烯酮毒素含量為396.00ng/ml，理論含量為382.02ng/ml(200.00ng/ml+383.02ng/ml)，回收率為103.39％(396.00ng/ml/382.02ng/ml)。以上加標(biāo)回收率均符合實驗室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測標(biāo)準(zhǔn)(gb/t27404)(加標(biāo)濃度<100ng/ml，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/ml，回收率范圍在80-110％)，說明本發(fā)明檢測玉米油中玉米赤霉烯酮毒素的方法是可行的，且該方法更加簡便。

表2加標(biāo)玉米油樣品中玉米赤霉烯酮毒素含量檢測

盡管本發(fā)明的內(nèi)容已經(jīng)通過上述優(yōu)選實施例作了詳細(xì)介紹，但應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到上述的描述不應(yīng)被認(rèn)為是對本發(fā)明的限制。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，從本專利公開內(nèi)容及常識直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的一些變形，或現(xiàn)有技術(shù)的替代，以及特征的等效變化或修飾，都能實現(xiàn)本專利描述的功能和效果，均屬本專利保護(hù)范圍。