本發(fā)明涉及明涉及紡織品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，進(jìn)一步涉及山羊絨與細(xì)羊毛的分子生物學(xué)鑒別與定量技術(shù)，具體涉及一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法。

背景技術(shù)：

山羊絨(簡稱羊絨)是山羊外表皮層粗毛根部的一些薄薄的細(xì)絨，其纖維細(xì)、強(qiáng)度大、光澤好、保暖性強(qiáng)，由于產(chǎn)量稀少，因此價(jià)格也比較貴，是目前世界紡織原料中品質(zhì)最好、價(jià)格最高的原料之一，被人們譽(yù)為“纖維寶石”、“軟黃金”。細(xì)羊毛是綿羊身上一層類似于羊絨特質(zhì)的很軟的細(xì)毛，因此也被稱為“細(xì)支羊毛”“拉細(xì)羊毛”。綿羊是沒有絨毛的，細(xì)羊毛雖然特性與山羊絨極為相似，但并不是真正的羊絨，二者的區(qū)別主要體現(xiàn)在其纖維的長度和細(xì)度上面。

山羊絨的纖維比較短，纖維細(xì)度比較細(xì)，絨毛直徑一般為14～17μm，長度為32～40mm；而細(xì)羊毛的纖維細(xì)度就比較粗，其纖維長度也會(huì)長一些，毛的細(xì)度與毛的支數(shù)相關(guān)，常見的有70支，直徑一般為18～20μm，長度約為55～100mm。由此可見，盡管其來源不同、物質(zhì)基礎(chǔ)也存在差異，但在表觀形態(tài)層面極為近似，利用常規(guī)的觀察方法很難區(qū)分，即使在顯微鏡觀測(cè)條件下也需要細(xì)致比對(duì)才能正確判斷。

由于山羊絨紡織性能優(yōu)異、產(chǎn)量稀少、價(jià)格較高，在巨大的經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使下，山羊絨摻假偽造現(xiàn)象不斷，近年來摻假手段越來越復(fù)雜，所用的摻假原料極易與山羊絨纖維混淆，其中細(xì)羊毛就是常見的摻假原料之一。細(xì)羊毛織物與山羊絨織物在形態(tài)和手感上都極難分辨，因此對(duì)山羊絨與細(xì)羊毛的準(zhǔn)確鑒定勢(shì)在必行。

目前對(duì)山羊絨產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)方法以物理性的顯微觀察法為主，由檢驗(yàn)人員對(duì)纖維的細(xì)度、異型纖維率、含雜率、長度、強(qiáng)度、伸長度等進(jìn)行檢驗(yàn)(參見《關(guān)于山羊絨國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定意見》)。這類檢測(cè)方法需要檢驗(yàn)人員接觸過大量的山羊絨樣品，積累數(shù)十年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，主觀性強(qiáng)。除了最常用的光學(xué)顯微鏡檢測(cè)法，國外研究者也嘗試過使用掃描電鏡觀察紡織纖維的表面形態(tài)和精細(xì)結(jié)構(gòu)，但這種方法實(shí)驗(yàn)成本高、操作繁瑣，而且無法區(qū)分與山羊絨纖維形、結(jié)構(gòu)非常近似的其他種類纖維，其中就以細(xì)羊毛的混淆作用最為突出。另外，研究者也通過分析纖維材料中的脂質(zhì)分子、dna序列差異或者制備特異性識(shí)別山羊絨的抗體來鑒別其成分，這類探索性的方法往往受到生產(chǎn)過程中多種化學(xué)處理(比如漂白、染色)的干擾，使得結(jié)果出現(xiàn)偏差。

除了上述定性檢測(cè)之外，確定紡織品中山羊絨含量對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)評(píng)價(jià)更為重要。為了獲得紡織品中的山羊絨含量，首要的技術(shù)問題是確定一種有效的檢測(cè)目標(biāo)，由于紡織品中廣泛存在其他蛋白成分，尤其存在諸如細(xì)羊毛等與山羊絨微觀結(jié)構(gòu)較為類似的蛋白，如果檢測(cè)目標(biāo)選擇不合適則很容易影響檢測(cè)結(jié)果。此外，標(biāo)志物的檢測(cè)信號(hào)與山羊絨實(shí)際含量間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是否穩(wěn)定、實(shí)驗(yàn)操作難度乃至實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性等技術(shù)問題都有待突破。盡管現(xiàn)有技術(shù)的研究者做過諸多嘗試，但截至目前尚缺乏一種有效的定量方法。

在獲得了理想標(biāo)志物的基礎(chǔ)上，從待測(cè)樣品出發(fā)如何進(jìn)行檢測(cè)也影響著結(jié)果的準(zhǔn)確性。在以測(cè)定待測(cè)樣品中標(biāo)志物肽段為手段的檢測(cè)方法中，蛋白酶解是重要環(huán)節(jié)之一。現(xiàn)有技術(shù)中，采用限制性內(nèi)切酶對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解，是采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)(或多肽)標(biāo)志物鑒定的重要預(yù)處理方法之一。該方法技術(shù)成熟度高、重復(fù)性好。最常用的蛋白酶為胰蛋白酶，其可以特異性的自賴氨酸和精氨酸兩個(gè)位點(diǎn)處切斷蛋白質(zhì)氨基酸序列。蛋白質(zhì)構(gòu)成中上述兩種氨基酸的含量及其在蛋白質(zhì)序列中的分布，甚至蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)都會(huì)對(duì)胰蛋白酶酶解的效果具有直接的影響。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨與細(xì)羊毛難以區(qū)分的技術(shù)問題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨織物與細(xì)羊毛織物難以區(qū)分。

本發(fā)明要解決的再一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中難以確定紡織品中山羊絨成分的含量。

本發(fā)明要解決的又一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨含量檢測(cè)操作較繁瑣。

為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測(cè)樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量或seqidno2的肽段含量；

3)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量或seqidno4的肽段含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno1的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測(cè)得到的序列為seqidno1的肽段含量確定出待測(cè)樣品中山羊絨含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno2的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測(cè)得到的序列為seqidno2的肽段含量確定出待測(cè)樣品中山羊絨含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟3)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中細(xì)羊毛含量與序列為seqidno3的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測(cè)得到的序列為seqidno3的肽段含量確定出待測(cè)樣品中細(xì)羊毛含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟3)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中細(xì)羊毛含量與序列為seqidno4的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測(cè)得到的序列為seqidno4的肽段含量確定出待測(cè)樣品中細(xì)羊毛含量。

作為優(yōu)選，步驟1)包括以下步驟：將待測(cè)樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提??；棄沉淀、取上清液待用。

作為優(yōu)選，步驟2)和步驟3)所述的檢測(cè)，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

作為優(yōu)選，所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入二硫鍵還原劑孵育，而后加入巰基封閉試劑，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于35～39℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

作為優(yōu)選，所述二硫鍵還原劑是二硫蘇糖醇或三(2-羧乙基)膦。在此優(yōu)選技術(shù)方案中，二硫蘇糖醇、三(2-羧乙基)膦僅是效果較佳的優(yōu)選例，在本發(fā)明的技術(shù)思路下，其他常規(guī)的二硫鍵還原劑同樣可以用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。

作為優(yōu)選，所述巰基封閉試劑是碘乙酰胺或碘乙酸。在此優(yōu)選技術(shù)方案中，碘乙酰胺、碘乙酸僅是效果較佳的優(yōu)選例，在本發(fā)明的技術(shù)思路下，其他常規(guī)的巰基封閉試劑同樣可以用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。

作為優(yōu)選，步驟2)所述檢測(cè)是氨基酸序列測(cè)定。

作為優(yōu)選，步驟2)所述生物質(zhì)譜分析是通過色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)的。

本發(fā)明中所述的山羊絨，是指生長在山羊外表皮層，掩在山羊粗毛根部的一層薄薄的細(xì)絨，其應(yīng)當(dāng)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的常規(guī)含義；其具體限定范圍可依據(jù)gb18267-2013所規(guī)定的山羊絨定義來確定。本發(fā)明所述的細(xì)羊毛，是指綿羊身上一層類似于羊絨特質(zhì)的很軟的細(xì)毛，其具體限定為：產(chǎn)自與綿羊體表的、直徑為18～20μm、長度為55～100mm的羊毛。

在以上技術(shù)方案中，序列為seqidno1和seqidno2的肽段被確定為山羊絨的標(biāo)志性肽段，當(dāng)利用液相色譜-生物質(zhì)譜方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)待測(cè)物總蛋白中具有上述兩肽段之一時(shí)，則證明待測(cè)物中含有山羊絨成分，反之則不含有山羊絨成分。同時(shí)，序列為seqidno3和seqidno4的肽段被確定為細(xì)羊毛的標(biāo)志性肽段，當(dāng)利用液相色譜-生物質(zhì)譜方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)待測(cè)物總蛋白中具有上述兩肽段之一時(shí)，則證明待測(cè)物中含有細(xì)羊毛成分，反之則不含有細(xì)羊毛成分。進(jìn)一步的，可以利用待測(cè)物總蛋白中以上標(biāo)志性肽段的含量反應(yīng)其中山羊絨或細(xì)羊毛的含量。

其中，確定山羊絨含量與標(biāo)志性肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以是通過以下方法實(shí)現(xiàn)的：取山羊絨標(biāo)準(zhǔn)品，與其他紡織品混合成為其中含有5％、10％、20％、30％、50％、70％等不同含量山羊絨的待測(cè)物，再利用上述已知山羊絨含量的待測(cè)物執(zhí)行目標(biāo)肽段含量檢測(cè)，從而得到山羊絨含量與目標(biāo)肽段含量之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，進(jìn)而可以繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線以后，可以將某待測(cè)物的檢測(cè)結(jié)果帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式求得該待測(cè)物中的山羊絨含量。在以上標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用中，應(yīng)當(dāng)注意規(guī)避系統(tǒng)性誤差。

本發(fā)明基于實(shí)驗(yàn)手段確定了山羊絨的標(biāo)志性肽段seqidno1、seqidno2以及細(xì)羊毛的標(biāo)志性肽段seqidno3、seqidno4，上述標(biāo)志物分別對(duì)山羊絨和細(xì)羊毛具有良好的特異性，若上述肽段能夠通過生物質(zhì)譜方法檢出則可以相應(yīng)證明山羊絨或細(xì)羊毛成分的存在，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不會(huì)受到其他常規(guī)紡織品成分的影響。同時(shí)，由于其穩(wěn)定性良好，不會(huì)受常規(guī)織物處理方法(如漂白、染色等)的影響，因此檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定。

除了定性檢測(cè)之外，可以利用上述標(biāo)志性肽段的含量進(jìn)行定量檢測(cè)，肽段含量與山羊絨含量間具有較好的線性關(guān)系，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。本發(fā)明以指向性優(yōu)異的標(biāo)志性肽段為基礎(chǔ)開發(fā)了針對(duì)山羊絨與細(xì)羊毛的鑒別方法，可用于混紡織物中山羊絨和細(xì)羊毛的定性、定量分析，其操作簡便、準(zhǔn)確有效，具有突出的推廣前景。

此外，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)采用胰蛋白酶對(duì)所涉及的毛絨纖維蛋白(主要為角蛋白keratin及角蛋白相關(guān)蛋白keratinassociateprotein，其性質(zhì)較普通蛋白質(zhì)具有較大差異)進(jìn)行酶解處理，雖可以獲得一定效果，但可供進(jìn)行纖維種屬鑒別的標(biāo)志性肽段數(shù)量較少，不利于混紡織物中山羊絨和細(xì)羊毛鑒定分析方法的開發(fā)。故而本發(fā)明在胰蛋白酶基礎(chǔ)上聯(lián)合使用金黃色葡萄球菌v8蛋白酶進(jìn)行共同酶解處理。在該酶解條件下，可以特異性的自賴氨酸、精氨酸和谷氨酸三個(gè)位點(diǎn)處切斷蛋白質(zhì)氨基酸序列。從而極大的擴(kuò)展了可供進(jìn)行纖維種屬鑒別的標(biāo)志性肽段數(shù)量，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法所獲得的標(biāo)志性候選肽段數(shù)量可增加2-3倍，經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，最終選擇四條肽段用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)細(xì)羊毛纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)羊毛纖維混合物的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例2中山羊絨纖維含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖6是本發(fā)明實(shí)施例3中代號(hào)為s1的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例3中代號(hào)為s2的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果圖；

在以上附圖1～7中，所有可檢出的標(biāo)準(zhǔn)肽段均標(biāo)注在譜圖中，未標(biāo)注表示該標(biāo)準(zhǔn)肽段未被檢出。

具體實(shí)施方式

以下將對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。

以下實(shí)施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情況下可允許數(shù)量有一定的變動(dòng)。因此，用“大約”、“左右”等語言所修正的數(shù)值不限于該準(zhǔn)確數(shù)值本身。在一些實(shí)施例中，“大約”表示允許其修正的數(shù)值在正負(fù)百分之十(10％)的范圍內(nèi)變化，比如，“大約100”表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在“大約第一數(shù)值到第二數(shù)值”的表述中，大約同時(shí)修正第一和第二數(shù)值兩個(gè)數(shù)值。在某些情況下，近似性語言可能與測(cè)量儀器的精度有關(guān)。

除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實(shí)施例1(山羊絨、細(xì)羊毛組成鑒別方法的特異性實(shí)驗(yàn))

一、材料

標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)細(xì)羊毛纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維樣品由天津紡織工程研究院提供。

二、方法

分別取山羊絨纖維標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行混合。將上述混合樣品及標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)細(xì)羊毛纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維樣品作為受試物，提取總蛋白質(zhì)并采用生物質(zhì)譜分析技術(shù)檢測(cè)羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr和細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr。

(1)自紡織纖維樣品中提取蛋白：

將紡織纖維樣品剪碎，乙醇浸泡，氯仿-甲醇溶液浸泡。濾去浸泡溶液后干燥纖維樣品，加入蛋白提取溶液提取。過濾，濾液離心，取上清液用丙酮沉淀蛋白。

(2)胰蛋白酶與金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解處理：

取蛋白，用8m尿素、100mm三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液，或8m尿素、50-100mm碳酸氫銨溶液溶解。取蛋白溶液30μl加二硫蘇糖醇至終濃度為10-20mm，37℃，孵育4小時(shí)。加入碘乙酰胺使終濃度為40mm，避光孵育40分鐘。再加入二硫蘇糖醇使終濃度為10mm。加入50mm碳酸氫銨溶液稀釋至300μl，按蛋白：酶＝1：50(w/w)加入胰蛋白酶；按蛋白：酶＝1：40(w/w)加入金黃色葡萄球菌v8蛋白酶，37℃孵育4小時(shí)。再按蛋白：酶＝1:100(w/w)加入胰蛋白酶；按蛋白：酶＝1:40(w/w)，加入金黃色葡萄球菌v8蛋白酶，37℃孵育12小時(shí)。加入甲酸至ph＝3，終止酶切。

取c18脫鹽柱進(jìn)行脫鹽。依次次加入乙腈，乙腈-水-甲酸(70：29.5：0.5，v/v/v)溶液及0.5％甲酸水溶液活化并平衡柱子。加入樣本，流過c18脫鹽柱。加入0.5％甲酸水溶液洗滌柱子，洗掉雜質(zhì)。最后用0.2ml乙腈洗脫，收集洗脫液。用冷凍離心濃縮儀干燥，-80℃保存待分析。

(3)生物質(zhì)譜分析

將上述處理后的紡織纖維蛋白的酶解樣品注入色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測(cè)，利用生物質(zhì)譜分析方法獲得羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr和細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr的檢測(cè)信號(hào)。

三、結(jié)果

如圖1～4所示，山羊絨成分標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr僅在山羊絨標(biāo)準(zhǔn)品(圖1)及含山羊絨纖維的混合樣品(圖3)中鑒定到，細(xì)羊毛纖維以及兔絨纖維的存在對(duì)山羊絨的鑒定結(jié)果未產(chǎn)生干擾(圖2，圖4)；細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr僅在細(xì)羊毛標(biāo)準(zhǔn)品(圖2)及含細(xì)羊毛纖維的混合樣品(圖3)中鑒定到，山羊絨纖維以及兔絨纖維的存在對(duì)細(xì)羊毛的鑒定結(jié)果未產(chǎn)生干擾(圖1，圖4)。因此本發(fā)明的山羊絨與細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段檢測(cè)方法顯示很好的特異性。

實(shí)施例2(建立山羊絨成分標(biāo)志肽段定量標(biāo)準(zhǔn)曲線)

一、材料

山羊絨纖維標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)樣品。

二、方法

分別取標(biāo)準(zhǔn)山羊絨樣品按不同比例分別與細(xì)羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)樣品混合，獲得山羊絨含量分別為5％、10％、25％、50％、75％、100％的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品，提取總蛋白質(zhì)，加入等量的牛血清白蛋白(bsa)，以牛血清白蛋白肽段lvneltefak作為內(nèi)標(biāo)，檢測(cè)山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe相對(duì)于內(nèi)標(biāo)肽段的質(zhì)譜信號(hào)，根據(jù)不同比例混合樣本中該肽段的不同質(zhì)譜信號(hào)，建立用于實(shí)際樣本定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

三、結(jié)果

如圖5及表1所示，基于對(duì)山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe的分析，山羊絨定量標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為5％～100％，線性相關(guān)系數(shù)(r2)在0.99以上。上述結(jié)果表明，建立的山羊絨定量檢測(cè)方法的靈敏度及線性范圍已足夠滿足羊絨紡織行業(yè)的質(zhì)量檢測(cè)要求。

表1山羊絨成分標(biāo)志肽段標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

實(shí)施例3(供試材料中山羊絨、細(xì)羊毛的鑒定分析)

一、材料

市售羊絨衣料s1、s2。經(jīng)纖維細(xì)度儀鑒定s1、s2的山羊絨比例約為70～85％

二、方法

分別處理各供試品，提取總蛋白質(zhì)，加入等量的牛血清白蛋白(bsa)，以牛血清白蛋白肽段lvneltefak作為內(nèi)標(biāo)，檢測(cè)山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe和細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr或shsawsilpr相對(duì)于內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜信號(hào)，根據(jù)鑒定結(jié)果判斷供試品種是否含有山羊絨或細(xì)羊毛以及山羊絨的相關(guān)含量。

三、結(jié)果

如圖6～7所示，供試品s1、s2中山羊絨成分標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe均為鑒定陽性，說明供試品s1、s2中均含有山羊絨成分；供試品s1、s2中細(xì)羊毛成分標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr和shsawsilpr均為鑒定陰性，說明供試品s1、s2中均不含有細(xì)羊毛成分或含量較低，未達(dá)到檢測(cè)下限。供試品s1、s2中山羊絨檢測(cè)結(jié)果列于表2，可見檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好且供試品s1、s2山羊絨含量測(cè)定與用纖維細(xì)度儀鑒定結(jié)果一致。

表2受試紡織衣料樣品中山羊絨含量檢測(cè)結(jié)果

實(shí)施例4

一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測(cè)樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量；

3)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno1的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測(cè)得到的序列為seqidno1的肽段含量確定出待測(cè)樣品中山羊絨含量。

還包括以下步驟5)：利用與步驟3)相同的檢測(cè)方法確定紡織品中細(xì)羊毛含量與序列為seqidno3的肽段含量之間對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測(cè)得到的序列為seqidno3的肽段含量確定出待測(cè)樣品中細(xì)羊毛含量。

步驟1)包括以下步驟：將待測(cè)樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提??；棄沉淀、取上清液待用。

步驟2)和步驟3)所述的檢測(cè)，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入三(2-羧乙基)膦孵育，而后加入碘乙酸，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于35℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

實(shí)施例5

一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測(cè)樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno2的肽段含量；

3)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno4的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟2)和步驟3)所述的檢測(cè)，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入二硫鍵還原劑孵育，而后加入巰基封閉試劑，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于39℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

最終檢測(cè)結(jié)果顯示，待測(cè)樣品總蛋白中序列為seqidno2的肽段處具有明顯的吸收峰，而序列為seqidno4的肽段處沒有吸收峰，從而表明該待測(cè)樣品中含有山羊絨成分而不含有細(xì)羊毛成分。

實(shí)施例6

一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測(cè)樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量；

3)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno4的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟1)包括以下步驟：將待測(cè)樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；棄沉淀、取上清液待用。

步驟2)和步驟3)所述的檢測(cè)，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

最終檢測(cè)結(jié)果顯示，待測(cè)樣品總蛋白中序列為seqidno1的肽段處、序列為seqidno4的肽段處各自具有明顯的吸收峰，從而表明該待測(cè)樣品中同時(shí)含有山羊絨成分和細(xì)羊毛成分。

實(shí)施例7

一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測(cè)樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno2的肽段含量；

3)檢測(cè)步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量。

最終檢測(cè)結(jié)果顯示，待測(cè)樣品總蛋白中序列為seqidno2的肽段處、序列為seqidno3的肽段處均沒有吸收峰，從而表明該待測(cè)樣品中既不含有山羊絨成分也不含有細(xì)羊毛成分。

以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

sequencelisting

<110>中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所

<120>一種鑒別山羊絨與細(xì)羊毛的方法

<160>4

<210>1

<211>12

<212>prt

<213>天然序列（山羊絨標(biāo)志性肽段）

<400>1

yavpvvtvsspe12

<210>2

<211>9

<212>prt

<213>天然序列（山羊絨標(biāo)志性肽段）

<400>2

cgpcssyvr9

<210>3

<211>24

<212>prt

<213>天然序列（細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段）

<400>3

tcceptvcqstcyqptpcvsspvr24

<210>4

<211>10

<212>prt

<213>天然序列（細(xì)羊毛標(biāo)志性肽段）

<400>4

shsawsilpr10