本發(fā)明涉及細(xì)胞檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種提取游離組織上細(xì)胞的方法及試劑盒。
背景技術(shù)：
：在診斷細(xì)胞學(xué)或臨床細(xì)胞學(xué)中，脫落細(xì)胞檢查就是提取病人基因組，從細(xì)胞形態(tài)上診斷疾病。目前提取基因組的方法是，利用類似注射器的結(jié)構(gòu)從患者體內(nèi)抽吸細(xì)胞組織制成石蠟組織，然后從石蠟組織切白片提取基因組。其存在的缺點(diǎn)是：1、會(huì)引入人為突變。2、對(duì)于某些疾病診斷所需的石蠟切片量大，例如像前列腺穿刺這類微量標(biāo)本10張白片可以提取的基因組不夠下游檢查用。3、過(guò)多的石蠟會(huì)干擾組織的基因組提取。4、絕大多數(shù)的rna已經(jīng)降解，導(dǎo)致下游檢測(cè)不能進(jìn)行或者檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種提取組織上粘附的游離細(xì)胞的方法及試劑盒。為此，本發(fā)明實(shí)施例提供了以下技術(shù)方案：一種提取游離細(xì)胞的方法，包括以下步驟：利用組織簽移動(dòng)穿刺針上的組織；將組織在a溶液中進(jìn)行涮洗，獲得游離細(xì)胞；將涮洗獲得的游離細(xì)胞在b溶液中進(jìn)行保存；所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩(wěn)定劑、雙蒸水的混合液，所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉、雙蒸水的混合液。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，1升a溶液中各成分的含量分別為：nacl＝8.5～9克，na2hpo4＝11～16克，kh2po4＝1～4克，穩(wěn)定劑＝0.2～0.7克，其余為雙蒸水；或者，1升b溶液中各成分的含量分別為：異硫氫酸胍＝9～14克，枸櫞酸鈉＝0.6～2.3克，穩(wěn)定劑＝0.5～1.5克，其余為雙蒸水。一種試劑盒，包括盒體，所述盒體內(nèi)設(shè)置有：第一溶液ep管，盛裝有a溶液，所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩(wěn)定劑、雙蒸水的混合液；第二溶液ep管，盛裝有b溶液，所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉、穩(wěn)定劑、雙蒸水的混合液；組織簽，用于移動(dòng)穿刺針上的組織，以提取組織上的游離細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，所述組織簽包括兩端封口的錐形實(shí)體，所述錐形實(shí)體上設(shè)置有凹凸齒，所述凹凸齒用于將游離組織液引入ep管內(nèi)。較優(yōu)地，上述試劑盒還包括定位墊，所述定位墊設(shè)置有分別用于放置第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽的第一定位槽、第二定位槽和第三定位槽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：1)提取游離細(xì)胞液后先利用a溶液進(jìn)行涮洗，再利用b溶液進(jìn)行保存，以備提取基因組，整個(gè)過(guò)程不會(huì)對(duì)基因組造成損傷，也不會(huì)干擾基因組的提取，rna也不會(huì)發(fā)生降解。2)現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于穿刺微量組織的表面粘附的細(xì)胞都是丟失在病理固定液中，通過(guò)本發(fā)明方法可以充分利用這部分細(xì)胞提取基因組，使得提取的細(xì)胞組織得到充分利用，也避免過(guò)多地從人體抽取細(xì)胞組織用于檢測(cè)，還為臨床微量珍貴標(biāo)本的利用(如前列腺穿刺和內(nèi)窺鏡所取標(biāo)本都使得及時(shí)檢測(cè)基因表達(dá)情況成為了可能。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。圖1為本發(fā)明實(shí)施例中組織簽的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例中試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中標(biāo)記：11-錐形實(shí)體；12-凹凸齒；10-盒體；20-定位墊；30-第一定位槽；40-第二定位槽；50-第三定位槽。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。通常在此處附圖中描述和示出的本發(fā)明實(shí)施例的組件可以以各種不同的配置來(lái)布置和設(shè)計(jì)。因此，以下對(duì)在附圖中提供的本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。本實(shí)施例中提供了一種提取游離細(xì)胞液的方法，該方法包括步驟：步驟一：利用組織簽移動(dòng)穿刺針上的組織，提取組織上的游離細(xì)胞液。請(qǐng)參閱圖1，組織簽可以采用圖1所示結(jié)構(gòu)，包括一中空的錐形實(shí)體11，錐形實(shí)體11上設(shè)置有4-5條凹凸齒12_，穿刺針上的組織通過(guò)該凹凸齒12被引入到ep管內(nèi)。作為一種應(yīng)用舉例，錐形實(shí)體11的細(xì)頭直徑為1mm，粗頭直徑為2.5～3mm，長(zhǎng)度為125mm。當(dāng)然地，可以根據(jù)不同使用場(chǎng)景設(shè)計(jì)錐形實(shí)體的具體結(jié)構(gòu)尺寸。步驟二：將提取的游離細(xì)胞液在a溶液中進(jìn)行涮洗。所述a溶液為包含nacl、na2hpo4、kh2po4、穩(wěn)定劑、雙蒸水(ddh2o)的混合液。根據(jù)研究，1升a溶液中各成分的含量分別為：nacl＝8.5～9克，na2hpo4＝11～16克，kh2po4＝1～4克，穩(wěn)定劑＝0.2～0.7克，其余為雙蒸水。a溶液中各成分的含量不同，對(duì)涮洗結(jié)果具有影響，如表1和表2所示。表1表2從表2中可以看出，當(dāng)1升a溶液中，nacl＝8.5克，na2hpo4＝13克，kh2po4＝3克，穩(wěn)定劑＝0.5克，其余為雙蒸水時(shí)游離細(xì)胞提取的效果最佳。步驟三：將涮洗獲得的游離細(xì)胞在b溶液中進(jìn)行保存，需要提取基因組時(shí)從b溶液中取出即可。所述b溶液為包含異硫氫酸胍、枸櫞酸鈉的混合液。根據(jù)研究，1升b溶液中各成分的含量分別為：異硫氫酸胍＝9～14克，枸櫞酸鈉＝0.6～2.3克，穩(wěn)定劑＝0.5～1.5克，其余為雙蒸水。尤其以1升b溶液中異硫氫酸胍為10克，枸櫞酸鈉為1克，穩(wěn)定劑為0.8克，其余為雙蒸水為佳，如表4所示。b溶液中各成分的含量不同，對(duì)游離細(xì)胞的保存效果具有影響，如表3和表4所示。表3表4性能第一組第二組第三組第四組第五組細(xì)胞活力78％91％64％50％40％總rna(ug)0.16110.41500.07260.05130.0558從表2中可以看出，當(dāng)1升a溶液中，nacl＝8.5克，na2hpo4＝13克，kh2po4＝3克，穩(wěn)定劑＝0.5克，其余為雙蒸水時(shí)游離細(xì)胞提取的效果最佳。通過(guò)本實(shí)施例所述方法，先利用a溶液涮洗組織提取游離細(xì)胞，再利用b溶液對(duì)游離細(xì)胞進(jìn)行保存，以備提取基因組，整個(gè)過(guò)程不會(huì)對(duì)基因組造成損傷，也不會(huì)干擾基因組的提取，rna也不會(huì)發(fā)生降解?，F(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于穿刺微量組織的表面細(xì)胞都是丟失在病理固定液中，通過(guò)本發(fā)明方法可以充分利用這部分細(xì)胞提取基因組，使得提取的細(xì)胞組織得到充分利用，也避免過(guò)多地從人體抽取細(xì)胞組織用于檢測(cè)，不僅最大限度節(jié)約基因資源，還為臨床內(nèi)窺鏡所取珍貴標(biāo)本獲得了及時(shí)檢測(cè)基因表達(dá)情況成為可能。相應(yīng)地，本實(shí)施例中還提供了一種試劑盒，包括盒體10，所述盒體10內(nèi)設(shè)置有：第一溶液ep管，盛裝有a溶液，a溶液用于涮洗組織，提取游離細(xì)胞；第二溶液ep管，盛裝有b溶液，b溶液用于保存提取的游離細(xì)胞；組織簽，例如圖1所示結(jié)構(gòu)，用于移動(dòng)穿刺針上的組織，將組織移動(dòng)到第一溶液ep管內(nèi)；定位墊20，也可稱之為防震墊，分別設(shè)置有用于放置第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽的第一定位槽30、第二定位槽40和和第三定位槽50，避免第一溶液ep管、第二溶液ep管、組織簽在運(yùn)輸過(guò)程中因振動(dòng)而損壞。以上所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12