本發(fā)明屬于水產(chǎn)品質(zhì)量安全技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法。
背景技術(shù)：
早在2000年左右，中國水產(chǎn)市場上出現(xiàn)了疑似“注膠”的冰鮮和冷凍大蝦，十多年來，這種注膠蝦已在沿海、內(nèi)地十多個(gè)城市被消費(fèi)者以微博或地方新聞媒體曝光，引起人們對食品安全問題的廣泛關(guān)注。但是，蝦中的“膠狀物質(zhì)”到底是什么？對人體有無危害？成為困擾執(zhí)法部門和消費(fèi)者的主要難題。由于檢測機(jī)構(gòu)需要有可依據(jù)的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)才能做出檢測判斷。但是，“注膠”蝦中的“膠體物質(zhì)”為未知樣品，對于檢測機(jī)構(gòu)來說屬于“盲樣”，無明確的檢測項(xiàng)目和檢測目的，因此檢測機(jī)構(gòu)難以對“膠體物質(zhì)”進(jìn)行定性檢測、鑒定。這也是十多年來，食品監(jiān)管部門無執(zhí)法依據(jù)而難以打擊“注膠蝦”行為的主要原因。
2017年1月，廣東省出現(xiàn)“注膠”蝦事件報(bào)導(dǎo)，廣東省食品藥品監(jiān)督管理局委托本發(fā)明申請人對疑似“注膠”的蝦樣品進(jìn)行應(yīng)急鑒定研究，經(jīng)過1個(gè)多月的研究，摸清了“注膠”蝦中膠體物質(zhì)的理化性質(zhì)、食用安全性、可能來源及膠體結(jié)構(gòu)和膠體品種，找到了一套精確鑒定、定量檢測“注膠”蝦中膠體物質(zhì)-瓊膠的技術(shù)方法，突破了十多年來一直困擾食品檢測機(jī)構(gòu)和食品監(jiān)督管理部門對“注膠”蝦中外來“膠體”-瓊膠無法檢測的技術(shù)難題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法，該方法能鑒別蝦體中是否含有外來膠體，以及該外來膠體的品種是否為瓊膠的情況。
本發(fā)明的上述技術(shù)問題是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法，包括以下步驟：
(一)、試驗(yàn)過程
(1)選取冰鮮蝦的蝦體組織，加入水，制備蝦體組織溶液；
(2)將步驟(1)中的蝦體組織溶液冷卻至室溫，觀察溶液凝膠情況；
(3)若步驟(2)中的溶液能夠自然形成凝膠，則將凝膠緩慢加熱至85℃以上，觀察凝膠融化情況；
(4)若步驟(3)中的凝膠能再次融化成溶液，則進(jìn)一步將溶液冷卻，并冷凍成全部結(jié)冰，并加入酒精，靜置后除去酒精，收集膠體，膠體同凝膠同樣條件下重復(fù)處理一次，得膠體，將膠體烘干；
(5)取步驟(4)中的烘干膠體，加入水，加熱至膠體完全溶解成膠體溶液，再加入鹽酸進(jìn)行沸水浴，接著再分別加入naoh溶液和堿性酒石酸銅溶液，水浴加熱，觀察溶液顏色變化；
(6)取步驟(4)中的烘干膠體，浸入i2溶液中浸染后，觀察膠體的染色情況，然后取出膠體，加水浸漬，觀察膠體顏色變化；
(二)試驗(yàn)結(jié)果判定
(1)若步驟(一)的步驟(2)中的溶液能夠自然形成凝膠，則將凝膠緩慢加熱至85℃以上，若凝膠在85℃以上才開始融化成溶液，則判定蝦體中含有外來膠體-瓊膠物質(zhì)；
若步驟(一)的步驟(2)中的溶液無凝膠或無凝膠復(fù)融現(xiàn)象，則加大蝦體組織取樣量重復(fù)試驗(yàn)，若試驗(yàn)結(jié)果仍無凝膠或凝膠復(fù)融現(xiàn)象，則判定蝦體中不含瓊膠物質(zhì)；
(2)若步驟(一)的步驟(5)中溶液顏色有磚紅色沉淀生成，則判定蝦體中的膠體為多糖類物質(zhì)；
(3)如步驟(一)的步驟(6)中膠體浸入i2溶液中浸染后，若先染成紫黑色，加水浸漬后又漸漸退為紫色，則判斷蝦體中膠體為瓊膠。
其中步驟(二)的步驟(1)中能判斷蝦體中“含有瓊膠物質(zhì)”，但僅憑此現(xiàn)象不能排除“膠體”中還混有“明膠”物質(zhì)。因?yàn)槊髂z也具有“凝膠—熱融化”這種熱可逆性質(zhì)，只不過凝膠溫度和融化溫度與瓊膠有所不同。
步驟(二)的步驟(2)中能確定膠體為多糖類物質(zhì)，瓊膠屬于多糖類物質(zhì)，而明膠屬于蛋白肽類物質(zhì)，不具備這一顯色化學(xué)現(xiàn)象，這一步是為了排除步驟(二)的步驟(1)中的膠體是“明膠”或膠體中含有“明膠”的可能性。
本發(fā)明方法綜合步驟(一)中的步驟(2)、(3)、(5)和(6)的試驗(yàn)理化現(xiàn)象，可以判斷蝦體中是否含有外來膠體物質(zhì)，以及該外來膠體物質(zhì)是否為多糖類物質(zhì)瓊膠。
在上述鑒別蝦體中外來膠體的方法中：
步驟(一)的步驟(1)中制備蝦體組織溶液的具體過程為：選取冰鮮蝦的蝦體組織，加入水，在攪拌下煮沸，過濾，收集濾液，將濾液離心，取上清液過濾，收集濾液，將濾液再重復(fù)離心、過濾，收集濾液，蒸發(fā)掉部分水分，得蝦體組織溶液備用。
所述的蝦體組織優(yōu)選為除去肌肉的蝦頭、蝦殼和胸腺體液；所述的蝦體組織和水的用量關(guān)系優(yōu)選為10～20g:100～200ml。
在攪拌下優(yōu)選煮沸5～10min(更佳為5min)，過濾優(yōu)選采用180～300目(更佳為200目)濾布，離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為4500～10000r/m(更佳為5000r/m)，離心時(shí)間優(yōu)選為5～10min(更佳為10min)，取上清液過濾時(shí)采用優(yōu)選中速濾紙過濾。
蒸發(fā)掉部分水分優(yōu)選至保留蝦體組織溶液為10～15ml，蝦體組織液需要濃度較高，才有可能顯示凝膠現(xiàn)象，因此蒸發(fā)殘留的液體需要保留較少體積，蒸發(fā)后保留溶液體積約為10～15ml較為合適，下一步脫水時(shí)也節(jié)約酒精用量。
步驟(一)的步驟(4)中所述酒精的體積百分含量優(yōu)選為95％以上，加入酒精的量優(yōu)選為溶液體積的3～5倍，靜置時(shí)間為2h以上，加入酒精是為了冰凍凝膠脫水，同時(shí)溶解去除部分蝦體組織液，達(dá)到純化瓊膠的目的，保留的蝦體組織液是10～15ml，加入3～5倍量的酒精處理2次，可以達(dá)到脫水、純化目的，也可以節(jié)約酒精消耗。
步驟(一)的步驟(4)中膠體烘干溫度優(yōu)選為45～70℃(更佳為50℃)，烘干是為了去除水分，為了防止瓊膠高溫降解，采用了中溫烘干法。
步驟(一)的步驟(5)中所述烘干膠體與水的用量關(guān)系優(yōu)選為0.005～0.02g：1ml(更佳為0.005～0.02g：1ml)，膠體溶液與鹽酸的體積份配比優(yōu)選為1:0.075～0.15(更佳為1:0.125)，所述沸水浴時(shí)間優(yōu)選為30～45min(更佳為30min)，所述膠體溶液與所述naoh溶液的體積份配比優(yōu)選為1:0.5～1(更佳為1:0.75)，所述naoh溶液的質(zhì)量百分含量優(yōu)選為3～5％(更佳為4.3％)。
步驟(一)的步驟(5)中所述膠體溶液與所述堿性酒石酸銅溶液的體積份配比優(yōu)選為1:0.5～1.5，所述堿性酒石酸銅溶液是由等體積的硫酸銅溶液與堿性酒石酸鉀鈉的臨時(shí)混合液，所述硫酸銅溶液的濃度優(yōu)選為2～5g/100ml，所述堿性酒石酸鉀鈉溶液包括濃度為5～10g/100ml的naoh溶液和濃度為12～25g/100ml的酒石酸鉀鈉溶液。
步驟(一)的步驟(6)中所述i2溶液的濃度優(yōu)選為0.02～0.05mol/l，用量以染色浸沒為宜。
步驟(二)的步驟(2)中加大蝦體組織取樣量重復(fù)試驗(yàn)，蝦體組織取樣量優(yōu)選為原取樣量的1.5～2倍，復(fù)檢一般增加1倍取樣量即可。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明用于鑒別蝦體中外來膠體的方法，可以充分利用瓊膠的特有理化性質(zhì)對疑似注膠蝦中的外來膠體物質(zhì)進(jìn)行定性鑒別，該方法無需特殊的分析儀器設(shè)備，鑒定操作簡單，適用于快速鑒定，易于推廣應(yīng)用，且該方法為食品監(jiān)督管理部門提供了“注膠蝦”中摻雜外來異物的鑒定、檢測技術(shù)，為其執(zhí)法定性起到關(guān)鍵技術(shù)支撐作用。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供的鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法，包括以下步驟：
1、試驗(yàn)方法：
(1)將市場出售的凍蝦先解凍、再剝殼去除肌肉，收集蝦頭、蝦殼和胸腺體液等肌肉以外的所有蝦體組織；取蝦體組織10g置燒杯中，加入蒸餾水100ml，攪拌下煮沸5min，再用200目濾布趁熱過濾、收集濾液；濾液再經(jīng)4500r/m離心10min，上清液經(jīng)中速濾紙過濾、收集濾液；將濾液再重復(fù)離心、過濾1次，收集濾液于燒杯；將燒杯緩慢加熱蒸發(fā)部分水分，至燒杯中剩余溶液約10ml；
(2)將步驟(1)燒杯中的溶液冷卻至室溫，觀察溶液凝膠情況；
(3)若步驟(2)中，溶液能夠自然形成“凝膠”，則進(jìn)一步將“凝膠”再緩慢加熱至85℃以上，觀察“凝膠”的融化情況；
(4)若步驟(3)的“凝膠”能再次融化成溶液，則進(jìn)一步將溶液冷卻凝膠后，將燒杯置冰箱冷凍至全部結(jié)冰；取出燒杯，立即加入95％酒精30ml，靜置2h，傾去酒精、收集膠體，膠體再用酒精同樣條件下重復(fù)處理1次，將膠體置50℃烘干；
(5)稱取步驟(4)烘干的膠體0.02g，置試管中，加4ml水，將試管加熱至膠體完全溶解，用水補(bǔ)充試管蒸發(fā)掉的水分；再加鹽酸0.5ml、沸水浴30分鐘，再分別加入3ml4％naoh溶液和6ml堿性酒石酸銅溶液(3ml4.5％cuso4溶液與3ml含10％naoh和25％酒石酸鉀鈉的混合溶液)，置水浴中加熱，觀察溶液顏色變化；
(6)取步驟(4)烘干的膠體，浸入0.02mol/l的i2溶液中浸染數(shù)分鐘，觀察“膠體”的染色情況，取出膠體，加蒸餾水浸漬，觀察“膠體”顏色變化。
2、試驗(yàn)結(jié)果判定
(1)試驗(yàn)(2)中，溶液在自然條件下能夠形成明顯的凝膠，試驗(yàn)(3)中“凝膠”在85℃左右開始逐漸融化成溶液，則判定蝦體中含有“瓊膠”物質(zhì)。
(2)進(jìn)一步試驗(yàn)(5)中，試管底部明顯發(fā)現(xiàn)有“磚紅色”沉淀生成，則判定蝦體中的“膠體”為多糖類物質(zhì)；
(3)進(jìn)一步試驗(yàn)(6)中，“膠體”在i2溶液中浸染幾分鐘后，發(fā)現(xiàn)膠體被染成紫黑色，將膠體再用水浸漬后又漸漸退為紫色，則判斷蝦體中膠體為“瓊膠”。
綜合(2)、(3)、(5)和(6)試驗(yàn)理化現(xiàn)象，則判斷蝦體中含有外來“膠體”物質(zhì)，并且該“膠體”物質(zhì)是多糖類化合物“瓊膠”。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供的鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法，包括以下步驟：
1、試驗(yàn)方法：
(1)選取市場出售的冰鮮蝦樣品，剝殼去除蝦肌肉組織，收集蝦頭、蝦殼和胸腺體液等除肌肉以外的所有蝦體組織；取蝦體組織約15g置燒杯中，加入蒸餾水150ml，攪拌下煮沸約10min，用240目濾布趁熱過濾、收集濾液；濾液再經(jīng)10000r/m離心5min，上清液經(jīng)中速濾紙過濾、收集濾液；將濾液再重復(fù)離心、過濾1次，收集濾液于燒杯；將燒杯緩慢加熱蒸發(fā)部分發(fā)水分至燒杯中剩余溶液約15ml；
(2)將步驟(1)燒杯中的溶液自然冷卻至室溫，觀察溶液的凝膠情況；
(3)若步驟(2)能自然形成凝膠，則將“凝膠”再緩慢加熱至85℃以上，觀察“凝膠”的融化情況；
(4)若步驟(3)的“凝膠”能融化成溶液，則將溶液冷卻凝膠、并將燒杯置冰箱冷凍過夜至完全結(jié)冰凍透，取出燒杯，立即加入95％的酒精50ml，靜置3h，傾去酒精、收集膠體，膠體再用酒精同樣條件下重復(fù)處理1次，將膠體置60℃烘干；
(5)稱取步驟(4)烘干的膠體0.04g，置試管中，加4ml水，將試管加熱至膠體完全溶解，用水補(bǔ)充試管蒸發(fā)的水分，再加鹽酸0.6ml、沸水浴40分鐘，再分別加入3ml5％naoh溶液和5ml堿性酒石酸銅溶液(2.5ml4.0％cuso4溶液與2.5ml含5％naoh和20％酒石酸鉀鈉的混合溶液)，置水浴中加熱，觀察溶液顏色變化；
(6)取步驟(4)烘干的膠體，浸入0.03mol/l的i2溶液中浸染數(shù)分鐘，觀察“膠體”的染色情況，取出膠體，加蒸餾水浸漬，觀察“膠體”顏色變化。
(二)、試驗(yàn)結(jié)果判定
(1)在試驗(yàn)步驟(2)中，燒杯中的溶液放置室溫后，發(fā)現(xiàn)溶液形成凝膠；試驗(yàn)步驟(3)中，凝膠加熱至85℃以上逐漸融化成溶液，則判定蝦體中含有“瓊膠”；
(2)進(jìn)一步試驗(yàn)(5)中，試管中的溶液經(jīng)加試劑后水浴，發(fā)現(xiàn)試管底部有“磚紅色沉淀”生成，則判定蝦體中的“膠體”為多糖類物質(zhì)；
(3)進(jìn)一步試驗(yàn)(6)中，“膠體”經(jīng)i2溶液染色后呈紫黑色，再經(jīng)水浸漬，膠體漸漸變?yōu)樽仙?，則判斷蝦中膠體為瓊膠。
綜合步驟(一)的步驟(2)、(3)、(5)和(6)中的試驗(yàn)理化現(xiàn)象，則可以判斷試驗(yàn)蝦體中含有外來“膠體”物質(zhì)，并且該“膠體”物質(zhì)為多糖類化合物“瓊膠”。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供的鑒別蝦體中外來膠體-瓊膠的方法，包括以下步驟：
(1)選取市售的凍蝦，凍蝦樣品先用流水解凍，剝殼去除蝦肌肉組織，收集蝦頭、蝦殼和胸腺體液等除肌肉以外的所有蝦體組織；取蝦體組織約15g置燒杯中，加入蒸餾水150ml，攪拌下煮沸10min，用180目濾布趁熱過濾、收集濾液；濾液再經(jīng)10000r/m離心5min，上清液經(jīng)中速濾紙過濾、收集濾液；將濾液再重復(fù)離心、過濾1次，收集濾液于燒杯；將燒杯緩慢加熱蒸發(fā)部分發(fā)水分至燒杯中剩余溶液約15ml；
(2)將步驟(1)燒杯中的溶液自然冷卻至室溫，觀察溶液的凝膠情況，結(jié)果表明，無凝膠現(xiàn)象；重新取蝦體組織30g，加入蒸餾水300ml，重復(fù)試驗(yàn)，最后蒸發(fā)濃縮至剩余溶液約10ml，試驗(yàn)結(jié)果仍無凝膠現(xiàn)象，則判定該蝦體中不含瓊膠物質(zhì)。
以上實(shí)施例僅用于闡述本發(fā)明，而本發(fā)明的保護(hù)范圍并非僅僅局限于以上實(shí)施例。所述技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員依據(jù)以上本發(fā)明公開的內(nèi)容和各參數(shù)所取范圍，均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。