本發(fā)明屬于中藥質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

在現(xiàn)有的技術(shù)中，茜芷類中藥制劑主要是由川牛膝，三七，茜草，白芷制成。制法∶川牛膝、白芷粉碎成粗粉，與等量70%乙醇拌和、悶潤，照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法（中國藥典2005年版一部附錄），以10倍量70%乙醇為溶劑浸泡24h后緩緩滲漉，漉液濾過，回收乙醇，并濃縮至相對密度約為1.10（35℃），噴霧干燥。茜草（制）、三七粉碎成細(xì)粉，與上述膏粉及淀粉合并，混勻，加入80%乙醇，與適宜輔料混合，按照常規(guī)的制劑方法制成相應(yīng)的制劑。主要功能∶活血止血，祛瘀生新，消腫止痛，用于氣滯血瘀所致子宮出血過多，時間延長，淋漓不止，小腹疼痛;藥物流產(chǎn)后子宮出血量多見上述癥候者。

茜芷類中藥制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有一個含量鑒別，對成品質(zhì)量控制的指標(biāo)比較單一。為更好的控制本品質(zhì)量，我們以制劑中中藥的成分作為控制指標(biāo)進(jìn)行含量測定，并對含量測定方法進(jìn)行線性關(guān)系、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率等方法學(xué)的考察，結(jié)果表明該方法可行，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可控性好，可以更好的控制本品的內(nèi)在質(zhì)量，保證了制劑工藝穩(wěn)定及質(zhì)量的可控。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供茜芷類中藥制劑的質(zhì)量控制方法，以解決現(xiàn)有茜芷中藥制劑控制方法存在的指標(biāo)成分單一、特征鑒別不全面、含量測定專屬性差等問題，從而能夠更加科學(xué)評價茜芷中藥制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定性和安全性，提高產(chǎn)品技術(shù)水平，實(shí)現(xiàn)利用現(xiàn)代分析手段全面提升茜芷類中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為茜芷走向國門提供更好的保障。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案∶

一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括茜芷中藥制劑的鑒別方法與含量測定方法；鑒別是對茜芷中藥制劑中的茜草對照藥材、大葉茜草素、羥基茜草素、三七對照藥材、三七皂苷、人參皂苷、白芷對照藥材、歐前胡素、異歐前胡素、川牛膝對照藥材、杯莧甾酮的薄層色譜鑒別；所述鑒別方法為：

鑒別：

（1）茜芷中藥制劑處方中鑒定茜草的方法是∶取相當(dāng)于生藥材15.25～20.55g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加入乙醚20～40ml,放置1小時，時時振搖提取，濾過，濾液揮去，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為茜草供試品溶液備用；另取茜草對照藥材粉末0.8～1.5g，同茜草供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8～15∶4～10∶1～3∶4～10的環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取大葉茜草素為對照品，加入甲醇制成1ml含大葉茜草素0.1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及所述茜草供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為20～25∶3～6∶0.1～0.8石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取羥基茜草素為對照品，加入甲醇制成每1ml含羥基茜草素40μg，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及所述茜草供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為15～20∶5～12∶1～2乙酸乙酯-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

（2）茜芷中藥制劑處方中鑒定三七的方法是∶取相當(dāng)于生藥材13.6～18.6g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加入5%甲酸的甲醇溶液15～30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液揮去，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為三七供試品溶液備用；另取三七對照藥材粉末0.8～1.5g，同三七供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為8～12∶6～9∶1～3苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取三七皂苷r1和三七皂苷rg1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和三七供試品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為5～12∶3～7∶0.5～1.5氯仿-甲醇-冰乙酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取人參皂苷rb1對照品和人參皂苷re對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和三七供試品溶液各3μl。分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為10～18∶35～45∶17～25∶8～12三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)；

（3）茜芷中藥制劑處方中鑒定白芷的方法是∶取相當(dāng)于生藥材14.6～19.8g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加石油醚（60～90℃）10～40ml，振搖提取30分鐘，濾過，濾渣備用，濾液揮去石油醚至2ml，作為白芷供試品溶液備用；另取白芷對照藥材0.4～0.9g，加石油醚（60～90℃）5～10ml，振搖提取30分鐘，靜置，上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為12～20∶2～5∶0.1～0.8石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取歐前胡素對照品和異歐前胡素對照品，加入乙酸乙酯制成每1ml含有1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和白芷供試品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為5～9∶2～5∶0～1石油醚（30～60℃）-乙醚-甲酸為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

（4）茜芷中藥制劑處方中鑒定川牛膝的方法是∶取相當(dāng)于生藥材12.7～18.9g的茜芷中藥制劑，加乙醇30～50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚15～25ml，振搖提取，揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為川牛膝供試品溶液；另取川牛膝對照藥材1～4g，加乙醇20～40ml，同川牛膝供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液；照薄層色譜試驗，吸取川牛膝供試品溶液6～8μl、對照藥材溶液3～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為10～25∶8～18∶1～3甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1∶1％三氯化鐵∶1％鐵氰化鉀的混合溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5～10μl和對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以體積比為13～18∶3～5∶1～2氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；

該茜芷中藥制劑的含量測定方法，主要采用高效液相色譜法測定中藥組合物中白芷所含歐前胡素的量；

含量測定∶

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗∶

流動固定相∶選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；

流動相∶以體積比為（30∶70）～（65∶35）的組分a和組分b構(gòu)成的混合溶劑作為流動相；所述組分a是體積比為5∶1的乙腈和甲醇溶液；組分b是0.01～0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液或磷酸二氫鈉溶液或磷酸二氫銨溶液（每1000ml加入3ml的三乙胺），用磷酸溶液調(diào)節(jié)ph值至3.0～4.5；

檢測波長∶275～315nm；

柱溫∶25～45℃；

流速∶流速0.8～1.2ml/min；

對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備∶取相當(dāng)于生藥材17.56g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25ml,稱定重量，超聲提取30～40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

測定法∶分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

本發(fā)明是一種通過控制茜芷類中藥制劑的活性成分進(jìn)而控制成藥質(zhì)量的分析方法，對茜芷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高、完善，在部頒標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，提高了藥品的質(zhì)量控制，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定性和安全性，提高產(chǎn)品技術(shù)水平，利用現(xiàn)代分析手段全面提升茜芷中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使茜芷的生產(chǎn)工藝更加嚴(yán)格合理。

本發(fā)明了解決現(xiàn)有茜芷中藥制劑控制方法存在的指標(biāo)成分單一、特征鑒別不全面、含量測定專屬性差等問題，從而能夠更加科學(xué)評價茜芷中藥制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定性和安全性，提高產(chǎn)品技術(shù)水平，實(shí)現(xiàn)利用現(xiàn)代分析手段全面提升茜芷類中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為茜芷走向國門提供更好的保障。

本發(fā)明對茜芷中藥制劑中歐前胡素的含量做了如下研究∶

一、實(shí)驗藥品

1.實(shí)驗藥品的處方∶川牛膝600g三七85g茜草（制）85g白芷85g

2.實(shí)驗藥品的制法∶以上四味，川牛膝、白芷粉碎成粗粉，與等量70%乙醇拌和、悶潤，照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法（中國藥典2005年版一部附錄，以10倍量70%乙醇為溶劑浸泡24h后緩緩滲漉，漉液濾過，回收乙醇，并濃縮至相對密度約為1.10（35℃），噴霧干燥。茜草（制）、三七粉碎成細(xì)粉，與上述膏粉及淀粉合并，混勻，加入80%乙醇制粒，干燥，加硬脂酸鎂混勻，整理，壓制成1000片，包薄膜衣，即得。

二、研究過程∶

1、儀器、試劑、樣品∶waters515型高效液相色譜儀、waters2487uv-vis檢測器、wdl-95色譜工作站、uv-1800型紫外可見分光光度計，800型沉淀器（上海手術(shù)器械廠）、qx型超聲波振蕩儀。試劑∶乙腈、甲醇、磷酸二氫鉀、三乙胺為色譜純，水為重蒸餾水。歐前胡素對照品（中國藥品生物制品檢驗所）。茜芷片（甘肅蘭藥藥業(yè)有限公司）。

2、測定波長的選擇：取歐前胡素對照品溶液，用紫外可見分光光度計，在波長范圍200～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描測定。結(jié)果表明∶波長在275nm～315nm范圍中有較好的效果，其中歐前胡素最大吸收波長為300nm。

3、色譜條件∶色譜柱：μ-bondapak2c18(4.6nm×250nm，5μm，中科院大連化學(xué)物理研究所國家色譜研究分析中心)；流動相∶體積比為45∶55的乙腈∶甲醇（5∶1）—0.02mol/l磷酸二氫鉀溶液混合溶劑作為流動相（每1000ml加入3ml的三乙胺），用磷酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.0。流速∶1.0ml／min。柱溫∶30℃.進(jìn)樣量∶5μl。

4、供試品溶液的制備∶

（1）提取時間的確定∶

取茜芷中藥制劑，研細(xì)，取約1.5g，四份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇25ml，稱定重量，分別超聲處理（功率250w，頻率40khz）20、30、40、50分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，測定。結(jié)果見表1。

表1提取時間的比較

根據(jù)表1的結(jié)果可知，提取40分鐘和50分鐘歐前胡素的含量接近，故選超聲40分鐘作為提取時間。

（2）取相當(dāng)于生藥材17.56g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇50ml,稱定重量，超聲提取40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

5、對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg歐前胡素的溶液，搖勻，即得。

6、陰性供試品溶液的制備∶按處方（除去白芷），根據(jù)制備工藝制備成藥物制劑。按照供試品溶液的制備方法，同理制成陰性供試品溶液。根據(jù)含量測定法分析，空白樣品色譜圖在歐前胡素峰保留時間上沒有干擾峰。結(jié)果表明，陰性無干擾。

7、線性關(guān)系的考察

精密吸取歐前胡素對照品溶液（20μg/ml）8、10、12、16、20、24μl，按上述色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果見表2。

表2歐前胡素線性關(guān)系測定結(jié)果

以各自的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以對照品吸收峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=5937.0x+98.61（r=0.9998），以吸收峰面積值對進(jìn)樣量(μg)作圖1，得一直線。以上結(jié)果表明，歐前胡素在0.16～0.48μg范圍內(nèi)，吸收峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

8、精密度試驗精密吸取歐前胡素對照品溶液20ul，連續(xù)進(jìn)樣5次，以對照品峰面積為考察指標(biāo)，結(jié)果歐前胡素峰面積的rsd為1.10%，表明本方法的精密度良好。

9、穩(wěn)定性試驗精密吸取上述供試品溶液20ul，分別在0h,4h,8h,12h,20h和24h進(jìn)樣，以供試品峰面積計算rsd為1.12%。測定結(jié)果顯示歐前胡素在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

10、重復(fù)性試驗精密稱取同一批號的茜芷片細(xì)粉適量，共做5份，按供試品溶液的制備與測定項下的方法進(jìn)行操作測定。

表3重復(fù)性試驗結(jié)果

由表3的結(jié)果可知測得含量平均值為0.0762mg／片，rsd為1.92%，說明該方法測定重復(fù)性好。

11、回收率試驗精密稱取已知含量的樣品約8g,6份，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，分別精密稱取加入歐前胡素對照品，按照樣品的含量測定方法，結(jié)果見表4。

表4回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明，本方法測定歐前胡素顯示加樣回收率良好。

12、樣品含量的測定取3批樣品各3份，按上述方法測定樣品中每克生藥材歐前胡素的含量，測定結(jié)果見表5。

表5樣品含量測定實(shí)驗

由表5的試驗結(jié)果可知，三批樣品中歐前胡素的平均含量值為0.076mg，rsd為4.2%。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際狀況和國際食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)，故要求相當(dāng)于1g生藥材的本中藥制劑含白芷以歐前胡素（c18h14o4計）計，不得少于0.067mg。

附圖說明

圖1為本發(fā)明歐前胡素線性關(guān)系測定結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施方式進(jìn)一步說明本發(fā)明。

本發(fā)明所述的一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑主要由川牛膝、三七、茜草、白芷組成，按照藥劑學(xué)的常規(guī)方法制得各種適用于臨床治療能夠接受的膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸劑與丸劑等。通過活血止血、祛瘀生新、消腫止痛，用于氣滯血瘀所致子宮出血過多，時間延長，淋漓不止，小腹疼痛；藥物流產(chǎn)后子宮出血量多見上述癥候者。所提供的該制劑的質(zhì)量控制方法穩(wěn)定、可靠，優(yōu)于部頒標(biāo)準(zhǔn)，更有效的保證了茜芷類中藥制劑的質(zhì)量。其質(zhì)量控制方法包括茜芷中藥制劑的鑒別方法與含量測定方法。

實(shí)施例1，針對劑型是膠囊劑的一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的質(zhì)量控制方法，所述鑒別方法為：

性狀∶除去膠囊殼，茜芷中藥制劑內(nèi)容物為褐色的粉末；氣芳香，味辛、微苦。

鑒別∶

（1）茜芷中藥制劑處方中鑒定茜草的方法是∶取20粒本品，除去膠囊殼，加入乙醚20ml,放置1小時，時時振搖提取，濾過，濾液揮去，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材粉末0.8g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用）,分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水（8∶4∶1∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取大葉茜草素為對照品，加入甲醇制成1ml含大葉茜草素0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（20∶3∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取羥基茜草素為對照品，加入甲醇制成每1ml含羥基茜草素40μg，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸（15∶7∶1）為展開劑,展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）茜芷中藥制劑處方中鑒定三七的方法是∶取17粒本品，除去膠囊殼，加入5%甲酸的甲醇溶液20ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液揮去，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材粉末0.8g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（8∶7∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取三七皂苷r1和三七皂苷rg1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水-冰乙酸(7∶2∶4∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（1→10），在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取人參皂苷rb1對照品和人參皂苷re對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各3μl。分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（10∶35∶17∶8）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸溶液（1→10），在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)。

（3）茜芷中藥制劑處方中鑒定白芷的方法是∶取18粒本品，除去膠囊殼，加石油醚（60～90℃）20ml，振搖提取30分鐘，濾過，濾渣備用，濾液揮去石油醚至約2ml，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材0.4g，加石油醚（60～90℃）5ml，振搖提取30分鐘，靜置，上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（12∶2∶0.3）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取歐前胡素對照品和異歐前胡素對照品，加入乙酸乙酯制成每1ml含有1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（5∶2）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（4）茜芷中藥制劑處方中鑒定川牛膝的方法是∶取14粒本品，除去膠囊殼，加乙醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚15ml，振搖提取，揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川牛膝對照藥材2g，加乙醇20ml，供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜試驗，吸取供試品溶液6μl、對照藥材溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（10∶9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵∶1％鐵氰化鉀（1∶1）的混合溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5μl和對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(13∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

含量測定∶

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗∶

流動固定相∶選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；

流動相∶體積比為45∶55的乙腈∶甲醇（5∶1）—0.02mol/l磷酸二氫鉀溶液混合溶劑作為流動相（每1000ml加入3ml的三乙胺），用磷酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.0；

檢測波長∶300nm；

柱溫∶30℃；

流速∶1.0ml/min。

對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備∶取相當(dāng)于生藥材17.56g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25ml,稱定重量，超聲提取30～40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

測定法∶分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

相當(dāng)于1g生藥材的本中藥制劑含白芷以歐前胡素（c18h14o4計）計，不得少于0.067mg。

實(shí)施例2，針對劑型是片劑的一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的質(zhì)量控制方法，所述鑒別方法為：

性狀∶本品為薄膜衣片，除去包衣后呈褐色：氣芳香，味辛、微苦。

鑒別∶

（1）茜芷中藥制劑處方中鑒定茜草的方法是∶取25片本品，除去包衣，研細(xì)，加入乙醚40ml,放置1小時，時時振搖提取，濾過，濾液揮去，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材粉末1.5g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用）,分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水（15∶10∶3∶10）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取大葉茜草素為對照品，加入甲醇制成1ml含大葉茜草素0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（25∶5∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取羥基茜草素為對照品，加入甲醇制成每1ml含羥基茜草素40μg，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸（20∶11∶2）為展開劑,展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）茜芷中藥制劑處方中鑒定三七的方法是∶取22片本品，除去包衣，研細(xì)，加入5%甲酸的甲醇溶液30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液揮去，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材粉末1.5g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（12∶9∶2.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取三七皂苷r1和三七皂苷rg1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水-冰乙酸（12∶7∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（1→10），在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取人參皂苷rb1對照品和人參皂苷re對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各3μl。分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（18∶45∶25∶12）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)。

（3）茜芷中藥制劑處方中鑒定白芷的方法是∶取22片本品，除去包衣，研細(xì)，加石油醚（60～90℃）40ml，振搖提取30分鐘，濾過，濾渣備用，濾液揮去石油醚至約2ml，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材0.9g，加石油醚（60～90℃）10ml，振搖提取30分鐘，靜置，上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶0.8）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取歐前胡素對照品和異歐前胡素對照品，加入乙酸乙酯制成每1ml含有1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚-甲酸（9∶5∶1）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（4）茜芷中藥制劑處方中鑒定川牛膝的方法是∶取相當(dāng)于20片的本品，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚25ml，振搖提取，揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川牛膝對照藥材4g，加乙醇40ml，供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜試驗，吸取供試品溶液8μl、對照藥材溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（25∶18∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵∶1％鐵氰化鉀（1∶1）的混合溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl和對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(18∶5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

含量測定∶

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗∶

流動固定相∶選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；

流動相∶體積比為45∶55的乙腈∶甲醇（5∶1）—0.02mol/l磷酸二氫鉀溶液混合溶劑作為流動相（每1000ml加入3ml的三乙胺），用磷酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.0；

檢測波長∶300nm；

柱溫∶30℃；

流速∶1.0ml/min。

供試品溶液的制備∶取相當(dāng)于生藥材17.56g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25ml,稱定重量，超聲提取30～40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg的溶液，搖勻，即得。

測定法∶分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

相當(dāng)于1g生藥材的本中藥制劑含白芷以歐前胡素（c18h14o4計）計，不得少于0.067mg。

實(shí)施例3，針對劑型是丸劑的一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的質(zhì)量控制方法，所述鑒別方法為：

性狀∶茜芷丸劑呈褐色：氣芳香，味辛、微苦。

鑒別∶

（1）茜芷中藥制劑處方中鑒定茜草的方法是∶取23丸的本品，研細(xì)，加入乙醚30ml,放置1小時，時時振搖提取，濾過，濾液揮去，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材粉末1.2g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用）,分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水（12∶5∶2∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取大葉茜草素為對照品，加入甲醇制成1ml含大葉茜草素0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（22∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取羥基茜草素為對照品，加入甲醇制成每1ml含羥基茜草素40μg，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸（17∶9∶1）為展開劑,展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（2）茜芷中藥制劑處方中鑒定三七的方法是∶取20丸的本品，研細(xì)，加入5%甲酸的甲醇溶液25ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液揮去，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材粉末1.1g，同供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（10∶7∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取三七皂苷r1和三七皂苷rg1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-冰乙酸（9∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取人參皂苷rb1對照品和人參皂苷re對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液各3μl。分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（14∶40∶22∶9）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)。

（3）茜芷中藥制劑處方中鑒定白芷的方法是∶取21丸本品，研細(xì)，加石油醚（60～90℃）25ml，振搖提取30分鐘，濾過，濾渣備用，濾液揮去石油醚至約2ml，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材0.6g，加石油醚（60～90℃）8ml，振搖提取30分鐘，靜置，上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl（供試品溶液留作備用），分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（15∶4∶0.5）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取歐前胡素對照品和異歐前胡素對照品，加入乙酸乙酯制成每1ml含有1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和供試品溶液三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（7∶4）為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

（4）茜芷中藥制劑處方中鑒定川牛膝的方法是∶取18丸本品，加乙醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚20ml，振搖提取，揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川牛膝對照藥材2.5g，加乙醇30ml，供試品溶液制備方法制成對照藥品溶液。照薄層色譜試驗，吸取供試品溶液7μl、對照藥材溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（18∶13∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵∶1％鐵氰化鉀（1∶1）的混合溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液8μl和對照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(15∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

含量測定∶

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗∶

流動固定相∶選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；

流動相∶體積比為45∶55的乙腈∶甲醇（5∶1）—0.02mol/l磷酸二氫鉀溶液混合溶劑作為流動相（每1000ml加入3ml的三乙胺），用磷酸溶液調(diào)節(jié)ph值至4.0；

檢測波長∶300nm；

柱溫∶30℃；

流速∶1.0ml/min。

供試品溶液的制備∶取相當(dāng)于生藥材17.56g的本品，精密稱定，研細(xì)，取約1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇25ml,稱定重量，超聲提取40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg的溶液，搖勻，即得。

測定法∶分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

相當(dāng)于1g生藥材的本中藥制劑含白芷以歐前胡素（c18h14o4計）計，不得少于0.067mg。