本發(fā)明涉及納米材料的定量檢測(cè)，具體涉及一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法。

背景技術(shù)：

本發(fā)明涉及納米材料的定量檢測(cè)，特別涉及一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法。

背景技術(shù)

癌癥是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病之一，癌癥治療對(duì)于提高患者的生存質(zhì)量、減輕患者的痛苦、降低死亡率具有十分重要的意義。目前臨床中對(duì)于癌癥的治療主要采用化療法，但目前的化療藥物不具有靶向性，在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)殺死正常細(xì)胞，從而引起嚴(yán)重的毒副作用，阻礙了化療藥物的發(fā)展和應(yīng)用，對(duì)患者身心造成極大地?fù)p傷。因此，降低藥物毒副作用、改善藥物體內(nèi)分布與代謝、提高藥物治療效率等已經(jīng)成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

隨著納米材料的快速發(fā)展與應(yīng)用，越來(lái)越多的研究者們將目光投向了納米藥物載體。納米載體粒徑大小在10～500nm，可將藥物分子包裹其中或吸附在其表面，通過(guò)靶向分子與細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合或磁靶向，在細(xì)胞攝取作用下進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)安全有效的靶向藥物輸送，因此在藥物傳遞中具有特殊的價(jià)值和意義。

功能化納米材料在實(shí)現(xiàn)靶向性給藥、緩釋藥物、降低藥物的毒副作用等方面表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，已成為近年來(lái)新型藥物輸送系統(tǒng)研究的熱點(diǎn)。二氧化硅納米材料作為無(wú)機(jī)納米顆粒材料的重要成員之一，由于其制備簡(jiǎn)便、性質(zhì)穩(wěn)定、生物相容性好和表面易修飾，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。將靶向配體葉酸修飾到二氧化硅納米材料上作為一種新型靶向藥物載體，為癌癥的治療注入了新的活力，為改善抗腫瘤藥物載藥體系提供了新的思路與手段，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。

納米生物技術(shù)是生物技術(shù)領(lǐng)域的前沿和熱點(diǎn)問(wèn)題，從現(xiàn)有研究結(jié)果來(lái)看，對(duì)于納米材料應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域通常局限于考察其在體內(nèi)的分布、降解、藥物釋放效率以及毒性研究等方面。眾所周知，納米材料因其特殊的效應(yīng)對(duì)人體可能有一定的影響，不同的劑量可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不同的功效或副作用。因此，納米藥物載體的劑量檢測(cè)對(duì)于考察該材料是否可以應(yīng)用于臨床顯得尤為重要。而目前對(duì)于納米材料的表征方法主要集中在其結(jié)構(gòu)、成分、粒度、形貌以及界面等分析。而對(duì)于納米材料的定量分析還不是很多，目前常用的方法有電感耦合等離子體質(zhì)譜法(icp-ms)、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(hplc-icp-ms)以及氣相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(gc-icp-ms)，然而這些方法不僅操作繁瑣，儀器昂貴，而且穩(wěn)定性和靈敏度都不高，檢測(cè)技術(shù)仍不夠成熟。因此，對(duì)于納米載體本身在生物體內(nèi)的定量檢測(cè)仍是一項(xiàng)十分必要且具有挑戰(zhàn)性的工作。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法。結(jié)合抗原、抗體反應(yīng)的特異性與熒光的敏感性對(duì)sio2-fo納米粒子進(jìn)行了定量檢測(cè)分析。該方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)等特點(diǎn)。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法，所述方法包括以下步驟：

a、sio2-fo包被抗原和免疫原的制備；

b、抗sio2-fo抗體的制備；

c、熒光抗體的制備；

d、將sio2-fo包被抗原經(jīng)包被液稀釋后包被于酶標(biāo)板中，封閉、加入不同濃度的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品，以fitc標(biāo)記的抗sio2-fo抗體作為一抗，建立直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫分析定量檢測(cè)sio2-fo；

e、以sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，從而定量檢測(cè)出sio2-fo的濃度。

所述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性方程為a＝12434.4-1136.7logc，其中a為熒光強(qiáng)度值，c為sio2-fo濃度。其相關(guān)系數(shù)r＝-0.9992，線(xiàn)性范圍為10^-1-10⁵ng/ml，檢出限為0.035ng/ml。

所述步驟a具體包括以下步驟：

a-1、將sio2-fo溶于pbs溶液中，得到水溶性的sio2-fo溶液；

a-2、將ova溶于pbs溶液中，然后加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液和戊二醛溶液，25～28℃下避光攪拌2～5h；將反應(yīng)液置于透析袋中透析24h即可得到sio2-fo包被抗原；

a-3、將bsa溶于pbs溶液中，然后加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液和戊二醛溶液，25～28℃下避光攪拌2～5h；將反應(yīng)液置于透析袋中透析24h即可得到sio2-fo免疫原。

進(jìn)一步地，所述步驟a具體包括以下步驟：

a-1、稱(chēng)取10～20mgsio2-fo溶于1～2mlpbs溶液中，磁力攪拌1～2h即得到水溶性的sio2-fo溶液；

a-2、稱(chēng)取10～20mgova溶于2～4mlpbs溶液中,并在攪拌下加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液，混合均勻后再滴加80～200μl25％戊二醛溶液，25～28℃下避光攪拌2～5h；將反應(yīng)液置于透析袋中，用pbs透析24h后收集即可得到sio2-fo包被抗原，其濃度為2～4mg/ml；

a-3、稱(chēng)取10～20mgbsa溶于2～4mlpbs溶液中，并在攪拌下加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液，混合均勻后再滴加80～200μl25％戊二醛溶液，25～28℃下避光攪拌2～5h；將反應(yīng)液置于透析袋中，用pbs透析24h后收集即可得到sio2-fo免疫原，其濃度為2～4mg/ml。

所述步驟a-2和a-3中，透析袋的截留分子量為8000～14000da。

所述水溶性的sio2-fo溶液濃度為5～15mg/ml。

所述步驟b具體包括以下步驟：

b-1、首次免疫：將sio2-fo免疫原與弗氏完全佐劑等體積比混合后，采用背部皮下多點(diǎn)注射的方式注射到大白兔體內(nèi)，注射8～10個(gè)點(diǎn)，注射量為1～2ml/只；首次免疫三周后進(jìn)行加強(qiáng)免疫；

b-2、加強(qiáng)免疫：將sio2-fo免疫原與弗氏不完全佐劑等體積比混合后，采取同樣的方式注射到大白兔體內(nèi)，注射8～10個(gè)點(diǎn)，注射量為1～2ml/只；此后每?jī)芍苓M(jìn)行再次加強(qiáng)免疫，中間周進(jìn)行耳靜脈采血測(cè)血清效價(jià)，直到效價(jià)達(dá)到1:64000，再進(jìn)行最后一次加強(qiáng)免疫，并在免疫一周后從動(dòng)物頸動(dòng)脈采血，靜置析出抗血清并進(jìn)行純化，得到抗sio2-fo抗體，其濃度為15～20mg/ml。

所述步驟c具體包括以下步驟：

c-1、取純化后的抗sio2-fo抗體，用碳酸鹽緩沖液稀釋至每毫升內(nèi)含蛋白8～15mg，制得抗體溶液；

c-2、將異硫氰酸熒光素(fitc)溶解在碳酸鹽緩沖液中，制成濃度為2mg/ml的fitc溶液；

c-3、在25～28℃下將fitc溶液緩慢加入步驟c-1得到的抗體溶液中，磁力攪拌4～6h；

c-4、將步驟c-3得到的溶液用葡聚糖凝膠進(jìn)行過(guò)濾純化，得到fitc標(biāo)記的抗sio2-fo抗體。

所述步驟c-3中，fitc溶液與抗體溶液的體積之比為1:10。

所述步驟d具體包括以下步驟：

d-1、包被：用包被緩沖液將sio2-fo包被抗原稀釋80倍，包被96孔酶標(biāo)板，每孔100μl，4℃冰箱過(guò)夜；

d-2、封閉：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3～5min，洗去未被結(jié)合上的sio2-fo包被抗原,加入1wt％酪蛋白，每孔200μl進(jìn)行封閉，37℃烘箱溫育1～2h；

d-3、加樣競(jìng)爭(zhēng)：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3～5min，洗去多余的封閉液,然后將50μl不同濃度的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品和50μlfitc標(biāo)記的抗sio2-fo抗體分梯度加入各孔中，使之發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，37℃烘箱溫育2～4h；

d-4、檢測(cè)：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3～5min，除去游離態(tài)的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品或抗體結(jié)合物,用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在激發(fā)波長(zhǎng)為485nm，發(fā)射波長(zhǎng)為528nm處的熒光強(qiáng)度值。

本發(fā)明提供了一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法，結(jié)合抗原、抗體反應(yīng)的特異性與熒光的敏感性實(shí)現(xiàn)了該免疫方法對(duì)sio2-fo的定量檢測(cè)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：

(1)利用機(jī)體的免疫應(yīng)答效應(yīng)，成功制備且篩選出了高效價(jià)的抗sio2-fo抗體，為建立高特異性的免疫分析定量檢測(cè)sio2-fo奠定了基礎(chǔ)；

(2)利用抗原、抗體反應(yīng)的特異性與熒光的敏感性建立了一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫分析法定量檢測(cè)sio2-fo的新方法，為今后納米材料提供了一種快速、準(zhǔn)確定量檢測(cè)的方法；

(3)該方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)。

附圖說(shuō)明

圖1為以sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度值為縱坐標(biāo)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。

具體實(shí)施方式

弗氏完全佐劑、牛血清白蛋白(bsa)和雞卵清白蛋白(ova)購(gòu)買(mǎi)自生工生物工程(上海)股份有限公司。

其他試劑均可從市場(chǎng)上的銷(xiāo)售廠(chǎng)家購(gòu)買(mǎi)得到。

本發(fā)明涉及到的各溶液的制備方法為：

pbs溶液(0.01mol/lph＝8.0)：稱(chēng)取nacl8.0g、kcl0.1g、nah2po4·2h200.106g、na2hpo4·12h2o3.34g溶解于蒸餾水中并定容至1000ml。

碳酸鹽緩沖液cb(0.5mol/lph＝9.6)：稱(chēng)取na2co31.59g、nahco32.94g溶解于蒸餾水中并定容至100ml。

pbst溶液(0.01mol/lph＝8.0)：在1000mlpbs中加入500μltween-20，混合均勻。

包被緩沖液cb(0.05mol/lph＝9.6)：稱(chēng)取na2co31.59g、nahco32.94g溶解于蒸餾水中并定容至1000ml。

1wt％酪蛋白溶液：其為封閉液，稱(chēng)取0.01g酪蛋白溶解于1mlpbs中，混合均勻。

mes緩沖液(0.1m，ph＝5.5)：稱(chēng)0.1921gmes溶解于10ml蒸餾水中，用naoh溶液調(diào)節(jié)其ph至5.5。

實(shí)施例1

一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅(sio2-fo)靶向納米藥物載體的方法，所述方法包括以下步驟：

a、sio2-fo包被抗原和免疫原的制備

a-1、稱(chēng)取10mgsio2-fo溶于1mlpbs溶液中，磁力攪拌1h即得到濃度為10mg/ml的sio2-fo溶液；

a-2、稱(chēng)取10mgova溶于2mlpbs中，并在攪拌加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液，混合均勻后再滴加90μl25％戊二醛溶液，25℃下避光攪拌4h；將反應(yīng)液置于截留分子量為8000-12000da的透析袋中，用pbs透析24h后收集即可得到sio2-fo包被抗原，其濃度為3.33mg/ml，4℃儲(chǔ)存待用；

a-3、稱(chēng)取10mgbsa溶于2mlpbs中，并在攪拌加入步驟a-1得到的sio2-fo溶液，混合均勻后再滴加90μl25％戊二醛溶液，25℃下避光攪拌4h；將反應(yīng)液置于截留分子量為8000-12000da透析袋中，用pbs透析24h后收集即可得到sio2-fo免疫原，其濃度為3.33mg/ml，4℃儲(chǔ)存待用。

所述步驟a-1中的sio2-fo(葉酸功能化二氧化硅)的制備方法為：

a-1-1、氨基功能化二氧化硅(sio2–nh2)的制備

將380μl正硅酸乙酯和12ml無(wú)水乙醇混合攪拌0.5h；加入570μl26％氨水，25℃下攪拌24h；再加入400μl3-氨丙基三乙氧基硅烷，25℃下持續(xù)攪拌24h；將反應(yīng)液10000rpm/min離心分離20min，取沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，并在25℃下干燥24h即可得到氨基功能化二氧化硅；

a-1-2、葉酸功能化二氧化硅(sio2–fo)的制備

稱(chēng)取57.5mg葉酸溶于2mlmes緩沖液，再加入40.3mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(edc)和17.25mgn-羥基琥珀酰亞胺，室溫下攪拌1h；

稱(chēng)取100mgsio2–nh2溶于5mlmes緩沖液后加入到上述混合液中，25℃下避光攪拌24h；將反應(yīng)液10000rpm/min離心分離10min，取沉淀用蒸餾水和無(wú)水乙醇洗滌，并在25℃下干燥24h即可得到葉酸功能化二氧化硅。

b、抗sio2-fo抗體的制備

選用4只體重為2～2.5kg的雄性新西蘭大白兔為免疫對(duì)象，實(shí)驗(yàn)之前首先將購(gòu)買(mǎi)的新西蘭大白兔飼養(yǎng)2周左右，維持其健康狀態(tài)，其中3只作為免疫對(duì)象，第4只作為空白對(duì)照，空白對(duì)照組不進(jìn)行任何免疫。

b-1、首次免疫：將sio2-fo免疫原與弗氏完全佐劑等體積比混合后，采用背部皮下多點(diǎn)注射的方式注射到3只實(shí)驗(yàn)兔體內(nèi)，注射8～10個(gè)點(diǎn)，注射量為1ml/只；免疫接種的方式有注射免疫、口服免疫、氣霧免疫等，其中注射免疫又有皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射靜脈注射等方式，背部皮下注射操作方便，藥物擴(kuò)散較慢，有利于刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，繼而產(chǎn)生抗體；而雄兔作為免疫對(duì)象可以避免其生理周期對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。

b-2、加強(qiáng)免疫：首次免疫三周后進(jìn)行加強(qiáng)免疫。將sio2-fo免疫原與弗氏不完全佐劑等體積比混合后，采取同樣的方式注射到3只實(shí)驗(yàn)兔體內(nèi)，注射8～10個(gè)點(diǎn)，注射量為1ml/只；此后每?jī)芍苓M(jìn)行再次加強(qiáng)免疫，中間周進(jìn)行耳靜脈采血測(cè)血清效價(jià)，直到效價(jià)達(dá)到1:64000，再進(jìn)行最后一次加強(qiáng)免疫，并在免疫一周后從動(dòng)物頸動(dòng)脈采血，靜置析出抗血清并進(jìn)行純化，得到抗sio2-fo抗體，其濃度為16.55mg/ml。

弗氏不完全佐劑的制備方法為：稱(chēng)取50g的無(wú)水羊毛脂，量取100ml的液體石蠟混合，超聲儀多次超聲，每次不超過(guò)20min，防止超聲過(guò)程中溫度過(guò)高，不能及時(shí)散熱，超聲使之混合均勻，直到將該混合液體滴到水中并且半分鐘內(nèi)不擴(kuò)散為止，得到的油狀液體即為弗氏不完全佐劑，4℃冰箱儲(chǔ)存待用。

抗體效價(jià)鑒定的具體方法為：用包被緩沖液cb將包被抗原稀釋400倍，包被在96孔酶標(biāo)板上，4℃冰箱過(guò)夜；甩干，用pbst溶液洗3次，每次3min，每孔加200μl1wt％酪蛋白封閉液，37℃封閉1h；甩干，pbst洗3次，每次3min，每孔加入100μl用pbs稀釋成不同濃度的抗血清，其稀釋比為1/1000～1/128000，37℃溫育2h；甩干，pbst洗3次，每次3min，每孔加入100μl用pbs稀釋的稀釋比為1/5000的hrp標(biāo)記的羊抗兔igg，37℃溫育2h；甩干，pbst洗3次，每次3min，每孔加入100μl鄰苯二胺底物液進(jìn)行顯色反應(yīng)，37℃溫育0.5h；每孔再加入50μl2mol/lh2so4終止反應(yīng)；最后用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在490nm處的吸光度值a。比較實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組在同一抗血清稀釋倍數(shù)下的吸光值a，當(dāng)a實(shí)驗(yàn)組≥2倍a空白組時(shí)對(duì)應(yīng)的最大稀釋倍數(shù)即抗血清的效價(jià)。

c、熒光抗體的制備

c-1、取純化后的抗sio2-fo抗體1ml，用碳酸鹽緩沖液稀釋至每毫升內(nèi)含蛋白8.5mg，制得抗體溶液；

c-2、稱(chēng)取2mg異硫氰酸熒光素(fitc)溶解在1ml碳酸鹽緩沖液中，制成fitc溶液；

c-3、在25℃下將0.1mlfitc溶液緩慢加入1ml抗體溶液中，磁力攪拌5h；

c-4、將上述標(biāo)記好的溶液用葡聚糖凝膠進(jìn)行過(guò)濾純化，收集柱下端溶液，得到fitc標(biāo)記的抗sio2-fo抗體，-20℃儲(chǔ)存待用。

d、利用標(biāo)記好的熒光抗sio2-fo抗體和sio2-fo包被抗原進(jìn)行直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫分析實(shí)驗(yàn)，在最優(yōu)條件下建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)從而達(dá)到定量檢測(cè)sio2-fo的目的

d-1、包被：用包被緩沖液將sio2-fo包被抗原稀釋80倍，包被96孔酶標(biāo)板。每孔100μl，4℃冰箱過(guò)夜；

d-2、封閉：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3min，洗去未被結(jié)合上的sio2-fo包被抗原。加入1wt％酪蛋白，每孔200μl進(jìn)行封閉(減少非特異性吸附)，37℃烘箱溫育1h；

d-3、加樣競(jìng)爭(zhēng)：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3min，洗去多余的封閉液。將50μl濃度分別為0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、10²ng/ml、10³ng/ml、10⁴ng/ml、10⁵ng/ml的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品依次加入到酶標(biāo)板的各行中，即每個(gè)濃度梯度重復(fù)三次，然后向各孔中加入50μlfitc標(biāo)記的抗sio2-fo抗體，使之發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，37℃烘箱溫育3h；

不同濃度的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法為：用0.01mol/lph＝8.0的pbs緩沖溶液將sio2-fo稀釋到指定的濃度。

d-4、檢測(cè)：甩干，pbst溶液洗滌3次，每次3min，除去游離態(tài)的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品或抗體結(jié)合物。用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在激發(fā)波長(zhǎng)為485nm，發(fā)射波長(zhǎng)為528nm處的熒光強(qiáng)度值，同一濃度梯度的取平均值計(jì)算熒光強(qiáng)度值。

e、以sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性方程為a＝12434.4-1136.7logc，其中a為熒光強(qiáng)度值，c為sio2-fo濃度。其相關(guān)系數(shù)r＝-0.9992，線(xiàn)性范圍為10^-1-10⁵ng/ml，檢出限為0.035ng/ml。

f、重復(fù)以上各步驟，只是將步驟(3)中的不同濃度的sio2-fo標(biāo)準(zhǔn)品替換為未知濃度的sio2-fo待測(cè)液，然后用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在激發(fā)波長(zhǎng)為485nm，發(fā)射波長(zhǎng)為528nm處的熒光強(qiáng)度值，求取平均熒光強(qiáng)度值。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性方程a＝12434.4-1136.7logc，即可計(jì)算出sio2-fo待測(cè)液的濃度。

以上方法為多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后的最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)方法，此方法所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性關(guān)系最好，線(xiàn)性范圍最寬。

上述參照實(shí)施例對(duì)一種基于直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法定量檢測(cè)葉酸功能化二氧化硅靶向納米藥物載體的方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。