本發(fā)明涉及一種細(xì)胞dna的染色方法。

背景技術(shù)：

細(xì)胞dna含量反映細(xì)胞生長(zhǎng)及分化狀態(tài)，測(cè)定其含量的變化對(duì)判斷腫瘤的性質(zhì)及預(yù)后具有重要意義?，F(xiàn)階段應(yīng)用于細(xì)胞dna染色的產(chǎn)品時(shí)，在酸化過(guò)程中，采用5摩爾/升鹽酸進(jìn)行酸化，鹽酸為易制毒化學(xué)品，且由于酸度高，使細(xì)胞容易產(chǎn)生酸化過(guò)度導(dǎo)致dna破碎，影響結(jié)果；染色時(shí)采用的染色劑為固體粉末，用戶需要自己進(jìn)行配制，其中經(jīng)歷了稱量，加熱，攪拌、過(guò)濾等多個(gè)過(guò)程，需要用戶具備一定的實(shí)驗(yàn)室操作基礎(chǔ)和基礎(chǔ)設(shè)備的使用知識(shí)，而且配制時(shí)間較長(zhǎng)，大概需要3～4h，容易產(chǎn)生誤差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)階段應(yīng)用于細(xì)胞dna染色方法中費(fèi)時(shí)且易有誤差的問(wèn)題，提供了一種細(xì)胞dna的染色方法。

本發(fā)明一種細(xì)胞dna的染色方法為：一、將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在固定液中固定，得到固定有細(xì)胞的玻璃片，再放入濃度為1.5～2.5mol/l的氫溴酸中酸化40～50min；二、將細(xì)胞dna染色液中的a試劑和b試劑混合，震蕩25～35min，然后放入步驟一處理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中a試劑按質(zhì)量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫鹽和余量的水組成。

本發(fā)明染色方法在酸化過(guò)程中使用2摩爾/升氫溴酸替代鹽酸，不僅不屬于易制毒化學(xué)品，而且大大降低了酸度，不易產(chǎn)生酸化過(guò)度的問(wèn)題，酸化時(shí)間也可以從60分鐘降低到45分鐘。本發(fā)明的染色液采用兩種液體試劑，保質(zhì)期可以達(dá)到5年，而且經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，該試劑在零下40攝氏度到40攝氏度的溫度中長(zhǎng)期存放，其化學(xué)物質(zhì)沒(méi)有任何性能改變。本發(fā)明染色液的a、b試劑均為液體狀態(tài)，只需簡(jiǎn)單混合就可以得到滿意的效果，大大節(jié)省了用戶的時(shí)間，僅需1.5h，提高了工作效率，而且無(wú)論是否有操作基礎(chǔ)都可以輕易掌握這個(gè)過(guò)程。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例1中采用本發(fā)明方法染色后的細(xì)胞圖片；

圖2是實(shí)施例2中采用本發(fā)明方法染色后的細(xì)胞圖片；

圖3是實(shí)施例3中采用本發(fā)明方法染色后的細(xì)胞圖片；

圖4是實(shí)施例中采用現(xiàn)有方法染色后的細(xì)胞圖片。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式一種細(xì)胞dna的染色方法為：一、將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在固定液中固定，得到固定有細(xì)胞的玻璃片，再放入濃度為1.5～2.5mol/l的氫溴酸中酸化40～50min；二、將細(xì)胞dna染色液中的a試劑和b試劑混合，震蕩25～35min，然后放入步驟一處理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中a試劑按質(zhì)量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫鹽和余量的水組成。

本實(shí)施方式染色方法在酸化過(guò)程中使用2摩爾/升氫溴酸替代鹽酸，不僅不屬于易制毒化學(xué)品，而且大大降低了酸度，不易產(chǎn)生酸化過(guò)度的問(wèn)題，酸化時(shí)間也可以從60分鐘降低到45分鐘。本實(shí)施方式的染色液采用兩種液體試劑，保質(zhì)期可以達(dá)到5年，而且經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)試，該試劑在零下40攝氏度到40攝氏度的溫度中長(zhǎng)期存放，其化學(xué)物質(zhì)沒(méi)有任何性能改變。本實(shí)施方式的a、b試劑均為液體狀態(tài)，只需簡(jiǎn)單混合就可以得到滿意的效果，大大節(jié)省了用戶的時(shí)間，提高了工作效率，僅需1.5h，而且無(wú)論是否有操作基礎(chǔ)都可以輕易掌握這個(gè)過(guò)程。

具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是：所述的震蕩的速率為12hz。其他與具體實(shí)施方式一相同。

具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一或二不同的是：步驟二中染色45min。其他與具體實(shí)施方式一或二不同。

具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至三之一不同的是：所述的含硫鹽為亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀、硫帶硫酸鈉、硫帶硫酸鉀、偏重亞硫酸氫鈉和偏重亞硫酸氫鉀中的一種或幾種按任意比組成。其他與具體實(shí)施方式一至三之一相同。

具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至四之一不同的是：所述的醇為乙醇、乙二醇、丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一種或幾種按任意比組成。其他與具體實(shí)施方式一至四之一相同。

本實(shí)施方式中所述的醇均為分析純。

具體實(shí)施方式六：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至五之一不同的是：所述的酸為濃度為1～5mol/l的鹽酸、濃度為1～5mol/l的硝酸、濃度為0.5～2.5mol/l的硫酸、濃度為0.4～2mol/l的磷酸和濃度為1～5mol/l的氫溴酸中的一種或幾種按任意比組成。其他與具體實(shí)施方式一至五之一相同。

具體實(shí)施方式七：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至六之一不同的是：細(xì)胞dna染色液的a試劑按質(zhì)量百分含量由1％硫堇、12.5％的氫溴酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由80％的叔丁醇、1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中氫溴酸的濃度為2mol/l。其他與具體實(shí)施方式一至六之一相同。

具體實(shí)施方式八：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至七之一不同的是：細(xì)胞dna染色液的a試劑按質(zhì)量百分含量由2％硫堇、5％的氫溴酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由87％的叔丁醇、1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中氫溴酸的濃度為5mol/l。其他與具體實(shí)施方式一至七之一相同。

具體實(shí)施方式九：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至八之一不同的是：細(xì)胞dna染色液的a試劑按質(zhì)量百分含量由2％硫堇、6％的氫溴酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中氫溴酸的濃度為4mol/l。其他與具體實(shí)施方式一至八之一相同。

具體實(shí)施方式十：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至九之一不同的是：細(xì)胞dna染色液的a試劑按質(zhì)量百分含量由1％硫堇、5％的鹽酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中鹽酸的濃度為5mol/l。其他與具體實(shí)施方式一至九之一相同。

為驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)：

實(shí)施例一：一種細(xì)胞dna的染色方法為：一、將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有細(xì)胞的玻璃片，再放入濃度為2mol/l的氫溴酸中酸化45min；二、將細(xì)胞dna染色液中的a試劑和b試劑混合，震蕩30min，然后放入步驟一處理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a試劑按質(zhì)量百分含量由1％硫堇、12.5％的氫溴酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由80％的叔丁醇、1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中氫溴酸的濃度為2mol/l。本實(shí)施例染色后的圖片如圖1所示。

實(shí)施例二：一種細(xì)胞dna的染色方法為：一、將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有細(xì)胞的玻璃片，再放入濃度為2mol/l的氫溴酸中酸化45min；二、將細(xì)胞dna染色液中的a試劑和b試劑混合，震蕩30min，然后放入步驟一處理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a試劑按質(zhì)量百分含量由2％硫堇、5％的氫溴酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由87％的叔丁醇、1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中氫溴酸的濃度為5mol/l。

本實(shí)施例染色后的圖片如圖2所示。

實(shí)施例三：一種細(xì)胞dna的染色方法為：一、將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在bs固定液中固定30min，得到固定有細(xì)胞的玻璃片，再放入濃度為2mol/l的氫溴酸中酸化45min；二、將細(xì)胞dna染色液中的a試劑和b試劑混合，震蕩30min，然后放入步驟一處理后的玻璃片，染色45min，即完成；其中a試劑按質(zhì)量百分含量由1％硫堇、5％的鹽酸和余量的水組成；b試劑按質(zhì)量百分含量由1.8％的亞硫酸氫鈉和余量的水組成；其中鹽酸的濃度為5mol/l。

本實(shí)施例染色后的圖片如圖3所示。

將實(shí)施例一、二和三的染色方法和現(xiàn)有dna染色方法進(jìn)行對(duì)比：

現(xiàn)有dna染色方法：先取得細(xì)胞，在細(xì)胞保存液中保存。將細(xì)胞進(jìn)行液基薄層制片，然后在bs固定液中固定半小時(shí)。將片在5摩爾/升鹽酸中酸化60分鐘，然后在染色液中染色60分鐘，脫水，封片，測(cè)量。結(jié)果如圖4所示。由圖1、2、3和圖4可知，本發(fā)明的染色效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有dna染色方法。本實(shí)施例的a、b試劑均為液體狀態(tài)，只需簡(jiǎn)單混合就可以得到滿意的效果，大大節(jié)省了用戶的時(shí)間，提高了工作效率，僅需1.5h，而且無(wú)論是否有操作基礎(chǔ)都可以輕易掌握這個(gè)過(guò)程。