本發(fā)明涉及電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

酪氨酸屬于芳香類(lèi)氨基酸，是合成有機(jī)體內(nèi)多種生成物的原料。酪氨酸雖是人體一種非必需的氨基酸，但它在機(jī)體內(nèi)可通過(guò)不同代謝途徑轉(zhuǎn)化為不同的生理物質(zhì)，對(duì)神經(jīng)處于高度緊張，身體處于極度嚴(yán)寒、疲憊以及長(zhǎng)時(shí)間工作的人群有很大的幫助。酪氨酸在許多領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，例如在醫(yī)學(xué)方面中，可用于醫(yī)治骨髓灰質(zhì)炎、甲狀腺功能缺陷等癥狀，還可用于治療焦急憂(yōu)慮、心情郁悶、皮膚性過(guò)敏、頭痛等癥，幫助黑色素的制造、減輕白癜風(fēng)等癥狀；同時(shí)有助于防止細(xì)胞老化，維持身體健康。在食品領(lǐng)域中，常被用于食品和飲料的營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑以及作為保鮮劑用于罐頭食品?？傊野彼嵩谑称?、醫(yī)藥以及化工等領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛。因此，對(duì)開(kāi)展酪氨酸的定量檢測(cè)在臨床診斷、保障食品和藥品安全等方面有著重要作用。

目前，測(cè)量酪氨酸方法主要有微生物轉(zhuǎn)化法、微生物發(fā)酵法、化學(xué)合成法、化學(xué)發(fā)光法和離子色譜法等。這些方法雖然很重要，但都有一定的局限性。比如微生物轉(zhuǎn)化法易受酶活性影響導(dǎo)致穩(wěn)定性差，微生物發(fā)酵法的代謝途徑調(diào)控機(jī)制復(fù)雜，化學(xué)合成法工藝較復(fù)雜，化學(xué)發(fā)光法選擇性差且對(duì)環(huán)境體系的各種因素要求極高，離子色譜法受ph影響大、酸堿忍耐度差。而電化學(xué)分析法能克服上述傳統(tǒng)測(cè)定方法的缺點(diǎn)，且具有測(cè)定時(shí)間短、易操作、不需要前處理、低碳、投資小等優(yōu)勢(shì)，酪氨酸自身具有電氧化活性這一特點(diǎn)也有利于其的電化學(xué)定量檢測(cè)。電化學(xué)測(cè)定方法中用到的工作電極若未經(jīng)修飾直接使用，其較低的電催化活性將導(dǎo)致分析物的電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)弱，靈敏度和檢出限達(dá)不到痕量檢測(cè)要求。通常，將工作電極進(jìn)行化學(xué)修飾以達(dá)到增強(qiáng)電化學(xué)響應(yīng)的目的。目前用于酪氨酸的定量檢測(cè)的化學(xué)修飾電極有：樹(shù)枝狀銅修飾電極(檢測(cè)范圍為2.0×10^-6～5.0×10^-3mol/l、檢出限為6.0×10^-7mol/l，王曉崗等,化學(xué)世界,2014,7(7):400-404)、聚蘇木精修飾電極(檢測(cè)范圍為5.0×10^-6～1.0×10^-4mol/l、檢出限為3.0×10^-7mol/l，許春萱等,分析試驗(yàn)室,2011,30(7):87-90)、電還原氧化石墨烯修飾電極(檢測(cè)范圍為5×10^-7～8.0×10^-5mol/l、檢出限為2.0×10^-7mol/l，dengkqetal,colloids&surfacesbbiointerfaces,2013,101:183-18)、銪鐵氰化物膜修飾電極(檢測(cè)范圍為1×10^-5～6.0×10^-4mol/l、檢出限為8.0×10^-6mol/l，liuyetal,appliedsurfacescience,2010,256(10):3148-3154)等。鑒于電化學(xué)方法的靈敏性，這些修飾電極檢測(cè)的結(jié)果還有進(jìn)一步的提升空間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極以及電化學(xué)傳感器。所述的化學(xué)修飾電極以及電化學(xué)傳感器具有較寬的檢測(cè)范圍和較低的檢出限。

本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問(wèn)題，通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極的制備方法，包含如下步驟：

(1)取40～60mg氮摻雜石墨烯(n-rgo)，用40～60ml水分散均勻，形成溶液1；

(2)分別取10～11gk4[fe(cn)6]和0.7～0.8gkcl用8～12mlhcl溶解，形成溶液2；

(3)分別取0.1～0.2gfecl3和0.7～0.8gkcl用8～12mlhcl溶解，形成溶液3；

(4)在30～40℃水浴中，以300～600μl/min的速率同時(shí)往溶液1里面滴加溶液2和溶液3，滴加結(jié)束后，攪拌20～60min；

(5)將步驟(4)得到的反應(yīng)液分離、洗滌、干燥后得普魯士藍(lán)/氮摻雜石墨烯納米復(fù)合材料(pb/n-rgo納米復(fù)合材料)；

(6)取2～5mg普魯士藍(lán)/氮摻雜石墨烯納米復(fù)合材料分散在4～8mln,n-二甲基甲酰胺中，取5～8μl該分散液涂覆在洗凈的直徑為2～5mm玻碳電極的表面，烤干后得用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極(pb/n-rgo化學(xué)修飾電極)。

優(yōu)選地，步驟(1)中取45～55mg氮摻雜石墨烯(n-rgo)，用45～55ml水分散均勻，形成溶液1。

最優(yōu)選地，步驟(1)中取50mg氮摻雜石墨烯(n-rgo)，用50ml水分散均勻，形成溶液1。

優(yōu)選地，步驟(2)中分別取10.2～10.6gk4[fe(cn)6]和0.72～0.76gkcl用8～12mlhcl溶解。

最優(yōu)選地，步驟(2)中分別取10.423gk4[fe(cn)6]和0.7455gkcl用10mlhcl溶解。

優(yōu)選地，步驟(3)中分別取0.15～0.2gfecl3和0.7～0.75gkcl用8～12mlhcl溶解。

最優(yōu)選地，步驟(3)中分別取0.162gfecl3和0.7455gkcl用10mlhcl溶解。

優(yōu)選地，步驟(4)中在35℃水浴中，以500μl/min的速率同時(shí)往溶液1里面滴溶液2和溶液3，滴加結(jié)束后，攪拌30min。

優(yōu)選地，步驟(6)中取3mg普魯士藍(lán)/氮摻雜石墨烯納米復(fù)合材料分散在5mln,n-二甲基甲酰胺中，取6μl該分散液涂覆在洗凈的直徑為3mm的玻碳電極的表面。

一種由上述制備方法制備得到的用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極。

對(duì)于使用納米復(fù)合材料制備測(cè)定具體某種化學(xué)成分含量的電極，則需要發(fā)明人根據(jù)具體待測(cè)定的化學(xué)物質(zhì)的性質(zhì)制備不同的納米復(fù)合材料。制備出的電極對(duì)所要測(cè)定物質(zhì)的檢出限、靈敏度、穩(wěn)定性和抗干擾性等效果的好壞主要由納米復(fù)合材料的制備方法決定。納米復(fù)合材料的制備方法主要包括原材料的選擇、原材料的配比，以及各個(gè)步驟反應(yīng)條件等。對(duì)于用作電極的納米復(fù)合材料，其制備方法中原材料的選擇、配比以及各個(gè)步驟反應(yīng)條件的不同都會(huì)導(dǎo)致后續(xù)制備得到的電極電性能的巨大差異，從而導(dǎo)致檢出限、靈敏度、穩(wěn)定性和抗干擾性等效果的巨大差異。

根據(jù)酪氨酸的特性，為得到具有低檢出限的酪氨酸檢測(cè)電極，本發(fā)明發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，不斷調(diào)整原料組成、配比以及制備過(guò)程中的工藝參數(shù)；制備得到粒徑為50～120nm的普魯士藍(lán)納米粒子并成功地將其高分散地負(fù)載在氮摻雜石墨烯上，該過(guò)程將成功增加復(fù)合納米材料的比表面積和催化活性，使得制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極具有優(yōu)異的電化學(xué)響應(yīng)性能，可以顯著降低樣品中酪氨酸的檢出限，以及提高檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性與抗干擾性。

一種用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器，其包含上述用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極。

優(yōu)選地，所述的用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器，其以上述用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極為工作電極，ag-agcl為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，利用三電極法組裝電極測(cè)試體系后連接電化學(xué)工作站得用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器。

一種酪氨酸的定量檢測(cè)方法，其使用上述電化學(xué)傳感器，用差分脈沖伏安法檢測(cè)樣品中的酪氨酸的含量。

優(yōu)選地，所述的定量檢測(cè)方法，具體包含如下步驟：

配置待測(cè)樣品溶液；

使用上述電化學(xué)傳感器，用差分脈沖伏安法測(cè)定待測(cè)樣品溶液中酪氨酸的氧化峰電流值，根據(jù)線(xiàn)性方程換算出酪氨酸的濃度，進(jìn)而得出樣品中酪氨酸的含量；

所述線(xiàn)性方程為ip＝1.65589×10^-6logc+1.15645×10^-5(r²＝0.9904)；方程中c為酪氨酸濃度，ip為差分脈沖伏安法得到的氧化峰電流值；

所述的差分脈沖伏安法的檢測(cè)條件為以ph為5.0的磷酸緩沖液為底液，攪拌富集時(shí)間為10s，靜止時(shí)間2s；所述的差分脈沖伏安法設(shè)置的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s。

有益效果：(1)本發(fā)明提供了一種全新的用于酪氨酸定量檢測(cè)的化學(xué)修飾電極以及電化學(xué)傳感器，該電極或傳感器對(duì)酪氨酸具有優(yōu)異的電催化活性；(2)所述的用于酪氨酸定量檢測(cè)的化學(xué)修飾電極或電化學(xué)傳感器具有極低的檢出限(實(shí)施例表明其檢出限為2.086×10^-10mol/l，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于現(xiàn)有技術(shù)中的6.0×10^-7mol/l、3.0×10^-7mol/l、2.0×10^-7mol/l和8.0×10^-6mol/l)和較寬的檢測(cè)范圍(1.0×10^-8～8.0×10^-4mol/l，寬于現(xiàn)有技術(shù)中的5.0×10^-6～1.0×10^-4mol/l、5×10^-7～8.0×10^-5mol/l和1×10^-5～6.0×10^-4mol/l)以及良好的穩(wěn)定性、抗干擾性和重現(xiàn)性；(3)基于本發(fā)明構(gòu)建的酪氨酸電化學(xué)傳感器操作簡(jiǎn)單、成本低廉，在藥品質(zhì)量控制、食品安全和臨床醫(yī)療等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1為n-rgo(a)和本發(fā)明所述的pb/n-rgo納米復(fù)合材料(b)的掃描電鏡圖。

圖2為n-rgo(a)和本發(fā)明所述的pb/n-rgo納米復(fù)合材料(b)的紅外光譜圖(a)和紫外光譜圖(b)。

圖3為本發(fā)明所述的pb/n-rgo納米復(fù)合材料的能譜圖。

圖4為裸電極(a)、n-rgo修飾電極(b)和本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極(c)在5.0mmol/lk3[fe(cn)6]和0.1mol/lkcl底液中的交流阻抗(a)和循環(huán)伏安圖(b)。

圖5為裸電極(a)、n-rgo修飾電極(b)和本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極(c)在0.04mmol/l酪氨酸溶液中的循環(huán)伏安圖(a)和本發(fā)明所述的pb/n-rgo復(fù)合膜修飾電極在空白磷酸緩沖液(a)和含0.04mmol/l酪氨酸溶液(b)中的循環(huán)伏安圖(b)。

圖6為不同濃度的酪氨酸在pb/n-rgo化學(xué)修飾電極上的差分脈沖伏安圖(a)和酪氨酸氧化峰電流與其濃度對(duì)數(shù)值之間的線(xiàn)性關(guān)系圖(b)。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例對(duì)本發(fā)明不做任何形式的限定。

實(shí)施例1用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極的制備

(1)取50mg氮摻雜石墨烯(n-rgo)，加入50ml水超聲20min分散均勻，形成溶液1；

(2)分別取10.423gk4[fe(cn)6]和0.7455gkcl加入到10mlhcl中攪拌溶解形成溶液2；

(3)分別取0.162gfecl3和0.7455gkcl加入到10mlhcl中攪拌溶解形成溶液3；

(4)在35℃水浴中，以500μl/min的速率同時(shí)往溶液1里面滴加溶液2和溶液3，滴加結(jié)束后，繼續(xù)攪拌30min；

(5)取出上述反應(yīng)液離心分離，用水洗3次后再次離心分離，60℃烘箱中干燥10h后即可得到普魯士藍(lán)/氮摻雜石墨烯納米復(fù)合材料(pb/n-rgo納米復(fù)合材料)；

(6)取3mgpb/n-rgo納米復(fù)合材料在5mln,n-二甲基甲酰胺中超聲分散后，取分散液6μl涂覆在洗凈的玻碳電極(直徑為3mm)的表面，在紅外燈下烤干得用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極(pb/n-rgo化學(xué)修飾電極)。

圖1顯示的是n-rgo(a)和步驟(5)制備得到的pb/n-rgo納米復(fù)合材料(b)的掃描電鏡圖。從圖1(a)可以看到n-rgo具有典型的彎曲褶皺狀結(jié)構(gòu)，從圖1(b)可以清楚地觀察到顆粒狀的普魯士藍(lán)顆粒附著在彎曲褶皺的片狀石墨烯上面，表明該pb/n-rgo納米復(fù)合材料已被成功制備。圖2(a)為n-rgo(a)、pb/n-rgo(b)的紅外光譜圖，兩圖中主要峰相似，但是pb/n-rgo在1950cm^-1處出現(xiàn)明顯的普魯士藍(lán)的特征峰；圖2(b)為n-rgo(a)、pb/n-rgo納米復(fù)合材料(b)的紫外光譜圖，比較發(fā)現(xiàn)普魯士藍(lán)在350nm處出現(xiàn)明顯的紫外特征峰；證實(shí)了普魯士藍(lán)負(fù)載在氮摻雜石墨烯上。圖3顯示了步驟(5)制備得到的pb/n-rgo納米復(fù)合材料的能譜圖。從圖3可知，目標(biāo)產(chǎn)物中主要含有c、o、fe等元素，進(jìn)一步證實(shí)成功合成了pb/n-rgo納米復(fù)合材料；其它元素如k是合成過(guò)程中由反應(yīng)物引入的，對(duì)材料的使用性能無(wú)影響。

實(shí)施例2一種用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器

將實(shí)施例1制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極作為工作電極，以ag-agcl為參比電極、鉑絲電極為輔助電極組裝成三電極測(cè)試體系，并連接電化學(xué)工作站得用于檢測(cè)酪氨酸的電化學(xué)傳感器。

實(shí)施例3用于檢測(cè)酪氨酸的化學(xué)修飾電極或電化學(xué)傳感器的電學(xué)性能測(cè)試

(1)不同電極的電子傳遞性能對(duì)比

在如實(shí)施例2制備得到的三電極測(cè)試體系中，分別以裸玻碳電極(a)、n-rgo修飾電極(b)和實(shí)施例1制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極(c)為工作電極在5.0mmol/lk3[fe(cn)6]混合了0.1mmol/lkcl的底液中進(jìn)行交流阻抗和循環(huán)伏安測(cè)試。交流阻抗測(cè)試條件為：頻率范圍10⁵～0.1hz、振幅5mv、電位0.17v；循環(huán)伏安測(cè)試條件為：電位范圍-0.2～0.6v，掃描速度0.1v/s，測(cè)試結(jié)果如圖2。從圖2(a)可見(jiàn)電化學(xué)阻抗在上述裸電極、n-rgo修飾電極和pb/n-rgo化學(xué)修飾電極上分別為1800ω、500ω和150ω，從圖2(b)可見(jiàn)氧化峰電流在上述三種工作電極分別為5μa、35μa和200μa，結(jié)果表明探針離子在本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極上的阻抗值最小、氧化峰電流最大，說(shuō)明n-rgo上負(fù)載pb納米粒子后其電子傳遞性能和催化活性得到極大增強(qiáng)。

(2)不同電極對(duì)酪氨酸的電催化性能對(duì)比

在如實(shí)施例2制備得到的三電極測(cè)試體系中，分別以裸玻碳電極(a)、n-rgo修飾電極(b)和實(shí)施例1制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極(c)為工作電極在0.04mmol/l酪氨酸溶液中的循環(huán)伏安測(cè)試，測(cè)試的電位范圍為-0.2～1.2v、掃描速度為0.1v/s，圖5(a)為測(cè)試結(jié)果。從圖中可見(jiàn)酪氨酸在本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極上的氧化峰電流為55.16μa，峰電位為0.851v。酪氨酸在n-rgo修飾電極和裸玻碳電極上的氧化峰電流分別為20.20μa和4.56μa，氧化峰電位分別為0.878v和0.915v。酪氨酸在本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極上的氧化峰電流值最大，氧化超電勢(shì)分別下降了27mv和64mv，說(shuō)明了本發(fā)明所制備的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極對(duì)酪氨酸有著最好的電催化活性，有利于提高傳感器的檢測(cè)靈敏度。圖5(b)為本發(fā)明所述的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極在空白磷酸緩沖液(a)和含0.04mmol/l酪氨酸溶液(b)中的循環(huán)伏安圖。從該圖可知，pb/n-rgo化學(xué)修飾電極本身在pbs溶液中于1.10v處有pb的氧化峰，而當(dāng)溶液中含有酪氨酸時(shí)會(huì)在0.851v處出現(xiàn)一新的氧化峰，即可證實(shí)該峰即為酪氨酸的氧化峰，利用該峰可對(duì)酪氨酸進(jìn)行定量檢測(cè)。

(3)本發(fā)明制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極對(duì)酪氨酸的檢測(cè)性能測(cè)試

以實(shí)施例1制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極為工作電極、ag-agcl電極為參比電極和鉑絲電極為輔助電極，利用三電極法組裝電極測(cè)試體系，并連接電化學(xué)工作站(構(gòu)建方法如實(shí)施例2所示)；在ph為5.0的磷酸緩沖液中，富集10s，靜止2s后對(duì)一系列酪氨酸溶液進(jìn)行差分脈沖伏安法測(cè)試。差分脈沖伏安法設(shè)置的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s。結(jié)果表明(見(jiàn)圖6)酪氨酸的氧化峰電流隨其濃度增加而增大，在1.0×10^-8～8.0×10^-4mol/l濃度范圍內(nèi)酪氨酸氧化峰電流與其濃度的對(duì)數(shù)值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為：ip＝1.65589×10^-6logc+1.15645×10^-5，相關(guān)系數(shù)r²＝0.99039，該方程中c為酪氨酸濃度，ip為差分脈沖伏安法得到的氧化峰電流值。檢出限利用下面方程得到：

dl＝ksb/r

上式中，dl為檢出限；sb為空白液測(cè)定20次所得信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差，實(shí)驗(yàn)中測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)偏差為8.625×10^-11；k為置信系數(shù)，通常k取3；r為方法的靈敏度；經(jīng)計(jì)算可得檢出限為2.086×10^-10mol/l。說(shuō)明本發(fā)明所制備得到的電極具有良好的線(xiàn)性關(guān)系和極低的檢出限。

(4)本發(fā)明制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性測(cè)試

按照實(shí)施例1的步驟制備10支相同的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極，分別以這10支電極為工作電極、ag-agcl為參比電極和鉑絲電極為輔助電極，用三電極法組裝電極測(cè)試系統(tǒng)并連接電化學(xué)工作站(構(gòu)建方法如實(shí)施例2所示)，在ph為5.0的磷酸緩沖液中，富集10s，靜止2s，利用差分脈沖伏安法對(duì)同一濃度的酪氨酸進(jìn)行測(cè)定。差分脈沖伏安法設(shè)置的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.66％。將其中一支bp/n-rgo修飾電極保存在4℃冰箱中，選取10個(gè)不同的時(shí)間段(保存前測(cè)試第1次，然后每隔2天測(cè)試1次)，利用上述同樣條件和方法對(duì)同一濃度的酪氨酸進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.35％；表明本發(fā)明提供的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極具有較好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。

(5)本發(fā)明制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極的抗干擾能力測(cè)試

將實(shí)施例1制備得到的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極利用三電極法組裝電極測(cè)試體系，并連接電化學(xué)工作站構(gòu)成電化學(xué)傳感器(構(gòu)建方法如實(shí)施例2所示)，利用差分脈沖伏安法考察了外來(lái)干擾物質(zhì)對(duì)酪氨酸測(cè)定的影響。差分脈沖伏安法設(shè)置的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s。具體測(cè)試方法是，在4.5ml磷酸底液中加入0.5ml1mmol/l的酪氨酸，調(diào)節(jié)底液ph為5.0，在富集10s、靜止2s后通過(guò)差分脈沖伏安法測(cè)定其氧化峰電流值，再加入0.5ml1mol/l(或10mol/l)的干擾物質(zhì)，通過(guò)差分脈沖伏安法測(cè)定酪氨酸的氧化峰電流值。對(duì)比加入干擾物質(zhì)前后酪氨酸的氧化峰電流值的變化情況，如果偏差在±5％以?xún)?nèi)，可以認(rèn)為干擾物對(duì)分析物的檢測(cè)無(wú)影響。測(cè)試結(jié)果表明，本發(fā)明所制備的傳感器在10倍的葡萄糖、草酸、vb1、kcl、fecl3以及1倍的色氨酸，腺嘌呤，抗壞血酸、撲熱息痛和香草醛等物質(zhì)的干擾下對(duì)酪氨酸的檢測(cè)值偏差在±5％以?xún)?nèi)，說(shuō)明本發(fā)明提供的pb/n-rgo化學(xué)修飾電極具有較好的抗干擾能力，能有效地對(duì)酪氨酸進(jìn)行定量檢測(cè)。

實(shí)施例4酪氨酸的定量檢測(cè)方法

(1)配置待測(cè)樣品溶液；

(2)使用實(shí)施例2所述的電化學(xué)傳感器，用差分脈沖伏安法測(cè)定待測(cè)樣品溶液中酪氨酸的峰電流值，根據(jù)線(xiàn)性方程換算出酪氨酸的濃度，進(jìn)而得出樣品中酪氨酸的含量；

所述線(xiàn)性方程為ip＝1.65589×10^-6logc+1.15645×10^-5(r²＝0.9904)；方程中c為酪氨酸濃度，ip為差分脈沖伏安法得到的氧化峰電流值；

所述的差分脈沖伏安法的檢測(cè)條件為以ph為5.0的磷酸緩沖液為底液，攪拌富集時(shí)間為10s，靜止時(shí)間2s；所述的差分脈沖伏安法設(shè)置的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s。

實(shí)施例5實(shí)際樣品檢測(cè)

稱(chēng)取0.9684g葡萄干和1.1260g花生米為實(shí)際樣品進(jìn)行酪氨酸的定量檢測(cè)，將實(shí)際樣品碾碎后分別加入20ml醋酸溶液浸泡24h后備用。分別取準(zhǔn)備好的樣品溶液0.2ml，加入5ml磷酸緩沖液并調(diào)整ph為5.0后進(jìn)行差分脈沖伏安測(cè)試，差分脈沖伏安測(cè)試的操作條件為：電位掃描范圍0.0～1.1v、電位增量4mv、振幅50mv、一次脈沖寬度0.2s、二次脈沖寬度0.05s、測(cè)樣寬度0.0167s、脈沖周期0.5s。先在樣品溶液中掃描測(cè)定一組數(shù)據(jù)后，再分別在葡萄干樣品液中加入0.5ml濃度為10umol/l的和1.0ml、1.5ml濃度為20umol/l的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液；在花生米樣品液中加入0.5ml濃度為1umol/l的和1.0ml、1.5ml濃度為2umol/l的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)一步進(jìn)行差分脈沖伏安測(cè)試。測(cè)定結(jié)果顯示測(cè)樣品溶液有氧化峰電流出現(xiàn)，該峰電流值隨著酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入而不斷增大且呈線(xiàn)性關(guān)系，說(shuō)明葡萄干和花生米樣品中含有酪氨酸且能利用pb/n-rgo化學(xué)修飾電極進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)樣品溶液中得到的標(biāo)準(zhǔn)加入曲線(xiàn)的延長(zhǎng)線(xiàn)與濃度軸的交點(diǎn)，可求得酪氨酸在葡萄干中的含量為9.65×10^-6mol/l、在花生米中的含量為9.21×10^-6mol/l；說(shuō)明了本發(fā)明提供的化學(xué)修飾電極或電化學(xué)傳感器可用于食品、藥品等物質(zhì)中酪氨酸含量的定量檢測(cè)。