本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種超高效液相-四級桿靜電場軌道阱高分辨質譜檢測白酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。技術背景氨基甲酸乙酯(ethylcarbamate，簡稱ec)又名脲烷，具有基因毒性和致癌性，國際癌癥研究機構(iarc)將其定為“2a”級致癌物。氨基甲酸乙酯不僅是煙草葉和香煙的天然成分，也是發(fā)酵食品和酒精飲料的副產(chǎn)物。人體攝取氨基甲酸乙酯主要是通過飲用酒精飲料。對于長期飲用酒精飲料的人們，氨基甲酸乙酯在體內(nèi)積累，無疑增加了致癌的風險。對此，1985年，加拿大衛(wèi)生與福利院組織規(guī)定了各類酒中的ec限量標準：佐餐葡萄酒30μg/l，強化葡萄酒100μg/l，蒸餾酒150μg/l，水果白蘭地400μg/l，清酒100μg/l，隨后歐美等國家也相繼提出來各種酒類中的限量標準。但目前國際上尚無統(tǒng)一限量，主要以加拿大ec限量作為主要參照。目前測定酒中氨基甲酸乙酯的前處理方法主要有衍生法、液-液萃取法、固相微萃取法、固相萃取法四種，其中衍生法需要使用衍生試劑9-羥基噸，該方法雖操作簡單，但衍生時間長；液-液萃取法雖無需貴重儀器，但需要使用大量有機溶劑、乳化現(xiàn)象嚴重且操作系統(tǒng)誤差大，方法的精密度及準確度較低；固相微萃取法雖簡便快速環(huán)保，且不需要萃取溶劑，但方法的精密度和準確度較低、成本高；固相萃取法準確度高，重復性好，但溶劑用量大、對操作者要求高[1]。酒類中氨基甲酸乙酯的儀器檢測方法主要有hplc法、gc-ms法、lc-ms法等，但這些方法有的需要對樣品進行復雜的前處理，耗時費力；有的分析時間長，需要消耗一定量的有機溶劑，對操作者的身體健康有不良影響，不經(jīng)濟環(huán)保；有的因乙醇的存在對質譜穩(wěn)定性有嚴重影響。也有人采用超高效液相色譜-四級桿靜電場軌道阱高分辨質譜檢測白酒中的氨基甲酸乙酯，其方法為將白酒稀釋后以降低基質效應再進行ec的檢測，然而，由于白酒中酒精濃度較高，為了降低基質效應，需要進行高倍稀釋，高倍稀釋雖然可以減輕基質效應，同時也會降低方法的檢出能力，且目標物峰形較差[2]。練順才等[3]采用了減壓蒸餾法除去樣品中的乙醇，操作復雜，費時費力，且加標回收率或高或低，蒸餾后樣品中的乙醇含量難控制，使ec定量存在較大的誤差。上述前處理方法和儀器分析方法，或者需要大量的溶劑，或者需要復雜的前處理，或者精密度和準確度低，無一能夠滿足快速、簡單、環(huán)保、精確的氨基甲酸乙酯的分析需求。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種白酒中氨基甲酸乙酯含量分析的前處理方法。本發(fā)明的目的還在提供一種超高效液相色譜-四級桿靜電場軌道阱高分辨質譜檢測白酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。本發(fā)明的目的還在于提供一種不需要有機溶劑、環(huán)保、安全的白酒中氨基甲酸乙酯含量的分析方法。本發(fā)明的目的在于提供一種無乙醇對質譜穩(wěn)定性的干擾，可以快速、準確、穩(wěn)定、批量的對白酒中的痕量氨基甲酸乙酯進行定性定量分析方法。本發(fā)明的上述目的具體是通過以下技術方案得以實現(xiàn)的：一種超高效液相色譜-四級桿靜電場軌道阱高分辨質譜檢測白酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，其包含以下步驟：(1)取樣：量取一定體積的白酒，如1～5ml；(2)氮吹除醇：在15～30℃以下氮吹至乙醇除凈，剩余體積為原體積的30-50％；(3)定容：用超純水定容到原體積的0.5～5倍；(4)過濾：采用0.22μm微孔濾膜過濾；(5)過濾后的液體進行超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜分析：其中，步驟(2)中，作為優(yōu)選的實施方式，氮吹除醇條件為：在氮吹25℃下氮吹至原酒樣體積的40％；其中，步驟(3)中，作為優(yōu)選的實施方式，定容條件為：用超純水定容到原體積的2倍；其中，步驟(5)中，超高效液相色譜條件為：thermohypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)色譜柱，檢測溫度20～50℃，進樣量1-10μl，0.05～0.30％(v/v)甲酸水。作為流動相進行等度洗脫；流速為200～400μl/min。作為優(yōu)選的實施方式，高效液相色譜條件為：檢測溫度50℃，進樣量10μl，0.08～0.12％(v/v)甲酸水溶液作為流動相進行等度洗脫，分析時間5min；流速為300μl/min。作為更優(yōu)選的實施方式，采用0.10％(v/v)甲酸水溶液作為流動相。其中，步驟(5)中，質譜條件如下：采用加熱hesi源，正離子模式，源參數(shù)：毛細管電壓3.1kv，鞘氣35arb(1arb≈0.3l/min)，輔助氣20arb，吹掃氣3arb，霧化溫度170℃，掃描范圍50-100，分辨率70000，掃描模式fullms/dd-ms2。作為優(yōu)選的實施方式，源參數(shù)為：鞘氣35arb(1arb≈0.3l/min)，輔助氣20arb，吹掃氣3arb。其中，所述氨基甲酸乙酯分子離子[m+h]+90.05540為定量離子，特征離子m/z62.0240為定性離子。本發(fā)明的有益效果：(1)前處理簡單：僅采用氮吹除醇、定容、過濾。(2)安全環(huán)保：前處理和進樣過程中基本沒有使用到有機溶劑，采用超純水定容，流動相中基本也為超純水，整個分析過程中不會對人類健康產(chǎn)生影響，環(huán)境友好。(3)快速、準確、靈敏度高：利用氮吹除醇完全避免乙醇對質譜穩(wěn)定性的干擾，高分辨質譜準確定定量樣品中痕量氨基甲酸乙酯，且無需進行梯度洗脫，整個分析過程中僅需采用一種流動相。附圖說明圖1氨基甲酸乙酯的二級質譜圖；圖2不同色譜柱對于分析效果的影響，從左到右依次為色譜柱1～色譜柱4；圖3洗脫條件1～4對于分析效果的影響，從上到下依次為：洗脫條件1～洗脫條件4；圖4不同定容體積對目標物分析效果的影響；圖5氮吹除醇后剩余不同體積對于分析效果的影響。具體實施方式下面結合附圖和具體的實施方式來對本發(fā)明的技術方案做進一步的限定，但要求保護的范圍不僅局限于所作的描述。氨基甲酸乙酯購于美國sigma公司；甲酸及甲醇、乙腈(lc-ms級)購于美國tedia公司。超高效液相色譜-四級桿靜電場軌道阱高分辨質譜儀(thermofisherscientific)、分析天平(mettlertoledoxp205)、純水儀(艾科浦rm-220)，氮吹器(日本日立)。色譜柱：agilent的eclipseplusc18(50×2.1mm，1.8μm)、eclipseplusc18(50×2.1mm，1.8μm)、eclipsexdb-c18(150×2.1mm，3.5μm)；thermo的hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)實施例1采用色譜柱(thermohypersilgoldaq)測定白酒中的氨基甲酸乙酯含量實驗方法：標準溶液的配制準確稱取氨基甲酸乙酯標準品0.2000g于100ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100ml，配制成2000mg/l的標準儲備液，置于4℃冰箱中保存。樣品前處理方法量取1ml的白酒，25℃氮吹至0.4ml，用超純水定容至原來的體積2倍，0.22μm微孔濾膜過濾；取濾液2ml進樣瓶中進行超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜分析。儀器方法超高效液相色譜條件為：thermo的hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)色譜柱，檢測溫度50℃，進樣量10μl；流動相為0.10％(v/v)甲酸水溶液，流速為300μl/min，等度洗脫，分析時間5min。質譜條件如下：采用加熱hesi源，正離子模式，源參數(shù)：毛細管電壓3.1kv，鞘氣35arb(1arb≈0.3l/min)，輔助氣20arb，吹掃氣3arb，霧化溫度170℃，掃描范圍50-100，分辨率70000，掃描模式fullms/dd-ms2。氨基甲酸乙酯分子離子[m+h]+90.05540為定量離子，特征離子m/z62.0240為定性離子。結果與討論1、流動相流速優(yōu)化本實驗考察了200、300、400μl/min三種流速對色譜行為的影響。以300μl/min為流速，目標物峰寬窄，峰形好，與干擾物分離度好。以200μl/min為流速時，雖然目標物與干擾物分離度更大，但峰寬達0.8～1min；以400μl/min為流速時，壓力大，不利于色譜柱長時間使用。所以流速300μl/min為最優(yōu)流速。2、質譜條件優(yōu)化分別在正離子模式和負離子模式下對氨基甲酸乙酯標液進行掃描，發(fā)現(xiàn)在正離子模式下ec分子離子[m+h]+(母離子)的豐度最強，通過優(yōu)化質譜參數(shù)獲得較強的質譜信號。氨基甲酸乙酯[m+h]+母離子的精確理論質量數(shù)為90.05496，而實驗中實際質量數(shù)為90.05540，對母離子施加碰撞能量，獲得其二級質譜圖，結果見圖1。由于ec相對分子質量較小，結構簡單，經(jīng)質譜碰撞碎裂后只得到一個較明顯的特征碎片離子，其特征子離子為62.0240，可能原因是由于α-裂解和γ-重排作用使ec丟失c2h4基團，最終產(chǎn)生m/z62.0240碎片離子。3、方法學評價(1)線性范圍和檢出限分別配制質量濃度為2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、400.0μg/l的氨基甲酸乙酯標準溶液，以上述儀器條件下進行測定，采用外標法定量。以目標物的濃度為縱坐標y(μg/l)、母離子的色譜峰面積為橫坐標(x)，繪制標準曲線，得到線性方程：y＝5e-06x-0.891，r2＝0.9994，線性范圍2.0～400.0μg/l。以信噪比(s/n)為3計算得到氨基甲酸乙酯的檢出限(lod)為0.19μg/l，信噪比(s/n)為10計算得定量限(loq)為0.64μg/l。(2)回收率在待測酒樣中加入ec標準溶液，使其配制成加標濃度為20.0、50.0、100.0μg/l的加標樣品，按上述方法進行前處理，然后進儀器分析，每個添加水平做3次平行，最后計算平均回收率，驗證方法的準確度，結果見表1。對于3種不同的加標量，回收率在99.2％～101.2％之間，相對標準偏差(rsd)在0.6％～1.2％范圍內(nèi)。可見此方法檢測白酒中的氨基甲酸乙酯具有良好的回收率，前處理方法對待測樣品基本上無損失。表1.樣品加標回收實驗結果(3)精密度和穩(wěn)定性實驗分別配制兩種ec濃度為10.0、50.0μg/l的標準溶液，重復測定6次；隨機取一樣品，按上述方法進行樣品前處理，平行樣品6份，進儀器分析。分別驗證儀器與方法的精密度和穩(wěn)定性，結果見表4，從表中可看出濃度為10.0、50.0μg/l的標樣rsd值分別為1.6％、0.8％，樣品的相對標準偏差rsd值為1.1％，表明該方法具有良好的精密度和穩(wěn)定性。表2方法的精密度和穩(wěn)定性實施例2采用色譜柱(thermohypersilgoldaq)測定白酒中的氨基甲酸乙酯含量實驗方法同權利要求1，有以下不同點：進樣量1μl；質譜條件：源參數(shù)：毛細管電壓3.1kv，鞘氣40arb(1arb≈0.3l/min)，輔助氣10arb，吹掃氣0arb，霧化溫度170℃，掃描范圍50-100，分辨率70000，掃描模式fullms/dd-ms2。實施例3不同色譜柱的選擇對分析效果的影響現(xiàn)有技術中，對氨基甲酸乙酯分析采用的柱子一般為poroshell120ec-c18、zorbaxsb-c18等，而本發(fā)明在實驗中，發(fā)現(xiàn)這些柱子對于氨基甲酸乙酯分離效果和保留相對較差。因此，本發(fā)明結合氨基甲酸乙酯的結構特性，選擇了agilent的eclipseplusc18(50×2.1mm，1.8μm)、eclipsexdb-c18(150×2.1mm，3.5μm)、eclipsexdb-c18(100×2.1mm，1.8μm)和thermo的hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)4種色譜柱對化合物進行測試。實驗方法如下：1.實驗步驟同實例1,不同之點如下：色譜柱：eclipseplusc18(50×2.1mm，1.8μm，agilent)超高效液相色譜流動相a為0.10％(v/v)甲酸水溶液，b為乙腈，流速為300μl/min，洗脫程序見表3。表3流動相線性洗脫條件時間(min)a％b％流量(μl/min)0.0090103000.5090103002.5010903008.0010903008.1090103001090103002.實驗步驟同實例1,不同之點如下：色譜柱：eclipsexdb-c18(150×2.1mm，3.5μm，agilent)流動相：a：0.10％(v/v)甲酸水溶液，b：乙腈，梯度洗脫，洗脫條件如下：表4流動相線性洗脫條件3.實驗步驟同實例1,不同之點如下：色譜柱：eclipsexdb-c18(100×2.1mm，1.8μm，agilent)流動相：a：0.10％(v/v)甲酸水溶液，b：乙腈，洗脫條件如下：表5流動相線性洗脫條件時間(min)a％b％流量(μl/min)0.0090103004.0090103004.10109030010.00109030010.10901030015.0090103004.實驗步驟完全同實施例1，即采用的色譜柱為thermo的hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)需要說明的是，上述柱子的流動相梯度為經(jīng)實驗摸索后，對于該柱子和該目標化合物分析效果最好的洗脫條件。實驗結果與討論：結果發(fā)現(xiàn)，目標化合物在thermo的hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)柱上的分離度和保留優(yōu)于其他三種色譜柱，見圖2，而其他三種色譜柱對目標物的保留較差，且干擾物與目標物分離不理想，甚至共流出，導致影響目標物靈敏度，尤其是目標物含量較低時，影響尤為明顯；hypersilgoldaq(150×2.1mm，1.9μm)避免了干擾物和目標化合物共流出，使干擾物與目標物流出時間相差3.0min左右，可通過設置質譜采集時間，避免干擾物進入質譜，提高目標物靈敏度，且該色譜柱在100％的水相中穩(wěn)定性好，可得到較窄的峰寬和很好的峰形。實施例4不同的洗脫條件對于分析效果的影響本發(fā)明分析了不同的洗脫條件對于分析效果的影響，洗脫條件如下，其余的實驗步驟同實施例1。洗脫條件1為：流動相a為0.10％(v/v)甲酸水溶液，b相為甲醇，等度洗脫，50％a+50％b，分析時間5min；洗脫條件2為：流動相a為0.10％(v/v)甲酸水溶液，b相為甲醇，等度洗脫，90％a+10％b，分析時間5min；洗脫條件3為：流動相a為0.10％(v/v)甲酸水溶液，b相為乙腈，等度洗脫，90％a+10％b，分析時間5min；洗脫條件4為：流動相為a為0.10％(v/v)甲酸水溶液，等度洗脫，100％a，分析時間5min；實驗討論：本實驗考察了4種不同洗脫條件對對色譜行為和離子化程度的影響，如圖3。結果表明，甲酸水溶液流動相比其他三種流動相體系有更好的洗脫效果，且干擾物與目標物分離很好，峰形最佳。洗脫條件1～3因流動相中加入洗脫能力強的乙腈、甲醇，致使干擾物與目標物分離不佳，且峰形較差，影響ec定量結果。所以選擇0.10％(v/v)甲酸水溶液作為最優(yōu)流動相?，F(xiàn)有技術中，氨基甲酸乙酯采用液相色譜-質譜聯(lián)用進行分析時，常采用的流動相為乙腈或甲醇和甲酸/乙酸水，而事實上，經(jīng)本發(fā)明實驗證實，在本發(fā)明的方法中，洗脫溶劑僅需采用甲酸水溶液，不含有機溶劑，經(jīng)濟環(huán)保，分析方法十分簡單。實施例5不同的定容體積對于分析效果的影響本發(fā)明分析了不同的定容體積對于分析效果的影響，定容體積如下，其余的實驗步驟同實施例1。定容條件1：用超純水定容到原酒樣體積0.5倍定容條件2：用超純水定容到原酒樣體積1倍定容條件3：用超純水定容到原酒樣體積2倍定容條件4：用超純水定容到原酒樣體積3倍定容條件5：用超純水定容到原酒樣體積5倍實驗討論：本實驗考察了5種不同定容體積對目標物分析效果的影響，選取ec響應值與稀釋倍數(shù)之積最高的一組的定容體積作為最優(yōu)定容體積，如圖4。結果表明，定容體積為原體積的2倍時響應最大；氮吹除醇后定容體積為原體積的0.5、1倍時，干擾物含量較高，對目標物存在一定干擾，影響其靈敏度；氮吹除醇后定容體積為原體積的3、5倍時，稀釋倍數(shù)較大，目標物隨之被稀釋，峰形變差，響應值降低。所以選擇最佳定容體積為原體積的2倍。實施例6氮吹除醇后剩余不同體積對于分析效果的影響本發(fā)明分析了氮吹除醇后剩余不同體積對于分析效果的影響，定容體積如下，其余的實驗步驟同實施例1。氮吹除醇條件1：氮吹至原體積30％；氮吹除醇條件2：氮吹至原體積40％；氮吹除醇條件3：氮吹至原體積50％；實驗討論：實驗考察了1ml酒樣氮吹除醇后剩余體積為原體積的30％～50％對目標物的分析效果的影響，如圖5。結果表明，在30％在50％的范圍內(nèi)，目標物的響應差別不是很大，氮吹至原體積的40％時目標物響應最高；氮吹至原體積的50％時，樣品中仍存在少量乙醇，干擾目標物離子化和穩(wěn)定性，降低目標物響應值；而氮吹至原體積的30％時，由于氮吹過度，目標物有損失，致使樣品中目標物含量減少，響應降低。所以選擇最佳氮吹后剩余體積為原體積的40％。本發(fā)明所述的檢測方法能夠適用于任何一種白酒中氨基甲酸乙酯含量的檢測。在此有必要指出的是，以上實施例和實驗例僅限于發(fā)明的技術方案做進一步的闡述和說明，使得本領域技術人員能夠更加準確地理解本發(fā)明的發(fā)明思路以及操作方案，并不是對本發(fā)明的進一步限制，本領域技術人員在此基礎上作出的非突出的實質性特征和非顯著進步的改進，均屬于本發(fā)明的保護范疇。參考文獻：[1]劉紅麗,張榕杰,盧素格.酒中氨基甲酸乙酯的測定分析[j].中國衛(wèi)生工程學,2010(4):299-300.[2]王成龍,黃秋婷,戚平.超高效液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質譜法對酒中氨基甲酸乙酯確認分析的研究[j].釀酒科技,2016(7):112-115.[3]練順才,周韓玲,李楊華,等.蒸餾酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色譜-質譜檢測方法[j].釀酒科技,2014(8):117-118.當前第1頁12