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      一種尿液有形成分質(zhì)控品的制備方法與流程

      文檔序號(hào):11232782閱讀:2220來源:國(guó)知局

      本發(fā)明屬于醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種尿液有形成分質(zhì)控品的制備方法。



      背景技術(shù):

      尿液分析是一項(xiàng)方便、常用和重要的實(shí)驗(yàn)室檢查,對(duì)于泌尿系統(tǒng)感染性和非感染性疾病的篩查、輔助診斷、病程和療效監(jiān)測(cè),以及對(duì)其他系統(tǒng)疾病(如糖尿病、高血壓、遺傳性疾病、藥物不良反應(yīng)等)的篩查、療效或并發(fā)癥監(jiān)測(cè)都有重要意義。尿液有形成分檢驗(yàn)是尿液分析的重要組成部分,對(duì)于臨床醫(yī)生了解泌尿系統(tǒng)各個(gè)部位的變化,對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病進(jìn)行定位診斷、鑒別診斷和愈后判斷更具有應(yīng)用價(jià)值。尿沉渣中有形成分檢查中經(jīng)典的方法是在顯微鏡下進(jìn)行人工判別,但標(biāo)準(zhǔn)化人工顯微鏡尿有形成分檢查操作繁瑣、速度慢,在當(dāng)前臨床檢查的標(biāo)本不斷增加的背景下,越來越多的醫(yī)院采用自動(dòng)化有形成分分析儀進(jìn)行尿液有形成分的篩查,采用合適的質(zhì)控品對(duì)檢測(cè)儀器進(jìn)行質(zhì)量控制是檢測(cè)儀器運(yùn)行狀態(tài)、獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要條件。

      目前臨床上所用尿液有形成分質(zhì)控品主要有日本sysmex公司ufⅱcontrol尿有形成分檢測(cè)質(zhì)控品和美國(guó)bio-rad公司尿質(zhì)控品,但是價(jià)格昂貴。其中sysmex公司ufⅱcontrol尿有形成分檢測(cè)質(zhì)控品采用不同大小的微粒可代表紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型和細(xì)菌,僅適用于sysmex公司的流式細(xì)胞術(shù)原理的尿有形成分分析儀,不適用于顯微鏡檢查和采用機(jī)器視覺原理的尿液有形成分分析系統(tǒng);美國(guó)bio-rad公司的尿質(zhì)控品所提供的可供檢測(cè)的有形成分少,僅有紅細(xì)胞、白細(xì)胞和結(jié)晶成分,缺少對(duì)臨床上有重要意義的管型成分。因此,需要對(duì)尿有形成分質(zhì)控品進(jìn)行研究開發(fā)。



      技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

      本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn),提供了一種尿液有形成分質(zhì)控品的制備方法,該方法制備過程簡(jiǎn)單,成品含量較為全面、準(zhǔn)確、穩(wěn)定,并且該質(zhì)控品能夠適用于各種分析儀的應(yīng)用中,應(yīng)用范圍較廣。

      本發(fā)明的具體技術(shù)方案是:

      一種尿液有形成分質(zhì)控品的制備方法,關(guān)鍵點(diǎn)是,所述的制備方法包括以下步驟:

      a、分別取edta抗凝的血液、白細(xì)胞大于50個(gè)/高倍視野的尿液、管型大于30個(gè)/低倍視野的尿液、鱗狀上皮細(xì)胞大于30個(gè)/低倍視野的尿液,上述各成分的體積比為(0.02-0.03):(20-40):(20-40):(20-40),隨后在各成分中加入稀釋液,血液與其稀釋液添加量的體積比為(0.02-0.03):(42-52),其他尿液與各自稀釋液添加量的體積比為(2-4):(1-3),添加稀釋液后混勻并離心去除上清液,然后將剩余物洗滌3-5次,隨后加入2%-3%的戊二醇,血液與其戊二醇添加量的體積比為(0.02-0.03):(3-7),其他尿液與各自戊二醇添加量的體積比為(20-40):(3-7),隨后向各成分中添加稀釋液至離心前的體積,混勻后振蕩1-1.5h,2-6℃下保存8-24h后備用,分別形成a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液;

      選擇尿液真菌培養(yǎng)時(shí)在科馬嘉念珠菌顯色鑒別培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的白色念珠菌菌落4-6個(gè),在所選菌落中加入生理鹽水,生理鹽水和所選菌落的總體積在a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液中最小值和最大值之間,加入生理鹽水后混勻并進(jìn)行離心去除上清液,然后將剩余物洗滌3-5次,隨后向剩余物中加入8%-12%的甲醛生理鹽水至離心前的體積,2-6℃下保存8-24h后備用,形成e溶液;

      b、選取尿蛋白、潛血和尿有形成分正常的尿液,進(jìn)行高壓滅菌,隨后自然冷卻至常溫備用,形成f溶液;

      c、將a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理鹽水洗滌2-4次,隨后各取適量與f溶液混合至濃度分別為20-25個(gè)/μl、15-25個(gè)/μl、5-10個(gè)/μl、3-6個(gè)/μl、5-10個(gè)/μl的a1溶液、b1溶液、c1溶液、d1溶液以及e1溶液,最后將各溶液進(jìn)行均勻混合后形成低值質(zhì)控品原液;

      將a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理鹽水洗滌2-4次,隨后各取適量與f溶液混合至濃度分別為200-250個(gè)/μl、30-40個(gè)/μl、15-30個(gè)/μl、10-15個(gè)/μl、20-30個(gè)/μl的a2溶液、b2溶液、c2溶液、d2溶液以及e2溶液,最后將各溶液進(jìn)行均勻混合后形成高值質(zhì)控品原液;

      d、向低值質(zhì)控品原液和高值質(zhì)控品原液中分別加入慶大霉素,加入量為2-4mg/100ml,混勻后分別加入兩性霉素b,加入量為0.2-0.3mg/100ml,混勻后分別形成低值質(zhì)控品成品和高值質(zhì)控品成品。

      所述的步驟a中,所述稀釋液為sysmex血液分析儀用的稀釋液。

      所述的步驟a中,edta抗凝的血液為edta抗凝的健康成人全血,選取20-30μl,白細(xì)胞大于50個(gè)/高倍視野的尿液、管型大于30個(gè)/低倍視野的尿液、鱗狀上皮細(xì)胞大于30個(gè)/低倍視野的尿液各選取20-40ml,各成分中添加稀釋液后的體積均為50ml,所選戊二醇為2.5%且添加量為5ml;所述白色念珠菌菌落中加入生理鹽水后的體積為50ml,所選甲醛生理鹽水為10%。

      所述的步驟b中,所述尿液分別取自尿蛋白、潛血和尿有形成分正常且尿液ph值為6-7的至少5名健康者,均勻混合后進(jìn)行高壓滅菌。

      本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明通過血液、不同成分尿液以及尿液真菌培養(yǎng)時(shí)在科馬嘉念珠菌顯色鑒別培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的白色念珠菌菌落的制備和混合來形成質(zhì)控品原液,所得原液中的成分較為精準(zhǔn),工藝過程簡(jiǎn)單,成品的成分精準(zhǔn)性和穩(wěn)定性較高,合格率較高,采用本發(fā)明中的制備方法制備的質(zhì)控品包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型和真菌五種常見成分,4-8℃條件下保存的穩(wěn)定期至少可達(dá)60天以上,同時(shí),該質(zhì)控品可以適用于顯微鏡檢查、機(jī)器視覺原理的尿液有形成分分析儀檢查以及流式細(xì)胞術(shù)原理的尿液有形成分分析儀檢查,適用范圍廣,避免了各個(gè)設(shè)備的不通用性。

      具體實(shí)施方式

      本發(fā)明涉及一種尿液有形成分質(zhì)控品的制備方法,該制備方法選取不同條件的血液、尿液以及菌落,并分別進(jìn)行稀釋、離心以及振蕩等操作,形成質(zhì)控品的制備原料,隨后用健康者尿液進(jìn)行混合形成質(zhì)控品原液,隨后進(jìn)行慶大霉素和兩性霉素b的配比處理,最后形成質(zhì)控品成品,具體的操作步驟通過具體實(shí)施例進(jìn)行展示。

      具體實(shí)施例,所述的制備方法包括以下步驟:

      a、分別取edta抗凝的健康成人全血20-30μl以及白細(xì)胞大于50個(gè)/高倍視野的尿液、管型大于30個(gè)/低倍視野的尿液、鱗狀上皮細(xì)胞大于30個(gè)/低倍視野的尿液各20-40ml,分別加入不同的帶帽離心管中,各個(gè)離心管中加入稀釋液至總體積為50ml并進(jìn)行混合,所述稀釋液為sysmex血液分析儀用的稀釋液,混勻后離心去除上清液并洗滌3-5次,然后加入2.5%的戊二醇5ml,隨后加入稀釋液稀釋至總體積為50ml,所述稀釋液為sysmex血液分析儀用的稀釋液,充分混勻后振蕩1-1.5h,4℃下保存8-24h后備用,分別形成a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液;

      選擇尿液真菌培養(yǎng)時(shí)在科馬嘉念珠菌顯色鑒別培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的綠色菌落4-6個(gè),該綠色菌落為白色念珠菌菌落,將所選菌落加入帶帽離心管中,離心管中加入生理鹽水至總體積為50ml并進(jìn)行混合,混勻后離心去除上清液并洗滌3-5次,隨后加入10%的甲醛生理鹽水至總體積為50ml并混合均勻,4℃下保存8-24h后備用,形成e溶液;

      b、選取尿蛋白、潛血和尿有形成分正常且尿液ph值為6-7的5名健康者尿液各200ml,共計(jì)1000ml,均勻混合后進(jìn)行高壓滅菌,隨后自然冷卻至常溫備用,形成f溶液;

      c、將a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理鹽水洗滌3次,隨后各取適量與100ml的f溶液混合至濃度分別為20-25個(gè)/μl、15-25個(gè)/μl、5-10個(gè)/μl、3-6個(gè)/μl、5-10個(gè)/μl,形成a1溶液、b1溶液、c1溶液、d1溶液以及e1溶液,最后將各溶液進(jìn)行均勻混合后形成低值質(zhì)控品原液;

      將a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理鹽水洗滌3次,隨后各取適量與100ml的f溶液混合至濃度分別為200-250個(gè)/μl、30-40個(gè)/μl、15-30個(gè)/μl、10-15個(gè)/μl、20-30個(gè)/μl,形成a2溶液、b2溶液、c2溶液、d2溶液以及e2溶液,最后將各溶液進(jìn)行均勻混合后形成高值質(zhì)控品原液;

      d、向500ml低值質(zhì)控品原液和500ml高值質(zhì)控品原液中分別加入慶大霉素10-20mg,均勻混合后,再分別加入兩性霉素b1-1.5mg,混勻后分別形成低值質(zhì)控品成品和高值質(zhì)控品成品,最后將質(zhì)控品成品以2-3ml/份裝入高壓滅菌后的塑料瓶中,4-8℃條件下保存。

      本發(fā)明中制備方法制備的質(zhì)控品成品適用于顯微鏡檢查、采用機(jī)器視覺原理的尿液有形成分分儀、流式細(xì)胞術(shù)原理的尿有形成分分析儀,質(zhì)控品成分包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型和真菌五種常見成分,4-8℃冰箱保存的穩(wěn)定期至少可達(dá)60天以上。

      該發(fā)明制備得到的質(zhì)控品成品,在第60天時(shí),經(jīng)sysmexuf1000尿有形成分檢測(cè)儀檢測(cè),重復(fù)20次,低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品中各成分的不精密度分別如下:

      紅細(xì)胞22個(gè)/μl,cv為8.05%;白細(xì)胞18個(gè)/μl,cv為15.11%;管型6個(gè)/μl,cv為27.86%;上皮細(xì)胞8個(gè)/μl,cv為15.17%;真菌8個(gè)/μl,cv為11.31%;

      紅細(xì)胞232個(gè)/μl,cv為4.88%;白細(xì)胞34個(gè)/μl,cv為8.12%;管型15個(gè)/μl,cv為17.63%;上皮細(xì)胞19個(gè)/μl,cv為9.82%;真菌8個(gè)/μl,cv為8.89%;

      兩種濃度的質(zhì)控品重復(fù)性較好,符合檢測(cè)需求。

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