本實用新型涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒。
背景技術(shù)：
白喉(diphtheria)是由白喉棒狀桿菌(C.diphtheriae)經(jīng)空氣飛沫傳播引起的急性呼吸道傳染病。其臨床特征為咽、喉、鼻等處黏膜充血、腫脹并有灰白色假膜形成，以及由細菌外毒素引起的全身中毒癥狀，嚴重者可有中毒性心肌炎和周圍神經(jīng)麻痹該菌能產(chǎn)生強烈外毒素，進入血液可引起全身中毒癥狀。潛伏期1～7天，一般為2～4天。根據(jù)病變部位，可分為咽白喉、喉白喉、鼻白喉和其他部位白喉。成人和年長兒童以咽白喉居多，其他類型的白喉較多見于幼兒。白喉桿菌侵襲力弱，侵入上呼吸道黏膜后，僅在表層上皮細胞內(nèi)繁殖，一般不引起菌血癥。當局部黏膜有損傷時，如患百日咳、猩紅熱、百日咳或上呼吸道感染時，白喉桿菌的侵襲力增強。在白喉桿菌的繁殖過程中產(chǎn)生的外毒素不但可引起局部病變，還可引起全身性中毒性病變，是致病的主要因素。此毒素有A和B兩個亞單位組成，兩者通過二硫鍵連接，B亞單位無直接的毒性，但它有一個受體結(jié)合區(qū)和一個轉(zhuǎn)位區(qū)。B亞單位可以與細胞表面特異性受體(膜受體pro-hHB-EGF)結(jié)合，結(jié)合后通過轉(zhuǎn)位區(qū)的介導(dǎo)，可輸送A亞單位進入宿主胞質(zhì)內(nèi)。
白喉疫苗的成份是白喉類毒素，即經(jīng)處理的白喉毒素，可以誘生具有保護作用的抗毒素。自1974年WHO擴大免疫規(guī)劃(EPI)開始時，白喉類毒素與破傷風(fēng)和百日咳疫苗組成的聯(lián)合疫苗(DTwP)就被包括在內(nèi)。在1980～2000年期間，白喉的總報告病例數(shù)減少幅度>90％?；A(chǔ)免疫程序完成后平均保護時間為10年左右。保護性免疫在接觸產(chǎn)毒的白喉桿菌后會得到加強。如不能通過此自然途徑獲得加強免疫，對嬰兒期后及小學(xué)低年級兒童需進行白喉類毒素的加強免疫，以便維持保護性免疫力。
免疫規(guī)劃工作一直以來都是政府工作的重點之一，兒童的預(yù)防免疫關(guān)乎其一生的健康，疫苗接種、疾病預(yù)防遠比疫病的治療更為重要。由于個體免疫水平的差異、疫苗質(zhì)量、接種程序的規(guī)范與否以及隨時間推移抗體水平的逐漸下降等原因，疫苗接種后，大部分人群獲得了免疫保護，但仍有部分人群由于以上原因?qū)е驴贵w水平低下，無法抵御相關(guān)傳染病的侵襲。開展抗體檢測，對抗體水平不足的人群進行有針對性的補種，對有效形成免疫屏障、預(yù)防傳染病的發(fā)生、保護相關(guān)人群的健康有著十分重要的意義。我國經(jīng)過多年的努力，計劃免疫已取得相當?shù)某删?，但疫苗接種后相關(guān)對應(yīng)的抗體水平檢測、疫苗接種后免疫效果的評價等工作相對滯后，目前國家已加強了這方面的工作安排部署。
目前市場上的白喉桿菌IgG抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑樣品采用血清/血漿，需血量多且需靜脈抽血，基層使用存在諸多不便，尤其是低年齡組兒童采血更為困難，有的試劑還存在促凝劑對檢測的干擾等問題。因此推出效期長、操作簡便，適用于血清、血漿、全血檢測的試劑已成為當務(wù)之急。
為適應(yīng)各級臨床醫(yī)院及疾控中心開展白喉桿菌IgG抗體檢測的需求，我們研制出了適合于全血、血清、血漿樣品的白喉桿菌IgG抗體檢測試劑，試劑盒穩(wěn)定，有效期達到一年，每次檢測僅需血樣5微升。
試劑盒適用于白喉桿菌IgG抗體的篩查。篩查結(jié)果可應(yīng)用于接種含白喉類毒素成分疫苗后人群抗體陽性率的檢測、白喉相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查、個體白喉桿菌易感性的判定等。
評價疫苗免疫效果最可靠的方法就是檢測接種者體內(nèi)血清中的特異抗體的含量。當前市場上檢測白喉類毒素抗體的商品化試劑盒多采用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法，這些方法雖然靈敏度高、結(jié)果準確、化學(xué)發(fā)光試劑還可以對抗體進行定量，但在實際操作上存在諸多不便，如步驟復(fù)雜、耗時較長，還需使用特定的儀器設(shè)備；試劑盒需4℃保存；對樣品要求靜脈采血等，不易在基層普及運用。
免疫膠體金快速診斷技術(shù)是建立在酶聯(lián)免疫吸附試驗、乳膠凝集試驗、單克隆抗體技術(shù)和免疫膠體金標記技術(shù)基礎(chǔ)上，以膠體金為標記物，利用特異的抗原抗體反應(yīng)放大反應(yīng)信號,通過直接觀察就可以判定結(jié)果的新技術(shù)。該技術(shù)具有簡單、快速、準確和無污染等優(yōu)點，在臨床醫(yī)學(xué)檢測、動物醫(yī)學(xué)檢測、激素檢測、食品安全檢測、藥物殘留和毒品快速檢測等諸多診斷領(lǐng)域迅速發(fā)展。目前，膠體金標記快速檢測抗體的方法大體分為兩種：一種是將抗原標金，待測抗體的抗體劃膜；另一種是將抗原劃膜，待測抗體的抗體標金?，F(xiàn)有研究表明：因為抗體蛋白性質(zhì)較為穩(wěn)定，所以對抗體蛋白的膠體金標記較為穩(wěn)定，上述第一種方法所述的抗原的膠體金標記則存在頗多問題，因為抗原多為病毒類，性質(zhì)多樣，有的大小甚至比膠體金顆粒還大，且穩(wěn)定性較差，因此很難直接將抗原標記在膠體金顆粒上；即使勉強能將抗原標記上，也需要抗原達到極高的純度，而對抗原病毒的純化是一項難度較大、成本較高的工程；也有人尋找抗原的重組抗原來代替這些天然抗原，但是很多抗原很難尋到能替代的重組抗原，而且即使有，成本也是極高的，因此上述第一種方法的局限性比較高。上述的第二種方法是將抗原進行劃膜，這種方法使用待測抗體的抗體進行金標記，可以避免抗原金標記的問題，但將抗原劃到膜上發(fā)生反應(yīng)，需要抗原具有較高的濃度和純度，這也增加了產(chǎn)品生產(chǎn)的成本和難度；另外將抗原劃到膜上，由于抗原穩(wěn)定性較差，很難長時間保存，檢測試紙的有效期極短。這些都是限制抗體快速檢測類試劑盒快速發(fā)展的原因。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本實用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒，解決采用膠體金標記時抗原的顆粒大，純度要求高以及采用抗原劃膜時，由于抗原穩(wěn)定性差，很難長時間保存，檢測試紙的有效期極短的問題。
本實用新型解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒，包括包裝盒、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙；所述包裝盒包括盒體和蓋體，所述盒體內(nèi)設(shè)有第一隔板，所述第一隔板將所述盒體分為第一容納腔和第二容納腔，所述檢測試紙設(shè)于所述第一容納腔內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔內(nèi)；所述蓋體包括第一蓋體和第二蓋體，所述第一蓋體設(shè)于所述第一容納腔的上方，所述第二蓋體設(shè)于所述第二容納腔的上方；所述第一容納腔內(nèi)設(shè)有若干個第二隔板，若干個所述第二隔板分別與所述盒體的外壁圍成第三容納腔，所述第三容納腔內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板上設(shè)有多個直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔；所述檢測試紙包括包被膜、標記物結(jié)合墊和抗原墊；所述抗原墊上包被有白喉類毒素抗原，所述標記物結(jié)合墊上包被有膠體金標記的鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜上固定有檢測T線和質(zhì)控C線，所述檢測T線上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙的最低檢測線為0.1IU/ml。
本實用新型的有益效果是：所采用的檢測試紙，通過引進白喉類毒素抗原墊，同時在抗原墊中加入抗原保護液，解決了白喉類毒素抗原由于穩(wěn)定性差而不容易被金標記的問題；另一方面，采用的白喉類毒素抗原為粗抗原，在檢測試紙反應(yīng)層析過程中，已經(jīng)通過雙抗體夾心法對粗抗原進行了篩選和純化，保證了試劑反應(yīng)的特異性，因此不需對粗抗原進一步純化就能達到反應(yīng)效果，制備成本低，利用推廣應(yīng)用。另采用的白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙均設(shè)于包裝盒內(nèi)，用戶在使用時，無需另外準備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙分別置于試劑盒的兩個容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個蓋體，使試劑盒的結(jié)構(gòu)更加緊湊，另用戶在使用時只需打開第二蓋體即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙造成干擾；另在包裝盒內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0.1IU/ml，可實現(xiàn)對白喉疫苗接種效果的快速評估。
進一步：所述第二隔板的數(shù)量為兩個，兩個所述的第二隔板分別設(shè)于所述第一容納腔的前端和后端。
上述進一步方案的有益效果是：通過設(shè)置兩個第二隔板，進一步的設(shè)置有兩個第三容納腔，且每個第三容納腔內(nèi)均放有干燥劑，加強對濕氣、氧氣的吸收。
進一步：所述第一容納腔內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙的定位裝置。
上述進一步方案的有益效果是：通過定位裝置可將檢測試紙鎖緊在第一容納腔中，防止其左右晃動。
進一步：所述定位裝置包括定位組件和活動組件，所述定位組件和所述活動組件分別設(shè)于所述第一容納腔的左端和右端；所述定位組件包括底板和U型定位塊，所述底板固定于所述盒體上；所述U型定位塊固定于所述底板的上方，且所述U型定位塊的開口端朝向所述活動組件；所述活動組件包括固定板、活動板和銅片，所述固定板固定于所述盒體上；所述銅片的一端嵌設(shè)于所述固定板中，所述銅片的另一端抵設(shè)于所述活動板上，所述活動板可在所述盒體內(nèi)移動。
上述進一步方案的有益效果是：定位組件主要用于對檢測試紙的放置位置進行定位，活動組件可根據(jù)檢測試紙的具體大小進行調(diào)整，是檢測試紙能夠卡緊在包裝盒中，避免其左右晃動。
進一步：所述活動板的底部設(shè)有若干個凸起，所述盒體的底部設(shè)有若干個與所述凸起相匹配的滑槽。
上述進一步方案的有益效果是：活動板的底部設(shè)置凸起，且在盒體上設(shè)置與所述凸起相匹配的滑槽，可對活動板在盒體內(nèi)的移動進行導(dǎo)向，防止活動板的偏移。
進一步：所述第一蓋體上的加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒。
上述進一步方案的有益效果是：第三圓筒起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。
進一步：所述第一蓋體與所述第二蓋體之間通過鉸鏈連接，且所述第一蓋體與所述盒體之間、所述第二蓋體與所述盒體之間均通過卡合方式連接。
上述進一步方案的有益效果是：確保第二蓋體的打開不會影響到檢測試紙的穩(wěn)定性。
進一步：所述第二容納腔內(nèi)設(shè)有第二圓筒，所述第二圓筒用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。
上述進一步方案的有益效果是：將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。
進一步：所述標記物結(jié)合墊為玻璃纖維。
進一步：所述抗原墊為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。
上述進兩步方案的有益效果是：使樣品加入到檢測試紙上后，可通過靜電作用和疏水相互作用等物理作用與蛋白質(zhì)結(jié)合且能通過毛細管現(xiàn)象展開。
附圖說明
圖1為本實用新型白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒中的包裝盒的爆炸圖；
圖2為本實用新型中的檢測試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3為本實用新型中的包裝盒在揭開第二蓋體時的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖4為本實用新型中的活動組件的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖對本實用新型的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本實用新型，并非用于限定本實用新型的范圍。
如圖1至圖4所示，一種白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒包括包裝盒1、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3；所述包裝盒1包括盒體12和蓋體13，所述盒體12內(nèi)設(shè)有第一隔板11，第一隔板11將所述盒體12分為第一容納腔111和第二容納腔112；所述檢測試紙3設(shè)于所述第一容納腔111內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔112內(nèi)；所述蓋體13包括第一蓋體131和第二蓋體132，所述第一蓋體131設(shè)于所述第一容納腔111的上方，所述第二蓋體132設(shè)于所述第二容納腔112的上方；所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有若干個第二隔板1115，若干個所述第二隔板1115分別與所述盒體12的外壁圍成第三容納腔1116，所述第三容納腔1116內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板1115上設(shè)有多個直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔1117；所述檢測試紙3包括包被膜32、標記物結(jié)合墊33和抗原墊34；所述抗原墊34上包被有白喉類毒素抗原，所述標記物結(jié)合墊33上包被有膠體金標記的鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜32上固定有檢測T線321和質(zhì)控C線322，所述檢測T線321上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線322上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙3的最低檢測線為0.1IU/ml。將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3均設(shè)于包裝盒1內(nèi)，用戶在使用時，無需另外準備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3分別置于試劑盒的兩個容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個蓋體13，使試劑盒的尺寸更加緊湊，另用戶在使用時只需打開第二蓋體132即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙3造成干擾；另在包裝盒1內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0.1IU/ml，可實現(xiàn)對白喉疫苗接種效果的快速評估。
如圖1所示，在第二隔板1115上設(shè)有多個通氣孔1117，可加強干燥劑的吸濕效果。所述第二隔板1115優(yōu)選為兩個，兩個所述第二隔板1115分別設(shè)于所述第一容納腔111的前后兩端，設(shè)于所述第一容納腔111前方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的前側(cè)壁延伸形成第三容納腔1116，設(shè)于所述第一容納腔111后方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的后側(cè)壁延伸形成另一第三容納腔1116。
所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙3的定位裝置。通過定位裝置可將檢測試紙3鎖緊在第一容納腔111中，防止其左右晃動。
如圖1所示，所述定位裝置包括定位組件1112和活動組件1113，所述定位組件1112和所述活動組件1113分別設(shè)于所述第一容納腔111的左端和右端；所述定位組件1112包括底板11121和U型定位塊11122，所述底板11121固定于所述盒體12上；所述U型定位塊11122固定于所述底板11121的上方，且所述U型定位塊11122的開口端朝向所述活動組件1113；所述活動組件1113包括固定板11131、活動板11133和銅片11132，所述固定板11131固定于所述盒體12上；所述銅片11132的一端嵌設(shè)于所述固定板11131中，所述銅片11132的另一端翹起，翹起的所述銅片11132抵設(shè)于所述活動板11133上，所述活動板11133可在所述盒體12內(nèi)移動。定位組件1112主要用于對檢測試紙3的放置位置進行定位，活動組件1113可根據(jù)檢測試紙3的具體大小進行調(diào)整，使檢測試紙3能夠卡緊在包裝盒1中，避免其左右晃動。
如圖1和圖4所示，所述活動板11133的底部設(shè)有若干個凸起11134，所述盒體12的底部設(shè)有若干個與所述凸起11134相匹配的滑槽1118。凸起11134和滑槽1118的設(shè)置可對活動板在盒體12內(nèi)的移動進行導(dǎo)向，防止活動板11133的偏移。
如圖1所示，所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有多個交叉型凸筋1114，多個所述交叉型凸筋1114均設(shè)于所述定位組件1112與所述活動組件1113之間，所述第一蓋體131在與每個所述交叉型凸筋1114相匹配的位置上均設(shè)有多個凸條1312。通過設(shè)置交叉型凸筋1114和與交叉型凸筋1114相匹配的多個凸條1312，可對檢測試紙3起到良好的支撐以及固定的作用。
如圖1所示，所述第一蓋體131上設(shè)有加樣口，所述加樣口設(shè)于所述樣品墊35上方的所述第一蓋體131上，所述加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒1313。第三圓筒1313起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。
所述第一蓋體131上還設(shè)有防塵塞，所述防塵塞與所述加樣口相匹配。可防止加樣口處聚集灰塵、雜質(zhì)，影響檢測試紙3檢測結(jié)果的準確性。所述第一蓋體131上還設(shè)有觀察窗1314，所述觀察窗1314設(shè)于所述包被膜32上方的所述第一蓋體131上。便于用戶觀察檢測結(jié)果。
如圖1和圖3所示，所述第一蓋體131與所述第二蓋體132之間通過鉸鏈133連接，且所述第一蓋體131與所述盒體12之間、所述第二蓋體132與所述盒體12之間均通過卡合方式連接。具體的，所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有多個第一圓筒1111，所述第一蓋體131上設(shè)有多個與所述第一圓筒1111相匹配的第一凸起1311。盒體12和蓋體13之間可通過所述的第一圓筒1111和第一凸起1311進行卡合連接，且采用第一圓筒1111和第一凸起1311配合還具有良好的定位效果。所述第二蓋體132上設(shè)有卡槽1321，所述卡槽1321設(shè)于所述第二蓋體132遠離所述第一蓋體131的一側(cè)的內(nèi)壁上，所述盒體12上設(shè)有與所述卡槽1321相配合的第二凸起121。第二蓋體132與盒體12之間直接采用卡槽1321與第二凸起121進行配合連接，方便開啟。
如圖1所示，所述第二容納腔112內(nèi)設(shè)有第二圓筒1121，所述第二圓筒1121用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。所述樣品稀釋液盛裝容器可選為瓶體或包裝袋，且瓶體的瓶口或包裝袋的開口處設(shè)置為錐形，便于樣品稀釋液的倒出。
本實用新型白喉疫苗接種效果快速評價試劑盒的組裝方法為：首先撥動活動組件1113中的活動板11133，將檢測試紙3的底板31放置在交叉型凸筋1114上并使檢測試紙3靠近樣品墊35的一端卡設(shè)于定位組件1112中，松開活動板11133將檢測試紙3抵緊；然后將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121中，然后將盒體12和蓋體13通過第一圓筒1111和第一凸起1311進行卡合連接，并將第二凸起121卡合在卡槽1321中。使用時，用戶只需揭開第二蓋體132，并將樣品稀釋液取出滴在加樣口處即可，操作簡單方便。
如圖2所示，所述檢測試紙3還包括底板31和吸收墊36，所述包被膜32設(shè)于所述底板31上；所述標記物結(jié)合墊33、所述抗原墊34和所述樣品墊35依次搭接在所述包被膜32的一端，所述吸收墊36搭接在所述包被膜32的另一端。所述抗原墊34為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。所述標記物結(jié)合墊33和樣品墊35為玻璃纖維，所述吸收墊36為吸水紙。
所述的樣品稀釋液為：含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉的混合水溶液。以下實施例中，樣品稀釋液的組分為：磷酸氫二鈉5.72g，磷酸二氫鈉0.624g，氯化鈉8g，超純水定容至1L。
下面將對白喉類毒素IgG抗體檢測試紙3的制備、組裝、檢測原理以及檢測效果進行詳細的說明：
1、主要材料
抗原：白喉類毒素抗原購自深圳市菲鵬生物股份有限公司購入，是從培養(yǎng)的白喉桿菌中提取白喉毒素，后經(jīng)甲醛脫毒制備而成，成為類毒素,其為粗純，不具有生物危害，用于制備抗原墊。
鼠抗人IgG單克隆抗體，購自廈門波生生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜T線的包被。
鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體，購自武漢賽欣生物技術(shù)有限公司，用于標記膠體金。
羊抗鼠IgG抗體，購自杭州隆基生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜質(zhì)控C線的包被。
氯金酸：sigma公司產(chǎn)品。
硝酸纖維素膜：millipore公司產(chǎn)品。
牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白：sigma公司產(chǎn)品。
其余化學(xué)試劑均為分析純試劑。
臨床實驗由公司在武漢市省級以上臨床試驗機構(gòu)完成，其中白喉類毒素IgG抗體陽性樣本155份，陰性樣本213份。
白喉類毒素IgG抗體檢測試劑盒(ELISA法)：購自德國維潤賽潤，是CE已認證的商用產(chǎn)品。
2、標記物結(jié)合墊33的制備
氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后，取100ml膠體金溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，調(diào)節(jié)pH至8.0，然后按每100ml膠體金溶液0.7mg抗體加入鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體0.7mg，繼續(xù)攪拌30min，再加入終濃度為1％的BSA進行封閉，繼續(xù)攪拌30min。標記結(jié)束后，以10000r/min對標記液進行離心，棄上清，然后將沉淀用復(fù)溶溶液進行復(fù)溶至原體積，所述復(fù)溶溶液的配方為：Tris：1.965g，Casein-Na：2.5g，檸檬酸三鈉：2.5g，吐溫-20：0.50ml，蔗糖：10.0g，用超純水定容至1L。將復(fù)溶好的金標記溶液按每1ml溶液鋪18cm2的比例均勻鋪在玻璃纖維上，置于37℃，相對濕度低于20％的環(huán)境中，干燥12-18小時，制成標記物結(jié)合墊33。
3、抗原墊34的制備
將白喉類毒素抗原使用抗原保護液進行稀釋到20倍得到抗原液，將稀釋好的抗原液按每1ml溶液鋪18cm2的比例均勻鋪在玻璃纖維、無紡布或聚酯膜上，置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥4小時，制成抗原墊34。所述抗原保護液的配方為：Na2HPO4：5.72g，NaH2PO4：0.624g，檸檬酸三鈉：8.5g，蔗糖：10g，水定容至1L；所述白喉類毒素抗原為粗抗原，其中抗原的含量為45wt％至50wt％。
4、包被膜32的制備
使用0.02M，pH為7.2的磷酸鹽緩沖液將鼠抗人IgG單克隆抗體分別稀釋成2.0mg/ml(T線溶液)，羊抗鼠IgG抗體稀釋至150IU/ml(C線溶液)。然后使用劃膜儀將檢測T線321與質(zhì)控C線322溶液按1.3ul/cm的出液量均勻地包被于NC膜(硝酸纖維素膜)上，NC膜已事先黏貼于塑料底板上，包被完成后，將NC膜置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥3至4小時，制成包被膜32。
5、白喉類毒素IgG抗體檢測試紙3的組裝
在干燥環(huán)境下(溫度20至25℃，相對濕度低于30％)，將包被膜32置于潔凈環(huán)境中，在靠近包被膜32的檢測T線321的一端緊密壓接標記物結(jié)合墊33，標記物結(jié)合墊33(標記物結(jié)合墊33已事先切裁成6mm寬)緊密壓接在包被膜32上的長度為2mm左右，抗原墊34(抗原墊已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標記物結(jié)合墊33的另一端，抗原墊34(抗原墊34已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標記物結(jié)合墊33的長度為2mm左右，樣品墊35緊密壓接抗原墊34的另一端，樣品墊35緊密壓接抗原墊34上的長度為4至5mm，最后用切條機將貼好的底板31切成約4mm寬的檢測試紙3。
6、白喉類毒素IgG抗體檢測試紙3的使用方法
將待檢血清或血漿或全血(待檢樣品)平衡至室溫，并將制備好的檢測試紙3放入包裝盒1中，通過加樣口向樣品墊35處加入5ul待檢樣品，再加入2至3滴樣品稀釋液，若樣品中含有白喉類毒素IgG抗體，其將和抗原墊34中的白喉類毒素抗原形成白喉類毒素抗原-白喉類毒素IgG抗體復(fù)合物，該復(fù)合物向前移動，復(fù)合物中的白喉類毒素抗原再與標記物結(jié)合墊33中的膠體金標記的鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體結(jié)合，形成白喉類毒素IgG抗體-白喉類毒素抗原-膠體金標記的鼠抗白喉類毒素抗原單克隆免疫復(fù)合物，該復(fù)合物由于層析作用沿紙條向前移動，至檢測T線321，復(fù)合物中的白喉類毒素IgG抗體與檢測T線321上包被的鼠抗人IgG單克隆抗體反應(yīng)形成鼠抗人IgG單克隆抗體-白喉類毒素IgG抗體-白喉類毒素抗原-膠體金標記的鼠抗白喉類毒素抗原單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物可聚集在檢測區(qū)，當聚集的復(fù)合物達到一定的數(shù)量時，則形成一條肉眼可見的條帶(T線)，判斷結(jié)果為陽性；若樣品中不含有或含很少量的白喉類毒素IgG抗體，則不能形成免疫復(fù)合物，即不能形成肉眼可見的條帶，判斷結(jié)果為陰性；質(zhì)控C線322作為試劑的質(zhì)控標準，陽性和陰性檢測樣品均會產(chǎn)生條帶。具體的，在20分鐘內(nèi)可直接用肉眼觀察檢測T線321和質(zhì)控C線322的顯色情況：質(zhì)控C線322不顯色，說明本試驗失??；質(zhì)控C線322顯色，檢測T線321不顯色說明白喉疫苗接種不成功；質(zhì)控C線322和檢測T線321均顯色說明白喉疫苗接種成功。
7、根據(jù)世界衛(wèi)生組織規(guī)定的白喉類毒素IgG抗體的完全保護滴度為0.1IU/ml，當白喉類毒素IgG抗體濃度≥0.1IU/ml說明人體對白喉具有抵抗性，當白喉類毒素IgG抗體濃度＜0.1IU/ml說明人體對白喉棒狀桿菌還沒有產(chǎn)生抵抗性或者有部分抵抗力，因此本檢測試紙將檢測白喉類毒素IgG抗體的檢測臨界值設(shè)置為0.1IU/ml，T線顯線表明白喉類毒素IgG抗體的濃度≥0.1IU/ml，白喉疫苗接種成功，T線不顯線表明白喉類毒素IgG抗體的濃度＜0.1IU/ml，白喉疫苗接種不成功。因此，本實用新型所述的試劑盒可以實現(xiàn)快速評價白喉疫苗的接種效果。
8、臨床樣品檢測結(jié)果對照
對公司收集的臨床血清樣本使用本申請檢測試紙及商用檢測ELISA試劑盒同時進行檢測，再對檢測結(jié)果進行對照。
以ELISA試劑盒為對照，對白喉類毒素IgG抗體進行檢測，檢測出155份白喉類毒素IgG陽性樣本，213份白喉類毒素IgG陰性樣本，而本檢測試紙檢測出158份白喉類毒素IgG陽性樣本，210份白喉類毒素IgG陰性樣本，總體符合率為97.01％。臨床檢測結(jié)果表明，本試劑盒的性能與ELISA試劑盒相比無顯著差異，說明本實用新型適合用于臨床檢驗，具有實用價值。
以上所述僅為本實用新型的較佳實施例，并不用以限制本實用新型，凡在本實用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。