本發(fā)明涉及生物,具體涉及于鑒別肺腺癌和良性肺部疾病的血漿自身抗體標(biāo)志物及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
1、本部分提供的僅僅是與本公開相關(guān)的背景信息,其并不必然是現(xiàn)有技術(shù)。
2、根據(jù)2024年全球癌癥數(shù)據(jù)的結(jié)果顯示,肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,占所有腫瘤確診和死亡人數(shù)的比例分別為12.4%和18.7%。肺癌分為小細(xì)胞肺癌(small?cell?lungcancer,sclc)和非小細(xì)胞肺癌(non-small?cell?lung?cancer,nsclc),其中大約85%的肺癌屬于nsclc。肺腺癌(lung?adenocarcinoma,luad)是nsclc中最常見的類型,占肺癌的40%左右。雖然肺癌相關(guān)的研究已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展,但是發(fā)病率依舊是上升的趨勢(shì)。肺癌患者的生存預(yù)后近年來得到了明顯改善,但其5年存活率并不高。多數(shù)患者在診斷時(shí)多為中、晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,錯(cuò)過了最好的治療時(shí)機(jī)。如能早發(fā)現(xiàn)、早治療,患者的生存時(shí)間將大大延長(zhǎng)。目前的x射線和ct等早期檢測(cè)方法存在靈敏度低、特異性差、成本高、無創(chuàng)等不足,很難滿足大規(guī)模人群的早期檢測(cè)需求。
3、腫瘤標(biāo)志物在癌癥的早期篩查、診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后評(píng)價(jià)中扮演著非常關(guān)鍵的角色。目前,血液是肺癌篩查的腫瘤標(biāo)志物主要來源,由于其易獲得、無創(chuàng)和可重復(fù)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)而廣受關(guān)注,傳統(tǒng)的血液腫瘤標(biāo)志物在臨床上已被用于癌癥的輔助診斷,目前常見的腫瘤標(biāo)志物有括癌胚抗原(carcinoembryonic?antigen,cea)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific?enolase,nse)、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin?19fragment,cyfra21-1)。雖然目前的腫瘤標(biāo)記物在臨床上已經(jīng)得到了大量的證實(shí),但是并不能很好的用于肺腺癌的特異性診斷。
4、目前許多研究表明,癌癥患者的血漿中含有的自體細(xì)胞抗原,稱為腫瘤相關(guān)抗原(tumor?associated?antigen,taa),腫瘤相關(guān)抗原自身抗體(autoantibody?againsttumor?associated?antigens,taab)可與之反應(yīng),其taab已在多種腫瘤中檢測(cè)到。一些自身抗體變化出現(xiàn)較早,在臨床診斷為腫瘤數(shù)月至數(shù)年前即可被檢測(cè)到。此外,taab作為免疫診斷標(biāo)志物可能具有更大的優(yōu)勢(shì),因?yàn)樗鼈儽幻庖叻磻?yīng)放大的信號(hào)比taa本身更容易檢測(cè)。因此,taab在癌癥的早期診斷中具有很大的潛力,有必要篩選和鑒定新的taab用于肺腺癌的早期篩查和診斷診斷。taab在血漿中出現(xiàn)的較早,具備早期檢測(cè)、穩(wěn)定存在和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)等優(yōu)點(diǎn),是早期肺腺癌篩查診斷的良好標(biāo)志物。目前,已開展的肺癌的自身抗體的研究包括:抗-annexin1、抗-lamr1、抗-hsp40、抗-ny-eso-1和抗-p53等,但目前臨床上與之相關(guān)的標(biāo)志物靈敏度或特異度較低,因此有待于尋找新的具有較好診斷價(jià)值的taabs。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、發(fā)明目的:本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供鑒別肺腺癌和良性肺部疾病的血漿自身抗體標(biāo)志物及其應(yīng)用。
2、為了解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明公開了如下技術(shù)方案:
3、第一方面,本發(fā)明公開了肺腺癌標(biāo)志物,包括抗-dsp、抗-agr2、抗-mdk、抗-abcc3、抗-met、抗-ass1、抗-pycr1、抗-lgals4和抗-crabp2中任意一種或多種抗原的自身抗體。
4、在一些實(shí)施例中,所述標(biāo)志物為血漿自身抗體標(biāo)志物。
5、在一些實(shí)施例中,所述自身抗體為外周血中血漿的自身抗體,如為外周血中血漿的igg自身抗體。
6、在一些實(shí)施例中,所述標(biāo)志物為鑒別肺腺癌與健康人,或鑒別肺腺癌和良性肺部疾病的血漿自身抗體標(biāo)志物。
7、進(jìn)一步地,本發(fā)明還提供了所述血漿自身抗體標(biāo)志物的篩選方法和驗(yàn)證方法。
8、所述篩選方法,具體包括以下步驟:
9、首先從geo數(shù)據(jù)庫中下載11例肺腺癌組織和11例癌旁組織的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行降維、聚類和分群;再根據(jù)cell雜志中的103例肺腺癌組織和103例癌旁組織的蛋白組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋白水平的驗(yàn)證,最終獲得具有潛在診斷價(jià)值的候選taas。
10、所述驗(yàn)證方法為基于elisa技術(shù)設(shè)計(jì)了兩階段驗(yàn)證,具體如下:
11、其中,驗(yàn)證階段一為小樣本初步驗(yàn)證(72例肺腺癌患者和72例健康對(duì)照)。兩組之間taabs表達(dá)水平的差異通過非參數(shù)檢驗(yàn)分析,并繪制各候選taab的受試者工作特征曲線(receiver?operating?characteristic,roc)對(duì)其診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)。
12、對(duì)于p<0.05且roc曲線下面積(area?under?the?roc?curve,auc)>0.5的taabs進(jìn)行驗(yàn)證階段二的大樣本驗(yàn)證(249例肺腺癌患者和249例良性肺部疾病)。各taab在三組間水平間的差異通過非參數(shù)檢驗(yàn)分析,并根據(jù)流行病學(xué)診斷試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)各taab的價(jià)值,評(píng)價(jià)指標(biāo)包括靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、陽性似然比、陰性似然比以及符合率等。
13、第二方面,本發(fā)明公開了上述第一方面所述標(biāo)志物在在制備診斷肺腺癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
14、其中,所述診斷肺腺癌為鑒別肺腺癌與健康人,或鑒別肺腺癌和良性肺部疾病。
15、其中,所述產(chǎn)品包括試劑盒、試劑和芯片。
16、第三方面,本發(fā)明公開了一種用于診斷肺腺癌的試劑盒,其包括上述第一方面所述標(biāo)志物。
17、其中,所述診斷肺腺癌為鑒別肺腺癌與健康人,或鑒別肺腺癌和良性肺部疾病。
18、其中,所述試劑盒為elisa檢測(cè)試劑盒。
19、第四方面,本發(fā)明公開了上述第一方面所述標(biāo)志物在制備用于鑒別肺腺癌和良性肺部疾病診斷模型中的應(yīng)用。
20、其中,所述診斷模型如下;當(dāng)p值≥0.5時(shí),診斷為肺腺癌患者;當(dāng)p值<0.5時(shí),診斷為良性肺部疾病患者;
21、p=1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)));
22、其中,抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk為血漿中的相應(yīng)自身抗體的表達(dá)量。
23、第五方面,本發(fā)明公開了一種用于鑒別肺腺癌和良性肺部疾病的診斷模型,所述診斷模型如下;
24、當(dāng)p值≥0.5時(shí),診斷為肺腺癌患者;當(dāng)p值<0.5時(shí),診斷為良性肺部疾病患者;
25、p=1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)));
26、其中,抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk為血漿中的相應(yīng)自身抗體的表達(dá)量。
27、進(jìn)一步地,本發(fā)明還提供了一種用于鑒別肺腺癌和良性肺部疾病的診斷模型的構(gòu)建方法,包括如下步驟:
28、將驗(yàn)證階段二中肺腺癌和良性肺部疾病樣本通過spss?statistics?26.0軟件按照7:3左右的比例拆分成訓(xùn)練集和驗(yàn)證集;利用訓(xùn)練集的樣本構(gòu)建肺腺癌的logistic鑒別診斷模型,利用roc曲線等評(píng)價(jià)各模型的價(jià)值并進(jìn)一步在驗(yàn)證集中驗(yàn)證;利用delong檢驗(yàn)比較訓(xùn)練集和驗(yàn)證集間的auc差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p=1/(1+exp(-(-4.914+1.329×抗-ass1+0.793×抗-dsp+1.105×抗-met+0.990×抗-pycr1+1.375×抗-mdk)));其中,抗-ass1、抗-dsp、抗-met、抗-pycr1、抗-mdk為血漿中的相應(yīng)自身抗體的表達(dá)量。
29、有益效果:
30、本發(fā)明通過單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)、蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)篩選并鑒定可用于肺腺癌(luad)和良性肺部疾病(bpd)鑒別診斷的新型血漿自身抗體標(biāo)志物(抗-agr2、抗-mdk、抗-abcc3、抗-met、抗-ass1、抗-pycr1、抗-lgals4、抗-dsp和抗-crabp2)九種變量聯(lián)合構(gòu)建luad和bpd的鑒別診斷模型,該模型對(duì)肺腺癌和良性肺部疾病患者具有良好的鑒別診斷效能,為臨床較好地管理肺部結(jié)節(jié)患者提供幫助。