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      檢測ASFV感染早、晚期抗體水平的間接ELISA試劑盒及檢測方法

      文檔序號:39346056發(fā)布日期:2024-09-10 12:10閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述間接elisa試劑盒包括:包被酶標板、酶標二抗;

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述p72δ-p30融合蛋白由如seq?id?no.2所示的核苷酸序列編碼。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗豬igg抗體。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述間接elisa試劑盒還包括:陰性對照血清、陽性對照血清、包被液、洗滌液、顯色液、封閉液、稀釋液、終止液。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述陰性對照血清為asfv陰性血清;所述陽性對照血清為asfv陽性血清;所述包被液為含20mm?na2co3、35mm?nahco3的水溶液,ph值為9.6;所述洗滌液為pbst緩沖液;所述顯色液為tmb顯色液;所述封閉液為3%bsa封閉液;所述稀釋液為pbst緩沖液;所述終止液為2mol/l硫酸溶液。

      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述p72δ-p30融合蛋白通過包括如下步驟的方法制備:

      7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述特異性引物的核苷酸序列如下所示:

      8.一種檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,包括以下步驟:

      9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,所述間接elisa方法的最佳工藝條件為:步驟(1)中,抗原包被的濃度為1μg/ml,融合蛋白的稀釋液在每孔的加入量為100μl/孔;包被液為含20mm?na2co3、35mm?nahco3的水溶液,ph值為9.6;包被條件為4℃過夜;步驟(2)中,封閉液為3%bsa封閉液,封閉時間為37℃、1h;步驟(3)中,所述稀釋的倍數(shù)為1:1000,所述孵育的條件為37℃、30min;步驟(4)中,所述稀釋的倍數(shù)為1:5000,所述孵育的條件為37℃、60min;步驟(5)中,所述顯色的條件為37℃、10min。

      10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,步驟(5)中,判定待測血清樣品中是否含有asfv的抗體,具體是:當od450nm值≥0.457時,判定待測血清樣品為陽性,即待測血清樣品中含有asfv的抗體,說明該動物已感染asfv;當od450nm值<0.457時,判定待測血清樣品為陰性,即待測血清樣品中不含asfv的抗體,說明該動物沒有被asfv感染。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及檢測ASFV感染早、晚期抗體水平的間接ELISA試劑盒及檢測方法。本發(fā)明提供的間接ELISA試劑盒,包括:包被酶標板、酶標二抗;所述包被酶標板以p72Δ?p30融合蛋白作為包被抗原;所述p72Δ?p30融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明提供的試劑盒,采用p72Δ?p30融合蛋白作為包被抗原,基于該融合蛋白建立ELISA方法,具有快速、特異、靈敏的特點,能夠有效檢測ASFV感染早、晚期抗體水平,用于臨床診斷后可精準判斷豬群的病毒持續(xù)感染情況,能夠為ASFV診斷試劑的開發(fā)以及ASF疫病防治措施制定提供科學(xué)依據(jù)。

      技術(shù)研發(fā)人員:夏平安,李夢娟,張宜娜,陳靜
      受保護的技術(shù)使用者:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/9/9
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