1.一種檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述間接elisa試劑盒包括:包被酶標板、酶標二抗;
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述p72δ-p30融合蛋白由如seq?id?no.2所示的核苷酸序列編碼。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗豬igg抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述間接elisa試劑盒還包括:陰性對照血清、陽性對照血清、包被液、洗滌液、顯色液、封閉液、稀釋液、終止液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述陰性對照血清為asfv陰性血清;所述陽性對照血清為asfv陽性血清;所述包被液為含20mm?na2co3、35mm?nahco3的水溶液,ph值為9.6;所述洗滌液為pbst緩沖液;所述顯色液為tmb顯色液;所述封閉液為3%bsa封閉液;所述稀釋液為pbst緩沖液;所述終止液為2mol/l硫酸溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述p72δ-p30融合蛋白通過包括如下步驟的方法制備:
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa試劑盒,其特征在于,所述特異性引物的核苷酸序列如下所示:
8.一種檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,包括以下步驟:
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,所述間接elisa方法的最佳工藝條件為:步驟(1)中,抗原包被的濃度為1μg/ml,融合蛋白的稀釋液在每孔的加入量為100μl/孔;包被液為含20mm?na2co3、35mm?nahco3的水溶液,ph值為9.6;包被條件為4℃過夜;步驟(2)中,封閉液為3%bsa封閉液,封閉時間為37℃、1h;步驟(3)中,所述稀釋的倍數(shù)為1:1000,所述孵育的條件為37℃、30min;步驟(4)中,所述稀釋的倍數(shù)為1:5000,所述孵育的條件為37℃、60min;步驟(5)中,所述顯色的條件為37℃、10min。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測asfv感染早、晚期抗體水平的間接elisa方法,其特征在于,步驟(5)中,判定待測血清樣品中是否含有asfv的抗體,具體是:當od450nm值≥0.457時,判定待測血清樣品為陽性,即待測血清樣品中含有asfv的抗體,說明該動物已感染asfv;當od450nm值<0.457時,判定待測血清樣品為陰性,即待測血清樣品中不含asfv的抗體,說明該動物沒有被asfv感染。