本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測，具體涉及一種綠茶品種可視化判別方法。

背景技術(shù)：

1、綠茶是世界上最受歡迎的飲料之一，具有抗氧化、抗炎、保護(hù)心血管和抗肥胖等生理功能。綠茶作為一種“非發(fā)酵”茶，經(jīng)過較少的加工步驟，可以最大程度的保留新鮮茶葉的原始多酚類化合物，由于綠茶品種眾多，質(zhì)量參差不齊，缺乏嚴(yán)格的分級標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)綠茶快速鑒定和質(zhì)量評價是消費(fèi)者的當(dāng)務(wù)之急。因此，準(zhǔn)確識別綠茶的品種和等級具有重要意義。

2、傳統(tǒng)綠茶品種和等級判別方法多依靠人工感官審評，該方法簡單快速，但結(jié)果易受環(huán)境、審評人員身心狀態(tài)等多方面因素的干擾和影響，并且存在一定的主觀性。目前已發(fā)展了高效液相色譜法(hplc)、液相色譜-質(zhì)譜法(lc-ms)、氣相色譜-質(zhì)譜法(gc-ms)和超高效液相色譜-高分辨率質(zhì)譜法(uplc-hrms)、電子鼻/舌和光譜法等來用于茶葉的質(zhì)量評價，這些大型儀器方法成本高、操作復(fù)雜、耗時長，只能局限于實(shí)驗(yàn)室中，無法被廣大人民群眾接受，難以普及開來。

3、因此，進(jìn)一步建立一種靈敏度高、特異性好、成本低廉并可快速便捷識別綠茶品種的方法，具有極大現(xiàn)實(shí)意義的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題和不足，提供一種綠茶品種可視化判別方法，納米金擬過氧化物酶(gsh-aunps)分解h2o2產(chǎn)生羥基自由基(·oh)從而氧化tmb，生成藍(lán)色氧化產(chǎn)物(oxtmb)。綠茶中含有的茶多酚等抗氧化活性物質(zhì)，通過對·oh的清除效果以及對oxtmb的還原作用而抑制tmb的氧化。由于不同品種綠茶的抗氧化活性不同，導(dǎo)致傳感體系發(fā)生不同的顏色變化，實(shí)現(xiàn)對不同品種綠茶的準(zhǔn)確鑒別；該方法工藝簡單、綠色環(huán)保、成本低廉、容易普及、可投入工業(yè)化生產(chǎn)，適合推廣應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

3、一種綠茶品種可視化判別方法，包括以下步驟：

4、將不同品種綠茶樣品的茶多酚提取液與gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系混合均勻，靜置反應(yīng)，采集所得檢測體系基于gsh-aunps-h2o2-tmb傳感的可視化圖像，利用不同品種的綠茶樣品的顏色響應(yīng)存在色差，根據(jù)待測綠茶樣品的茶多酚提取液反應(yīng)后所得檢測體系的顏色，實(shí)現(xiàn)對待測綠茶品種的可視化判別。其中，gsh-aunps表示谷胱甘肽修飾的納米金，tmb為四甲基聯(lián)苯胺。

5、上述方案中，所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系包括緩沖液和gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液，gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液中含有g(shù)sh-aunps、h2o2和tmb溶液。所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液中各溶液的添加次序?yàn)槿芤撼尸F(xiàn)的先后順序。所述gsh-aunps-h2o2-tmb傳感溶液的制備方法包括：將gsh-aunps、h2o2溶液混合反應(yīng)2-3min，最后加入tmb溶液，反應(yīng)8-10min。

6、上述方案中，所述靜置反應(yīng)的時間為15-18min。

7、上述方案中，所得檢測體系的ph為3.6-3.8；所得檢測體系中g(shù)sh-aunps的濃度為(0.79-1.79)×10-5mol/l；所得檢測體系中h2o2的濃度為0.3-0.35mol/l；所得檢測體系中tmb的濃度為0.9-1.5mmol/l；所述檢測體系中綠茶成分的含量以提取液制備過程中引入的綠茶生藥計(jì)為0.09-0.15mg生藥/ml。

8、優(yōu)選的，所得檢測體系中g(shù)sh-aunps的濃度為1.20×10-5mol/l；所得檢測體系中h2o2的濃度為0.326mol/l；所得檢測體系中tmb的濃度為1.0mmol/l。

9、上述方案中，所述綠茶品種的可視化識別方法中，采用肉眼觀察或拍攝設(shè)備的手段獲取顏色信息，比對得到不同品種綠茶的可視化識別圖譜庫。

10、優(yōu)選的，所述拍攝手段進(jìn)一步在led燈照射條件下拍攝。

11、上述方案中，所述的綠茶品種可視化識別方法具體包括以下步驟：

12、1)獲取不同品種的待測綠茶樣品的提取液；

13、2)將gsh-aunps-h2o2-tmb傳感體系分別與待測綠茶提取液混合，靜置反應(yīng)，采集所得檢測體系基于gsh-aunps-h2o2-tmb傳感的可視化圖像；

14、3)根據(jù)可視化圖像與綠茶品種之間的聯(lián)系，建立基于綠茶品種的可視化識別模型庫，實(shí)現(xiàn)不同品種綠茶產(chǎn)品的識別。

15、上述方案中，所述可視化識別模型庫的建立方法包括：根據(jù)不同品種綠茶樣品所得可視化圖像，提取其rgb值，構(gòu)建不同品種綠茶樣品對應(yīng)的比色卡。

16、上述方案中，所述比色卡中對應(yīng)的綠茶樣品的品種呈深藍(lán)綠色到無色的不同的變化。

17、上述方案中，所述gsh-aunps的制備方法包括如下步驟：將谷胱甘肽(gsh)加入到haucl4溶液中，在室溫下避光攪拌均勻，然后加入新鮮配置的冰凍nabh4溶液，繼續(xù)在室溫下避光劇烈攪拌，得到發(fā)紅光的黃色澄清溶液，高速離心后取上清液過微孔濾膜去除不溶性雜質(zhì)后得到谷胱甘肽修飾的納米金溶液。

18、上述方案中，所述谷胱甘肽(gsh)、haucl4、nabh4的摩爾比為1:(0.57～0.77):(0.0010～0.0012)。

19、上述方案中，所得gsh-aunps溶液的濃度為(0.79-1.79)×10-3mol/l。

20、上述方案中，所述離心速率為10000-12000rpm，時間為15-25min；所得上清液用0.22μm的微孔濾膜過濾。

21、上述方案中，所述提取液采用超聲醇提工藝，采用的提取溶劑為50-70vol％的甲醇水溶液。

22、上述方案中，所述超聲醇提工藝條件包括：綠茶經(jīng)粉碎研磨過50-200目篩得綠茶粉末，按照0.1g:9-11ml的料液比將綠茶粉末和50-70vol％的甲醇水溶液混合，35-40℃超聲提取0.3-0.5小時，得粗提液，再將所得粗提液在4000-5000rpm條件下離心5-15min，取上清液過0.22μm的微孔濾膜，即得綠茶提取液。

23、上述方案中，所述待測綠茶的品種包括洞庭碧螺春(dt-blc)、開化龍頂(khld)、黃山毛峰(hs-mf)、信陽毛尖(xy-mj)、都勻毛尖(dy-mj)、六安瓜片(lagp)或竹葉青(zyq)。

24、上述方案中，利用96孔板用于檢測綠茶品種，具體如下：用移液槍分別精準(zhǔn)量取醋酸鹽緩沖液、gsh-aunps、h2o2、tmb溶液和不同品種的綠茶提取液，并按照前述溶液先后順序加入96孔板中孵育25-30分鐘；后在led燈下，使用數(shù)碼相機(jī)(型號為尼康d3300)拍攝不同綠茶反應(yīng)后的照片，與此同時可通過肉眼判斷綠茶品種。

25、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

26、1)本發(fā)明利用gsh-aunps分解h2o2產(chǎn)生羥基自由基(·oh)從而氧化tmb，生成藍(lán)色氧化產(chǎn)物(oxtmb)，綠茶中茶多酚等有效成分對·oh的清除效果以及對oxtmb的還原作用而抑制tmb的氧化。由于不同品種綠茶的抗氧化活性不同，導(dǎo)致傳感體系發(fā)生不同的顏色變化，實(shí)現(xiàn)對不同品種綠茶的準(zhǔn)確鑒別。

27、2)本發(fā)明通過谷胱甘肽(gsh)對aunps進(jìn)行修飾，可以進(jìn)一步提高其生物相容性和穩(wěn)定性。gsh-aunps不僅保留了aunps的基本催化特性，還因?yàn)間sh的存在，增加了對生物分子的親和性，使得它們在傳感中具有更大的潛力。擬酶活性較現(xiàn)有報道的一些納米酶以及天然過氧化物酶相比，活性較好。

28、3)本發(fā)明所述識別方法與傳統(tǒng)基于色譜的檢測方法相比，具有穩(wěn)定性更高、響應(yīng)更快速、操作更簡便、裝置更便攜等優(yōu)勢，可滿足普通群眾的使用需求，具有廣闊的應(yīng)用前景，可投入工業(yè)化生產(chǎn)。