本發(fā)明涉及中藥成分檢測，具體涉及一種使用薄層色譜同時鑒別當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的方法。

背景技術(shù)：

1、當(dāng)歸六黃湯首見于《蘭室秘藏·卷下·自汗門》，是國家中醫(yī)藥管理局首批公布的百首經(jīng)典名方之一，當(dāng)歸六黃湯位于第47首，是按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑。

2、當(dāng)歸六黃湯原方由“當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃柏、黃芩、黃連(各等分)、黃芪(加倍)”組成。原書所載其煎服法為“上為粗末，每服五錢，水二盞，煎至一盞，食前服，小兒減半服之”。依據(jù)中醫(yī)理論，方中當(dāng)歸、生地黃、熟地黃入肝腎而滋陰養(yǎng)血，陰血充則水能制火，共為君藥；臣以黃連清心瀉火，并合黃芩、黃柏苦寒瀉火以堅(jiān)陰；倍用黃芪，益氣實(shí)衛(wèi)以固表，且合當(dāng)歸、熟地黃益氣養(yǎng)血，亦為臣藥；君臣相伍，滋陰瀉火兼施，益氣固表并進(jìn)，標(biāo)本兼顧，共奏滋陰瀉火、固表止汗之功。中醫(yī)臨床常用當(dāng)歸六黃湯治療各種汗證以及甲狀腺功能亢進(jìn)、糖尿病、圍絕經(jīng)期綜合征等證屬陰虛火旺者，療效確切，將其成中成藥制劑具有重要的臨床意義與價值。2022年8月，國家中醫(yī)藥管理局公布了當(dāng)歸六黃湯關(guān)鍵信息，預(yù)示著當(dāng)歸六黃湯新藥研發(fā)進(jìn)入到關(guān)鍵實(shí)施階段。

3、薄層鑒別方法是中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中定性鑒別的主要手段?！吨兴幮滤幯芯康募夹g(shù)要求》中“中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說明”【鑒別】項(xiàng)下要求：“可根據(jù)處方組成及研究資料確定建立相應(yīng)的鑒別項(xiàng)目，原則上處方各藥味均應(yīng)進(jìn)行試驗(yàn)研究，根據(jù)試驗(yàn)情況，選擇列入標(biāo)準(zhǔn)中”。目前，包括《中國藥典》在內(nèi)的中藥復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【鑒別】項(xiàng)的設(shè)置基本按單個藥味進(jìn)行鑒別，每個復(fù)方往往需要多種供試品制備方法、展開劑和展開條件，分別對不同藥味進(jìn)行鑒別，所需的試驗(yàn)次數(shù)往往較多。2020年5月試行的《中藥新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》鼓勵建立同時鑒別多個藥味的薄層色譜方法。

4、cn113759065a公開了一種同時鑒定黃連和黃柏成分的薄層色譜方法，但是其中不涉及黃連和黃柏成分之外的其他成分的鑒定；cn117420253a公開了一種當(dāng)歸六黃湯及其復(fù)方制劑的薄層鑒定方法，但是其中僅涉及黃芪成分的定性鑒別。

5、目前尚未發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)資料報道同時鑒別當(dāng)歸六黃湯中當(dāng)歸、地黃、黃芩、黃連、黃柏、黃芪的薄層色譜法，尋找一種簡便、快捷的中藥復(fù)方制劑檢測方法是中藥質(zhì)量控制的重要措施。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種同時鑒別當(dāng)歸六黃湯中當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的薄層色譜法。本發(fā)明方法可同時鑒別該方中6味藥，操作簡便、快捷，斑點(diǎn)清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)、無陰性干擾、耐用性強(qiáng)，減少了薄層鑒別的實(shí)驗(yàn)次數(shù)，節(jié)省了時間和成本，大大提高了檢測效率，有效降低了檢測成本，為當(dāng)歸六黃湯的質(zhì)量控制提供重要的技術(shù)手段，是實(shí)現(xiàn)其安全性和有效性的重要保障。

2、一方面，本發(fā)明提供一種使用薄層色譜同時鑒別當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的方法，包括如下步驟：

3、a、供試品溶液制備：

4、a.1、取當(dāng)歸六黃組合物的水溶液用乙醚萃取得到乙醚萃取液和第一水層溶液，乙醚萃取液干燥至干，殘?jiān)蛹状既芙?，得到乙醚層供試品溶液?/p>

5、a.2、第一水層溶液用水飽和正丁醇萃取得到正丁醇萃取液和第二水層溶液，正丁醇萃取液用氨試液萃取得到正丁醇層和氨試液層，正丁醇層和氨試液層分別干燥至干，殘?jiān)眉状既芙獾玫秸〈紝庸┰嚻啡芤汉桶痹囈簩庸┰嚻啡芤海?/p>

6、a.3、第二水層溶液進(jìn)行固液分離得到溶液與沉淀，分別干燥至干后，殘?jiān)眉状既芙獾玫剿畬尤芤汗┰嚻啡芤汉退畬映恋砉┰嚻啡芤海?/p>

7、b、對照品溶液制備：

8、b.1、取阿魏酸、藁本內(nèi)酯、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品加甲醇制成混合對照品溶液1；

9、b.2、取黃芩苷、鹽酸黃柏堿、黃芪甲苷對照品，分別加甲醇制成黃芩苷對照品溶液、鹽酸黃柏堿對照品溶液、黃芪甲苷對照品溶液；

10、b.3、取生地黃對照藥材用甲醇提取，取提取液作為生地黃對照藥材溶液；

11、c、薄層色譜分析：

12、c.1、吸取步驟a制備的乙醚層供試品溶液、正丁醇層供試品溶液、步驟b制備的混合對照品溶液1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠g板上，采用展開劑z1展開后干燥，將干燥后的硅膠g板置紫外燈下檢視，

13、在乙醚層供試品色譜中，在與阿魏酸對照品、藁本內(nèi)酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在當(dāng)歸；

14、正丁醇層供試品色譜中，在與鹽酸小檗堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃連和/或黃柏，在與鹽酸巴馬汀對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃連；

15、c.2、吸取步驟a制備的正丁醇層供試品溶液、氨試液層供試品溶液、水層溶液供試品溶液和水層沉淀供試品溶液，步驟b制備的生地黃對照藥材溶液、黃芩苷對照品溶液、鹽酸黃柏堿對照品溶液、黃芪甲苷對照品溶液，分別點(diǎn)于同一塊硅膠gf254板上，采用展開劑z2展開后干燥，

16、將干燥后的硅膠gf254板置紫外燈下檢視，在水層沉淀供試品色譜中，在與黃芩苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃芩；

17、將紫外燈檢視后的硅膠gf254板置于碘缸顯色，日光下檢視，在氨試液層供試品色譜中，在與鹽酸黃柏堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃柏；

18、將碘缸顯色后的硅膠gf254板噴以顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視，在水層上清供試品色譜中，在與生地黃對照藥材溶液特征斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在生地黃；在正丁醇層供試品色譜中，在與黃芪甲苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃芪，

19、其中，所述展開劑z1為乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷、氨水和三乙胺的混合溶液；所述展開劑z2為乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水的混合溶液，所述顯色劑為硫酸乙醇溶液。

20、在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明方法包括如下步驟：

21、a、供試品溶液制備：

22、a.1、取當(dāng)歸六黃組合物的水溶液用乙醚萃取兩次得到乙醚萃取液和第一水層溶液，乙醚萃取液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，得到乙醚層供試品溶液?/p>

23、a.2、第一水層溶液用水飽和正丁醇萃取兩次得到正丁醇萃取液和第二水層溶液，正丁醇萃取液進(jìn)一步用氨試液萃取兩次得到正丁醇層和氨試液層，正丁醇層、氨試液層分別水浴蒸干后用甲醇溶解，得到正丁醇層供試品溶液和氨試液層供試品溶液；

24、a.3、第二水層溶液離心，上清液與沉淀分別水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為水層上清供試品溶液和水層沉淀供試品溶液?/p>

25、b、對照品溶液制備：

26、b.1、取阿魏酸、藁本內(nèi)酯、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品加甲醇制成混合對照品溶液1，

27、b.2、取黃芩苷、鹽酸黃柏堿、黃芪甲苷對照品，分別加甲醇制成黃芩苷對照品溶液、鹽酸黃柏堿對照品溶液、黃芪甲苷對照品溶液；

28、b.3、取生地黃對照藥材加甲醇超聲，取上清液作為生地黃對照藥材溶液。

29、c、薄層色譜分析：

30、c.1、吸取步驟a制備的乙醚層供試品溶液、正丁醇層供試品溶液、步驟b制備的混合對照品溶液1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠g板上，采用展開劑z1展開，晾干，置紫外燈下檢視，

31、在乙醚層供試品色譜中，在與阿魏酸對照品、藁本內(nèi)酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在當(dāng)歸；

32、在正丁醇層供試品色譜中，在與鹽酸小檗堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃連和/或黃柏，在與鹽酸巴馬汀對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃連；

33、c.2、吸取步驟a制備的正丁醇層供試品溶液、氨試液層供試品溶液、水層上清供試品溶液和水層沉淀供試品溶液，步驟b制備的生地黃對照藥材溶液、黃芩苷對照品溶液、鹽酸黃柏堿對照品溶液、黃芪甲苷對照品溶液，分別點(diǎn)于同一塊硅膠gf254板上，采用展開劑z2展開，晾干；

34、將晾干后的硅膠gf254板置紫外燈下檢視，水層沉淀供試品色譜中，在與黃芩苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃芩；

35、將紫外燈檢視后的硅膠gf254板再置于碘缸顯色，日光下檢視，在氨試液層供試品色譜中，在與鹽酸黃柏堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃柏；

36、將碘缸顯色后的硅膠gf254板再噴以顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視，在水層上清供試品色譜中，在與生地黃對照藥材溶液特征斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在生地黃；如果在正丁醇層供試品色譜中，在與黃芪甲苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)時，則鑒別為存在黃芪，

37、其中，所述展開劑z1、z2和顯色劑與前述相同。

38、下面更詳細(xì)地描述本發(fā)明的方法。

39、本發(fā)明中，當(dāng)歸六黃組合物是同時含有當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的中藥組合物、中藥復(fù)方湯劑或者該中藥復(fù)方湯劑制成的復(fù)方制劑。特別地，所述當(dāng)歸六黃組合物可以是當(dāng)歸六黃湯或者當(dāng)歸六黃湯的復(fù)方制劑，例如當(dāng)歸六黃湯基準(zhǔn)樣品(水煎液或凍干粉)、當(dāng)歸六黃湯制劑(顆粒等)及其中間體回流提取液、濃縮液、浸膏粉等。

40、例如，復(fù)方制劑可以是固體制劑或者液體制劑。固體制劑可以是片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑等，但不限于此；液體制劑可以是口服液、煎劑、浸膏劑等，但不限于此。

41、當(dāng)歸六黃組合物水溶液可以是將各藥材飲片直接或者粉碎后加水煎煮或加熱回流提取得到的湯劑，或者可以是將復(fù)方制劑溶解于水得到的水溶液。

42、a、供試品溶液制備：

43、發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，供試品溶液的制備工藝會影響目標(biāo)成分的鑒別(見實(shí)驗(yàn)例1條件1至條件3)。若將當(dāng)歸六黃組合物直接用甲醇溶解制備供試品，由于中藥成分復(fù)雜，目標(biāo)成分含量懸殊，無法在薄層色譜中得到有效分離鑒定(見實(shí)驗(yàn)例1條件1)；當(dāng)歸六黃組合物水溶液經(jīng)水飽和正丁醇萃取后，正丁醇層溶液再經(jīng)氨試液萃取，所得的正丁醇層供試品溶液可鑒別到藁本內(nèi)酯，但未鑒別到阿魏酸(見實(shí)驗(yàn)例1條件2和圖1)；將當(dāng)歸六黃組合物水溶液首先經(jīng)乙醚萃取后得到乙醚萃取液供試品，然后乙醚萃取后的歸六黃組合物水溶液經(jīng)水飽和正丁醇萃取后，正丁醇層溶液再經(jīng)氨試液萃取得到正丁醇層供試品溶液和氨試液層供試品溶液，但是在上述供試品溶液中，無法檢測到黃芩苷的特征成分(見實(shí)驗(yàn)例1條件3和圖2)；通過對正丁醇萃取后的水層溶液用少量甲醇溶解后得到的上清液中未觀察到黃芩苷(見實(shí)驗(yàn)例1條件4和圖3)；最終在用甲醇溶解水層沉淀得到的水層沉淀供試品溶液中鑒定到黃芩苷，從而該水層沉淀供試品溶液可用于黃芩的專屬性鑒別。最后，發(fā)明人通過供試品溶液制備工藝條件結(jié)合展開劑的選擇和顯色劑的選擇，最終確定了供試品溶液的制備工藝。

44、在一些實(shí)施方式中，步驟a中，萃取為等體積萃取。

45、在一些實(shí)施方式中，當(dāng)歸六黃組合物的水溶液如下制備：取當(dāng)歸六黃組合物基準(zhǔn)樣品或浸膏粉4-7g(例如7g)或其等價用量，例如由占總重2/3的當(dāng)歸六黃湯浸膏粉和占總重1/3的藥物輔料制備的當(dāng)歸六黃湯顆粒6-10g(例如10g)，用水40ml溶解。

46、這里，例如，當(dāng)歸六黃組合物基準(zhǔn)樣品如下制備：取當(dāng)歸六黃組合物各藥材(包括當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃柏、黃連、黃芩和黃芪)飲片經(jīng)粉碎機(jī)粉碎為過10目篩的粗粉，按照液固比約1:30加入水，煎煮至藥液體積減半，趁熱過濾，濾液進(jìn)行冷凍干燥，即得當(dāng)歸六黃湯基準(zhǔn)樣品。

47、例如，當(dāng)歸六黃組合物浸膏粉如下制備：取當(dāng)歸六黃組合物中各藥材(包括當(dāng)歸、生地黃、熟地黃、黃柏、黃連、黃芩和黃芪)飲片，按照液固比約1:30加入水，回流提取1-1.5h后，采取適當(dāng)形式濃縮干燥，即得當(dāng)歸六黃湯浸膏粉。

48、例如，當(dāng)歸六黃湯顆粒如下制備：取當(dāng)歸六黃湯浸膏粉與單一輔料(糊精、可溶性淀粉、甘露醇)或組合輔料(糊精+木糖醇、糊精+甘露醇、可溶性淀粉+木糖醇)按照2:1的比例進(jìn)行混合，以75％乙醇為潤濕劑，制備軟材，達(dá)到“手握成團(tuán)，輕壓即散”的標(biāo)準(zhǔn)后，采用二號篩進(jìn)行擠壓制粒，將制備好的顆粒在烘箱中進(jìn)行干燥，溫度60℃，干燥后取出、整粒，篩選出能過一號篩而不過五號篩的顆粒，即得當(dāng)歸六黃湯顆粒樣品。

49、在一些實(shí)施方式中，所述步驟a中供試品溶液的制備方法如下：

50、a.1、取當(dāng)歸六黃湯基準(zhǔn)樣品或浸膏粉4-7g或其等價用量(例如，當(dāng)歸六黃湯顆粒6-10g)加水40ml，超聲溶解，加等體積的乙醚振搖萃取2次得到乙醚萃取液和第一水層溶液，乙醚萃取液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為乙醚層供試品溶液?/p>

51、a.2、第一水層溶液用等體積的水飽和正丁醇萃取兩次得到正丁醇萃取液和第二水層溶液，正丁醇萃取液用等體積的氨試液振搖萃取兩次得到正丁醇層和氨試液層，正丁醇層、氨試液層分別水浴蒸干后，殘?jiān)謩e用甲醇溶解，得到正丁醇層供試品溶液和氨試液層供試品溶液；

52、a.3、第二水層溶液離心，取上清液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，得到水層上清供試品溶液；沉淀加甲醇超聲溶解后，得到水層沉淀供試品溶液?/p>

53、本發(fā)明中，氨試液指的是《中國藥典》中規(guī)定的氨試液。

54、b、對照品溶液制備：

55、步驟b中，混合對照品溶液1中，阿魏酸的濃度約為0.25-1mg/ml，例如0.5mg/ml；藁本內(nèi)酯的濃度約為0.15-0.6mg/ml，例如0.3mg/ml；鹽酸小檗堿的濃度約為13-50μg/ml，例如25μg/ml；鹽酸巴馬汀對照品的濃度約為25-100μg/ml，例如50μg/ml；黃芩苷對照品溶液中，黃芩苷對照品的濃度約為0.5-2mg/ml，例如1mg/ml；黃芪甲苷對照品溶液中，黃芪甲苷對照品的濃度約為0.3-1mg/ml，例如0.5mg/ml；鹽酸黃柏堿對照品溶液中，鹽酸黃柏堿對照品的濃度約為0.5-2mg/ml，例如1mg/ml，以及生地黃對照藥材溶液制備過程中，生地黃對照藥材與甲醇的用量比約為1g：10ml，但不限于此。

56、進(jìn)一步的，所述步驟b中，對照品溶液的制備方法如下：

57、取阿魏酸、藁本內(nèi)酯、鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg阿魏酸、0.3mg藁本內(nèi)酯、25μg鹽酸小檗堿和50μg鹽酸巴馬汀的溶液，作為混合對照品溶液1；取黃芩苷、黃芪甲苷、鹽酸黃柏堿對照品，加甲醇制備成濃度分別為1、0.5、1mg/ml的溶液；

58、生地黃對照藥材溶液的制備方法如下：

59、取生地黃對照藥材約1g，加甲醇10ml，超聲1小時，取上清液作為生地黃對照藥材溶液。

60、c、薄層色譜分析

61、發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，展開劑會影響目標(biāo)成分的鑒別，所述展開劑z1中，展開劑不合適將不能有效分離目標(biāo)成分，且不同體積比的乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷、氨水和三乙胺會影響鹽酸小檗堿和鹽酸黃柏堿在供試品色譜圖中的分離度(參見實(shí)驗(yàn)例2的c(1)和圖4-5)，最終實(shí)驗(yàn)確定的展開劑z1為乙酸乙酯-甲醇-三氯甲烷-氨水-三乙胺混合體系。所述展開劑z2中，展開劑不合適將不能有效分離目標(biāo)成分，且不同體積比的乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水，會影響黃芩苷對照品色譜圖中斑點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象，以及供試品色譜圖中的黃芩苷的分離；以及該體系中將甲酸替換為冰醋酸后，黃芩苷的拖尾現(xiàn)象未見改善(參見實(shí)施例2的c(2)和圖6-9)，最終確定的展開劑z2為乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水的混合體系。

62、本發(fā)明中，所述展開劑z1中，乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷、氨水和三乙胺的體積比為(5-7):(1.5-2.5):(1.5-2.5):(0.8-1.2):(0.8-1.2)，優(yōu)選為(5.5-6.5):(1.8-2.2):(1.8-2.2):(0.9-1.1):(0.9-1.1)，更優(yōu)選是(5.8-6.2):(1.9-2.1):(1.9-2.1):(0.95-1.05):(0.95-1.05)，特別是6:2:2:1:1。

63、本發(fā)明中，所述展開劑z2中，乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水的體積比為(7-9):(0.8-1.2):(0.8-1.2):(0.8-1.2)，優(yōu)選為(7.5-8.5):(0.9-1.1):(0.9-1.1):(0.9-1.1)，更優(yōu)選是(7.8-8.2):(0.95-1.05):(0.95-1.05):(0.95-1.05)，特別是8:1:1:1。

64、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c中，供試品溶液的點(diǎn)樣量為3-20μl，點(diǎn)樣方式為點(diǎn)狀點(diǎn)樣或帶狀點(diǎn)樣，優(yōu)選的點(diǎn)樣量為10μl。

65、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c中，展開方式為：放入點(diǎn)好的硅膠板，加蓋密封，展開至溶劑前沿距硅膠板上端2-3cm。

66、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c.1中，檢視紫外線波長為366nm。

67、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c.2中，檢視紫外線波長為254nm。

68、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c.2中，碘缸顯色的操作方法為：將碘液置于玻璃干燥器的底部，將硅膠板置于玻璃干燥器中的瓷板上，加蓋密封，顯色時間為30s-1min，日光下檢視。

69、在一些實(shí)施方式中，所述步驟c.2中，顯色劑為10％硫酸乙醇溶液。所述加熱為在105℃加熱2-5min。

70、有益效果

71、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的方法可以同時鑒別當(dāng)歸六黃組合物中當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏、黃芪，并具有以下優(yōu)勢：

72、(1)本發(fā)明提供的同時鑒別六味藥材的方法是通過使用一份樣品制備成5份供試品溶液，點(diǎn)樣于兩塊薄層板上，分別展開檢視，即可同時鑒別當(dāng)歸六黃湯6味中藥；該方法斑點(diǎn)清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)、背景無干擾、陰性對照無干擾、耐用性好；一次鑒別試驗(yàn)即可反映6味中藥的質(zhì)量信息，鑒別更全面，更有利于反映其整體質(zhì)量特征，且減少了薄層鑒別的試驗(yàn)次數(shù)，減少試劑用量，節(jié)省時間，提高了檢驗(yàn)效率；

73、(2)中藥復(fù)方制劑的薄層鑒別方法的供試品溶液制備方法通常比較復(fù)雜，步驟繁瑣，費(fèi)時費(fèi)力，且不同藥味的薄層鑒別方法的供試品溶液一般不相同，而本發(fā)明只需要進(jìn)行一次樣品的稱量，對樣品進(jìn)行萃取處理后制備成5種供試品溶液，乙醚層供試品溶液用于當(dāng)歸的專屬性鑒別；正丁醇層供試品溶液用于黃連和黃芪的專屬性鑒別；氨試液層供試品用于黃柏的專屬性鑒別；水層沉淀供試品用于黃芩的專屬性鑒別；水層上清供試品用于生地黃的專屬性鑒別；5份供試品溶液可反映當(dāng)歸六黃湯全方6味中藥的指標(biāo)成分信息，鑒別全面；

74、(3)本發(fā)明提供的同時鑒別當(dāng)歸六黃組合物中當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的薄層色譜法，僅采用兩塊薄層板分別于乙酸乙酯-甲醇-三氯甲烷-氨水-三乙胺體系和乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水展開，前者經(jīng)紫外檢視即可用于當(dāng)歸、黃連、黃柏的鑒別；后者經(jīng)紫外檢視、碘缸顯色、10％硫酸乙醇溶液顯色，可用于黃芩、黃柏、黃芪和生地黃的鑒別；

75、(4)本發(fā)明提供的同時鑒別當(dāng)歸六黃組合物中當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪的薄層色譜法中，樣品斑點(diǎn)分離度好，陰性無干擾，能夠?qū)勹b別當(dāng)歸、生地黃、黃芩、黃連、黃柏和黃芪6味藥，并且通過試驗(yàn)例中對本發(fā)明的薄層色譜法的耐用性進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的薄層色譜鑒別方法的檢測過程不易受到薄層板、溫度、濕度等外界條件變化的影響，證明方法對外界條件要求不苛刻，耐用性好，適用性廣泛。